专利名称：枸橼酸他莫昔芬聚乳酸-羟乙酸共聚物微球的制备方法
技术领域：
本发明属防治乳腺癌药物制剂制备领域，特别是涉及枸橼酸他莫昔芬微球的制备方法。
背景技术：
近年来，乳腺癌的发病率急剧增长。在西方国家，乳腺癌已成为女性头号死亡原因。 而我国最近几年来，乳腺癌发病率也在不断上升中。据卫生部门的最新报道，我国的上海、 天津、北京、哈尔滨、武汉等特大型城市里，乳腺癌发病率亦已成为女性的第一或第二号 肿瘤疾病，而在广大农村地区，乳腺癌仍排在肿瘤疾病的第9位。近几年我国每年新增肿 瘤病人约160万-180万人，肿瘤病人总数约为450万-600万人。目前乳腺癌的治疗主要手段包括手术治疗，放射治疗，化学治疗和内分泌治疗。其 中内分泌治疗是乳腺癌的重要治疗手段，其疗效已得到广泛的认可。乳腺癌内分泌治疗已 有一百多年的历史，早在1896年英国学者Beastson首先报道卵巢切除成功地控制绝经前 乳腺癌的进展，成为乳腺癌内分泌治疗的第一个里程碑。尽管从20世纪30年代即开始使 用内分泌药物治疗乳腺癌，但效果不那么理想。直到1971年，第一个抗雌激素药物枸橼 酸他莫昔芬研制成功，成为乳腺癌内分泌治疗的第二个里程碑。但到目前为止，枸橼酸他 莫昔芬的剂型主要是片剂，它有药物释放时间短，对胃肠刺激大等缺点，所以开发一种新 的药物剂型具有重要意义。发明内容本发明的目的是提供一种枸橼酸他莫昔芬聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA微球的制备方 法。该方法以美国FDA认证的可用于人体的降解性生物相容材料——聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA作为载体来制备枸橼酸他莫昔芬聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA微球，该微球可 用作防治乳腺癌的植入剂型，给药安全，方便，药效持久。本发明的枸橼酸他莫昔芬聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA微球的制备方法，包括下列步骤(1) 将聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA溶于有机溶剂中，再加入枸橼酸他莫昔芬，超声溶解， 作为有机相；(2) 在搅拌条件下，将有机相慢慢加入作为水相的聚乙烯醇(PVA)水溶液中，然后加入电解 质，室温下继续搅拌至有机溶剂完全挥发，离心、洗涤、冷冻干燥即得枸橼酸他莫昔芬聚乳 酸—羟乙酸共聚物PLGA微球。所述的聚乳酸一羟乙酸共聚物规格是乳酸(LA):羟乙酸(GA)的重量比为50:50， 分子量Mr为20000; LA:GA=50:50， Mr=40000; LA:GA=75:25， Mr=20000; LA:GA=75:25， Mr=40000，聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA在有机相中的浓度是40~60mg/ml。所述步骤(1)中的有机溶剂是乙腈。所述枸橼酸他莫昔芬的用量是20mg 40mg。所述步骤(2)中的聚乙烯醇的规格是PVA-124，醇解度的摩尔百分数为98~99%，平 均聚合度n为2400-2500，聚乙烯醇水溶液质量浓度是1%~3%。所述步骤(2)中的电解质是氯化钠，在溶液中的质量浓度为5%~15%。 所述步骤(2)中的搅拌速度为400 600rpm。所述枸橼酸他莫昔芬聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA微球的粒径在l(Him以下。 本发明的有益效果(1) 本发明的用的聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA具有良好的生物相容性和生物可降解性，植入人体能够达到较好的缓释效果；(2) 制备的微球通过扫描电镜观察，形态圆整，分布均匀，微球的药物包封率在80%左右，药物含量在10%以上；(3) 制备的微球在体外释放实验中，2化内药物释放度为5.23%， 30d累计释放度达到68.46%，满足植入剂型缓释长效的要求，可以作为防治乳腺癌的药物植入剂型。
图1是制备的枸橼酸他莫昔芬聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA微球的显微镜照片； 图2是制备的枸橼酸他莫昔芬聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA微球的扫描电镜照片； 图3是枸橼酸他莫昔芬乙醇溶液的标准曲线；图4是制备的枸橼酸他莫昔芬聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA微球的体外释放曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术 人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限 定的范围。实施例1(1)枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA微球的制备精确称取聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA (LA:GA=50:50， Mr=20000) lOOmg，溶于2ml4乙腈中，再加入枸橼酸他莫昔芬20mg，超声溶解，作为有机相；配制60ml P/。PVA水溶液, 再加入0.45gNaCl，作为水相。在搅拌条件下(600rpm)，缓慢的(lml/min)把有机相加 入到水相中，室温下继续搅拌24h，然后离心分离，用双蒸水洗涤3次，冷冻干燥即得枸 橼酸他莫昔芬聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA微球。(2) 微球的形态和粒径尺寸 通过光学显微镜和扫描电镜拍摄的微球照片(图l，图2)，可以看到，研究所得的微球具有很好的圆形形态。用校正过的带目镜测微尺的显微镜测微球的粒径大小，发现所得 微球的直径在3-10 P m， 300个微球的平均粒径为7.36 y m。(3) 药物含量及包封率测定a. 枸橼酸他莫昔芬最大吸收波长的测定 为确定用紫外分光光度法测定枸橡酸他莫昔芬含量的测定波长，研究中用UV—2102PC型紫外可见分光光度计对枸橼酸他莫昔芬的最大吸收波长进行了测定，测定 步骤为精密称取20mg枸橼酸他莫昔芬，用95%的乙醇溶液溶解，以95%的乙醇溶液为 空白，在200 400nm间作紫外扫描，便可得到最大吸收波长为276nm。b. 标准曲线制备精密称取50mg枸橼酸他莫昔芬，用95%的乙醇溶液溶解，转移至50ml容量瓶中定 容，得1.000mg/ml的枸橼酸他莫昔芬对照液。精密吸取对照液0.05， 0.1， 0.15， 0.2， 0.25， 0.3ml，在试管中分别用95%的乙醇定容至5ml。按照分光光度法在枸橼酸他莫昔芬的最大 吸收波长处测定吸光度。并以枸橼酸他莫昔芬浓度为纵坐标、吸光度为横坐标作图得到枸 橼酸他莫昔芬乙醇溶液的标准曲线如图3所示。通过线性回归得到枸橼酸他莫昔芬浓度C 对吸光度A的回归方程为C=0.0446A-0.0065 [R2=0.9994， RSD=0.0518% ， n=6， PO.OOOl]。c. 药物含量及包封率的计算 精密称取10mg枸橼酸他莫昔芬PLGA微球，并加10ml95。/。乙醇于试管中，超声加热破坏lh后，用微孔滤膜抽滤，精密吸取滤液lml，以95%乙醇为空白，在276nm处测得， 代入回归方程并计算，便可得到枸橼酸他莫昔芬含量为12.1%。然后根据下列公式便可以 计算得到微球制备过程中枸橼酸他莫昔芬的包封率是78.95%。包封率=微球中枸橼酸他莫昔芬的实际含量/微球中枸橼酸他莫昔芬的理论含量 (4)体外释放实验精密称取微球10mg置10ml离心管中，加入10mL30。/。乙醇溶液，超声lmin，在37°C 振荡条件下分别于l， 5， 10， 15， 20， 25, 30d时将离心管取出，5 000r/min离心10min，取出所有lml上清液，同时补充同温30%乙醇溶液lmL，超声lmin后继续振荡。按(3) 项方法测定枸橼酸他莫昔芬浓度，做累计释放枸橼酸他莫昔芬PLGA微球体外累计释放 曲线见图4。在最初的24h内药物释放度为5.23。/。，在以后的30d枸橼酸他莫昔芬从微球 中缓慢持续释放，30d累计释放度达到68.46%,并且可以进一步释放，可见所得的微球满 足缓释长效的要求。
权利要求
1.枸橼酸他莫昔芬聚乳酸-羟乙酸共聚物PLGA微球的制备方法，包括下列步骤(1)将聚乳酸-羟乙酸共聚物PLGA溶于有机溶剂中，再加入枸橼酸他莫昔芬，超声溶解，作为有机相；(2)在搅拌条件下，将有机相慢慢加入作为水相的聚乙烯醇PVA水溶液中，然后加入电解质，室温下继续搅拌至有机溶剂完全挥发，离心、洗涤、冷冻干燥即得枸橼酸他莫昔芬聚乳酸-羟乙酸共聚物PLGA微球。
2. 根据权利要求1所述的枸櫞酸他莫昔芬聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA微球的制备方法， 其特征在于所述的聚乳酸一羟乙酸共聚物规格是乳酸LA:羟乙酸GA的重量比为50:50， 分子量Mr为20000; LA: GA=50:50 ， M产40000; LA: GA=75:25 ， Mr=20000; LA: GA=75:25 ， Mr=40000;聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA在有机相中的浓度是40~60mg/ml。
3. 根据权利要求1所述的枸橼酸他莫昔芬聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA微球的制备方法， 其特征在于所述步骤(1)中的有机溶剂是乙腈。
4. 根据权利要求1所述的枸橼酸他莫昔芬聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA微球的制备方法， 其特征在于所述枸橼酸他莫昔芬的用量是20mg 40mg。
5. 根据权利要求1所述的枸橼酸他莫昔芬聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA微球的制备方法， 其特征在于所述步骤(2)中的聚乙烯醇的规格是PVA-124,醇解度的摩尔百分数为 98~99%，平均聚合度n为2400-2500，聚乙烯醇水溶液质量浓度是1%~3%。
6. 根据权利要求1所述的枸橼酸他莫昔芬聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA微球的制备方法， 其特征在于所述步骤(2)中的电解质是氯化钠，在溶液中的质量浓度为5% 15%。
7. 根据权利要求1所述的枸橼酸他莫昔芬聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA微球的制备方法， 其特征在于所述步骤(2)中的搅拌速度为400 600卬m。
8. 根据权利要求1所述的枸橼酸他莫昔芬聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA微球的制备方法， 其特征在于所述枸橼酸他莫昔芬聚乳酸一羟乙酸共聚物PLGA微球的粒径在lOpin以下。
全文摘要
本发明涉及一种枸橼酸他莫昔芬聚乳酸—羟乙酸共聚物微球的制备方法，包括1)将聚乳酸—羟乙酸共聚物PLGA溶于有机溶剂中，再加入枸橼酸他莫昔芬，超声溶解，作为有机相；2)在搅拌条件下，将有机相慢慢加入作为水相的聚乙烯醇PVA水溶液中，然后加入电解质，室温下继续搅拌至有机溶剂完全挥发，离心、洗涤、冷冻干燥即得枸橼酸他莫昔芬聚乳酸—羟乙酸共聚物PLGA微球。该微球形态圆整，粒度分布均匀，粒径分布在10微米以下，载药量可达10％以上，包封率在80％左右，体外释药性能符合长效制剂特征，可以作为防治乳腺癌的药物植入剂型。
文档编号A61K47/34GK101249082SQ20081003548
公开日2008年8月27日 申请日期2008年4月2日 优先权日2008年4月2日
发明者余灯广, 周毓婷, 朱利民, 马宗会 申请人:东华大学