专利名称：2,4,5-三取代-1,3-二硫戊环、其合成方法、其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一类戊环化合物，尤其涉及一类具有抗肿瘤活性的2,4，5-三取代-1，3-二硫戊环及其制备方法，本发明还涉及它们作为抗肿瘤细胞增殖的应用，属于生物医药领域。
恶性胂瘤是一种严重威胁人类健康的常见病和多发病，人类因恶性肿瘤而引起的死亡率是所有疾病死亡率的第二位，仅次于心脑血管疾病。肿瘤的治疗方法有手术治疗，放射治疗和药物治疗(化学治疗)。目前，化学治疗仍然是临床治疗肿瘤的主要手段。寻找抗肺瘤药物是新药研究的热点之一。发明人认识到，1，3-二硫戊环可能具有抗肿瘤活性。发明人进一 步认识到，把1,3-二碌u戊环作为抗肿瘤药效团进行结构修饰可能获得抗肿瘤先导结构。于是，发明人在1,3-二硫戊环的2，4,5-三个位置引入取代基，尤其在4,5-两个位置引入氨基酸形成了本发明。
发明内容
本发明的目的之一是提供一类具有抗肿瘤细胞增殖活性的化合物。本发明的目的之二是提供一种制备上述抗肿瘤细胞增殖活性的化合物的方法。本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的具有抗肿瘤细胞增殖活性的化合物，其结构为通式I所示
其中，AA选自Ala， Arg， Asn， Gln， Gly， His， Ile， Leu， Lys， Met，Phe, Pro, Ser, Thr， Val， Tyr， Glu(C)tBu)或Trp。一种制备通式I化合物的方法，该方法包括
(1) 在4N氯化氢/曱醇溶液中将二巯基丁二酸转变为二巯基丁二酸曱酯；
(2) 在浓盐酸存在下将二巯基丁二酸曱酯与1,1,3,3-四曱氧丙烷缩合制备得到
皆景技术
32-(2，2-甲氧基乙基)-4,5-二曱氧羰基-l,3-二硫戊环；
(3) 在LiAlH4存在下将2-(2,2-曱氧基乙基)-4，5-二甲氧羰基-l,3-二硫戊环还原为 2-(2，2-曱氧基乙基)-4,5-二羟基-l,3-二硫戊环；
(4) 在DMAP和DCC存在下Boc-L-氨基酸与入(H曱氧基乙基)4，5-二羟基 -1,3-二硫戊环偶联生成2-(2,2-曱氧基乙基)-4,5-二-(1^-80(>1^氨基酰氧甲基)-1,3-二硫 戊环；
(5) 在4N氯化氢/乙酸乙酯溶液中将2-(2,2-甲氧基乙基)-4,5-二-(N-Boc-L-氨基 酰氧曱基)-l，3-二硫戊环转化为2-(2,2-甲氧基乙基)-4,5-二-L-氨基酰氧曱基-l,3-二硫戊环。
其中，所述的Boc-L-氨基酸选自Boc-L-Ala ， (Boc)rL-Arg , Boc-L-Asn , Boc-L-Gln-OH , Boc陽Gly-OH , Boc-L-His-OH ， Boc-L-Ile-OH , Boc-L-Leu-OH ， (Boc)2-L-Lys陽OH， Boc-L-Met-OH, Boc-L-Phe-OH， Boc-L-Pro-OH, Boc-L-Ser-OH, Boc陽L-Thr-OH ,Boc-L-Val-OH ,Boc-L-Tyr-OH ,Boc-L-Glu(OtBut)陽OH或 Boc-L-Trp-OH
本发明的又一个目的是提供一种抗肿瘤的药物组合物，该药物组合物由有效量 的通式I化合物和药学上可接受的载体或辅料组成，即将有效量的本发明化合物与 药学上可接受的载体或稀释剂配合后，按本领域常规的制剂方法将其制备成任意一 种适宜的药物组合物。通常该组合物适合于口服给药和注射给药，也适合其他的给 药方法。该组合物可以是片剂、胶嚢剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、栓剂，或口服液等 液体制剂形式。根据不同的给药方法，本发明药物组合物可以含有0.1%-99%重量， 优选10-60%重量的本发明化合物。
本发明在肿瘤细胞模型和小鼠S180肉瘤模型上评价本发明通式I化合物的抗肿 瘤活性。体外和体内试验结果证明，本发明通式I化合物具有确切的抗肿瘤活性， 临床在可作为抗肿瘤药物应用。
图1通式I化合物的合成路线图；i) 4N氯化氢/曱醇溶液；ii)浓盐酸，1,1,3，3-四 曱氧丙烷，CHC13， 40。C; iii)LiAlH4, 40°C; iv)DMAP/DCC/CH2Cl2; v)4N氯化氢/乙酸 乙酯溶液，0°C。在4a和5a中AA=Ala,在4b中AA=NG,NG-(Boc)2-Arg,在5b中 AA=Arg,在4c和5c中AA=Asn，在4d和5d中AA=Gln,在4e和5e中AA=Gly,在 4f中AA=imidazole-N-Boc-His,在5f中AA=His,在4g和5g中AA=Ile,在4h和5h
4中AA=Leu,在4i中AA=Nw-Boc-Lys,在5i中AA=Lys,在4j和5j中AA=Met,在 4k和5k中AA=Phe，在41和51中AA=Pro,在4m和5m中AA=Ser,在4n和5n 中AA=Thr，在4o和5o中AA=Val,在4p中AA=0-Boc-Tyr,在5p中AA=Tyr，在 4q和5q中AA=Glu(OtBu)，在4r和5r中AA=Trp。
具体实施例方式
为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的， 它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
实施例1制备2-(2,2-曱氡基乙基)-4，5-二甲氧g-l，3-二硫戊环(2)
往1810 mg (11.0 mmol) 1,1,3,3-四曱氧丙烷，2100 mg (10.0 mmol) (2R，3S)-2,3-二巯基丁二酸二曱酯及50 ml氯仿的溶液中加入lml浓盐 酸。混合物于40°C搅拌48h, TLC (氯仿/曱醇/冰醋酸，10:1:0.2)显示 (2R，3S)-2，3-二巯基丁二酸二曱酯消失。反应混合物用饱和NaHC03水溶 液中和至pH7，然后用水洗3次。氯仿层用无水Na2S04干燥过夜、过滤、滤 液减压浓缩，得到的3700 mg黄色油状物用硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯，3:1)纯 化得到2400 mg (77%)标题化合物，为无色油状物。ESI-MS (m/e): 311 [M+H] + . 'H顧R (CDC13): 5=4.63 (t, J=7.0Hz, 1H), 4.49 (d, J=8.0Hz, 2H)， 4.41 (t, J=6.0Hz, 1H), 3.77 (s, 6H), 3.35 (s， 6H)， 2.14 (t, J=7.0Hz, 2H).元素分析 CuH1806S2: C 42.57, H 5.85.实测值C 42.80, H 5.71。
实施例2制备2-(2，2-曱氡基乙基)-4,5-二羟甲基-1，3-二硫戊环(3)
于40。C将432 mg (12.0 mmol) LiAlH4与30 ml无水四氢呋喃的悬浮液激烈搅拌 lh后往里加入1705 mg (5.0 mmol) 2-(2，2-曱氧基乙基)-4,5-二曱氧羰基-l，3-二硫 戊环与20 ml无水四氢吹喃的溶液in 20 ml无水THF， 4h内加完，TLC (石油醚:乙 酸乙酯，3:l)显示2-(2,2-曱氧基乙基)-4,5-二曱氧羰基-l，3-二硫戊环消失。反应化合物 继续激烈搅拌、冷至室温、緩慢加入碎水破坏过量LiAlH4、力d2ml浓盐酸和30ml 水中和反应混合物。得到的悬浮液过滤、滤液减压浓缩残留物用乙酸乙酯萃取(30 mlx3)。分出的乙酸乙酯层依次用饱和NaCl水溶液洗、5。/oNaHC03水溶液洗和饱和 NaCl水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水Na2S04干燥过夜、过滤、滤液减压浓 缩。得到的无色油状物用硅胶柱层析(氯仿:甲醇，40:1)纯化得到1240 mg (80%)标题化合物，为无色油状物。ESI-MS (m/e): 255 [M+H] + , 'HNMR (CDC13) S=5.01 (t, J=5.0Hz, 2H), 4.43 (t, J=7.0Hz， 1H), 3.76 (d, J=5.0Hz, 4H), 3.73 (t, J=5.0Hz， 1H), 3.49 (t, J=5.0Hz, 2H), 3.35 (s， 6H), 2.15 (t, J=7.0Hz 2H)。元素分析 C9H1804S2: C 42.50, H 7.13.实测值C 42.81， H 7.00.
实施例3制备2-(2,2-甲氣基乙基)-4，5-二-(N-Boc-L-丙氨酰氧甲基)-l，3-二硫戊环(4a)
由254mg (1.0 mmol) 2-(2,2-曱氧基乙基)-4,5-二羟曱基-l,3-二硫戊环、414mg (2.2 mmol) Boc-L-Ala-OH、 453mg (2.2 mmol) of DCC、 26.8mg (0.22 mmol) DMAP和20ml 无水CH2Cl2的溶液室温搅拌0.5h。 TLC(石油醚乙酸乙酯，3:l)显示2-(2,2-曱氧基乙 基)-4，5-二羟曱基-1,3-二硫戊环消失。反应混合物过滤、滤液依次用饱和NaCI水溶液 洗、5。/。NaHC03水溶液洗、5。/。KHS04水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗。分出的012(:12 层用无水Na2S04干燥过夜、过滤、滤液减压浓缩。得到的无色油状物用硅胶 柱层析(石油醚乙酸乙酯，5:l)纯化得到542mg (91%)标题化合物，为无色油状物。 ESI-MS (m/e) 597[M+H〗+ ; 'H NMR (500 MHz, CDC13): S=5.25 (d, J=6.0 Hz, IH),
5.13 (d, J=6.0 Hz, IH), 4.55 (t, J=7.0 Hz, IH), 4.44 (t, J=6.0 Hz, IH), 4.40 (d, J=7.0 Hz, 4H), 4.33 (q, J=8.5 Hz， 2H)， 3.92 (m, J=5.0 Hz, 2H), 3.35 (s, 6H), 2.15 (t, J=5.5 Hz, 2H), 1.46 (s, 18H)， 1.42(d， J=7.0Hz, 6H). 13CNMR (125MHz, CDC13): S=172.81, 155.18， 103.42, 80.02， 63.91， 53.47, 49.30， 47.15, 46.12, 40.94, 28.33, 18.36。元素分析 C25H44N2O10S2: C 50.32, H 7.43， N 4.69.实测值C 50.11, H 7.30， N 4.44。
实施例4制备2-(2，2-曱^^乙基)-4，5-二-(NG,Na-双Boc-L-精氨酰氧甲基)-l，3-二硫戊 环(4b)
按照实施例3的方法，从(Boc)2-L-Arg-OH得到500 mg (43%)目标化合物，为无 色固体。Mp 101-104°C; [a]D25=-29.16 (c=1.0， CH3OH); ESI-MS (m/e) 1167[M+H]+; !H NMR (500 MHz, CDC13): 5=9.44 (s， 2H), 9.31 (s, 2H), 5.62 (d, J=7.0 Hz, IH), 5.55 (d, J=7.0 Hz， IH), 4.51 (t, J=6.0 Hz, IH)， 4.42 (t, J=8.0 Hz, IH), 4.40 (m， 4H), 4.31 (t， J=7.5 Hz， 2H)， 3.86 (m, J=5.5 Hz, 2H)， 3.48 (m, J=4.5 Hz， 4H)， 3.35 (s, 6H),
2.14 (t， J-5.5 Hz, 2H), 1.84 (m， 4H), 1.53 (s， 36H), 1.45 (s, 18H), 1.28 (m, J=7.0Hz， 4H). 13CNMR (125MHz, CDC13): S=173.03, 164.09, 155.88, 155.13, 154.59, 103.28, 80.03, 79.83, 79.66, 64.01, 55.47, 53.56, 47.22, 46.37, 40.93, 39.11, 28.34， 28.19, 22.08. 元素分析C51H90N8O18S2: C 52.47， H 7.77， N 9.60.实测值C 52.69, H7.91， N 9.85.
实施例5制备2-(2，2-曱氧基乙基)-4，5-二-(N-Boc-L-天冬酰胺酰氧曱基)-l，3-二硫戊 环(4c)
按照实施例3的方法，从Boc-L-Asn-OH得到(109mg, 16%)目标化合物，为无色 油状物。[a]D25=-46.56 (c=1.0， CH3OH), ESI-MS (m/e) 683[M+H] + ; ^画R (500 MHz, CDC13): S=6.58 (s, 2H), 6.14 (s, 2H), 5.81 (s, IH)， 5.63 (s， IH), 4.52 (t, J=6.5 Hz， IH), 4.41 (t, J=6.0 Hz, IH)， 4.36 (d， J=5.0 Hz, 4H), 4.33 (m， J=6.0 Hz, 2H), 3.90 (t, J=5.5 Hz, 2H)， 3.29 (s， 6H)， 2.72 (d, J=5.5 Hz, 4H), 2.13 (t, J=6.0 Hz, 2H), 1.43 (s，腦). 13CNMR (125MHz, CDC13): S=175.42, 171.93， 155.90, 103.23, 80.07, 63.66， 53.21, 50.40, 47.29， 46.53, 40.75， 36.71, 28.23.元素分析(327!146"401282: C 47.49, H 6.79, N 8.21.实测值C 47.71, H 6.94, N 7.97.
实施例6制备2-(2，2-曱氧基乙基)-4，5-二-(N-Boc-L-谷氨酰胺酰氧甲基)-l，3-二硫戊 环(4d)
按照实施例3的方法，从Boc-L-Gln-OH得到667mg(94。/。)目标化合物，为无色油 状物。[a]D25^46.49 (c=1.0, CH3OH); ESI-MS (m/e) 711[M+H] + ; 'H顧R(500 MHz, CDC13): S=6.60 (s， 2H)， 6.16 (s, 2H), 5.82 (s, IH)， 5.65 (s, IH), 4.53 (t， J=7.0 Hz, IH), 4.42 (t， J=5.5 Hz, IH), 4.37(d， J=5.5 Hz， 4H), 4.33 (m， J=6.5 Hz, 2H), 3.90 (m, J=5.5 Hz, 2H)， 3.29 (s， 6H)， 2.37 (d, J=4.5 Hz, 4H), 2.13 (t, J=6.0 Hz, 2H)， 1.43 (s, 18H), 1.25 (m， J=3.0 Hz, 4H). 13CNMR (125MHz, CDC13): S=176.13， 171.94, 155.58， 103.17, 79.44, 63.59, 53.89, 53.34， 47.48, 46.29, 40.44， 33.84, 28.41, 27.38.元素分析 C29H50N4O12S2: C 49.00, H 7.09, N 7.88.实测值C 49.23, H 7.22, N 8.14.
实施例7制备2-(2，2-曱氧基乙基)-4，5-二-(N-Boc-甘氨酰氧曱基)-l，3-二硫戊环(4e)
按照实施例3的方法，从Boc-Gly-OH得到550 mg (82%)目标化合物，为无色油 状物。[a]D25=2.7 (c=1.0, CH3OH); ESI-MS (m/e) 569[M+H] + ; & N證(500 MHz, CDC13): S=5.24 (s, 2H)， 4.53 (t， J-7.0 Hz, IH), 4.42 (t, J=6.0 Hz, IH), 4.36(d， J=7.0 Hz, 4H), 3.90 (t， J-4.5 Hz, 4H), 3.87 (q, J=5.0 Hz, 2H), 3.33 (s, 6H)， 2.14 (t, J=6.0 Hz， 2H)， 1.44 (s, 18H). 13CNMR (125MHz, CDC13): S=171.88, 155.66, 103.45， 79.89， 63.67， 53.43, 47.39, 46.18， 45.76， 40.42， 28.22. 元素分析
7C23H40N2O10S2: C 48.57， H 7.09， N 4.93。实测值C 48.35, H 6.96, N 4.70.
实施例8制备2-(2，2-甲氡基乙基)-4，5-二-(N-Boc-L-组氨酰氧甲基)-l,3-二硫戊环(4f)
按照实施例3的方法，从Boc-L-His-OH得到53 lmg (73%)目标化合物，为无色固 体。Mp71-72。C; [a]D25=-21.70 (c=1.0, CH3OH); ESI-MS (m/e) 729[M+H] + ; 'H画R ( 500 MHz， CDC13 ): 3=7.49 (s, 2H), 7.24 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.88 (s, 2H)， 4.55 (t， J=7.0 Hz, 1H), 4.42 (t, J=6.0 Hz, IH), 4.39 (d, J=7.0 Hz, 4H), 4.32 (q， J=6.5 Hz, 2H), 3.卯(m, J=5.0 Hz, 2H), 3.35 (s, 6H)， 2.94 (dd， J=11.5 Hz, J=3.5 Hz, 4H), 2.13 (t, J=6.0 Hz, 2H), 1.46 (s, 36H). 13CNMR (125MHz, CDC13): 5=172.14, 155.47, 151.22, 134.66， 126.75, 1 18.83, 103.37， 80.03, 79.97, 63.49, 55.46， 54.01, 47.84, 46.33， 40.72, 28.33， 27.21.元素分析C41H64N6014S2: C 53.00, H 6.94, N 9.05.实测值C 52.77, H 6.80， N 8.81。
实施例9制备2-(2，2-甲氧基乙基)-4，5-二-(N-Boc-L-异亮氨酰氧曱基)-l，3-二硫戊环 (4g)
按照实施例3的方法，从Boc-L-Ile-OH得到574mg (84%)目标化合物，为无色油 状物。[a]D25=-60.71 (c=1.0, CH3OH); ESI-MS (m/e) 681[M+H] + ; NMR (500 MHz, CDC13): S=5.22 (d, J=8.0 Hz, IH), 5.08 (d, J=8.5 Hz， IH), 4.57 (t, J=7.0 Hz, IH)， 4.44 (t, J=6.0 Hz， IH)， 4.40 (d， J=6.5 Hz, 4H)， 4.27 (q， J=6.0 Hz, 2H), 3.90 (q， J=7.5 Hz, 2H)， 3.36 (s, 6H)， 2.15 (t, JN6.5 Hz, 2H), 1,90 (m， J=3.0 Hz, 2H), 1.46 (s， 18H)， 1.24 (q, J=9.0 Hz, 4H)， 0.96 (d， J=8.0 Hz, 6H)， 0.94 (t， J=3.5 Hz， 6H). 13CNMR (125MHz, CDC13): S= 171.84, 155.65, 103.45， 79.90， 63.83， 54.24, 53.44, 47.31, 46.27， 41.02， 37.78,28.32,25.02, 15.65, 11.57.元素分析(:3^56]^201082: C 54.68， H 8.29, N 4.11.实测值C 54.46， H 8.15, N 4.3 5。
实施例10制备2-(2，2-甲氧基乙基)-4，5-二-(^8001^亮氨酰氧曱基)-l，3-二硫戊环 (4h)
按照实施例3的方法，从Boc-L-Leu-OH得到500mg (73%)目标化合物，为无色油 状物。[a]D25=-41.76 (c=1.0, CH3OH); ESI-MS (m/e) 681[M+H]+; &雨R (500 MHz， CDC13): S=5.27 (d, J=8.0 Hz, IH), 5.00 (d, J=8.0 Hz, IH), 4.50 (t, J=7.0 Hz, IH), 4.40 (t, J=6.0 Hz, IH), 4.36 (d, J=8.5 Hz, 4H)， 4.25 (q, J=6.0 Hz， 2H), 3.88 (q， J=6.0Hz， 2H), 3.33 (s, 6H), 2.13 (t, J=6.5 Hz, 2H), 1.64 (m, J=3.0 Hz, 2H)， 1.58 (t, J=3.0 Hz, 4H), 1.43 (s, 18H), 0.94 (d, J=7.5 Hz, 12H). 13CNMR (125MHz， CDC13): S= 172.51， 155.56， 103.48, 79.90， 63.77, 53.56, 52.92, 47.12， 45.94, 41.48, 40.35, 28.32, 24.82, 22.87,21.71.元素分析C3,H56N20,。S2: C 54.68, H 8.29， N4.ll.实测值C 54.89 H 8.42， N 4.34.
实施例11制备2-(2,2-曱氧基乙基)-4，5-二-(N"，Na-二-Boc-L-赖氨酰氧曱基)-l，3-二硫 戊环(4i)
按照实施例3的方法，从(Boc)2-L-Lys-OH得到770mg(85。/。)目标化合物，为无色 固体。Mp98-101。C; [a]D25=-60.99 (c=1.0， CH3OH); ESI-MS (m/e) 911[M+H]+; 'H NMR ( 500 MHz, CDC13): S=5.40 (s, IH)， 5.24 (s, IH)， 4.78 (s， 1H), 4.74 (s， 1H), 4.54 (t, J=7.0 Hz, IH)， 4.45 (m， IH)， 4.36 (d, J=6.5 Hz, 4H)， 3.94 (m， J=5.5 Hz, 2H), 3.卯(q， J=7.0 Hz, 2H)， 3.35 (s， 6H), 3.14 (m, 4H), 2.34 (t， J=6.5 Hz, 2H), 1.84 (m， J=7.0 Hz, 4H) ,1.72 (m, 4H)， 1.66 (m， 4H), 1.46 (s， 36H). 13CNMR (125MHz, CDC13): 3= 172.24， 156.11， 155.62, 103.43, 80.02, 79.59, 63.54, 54.06， 53.38, 47.24， 46.33， 41.53, 40.29, 31.02， 29.57， 28.33, 22.67。元素分析C41H74N42014S2: C 54.04， H 8.19, N 6.15。实测值C 53.83, H8.04, N 6.38。
实施例12制备2-(2，2-甲氧基乙基)-4，5-二-(N-Boc-L-蛋氨酰氧甲基)-l，3-二硫戊环 (4j)
按照实施例3的方法，从Boc-L-Met-OH得到630mg(88。/。)目标化合物，为无色油 状物。[a]D25=-17.57 (c=1.0, CH3OH); ESI-MS (m/e) 717[M+H]+; NMR (500 MHz， CDC13): S=5.43 (s, 1H), 5.25 (s, 1H), 4.55 (t, J=7.0 Hz， 1H), 4.41 (t, J=7.0 Hz, IH)， 4.38 (d， J=6.0 Hz， 4H)， 3.96 (m, J-5.0 Hz， 2H), 3.90 (m， J=6.5 Hz, 2H), 3.34 (s， 6H)， 2.56 (t， J=5.5 Hz， 4H), 2.15 (t， J=6.5 Hz, 2H), 2.11 (s， 6H), 1.97 (q， J=7.5 Hz, 4H)， 1.44 (s, 18H). 13CNMR (125MHz, CDC13):5=171.80， 155.48， 103.39, 80.07， 63.92, 53.48， 52.89， 47.15， 46.11, 40.92, 31.79, 30.07, 28.31， 15.47.元素分析 C29H52N2O10S4: C 48.58, H 7.31, N 3.91。实测值C 48.36， H 7.20, N 3.66。
实施例13制备2-(2，2-曱氧基乙基)-4，5-二-(N-Boc-L-苯丙氨酰氧曱基)-l，3-二硫戊环 (4k)按照实施例3的方法，从Boc-L-Phe-OH得到680mg (91 %)目标化合物，为无色固 体。Mp: 113-115。C; [a]D25=-9.48 (c=1.0, CH3OH); ESI-MS (m/e) 749[M+H] + ; 'H NMR (500 MHz, CDC13): S=7.27 (d, J=4,5 Hz, 2H), 7.24 (d,风5 Hz, 4H)， 7.16 (d, J=4.0 Hz, 4H)， 5.26 (d, J=5.0 Hz, IH)， 5.14 (d， J=5.0 Hz, IH), 4.56 (t, J=7.0 Hz， IH),
4.45 (t, J=6.5 Hz, IH), 4.41 (d, J=6.0 Hz, 4H)， 4.34 (m, J=8.0 Hz, 2H), 3.91 (m， J=5.0 Hz: 2H), 3.36 (s, 6H), 2.89 (dd, J=10.5 Hz, J=4.5 Hz, 4H), 2.16 (t, J=5.0 Hz, 2H), 1.46 (s, 18H). 13CNMR (125MHz, CDC13): S-171.3 5, 155.17， 13 5.96， 129.31, 128.64: 127.11, 103.42, 80.05， 63.64, 54.73, 53.56, 47.25, 46.23， 40.87, 38.18, 28.28.元素分析C37H52N2O10S2: C 59.34， H 7.00, N 3.74。实测值C 59.55, H 7.16， N 3.98。
实施例14制备2-(2，2-甲氧基乙基)-4，5-二-(N-Boc-L-甫氨酰氧曱基)-l，3-二硫戊环(41)
按照实施例3的方法，从Boc-L-Pro-OH得到480mg(74。/cO目标化合物，为无色固 体。Mp 102-103。C; [a]D25=-92.15 (c=1.0, CHC13); ESI-MS (m/e) 649[M+H] + ; &画R (500 MHz, CDC13): 5= 4.55 (t, J=6.5 Hz, IH)， 4.44 (t, J=4.5 Hz, IH), 4.39 (d, J=5.0 Hz, 4H)， 4.29 (q， J=5.5 Hz, 2H), 3.90 (m, J=8.0 Hz, 2H), 3.35 (s, 6H), 2.25 (m， J=8.0 Hz, 4H), 2.16 (t， J=5.5 Hz， 2H), 2.00 (m, J=7.0 Hz, 4H), 1.89 (m， J=5.5 Hz, 4H)，
1.46 (s, 18H). 13CNMR (125MHz, CDC13): 5=172.32, 154.36, 103.46, 79.95， 65.80, 63.90, 53.70, 47.46， 46.33, 42.61， 41.00， 29.90， 28.39, 23.63.元素 分析C29H48N2Ol0S2: C 53.68, H 7.46， N 4.32.实测值C 53.46， H 7.33, N 4.10。
实施例15制备2-(2，2-曱氧基乙基)-4，5-二-(N-Boc-L-丝氨酰氧甲基)-l，3-二硫戊环 (4m)
按照实施例3的方法，从Boc-L-Ser-OH得到300mg (48%)目标化合物，为无色油 状物。[a]D25=-45.23 (c=1.0, CH3OH); ESI-MS (m/e) 629[M+H] + ; IH NMR (500 MHz， CDC13): 3=5.50 (d, J=7.5 Hz IH), 5.40 (d, J=7.5 Hz， IH), 4.55 (s, 2H), 4.50 (t， J=6.0 Hz， IH)， 4.41 (t, J=5.0 Hz, IH), 4.37 (d, J=6.0 Hz, 4H), 4.13 (m, 4H), 4.23 (m， J=5.0 Hz， 2H), 3.90 (m， J=5.5 Hz, 2H)， 3.36 (s, 6H), 2.13 (t, J=5.0 Hz, 2H), 1.46 (s， 18H). 13CNMR (125MHz, CDC13): 5=171.02, 155.73, 103.44， 80.08， 63.15， 60.77, 57.11, 53.41, 47.22, 45.35, 40.46， 28.40.元素分析C26H44N2012S2:
10C 47.76， H 7.05， N 4.46。实观'H直C 47.54, H 6.91， N 4.69。
实施例16制备2-(2,2-曱氧基乙基)-4，5-二-(N-Boc-L-苏氨酰氧曱基)-l，3-二硫戊环 (4n)
按照实施例3的方法，从Boc-L-Thr-OH得到360mg (55%)目标化合物，为无色固 体。Mp61.2-62.4。C; [a]D25=-l5.96 (c=1.0, CH3OH); ESI-MS (m/e) 657[M+H]+; !H NMR (500 MHz, CDC13): 5=5.50 (d， J=8.0 Hz, IH), 5.41 (d, J=8.0 Hz， IH), 4.59 (s， 2H), 4.52 (t， J=7.0 Hz, IH), 4.41 (t, J=5,0 Hz, IH), 4.37 (d, J=6.0 Hz, 4H)， 4.34 (m, 2H), 4.23 (q, J=4.0 Hz, 2H)， 3.90 (q, J=6.0 Hz, 2H)， 3.36 (s， 6H)， 2.13 (t， J=5.0 Hz, 2H)， 1.46 (s, 18H)， 1.33 (d, J=5.5 Hz, 6H). 13CNMR (125MHz, CDC13): 5=170.5， 156.11, 103.37， 79.90, 70.74, 63.99, 58.42， 53.69, 47.27， 44.75， 40.81， 28.31, 24.57.元素分析C27H48N20!2S2: C 44.72, H 7.06, N 6.14。实测值C 44.50 H 6.92, N 5.91。
实施例17制备2-(2，2-甲氧基乙基)-4，5-二-(N-Boc-L-缬氨酰氧曱基)-l，3-二硫戊环 (4o)
按照实施例3的方法，从Boc-L-Val-OH得到475mg (73%)目标化合物，为无色油 状物。[a]D25=-33.37 (c=1.0, CH3OH); ESI-MS (m/e) 653[M+H] + ; 'H NMR (500 MHz， CDC13):5=5.21 (d, J=8.5 Hz， IH), 5.07 (d, J=8.5 Hz, IH), 4.56 (t, J=7.0 Hz, IH)， 4.44 (t, J=5.5 Hz, IH), 4.40 (d, J=6.5 Hz, 4H)， 4.25 (q, J=4.5 Hz, 2H), 3.91 (q, J=7.0 Hz, 2H), 3.36 (s, 6H), 2.16 (t， J=7.0 Hz, 2H), 2.14 (m, J=6.0 Hz, 2H), 1.46 (s, 18H), 1.00 (d， J=7.5 Hz, 6H), 0.90 (t， J=7.5 Hz, 6H). 13CNMR (125MHz, CDC13): 5=171.82， 155.73， 103.44， 79.90， 63.78， 58.59, 53.41， 47.29, 46.26, 41.00, 31.08， 28.31,17.10.元素分析C29H52N2O10S2: C 53.35, H 8.03, N 4.29。实测值 C 53.12, H 7.90， N 4.03。
实施例18制备2-(2，2-曱氧基乙基)-4,5-二-( 0,N-二-Boc-L-酪氨酰氧曱基)-l，3-二硫 戊环(4p)
按照实施例3的方法，从Boc-L-Tyr-OH得到803mg (82%)目标化合物，为无色油 状物。[a]D25=-50.07(c=1.0, CH3OH), ESI陽MS (m/e) 981[M+H] + ; &画R (500 MHz， CDC13): S=7.14 (d， J=8.0 Hz, 4H), 7.12 (d, J=8.0 Hz， 4H), 5.26 (d, J=7.5 Hz,
111H)， 5.11 (d, J=7.5 Hz， 1H)， 4.54 (t, J=7.5 Hz, 1H), 4.52 (t, J=8.5 Hz, 1H), 4.45 (m, J=6.0 Hz, 4H)， 4.30 (m, J=5.5 Hz, 2H), 3.79 (m， 2H), 3.35 (s， 6H), 3.14 (dd， J= 8.0 Hz， J=5.0 Hz, 4H)， 2.15 (t, J=6.5 Hz, 2H), 1.57 (s， 18H)， 1.42 (s,腦).13CNMR (125MHz, CDC13): 3=171.38, 155.19, 151.83, 150.18， 133.63, 130.27， 121.45, 103.44， 83.54， 80.16, 63.77， 54.71， 53.35, 47.23, 46.18， 40.86, 37.52， 28.29， 24.84。 元素分析(3471168>^01682: C 57.53, H 6.99, N 2.86。实测值C 57.30， H 6.84， N 3.13。
实施例19制备2-(H曱氧基乙基)-4，S-二-(N-Boc个叔丁氡基-L-谷氨酰氧曱基)-l，3-二^克戊环(4q)
按照实施例3的方法，从Boc-L-Glu(OtBut)-OH得到651 mg (79 %)目标化合物，为 无色油状物。[a]D25=21.63 (c=1.0, CH3OH), ESI-MS (m/e) 825[M+H] + ; ^ NMR(500 MHz, CDC13): 5=5.42 (d, J=7.5 Hz， 1H), 5.28 (d, J=7.5 Hz， 1H), 4.54 (t， J=7.0 Hz， 1H), 4.15 (t, J=9.0 Hz, 1H), 4.37 (m, J=9.0 Hz, 4H), 4.34 (m， 2H), 3.86 (m， J=7.5 Hz, 2H), 3.51 (s, 6H)， 2.51 (t, J=12.5 Hz, 4H), 2.24 (m， J=7.0 Hz, 4H)， 2.15 (t, J=9.5 Hz， 2H), 1.44 (s, 18H), 1.42 (s, 18H). 13CNMR (125MHz, CDC13):S=172.48, 171.61, 103.41, 82.18, 80.15， 63.92, 54.01， 53.57， 47.10， 40.93， 30.30, 29.80， 28.30， 27.30。 元素分析 C37H64N2014S2: C 53.86, H 7.82, N 3.40。实测值C 53.65， H 7.70， N 3.65.
实施例20制备2-(2，2-甲氧基乙基)-4，5-二-( N-Boc-L-色氨酰氧曱基)-l，3-二硫戊环 (4r)
按照实施例3的方法，从Boc-L-Trp-OH得到667mg (81 %)目标化合物，为无色油 状物。[a]D25=-20.93 (c=1.0， CH3OH); ESI-MS (m/e) 827[M+H] + ; NMR (500 MHz, CDC13): S=9.11 (s， IH)， 9.05 (s， 1H), 7.55 (d, J=4.0 Hz, 2H), 7.36 (d, J=8.0 Hz， 2H)， 7.17 (m, J=4.5 Hz, 4H)， 7.00 (d, J=10.5 Hz, 2H), 5.25 (d, J=8.0 Hz, IH)， 5.13 (d， J=8.0 Hz, 1H), 4.53 (t， J=7.0 Hz, 1H), 4.38 (t, J=6.0 Hz, 1H), 4.32 (d, J=7.0 Hz, 4H), 3.88 (m, J=6.0 Hz， 2H), 3.72 (m, J=7.5 Hz, 2H), 3.31 (s, 6H), 3.24 (dd, J=12.0 Hz, J=4.0 Hz, 4H)， 2.02 (t, J-6.0 Hz， 2H), 1.46 (s, 18H). 13CNMR (125MHz, CDC13): 5=172.06, 156.08， 136.23, 127.26, 123.36， 122.31, 119.78， 118.77， 111.65， 109.25， 103.31, 80.11， 63.76, 56.12， 53.51, 47.41， 46.57， 40.82， 30.89，
1228.46。元素分析C4,H54N40!oS2: C 59.54, H 6.58, N 6.77。实测值C 59.31, H 6.44 N 6.53。
实施例21制备2-(2，2-曱錄乙基)-4，5-二-( L-丙氨酰氧甲基)-l，3-二硫戊环(5a)
0。C下将60mg (O.lmmol) 2-(2，2-曱氧基乙基)-4，5-二-( L-丙氨酰氧甲基)-l，3-二 硫戊环与15 ml 6N氯化氢/乙酸乙酯溶液混合并搅拌lh。 TLC (氯仿:甲醇，10:1)显示 2-(2,2-曱氧基乙基)-4，5-二-( L-丙氨酰氧曱基)-l，3-二硫戊环消失。反应化合物减压浓 缩除去过量氯化氢，残留物用无水乙醚研磨，得到54.2 mg (91%)目标化合物，为无 色固体。Mp 15卜153。C; IR (KBr) 3400， 2876, 2703， 2615， 1750, 1591, 1394 cm-1. [a]D25=-14.63 (c=1.0, H20); ESI-MS (m/e) 351[M+H] + ; 醒R (500 MHz, DMSO-必)5=9.58 (s， 1H), 8.71 (s， 6H), 4.28 (d, J=5.0 Hz, 4H)， 4.24 (t, J=6.0 Hz, 1H), 3.82 (m， J=7.0 Hz, 2H)， 3.74 (m, J=5.0 Hz, 2H), 3.09 (dd， J=10.5 Hz, J=3.0Hz, 2H). 1.53 (d, J=7.5 Hz， 6H). 13C丽R (125 MHz， DMSO-,: 5=203.96, 170.20,66.03,57.49,50.74,48.81,44.66,20.62。 元素分析C13H22N205S2: C 44.55, H 6.33, N 7.99.实测值C 44.34, H 6.20, N 7.75。
实施例22制备2-(2，2-曱H^乙基)-4，5-二-(L-精氨酰氧曱基)-l，3-二硫戊环(5b)
按照实施例21的方法，从4b得到70.2mg (95%)目标化合物，为无色固体。Mp 132-133。Cj IR (KBr) 3339, 3 162， 2968， 2630， 1747, 1662, 1508, 1454, 1371， 1207， 587cm". [a]D25=9.14 (c=1.0, H20); ESI-MS (m/e) 521[M+H]+; !H NMR (500 MHz, DMSO-,: S=9.59 (s, 1H), 9.44 (s, 2H), 8.98 (s, 4H), 8.84 (s, 6H)， 8.72 (s, 6H), 4.47 (d, J=6.0 Hz, 4H), 4.38 (t, J=5.0 Hz， 1H), 4.25 (m, J=3.0 Hz， 2H)， 4.07 (m, J=6.0 Hz， 2H), 4.02 (m， 4H), 3.20 (m, J=5.5 Hz, 4H), 2.88 (dd, J=l 1.5 Hz， J=3.0 Hz, 2H), 2.17 (m， J=2.5 Hz, 4H). 13C顧R (125 MHz,画SO-測5=204.28, 172.31， 158.86, 65.78, 54.16, 52.45， 48.64， 43.17， 38.22, 31.91, 25.08。元素分析C19H36N805 S2: C 43.83， H 6.97, N 21.52.实测值C 43.05, H 6.81， N 21.77。
实施例23制备2-(2，2-曱氣基乙基)-4，5-二-( L-天冬酰胺酰氧甲基)-l,3-二硫戊环(5c)
按照实施例21的方法，从4c得到45.8mg (90%)目标化合物，为无色固体。Mp 170-172。Q IR (KBr) 3356， 3182, 2926, 1750, 1671, 1500, 1417, 1209， 1067， 601cm". [a]D25=11.7 (c=1.0, H20); ESI-MS (m/e) 437[M+H] + ; &顧R (500
13MHz, DMSO-測5=9.58 (s， 1H), 8.71 (s, 6H), 6.56 (s, 2H), 6.15 (s, 2H)， 4.28 (d, J=5.0 Hz, 4H), 4.24 (t， J=6.0 Hz, 1H), 3.84 (m， J=7.0 Hz, 2H), 3.74 (m, J=5.0 Hz， 2H), 3.10 (dd, J=10.0 Hz, J=3.0 Hz, 2H), 2.72 (d， J=5.5 Hz, 4H). 13C画R (125 MHz, DMSO-必):5=203.1 5, 171.13， 169.25, 65.38, 53.75， 50.30, 49.13, 44.71, 34.76。元素 分析C15H24N407S2: C 41.27, H 5.54， N 12.84.实测值C 41.51, H 5.70， N 12.60。
实施例24制备2-(2，2-曱猛乙基)-4，5-二-(L-谷氨酰胺酰氧曱基)-l，3-二硫戊环(5d)
按照实施例21的方法，从4d得到50.2mg (93%)目标化合物，为无色固体。Mp 181-183。C^ IR (KBr) 3381， 3200， 2923, 2617， 1749, 1662， 1515, 1445, 1203, 1081, 582cm". [a]D25=6.37 (c=1.0， H20)， ESI-MS (m/e) 465[M+H] + ; !H 画R (500 MHz, DMSO-測S=9.60 (s, IH), 8.73 (s, 6H), 6.60 (s, 2H)， 6.16 (s, 2H), 4.34(d， J=5.5 Hz, 4H), 4.30 (t, J=6.5 Hz, IH), 4.21 (m, J=5.5 Hz, 2H), 3.82 (m, J=5.5 Hz, 2H), 3.08 (dd， J=10.5 Hz， J=3.0 Hz， 2H), 2.67 (d， J=4.5 Hz, 4H), 1.55 (m, J=3.0 Hz， 4H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-^): 203.41， 173.68， 169.27, 64.63, 55.41， 53.78, 50.50， 45.57, 34.61, 30.68。元素分析C17H28N407S2: C 43.95, H 6.08, N 12.06。实测值C 43.72, 5.93, 12.3 1。
实施例25制备2-(2，2-曱氡基乙基)-4，5-二-(甘氨酰氧曱基)-l，3-二硫戊环(5e)
按照实施例21的方法，从4e得到35.3mg (89%)目标化合物，为无色固体。Mp 181-182。C^ IR (KBr): 3394， 2950， 2863， 2703， 2615, 1750, 1593， 1506， 1406， 1216， 1192, 1015, 904 cm-1. [a]D25=6.5 (c=1.0, H20), ESI-MS (m/e) 323[M+H] + ; !H NMR (500 MHz, DMSO-測:5=9.60 (s, IH), 8.67 (s, 6H), 4.26(d, J=7.0 Hz, 4H), 4.24 (t, J=6.0 Hz, IH), 3.88 (m， J=5.5 Hz, 4H), 3.83 (m, J=5.0 Hz， 2H), 3.09 (dd， J=10.5 Hz, J=3.0 Hz, 2H). 13C画R (125 MHz, DMSO-c/外5=204.39, 167.63, 65.35,56.47,49.03,44.21。元素分析CnH^NzOsS^ C 40.98, H 5.63, N 8.69。 实测值C 40.77, H 5.50, N 8.92。
实施例26制备2-(2，2-甲氡基乙基)-4，5-二-(L-组氨酰氧曱基)-l，3-二硫戊环(5f)
按照实施例21的方法，从4f得到61.1mg (97%)目标化合物，为无色固体。Mp 202-204°C; IR (KBr): 3343， 3114, 2852， 2604, 1746， 1621, 1558, 1515， 1435,1376， 1209, 1040, 827， 617纖-'.[a]D"=l5.4(c=l.0, H20); ESI-MS (m/e) 483[M+H] + ; &顧R (500 MHz, DMSO-測S=14.9 (s， 2H), 14.6 (s, 2H)， 9.58 (s， IH), 9.13 (s, 2H), 9.00 (s， 6H), 7.59 (s, 2H), 4.27 (d, J=6.0 Hz, 4H)， 4.23 (t, J=6.5 Hz, IH), 3.82 (m, J=7.0 Hz， 2H)， 3.74 (m, J=6.0 Hz, 2H)， 3.34 (d， J=7.0 Hz, 4H), 3.10 (dd, J=11.5 Hz， J=3.0 Hz， 2H). I3C丽R (125 MHz, DMSO-測S=203.21, 168.16, 134.56, 126.95， 118.73， 65.01, 56,46， 54.09, 51.50， 44.74, 34.59。元素分析 C19H26N605S2: C 47.29, H 5.43, N 17.41。 实测值C 47.50, H 5.59, N 17.66。
实施例27制备2-(2,2-曱氧基乙基)-4，5-二-(L-异亮氨酰氧曱基)-l,3-二硫戊环(5g)
按照实施例21的方法，从4g得到49.9mg (98%)目标化合物，为无色固体。Mp 175陽176。C; IR (KBr): 3419, 2967， 2923, 2876, 2617， 1746, 1595, 1510， 1461, 1389, 1212, 1045, 780cm". [a]D25=6.03 (c=1.0， H20 ), ESI-MS (m/e) 435[M+H] + ; !H雇R (500 MHz, DMSO-測5=9.59 (s, IH)， 8.74 (s， 6H), 4.37 (d, J=7.0 Hz, 4H)， 4.34 (t， J=6.0 Hz, IH), 4.08 (m, J=6.5 Hz, 2H), 3.92 (m, J=4.5 Hz， 2H), 3.12 (dd， J=10.5 Hz, J=2.5 Hz, 2H), 1.99 (m, 2H), 1.48 (m, 4H), 0.95 (d, J=4.0 Hz， 6H), 0.91(t， J=6.5 Hz, 6H). 13C NMR (125 MHz， DMSO-測S=204.15， 168.76， 64.37， 56.50， 53.93， 49.83, 44.75， 36.26, 25.71, 14.83, 12.01。元素 分析(:191134>^0582: C 52.51, H 7.89， N 6,45。 实测值C 52.30, H 7.74， N 6.69。
实施例28制备2-(2,2-曱氣基乙基)-4，5-二-(L-亮氨酰氧甲基)-l，3-二硫戊环(5h)
按照实施例21的方法，从4h得到45.6mg (90%)目标化合物，为无色固体。Mp 165-166°& IR (KBr》3391, 3200, 2959, 2872， 2630， 1749， 1593, 1509， 1463， 1383, 1208, 1129, 1051， 750cm-1. [a]D25=3.30 (c=1.0, H20); ESI-MS (m/e) 435[M+H]+; 'H NMR (500 MHz, DMSO-測5= 9.59 (s, IH), 8.73 (s， 6H), 4.34 (d, J=7.0 Hz, 4H)， 4.29 (t， J=6.5 Hz, IH), 3.91 (m, J=6.5 Hz, 2H)， 3.82 (m, J=5.0 Hz, 2H), 3.10 (dd， J=10.0 Hz， J=3.0 Hz, 2H), 1.88 (m, 2H), 1.54 (m, 4H), 0.98 (d， J=4.0 Hz, 12H). 13C画R (125 MHz, DMSO-測5=203.79， 169.15, 64.76， 56.44, 50.82， 50.03， 44.86, 25.44， 22.71。元素分析。191134&0582: C 52.51, H 7.89, N 6.45。实测值C 52.28, H 7.72， N 6.69。实施例29制备2-(2，2-甲氧基乙基)-4，5-二-(L-赖氨酰氧曱基)-l，3-二硫戊环(5i)
按照实施例21的方法，从4i得到55.5mg (91%)目标化合物，为无色固体。Mp 124陽126。C5 IR (KBr):3332， 3162, 2958, 2620， 1747, 1660, 1518， 1451, 1377, 1209, 596 cm". [a]D25=14.09 (c=1.0, H20), ESI-MS (m/e) 465[M+H] + ; 画R (500 MHz, DMSO陽測S=9.59 (s， 1H), 8.84 (s, 6H)， 8.25 (s, 6H), 4.26 (d, J=6.5 Hz， 4H), 4.22 (t， J=6.5 Hz, IH)， 3.99 (m, J=5.5 Hz， 2H), 3.80 (m, J=7.0 Hz, 2H), 3.75 (m, J=5.0 Hz, 4H), 3.10 (m， 2H), 2.84 (m, J=6.0 Hz, 4H), 1.88 (m, J-7.0 Hz, 4H)， 1.63 (m, 4H). 13C丽R (125 MHz, DMSO-刷5=203.85， 169.43， 64.93， 56.46, 52.16, 50.59, 45.36， 38.67, 34.61， 29.63， 21.75。元素分析C19H36N405S2: C 49.11, H 7.81, N 12.06。实观'H直C 48.90， H 7.66, N 12.32。
实施例30制备2-(2，2-曱lL&乙基)-4，5-二-(L-蛋氨酰氧曱基)-l，3-二硫戊环(5j)
按照实施例21的方法，从4j得到52.4mg (97%)目标化合物，为无色固体。Mp 154-155。& IR (KBr) 3410, 2906， 2625, 1750， 1591， 1390, 1300， 1207, 774cm". [a]D25=10.16 (c=1.0， H20), ESI-MS (m/e) 471[M+H] + ; 'H NMR (500画z， DMSO-測5= 9.58 (s, 1H), 8.71 (s, 6H)， 4.38 (d， J=6.0 Hz, 4H)， 4.33 (t, J=6.0 Hz, IH)， 4.01 (m, J=5.0 Hz， 2H), 3.90 (m, J=6.5 Hz, 2H), 2.56 (t, J=5.5 Hz， 4H), 3.10 (m， 2H), 2.11 (s, 6H)， 1.97 (q, J=7.5 Hz， 4H). 13C画R (125 MHz, DMSO-af外 5=203.19， 168.89, 64.71, 56.33, 52.69， 50.35, 44.39, 34.17， 30.07， 18.15。 元素分析(17113(^20584: C 43.38, H 6.42, N 5.95。 实测值C 43.14， H 6.28， N 5.71。
实施例31制备2-(2，2-曱猛乙基)-4，5-二-(L-苯丙氨酰氧曱基)-l,3-二硫戊环(5k)
按照实施例21的方法，从4k得到55,3mg (96°/。)目标化合物，为无色固体。Mp 168-169。C; IR (KBr》3407, 3200， 3018， 2876， 2617, 1747, 1591, 1500, 1452, 1394, 1203， 1080, 750, 700，-'. [a]D25= 3.9 (c=1.0, H20), ESI-MS (m/e) 503[M+H] + ; 'H NMR (500 MHz, DMSO-d(5): 5=9.58 (s, 1H), 8.71 (s, 6H), 7.30 (d, J=4.5 Hz, 2H), 7.27 (d, J=8.5 Hz, 4H), 7.16 (d, J=4.0 Hz, 4H), 4.27 (d, J=5.0 Hz, 4H), 4.23 (t, J=7.0 Hz， IH)， 3.82 (m, J=8.0 Hz， 2H), 3.74 (m, J=6.0 Hz, 2H), 3.19 (dd, J=10.5 Hz， J=4.5 Hz, 4H)， 3.10 (dd, J=l 1.5 Hz, J=5.0 Hz， 2H). 13C画R (125 MHz, DMSO,: 8=204.01， 168.87, 135.24, 129.95， 129.08, 127.73, 64.55， 56.69, 53.60,
1650.54, 45.02, 36.22。元素分析C25H3()N205S2: C 59.74, H 6.02, N 5.57。 实 测值C 59.95, H 6.17， N 5.84。
实施例32制备2-(2，2-曱氡基乙基)-4，5-二-(甫氨酰氧甲基)-1，3-二硫戊环(51)
按照实施例21的方法，从41得到46.0mg (97%)目标化合物，为黄色油状物。， yellowy oil. IR (KBr) 3411， 2958， 2876, 2603， 1747, 1590， 1501， 1453, 1377, 1202， 1025， 760cm-1. [a]D25=-16,8 (c=1.0， H20), ESI-MS (m/e) 403[M+H] + ; 'H画R (500 MHz, DMSO-必)S=9.58 (s, 1H), 8.70 (s， 4H), 4.48 (d, J=7.0 Hz， 4H), 4.34 (t, J=7.5 Hz, IH)， 4.3l(m， J=6.0 Hz, 2H), 3.94 (m, J=5.5 Hz, 2H), 3.26 (m, J=6.0 Hz, 4H), 3.15 (dd, J=l 1,5 Hz， J=5.0 Hz， 2H), 1.99 (m, J=6.0 Hz, 4H), l.卯(m, J-6.0 Hz， 4H). 13CNMR(125MHz, DMSO-d6):5=204.18, 169.34， 65.25， 59.73, 56.39, 50.46， 46.74, 44.36, 33.67， 25.24。元素分析(171126>^205 S2: C 50.72, H 6.51, N 6.96。实测值C 50.50， H 6.37, N 6.70。
实施例33制备2-(2，2-甲氡基乙基)-4，5-二-(L-丝氨酰氧曱基)-l，3-二硫戊环(5m)
按照实施例21的方法，从4m得到41.9mg (92%)目标化合物，为无色固体。Mp 176隱1780& IR (KBr) 3389， 3209, 2925， 2634, 1749, 1593， 1507， 1403, 1220， 1129， 1039， 564cnT1. [a]D25=2.97 (c=1.0, H20); ESI-MS (m/e) 383[M+H] + ; 'H薩R (500 MHz, DMSO扁,5=9.58 (s, IH)， 8.71 (s, 6H)， 4.52 (s， 2H), 4.28 (d， J=5.0 Hz, 4H), 4.23 (t, J=6.0 Hz， 1H), 4.11 (d， J=6.0 Hz ， 4H), 3.83 (m, J-7.0 Hz， 2H)， 3.74 (m, J=5.0 Hz， 2H)， 3.09 (dd, J=10.5 Hz, J=3.0 Hz, 2H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-,:S=203.48, 168.93, 65.74， 64.37, 56.44， 56.19, 50.32， 44.51。元素 分析Ci3H22N2。7S2: C 40.83, H 5.80, N 7.32。 实测值C 40.60, H 5.94, N 7.10。
实施例34制备2-(2，2-曱H^乙基)-4，5-二-(L-苏氨酰氧甲基)-l，3-二硫戊环(5n)
按照实施例21的方法，从4n得到45.1mg (93%)目标化合物，为无色固体。Mp 150-151°C; IR (KBr): 3394， 2928， 2614， 1749， 1590, 1507, 1408, 1217, 1125, 1036， 580cm-1. [a]D25=-l6.33 (c=1.0, H20); ESI-MS (m/e) 411[M+H]+; !H NMR (500 MHz, DMSO-柳S=9.58 (s, IH)， 8.71 (s, 6H)， 4.58 (s， 2H), 4.34 (m, 2H), 4.28 (d， J=5.0 Hz， 4H), 4.22 (t， J=6.5Hz, 1H), 3.88 (m， J=5.0 Hz， 2H), 3.74 (m, 2H)，
173.09 (dd, J=9.5 Hz, J=3.5 Hz, 2H), 1.33 (d, J=5.5 Hz, 6H). "C画R (125 MHz, DMSO-,:5=203.89, 166.92, 71.59， 65.31， 59.44， 56.68, 50.72, 44.45, 20.39。元素分析(151126:^20782: C 43.89, H 6.38, N 6.82。 实测值C 43.66, H 6.21， N 6.60。
实施例35制备2-(2，2-甲氡基乙基)-4，5-二-(L-缬氨酰氧曱基)-l,3-二硫戊环(5o)
按照实施例21的方法，从4o得到43.5mg (94%)目标化合物，为无色固体。Mp 166-167。C; IR CKBr): 3411， 3204, 2968， 2928, 2884， 2625, 1746, 1595, 1458, 1390, 1286, 1214, 1121， 1045， 533cm". [a]D25=1.50 (c=1.0， H20); ESI-MS (m/e) 393[M+H] + ; 画R (500 MHz, DMSO-t/d): 9.58 (s， IH), 8.70 (s, 6H)， 4.38 (d: J=6.5 Hz, 4H)， 4.34 (t， J=5.5 Hz, IH)， 4.25 (m, J=4.5 Hz, 2H), 3.91 (m， J=7.0 Hz, 2H), 3.09 (m, J=7.0 Hz, 2H)， 2.18 (m, J=6.0 Hz, 2H)， 1.02 (d, J=7.5 Hz, 12H). 13C薩R (125 MHz，DMSO-,:3=203.44, 168.85, 65.38， 57.82, 56.06, 50.55， 45.88， 29.78, 18.97。元素分析CnH3oN205S2: C 50.22, H 7.44， N 6.89。 实测值C 50.00, H 7.28, N 7.14。
实施例36制备2-(2，2-曱ltJ^乙基)-4，5-二-(L-酪氨酰氧曱基)-l,3-二硫戊环(5p)
按照实施例21的方法，从4p得到56.9mg (94%)目标化合物，为无色固体。Mp 121-122。Q IR (KBr) 3420， 3223, 3010, 2927, 1745, 1608, 1512, 1447, 1390， 1221， 1114, 1053, 830, 728cm.1. [a]D25=5.00 (c=1.0, H20); ESI-MS (m/e) 535[M+H]+; 画R (500 MHz, DMSO-c/6): 5=10.17 (s, 2H), 9.58 (s, IH), 8.73 (s, 6H)， 7.14 (d, J=8.0 Hz, 4H), 7.12 (d, J=8.0 Hz, 4H), 4.43 (m, 2H), 4.29 (d, J=5.5 Hz, 4H), 4.25 (t, J=6.5 Hz, IH), 3.98 (m, J=5.5 Hz, 2H), 3.20 (dd, J=8.0 Hz， J-5.0 Hz, 4H), 3.09 (dd, J=10.0 Hz， J=6.5 Hz, 2H). 13CNMR (125MHz, CDC13): S=203.17, 169.38, 150.18， 133.63, 130.27, 121.45， 65.38, 56.96, 54.72， 50.55， 45.88， 40.36。元素分析C25H3qN207S2: C 56.16, H 5.66， N 5.24。 实测值C 56.38, H 5.80, N 5.49。
实施例37制备2-(2，2-甲氧基乙基)-4，5-二-(L-，叔丁氧基谷氨酰氧曱基)-l，3-二硫戊 环(5q)
按照实施例21的方法，从4q得到50.7mg (94 %)目标化合物，为无色固体。Mpl43-1450& IR (KBr): 3390， 2929， 1744, 1595， 1506, 1406, 1207， 1085, 984, 807cm-1. [a]D25=3.77 (c=1.0, H20), ESI-MS (m/e) 467[M+H] + ; ^丽R (500 MHz, DMSO-測12.34 (s, 2H), 9.59 (s， IH), 8.77 (s, 6H), 4.38 (d, J=6.5 Hz, 4H)， 4.34 (t， J=6.0 Hz, IH), 4.08 (m， J=6.5 Hz, 2H), 3.92 (m, J=4.5 Hz, 2H), 3.12 (dd, J=10.5Hz, J=2.5Hz, 2H), 2.51 (t, J=9.5 Hz, 4H), 2.24 (m, J=7.0 Hz, 4H)， 13C雨R (125 MHz, DMSO-測:5=203.51， 177.31， 172.46, 65.82, 56.47, 53.98， 50.55, 40.93, 30.30, 27.30。元素分析。17112美0982: C 43.77, H 5.62, N 6.00。 实测值C 43.54， H 5.50, N 6.26。
实施例38制备2-(2，2-甲氡基乙基)-4，5-二-(L-色氨酰氧曱基)-l，3-二硫戊环(5r)
按照实施例21的方法，从4r得到62.1mg (95%)目标化合物，为棕色固体。Mp >220°& IR (KBr): 3405, 3228, 3044， 2914, 2859， 2612， 1745， 1608, 1505， 1457, 1331， 1203， 1095, 1061， 940, 746cm-1. [a]D25=6.47 (c=1.0, H20); ESI國MS (m/e) 581[M+H] + ; 'H NMR (500 MHz， DMSO層測S=10.94 (s, 2H)， S=9.58 (s, IH), 8.70 (s, 6H)， 7.42 (d, J=2.5 Hz, 2H)， 7.26 (d, J=10.5 Hz, 2H), 7.17 (m, 4H)， 6.82 (d, J=7.5 Hz, 2H), 4.25 (d， J=6.0 Hz, 4H), 4.04 (t, J=10.0 Hz, IH), 3.98 (m， J=3.5 Hz， 2H), 3.87 (m， 2H), 3.34 (dd, J=12.0 Hz, J-4.0 Hz, 4H), 3.06 (dd, J=10.0 Hz， J=4.5Hz,2H). 13CNMR(125MHz,DMSO,:S=204.17, 169.55, 136.41, 126.65， 125.34, 122.31， 119.61， 118.11, 112.24， 106.19， 65.58, 64.73， 56.29, 50.32, 43.59, 26.20。元素分析C29H32N405S2: C 59.98, H 5.55, N 9.65。 实测值C 59.74， H 5.41， N 9.91。
试验例l本发明通式I化合物抗肺瘤细胞增殖活性试验
1) 受试样品
本发明实施例21-38所制备的化合物(5a-5r )，将它们分别用含l 。/。DMSO的PBS 配制成所需浓度。
2) 人癌细胞抹
HL-60 (人早幼粒细胞白血病细胞)、hl299(非小细胞肺癌细胞)、HepG2 (肝 细月包癌细力包)。
3) 主要仪器
酶标仪450， Biorad公司高压灭菌锅400Ep-Z, Bruckmanning7仝司 细胞孵育箱INC153， memmer公司 低温离心机SPD111V， Thermo公司 96孔细胞培养板Costar公司
石英自动双重纯水蒸馏器1810-B，江苏荣华仪器制造有限公司
4) 主要试剂
MTT:四p塞峻蓝(3曙(4，5-dimethylthiazol-2-yl) 2，5-diphenyl-tetrazolium bromide) (Flka)，溶于PBS中，浓度为5mg/ml，过滤除菌,4 °C避光保存。
PBS:每升溶液中含有NaCl 8.2g, KC1 0.20g, Na2HP04.H201.56g, KH2P04 0.2g， pH为7.4
RPMI-1640培养基Gibco公司
DMEM培养基Gibco公司
改良的Mccy，s 5A medium + L-Glutamine培养基Gibccy厶司 胎牛血清Hyclone公司
青霉素石药集团中诺药业(石家庄)有限公司 链霉素石药集团中诺药业(石家庄)有限公司 DMSO: Hyclone公司。
其余所用试剂均为市售分析纯.
5) 实验方法
分别将生长状态良好、处于对数生长期的HL-60细胞以5xl(^个/mL的密度接种 于96孔板，每孔100jxl，按预设的浓度梯度加入经灭菌处理的5a-r,对照组加入等体 积的溶解样品的溶媒。继续培养48小时后，每孔加25^d浓度为5mg/ml的MTT溶液， 继续置于37 。C孵育四个小时，离心5min(2500rpm)小心吸出上清液，每孔加入100pl 的DMSO溶解紫色残留物(曱缵)，振荡约15min沉淀全部溶解，于570nm酶标仪上 测定O.D.(吸收值),波长570nm。
按照公式"相对生存率-(D含药-D空白)/(D对照-D空白)x100 %"计算每一 个样品浓度下的样品对肺瘤细胞的抑制率。
实验重复6次,以抑制率对药物浓度作图，按作图法求出IQo(半数有效抑制浓度)值。
6) 结果
结果列入表l。可见，本发明的化合物显示明确的抗肿瘤细胞增殖活性。表l本发明化合物体外抗肿瘤细胞增殖活性的试验结果
化合物ic50 HL60 HepG2 h1299
154.29±18.04378.02±61.16217.68±4.33
5b195.97±14.52491.96±36.33264.31±27.25
5c120.52±24.07290.98±78.25180.01±2.35
5d208.16±38.62409.6U34.81327.04±18.90
5e92.37±11.27220.68±28.41141.03±10.02
5f243.85±36.45423.15±43.25468.78±69.14
5g256.86±38.43歡85±30.36353.94±23.62
5h265.59±3.44522.40±77.43409.85±38.23
5i278.82±16.86684.05±53.49493.57±48.69
5j331.15±58.90654.6U70.25519.74±117.98
5k65.27±27.98215.46±22.65178.92±9.09
51137.02±12.36306.92±21.44222.75±28.85
5m211.16±2.88334.65±20.32293.27±20.46
5n247.47±9.38432.47±53.53296.53±12.40
5o285.62±44.28529.95±5.31455.73±18.60
5p84.18±10.09268.73±18.34123.24±5.64
5q651.01±124.11824.17±93.381086.45±97.46
5r336.25±52.79527.38±55.79402.16±37.63
IC50用i士SD(iM表示，n=6。
试验例2本发明通式I化合物(5a-5r )体内抗肿瘤活性试验
1 )实验材料
受试化合物本发明实施例21-38所制备的化合物(5a-r)。 阳性对照品为阿糖胞苦。
实验动物雄性ICR小鼠，体重20土2g(7土s);购自北京大学医学部动物实验中 心提供。每10只小鼠一组，空白及阳性对照各一组。
瘤源小鼠S哪肉瘤，来自北京大学医学部动物实验中心，自行传代维持。
21溶剂生理盐水，0.5。/。CMC-Na溶液。
2) 剂量设置5a-r: 5a-r为44.64pmol/kg,阳性对照为89.28pmol/kg，均采用腹腔 单次给药。
3) 药物配制
5a-5r和阳性对照品阿糖胞普均用生理盐水溶解。
4) 给药剂量及给药方案
5a-5r均以腹腔单次给药。按相应的给药剂量每天一次，0.2ml/鼠，连续给药7 天，共给药7次。
阴性对照以等体积的相应溶液，均以腹腔给药。按相应的给药剂量每天一次， 0.2ml/鼠，连续给药7天，共给药7次。
阳性对照阿糖胞苷按89.28(imol/kg腹腔给药。每天一次，0.2ml/鼠，连续给药7 天，共给药7次。
5) 模型
釆用体内抗紳瘤腋皮下接种模型在无菌条件下抽取接种7d,后取生长旺盛S刚 腹水瘤瘤液，用生理盐水稀释成(1:2)的液体充分混合，将肺瘤细胞悬液用新鲜配制 的0.2%台盼蓝染色,混匀后按白细胞计数方法计数，染蓝色者为死细胞，不染色者为 活细胞，按如下公式计算细胞浓度和细胞存活率。
细胞浓度=4大方格内活细胞数/4x 10、稀释倍数—田胞数/ml
细胞存活率=活细胞数/(活细胞数+死细胞数)x 100%
将存活率大于90%的瘤液用匀浆法制备成lxl(f个/ml的细胞悬液，于相应宿主 腋皮下接种0.2ml/鼠，制成实体瘤动物模型。
6) ;险测指标及方法
7) 体内神经毒性观察
每曰观察给药各组动物的反应小鼠的自主活动、精神状态、毛发、呼吸、饮食， 粪便性状。
8) 实体瘤抑瘤率和体重增长的测定
各组连续给药7d后，于第8d脱颈推处死小鼠,用镊子固定小鼠右腋肿瘤生长部 位，剪开皮肤，暴露肿瘤，钝性剥离，称重，按如下公式计算抑瘤率。
抑瘤率％=[(阴性对照組平均瘤重-给药组平均瘤重)/阴性对照组平均瘤重]x 100
22%
9)统计方法
本实验数据统计均采用 检验和方差分析，以(7士SZ))表示。 11)实验结果
本发明化合物5a-5r对荷S咖肉瘤的体内抗肿瘤活性实验结果见表2。从实验结果 可见本发明化合物5a-5r具有明确的抗肿瘤活性。
表2本发明化合物5a-5r对荷S18。小鼠肿瘤重量的影响
化合物瘤重抑制率化合物瘤重抑制率
NS1.240±0.4480阿糖胞苷0.582±0.250 e53.08±22.80
531.213±0.8842.16±1.585k0.693±0.248e44.10±15.81e
5b0.778±0.265 c37.26±12.68511.446±0.757-16.61±8.70
5c0.855±0.371 b31.03±13.475m1.493±0.926-20.41±12.65
5d1.061±0.40014.48±5.465n1.087±0.4005.19±3.18
5e0.723±0.203d41.68±11.70d5o1.114±0.47010.19±4.30
5f1.076±0.46213.23±5.685p0.529±0.173e57.38±18.78e
5g1.064±0.35114.24±4.705q1.051±0.60815.27±8.83
5h1.296±0,596-4.63±2.135r0.954±0.33923.10±8.21
5i0.989±0.40920.27±8.3841.206±0.4142.79±0.96
5j1.139±0.3008.19±2.16
a)瘤重用i土SD g表示；抑制率用i± SD。/。表示；NS二生理盐水；n=10; b)与NS 比较p<0.05; c)与NS比较p<0.01; d)与NS比较pO.01,与阿糖胞苷p〉0.05。
试验例3本发明化合物5e， 5k和5p在不同剂量下的体内抗肿瘤活性试验
采用试验例2的模型和方法测定了本发明的化合物5e,5k和5p在 44.64pmol/kg、 4.46jamol/kg和0.45 nmol/kg三种剂量下的体内抗肿瘤活性。结果列 入表3 。结果表明它们的抗肺瘤作用具有剂量依赖性。
表3不同剂量本发明化合物5e， 5k, 5p的体内抗肿瘤活性a
23化合物抑制率 44.64 |imol/kg4.46 nmol/kg0.45 pmol/Kg5e41.68±11.17b31.64±5.56c15.17±5.57
5k44.10±15.81 b16.78±3.51 d12.30±3.48
5p57.38±16.78e43.44±5.76 e10.58±4.15
a)抑制率用7± SD。/。表示；NS-生理盐水；n=10; b)与4.46 pmol/kg组比较 p<0.01;c)与0.45 (imol/kg纟且t匕4交p〈0.01; d)与0.45 (imol/kg纟且t匕丰交p<0.05; e)与 4.46 ,ol/kg组比较p<0.05.
2权利要求
1、具有抗肿瘤活性的通式I化合物通式I其中，AA选自Ala，Arg，Asn，Gln，Gly，His，Ile，Leu，Lys，Met，Phe，Pro，Ser，Thr，Val，Tyr，Glu(OtBu)或Trp。
2、 一种制备权利要求1所述的通式I化合物的方法，包括(1) 在4N氯化氢/曱醇溶液中将二巯基丁二酸转变为二巯基丁二酸曱酯；(2) 在浓盐酸存在下将二巯基丁二酸甲酯与1，1,3,3-四曱氧丙烷縮合制备得到 2-(2,2-甲氧基乙基)-4，5-二甲氧羰基-1 ，3-二硫戊环；(3) 在LiAlH4存在下将2-(2,2-甲氧基乙基)-4,5-二曱氧羰基-l，3-二硫戊环还原为 2-(2，2-曱氧基乙基)-4,5-二羟基-l，3-二硫戊环；(4) 在DMAP和DCC存在下Boc-L-氨基酸与2-(2,2-曱氧基乙基)-4,5-二羟基 -1,3-二硫戊环偶联生成2-(2,2-曱氧基乙基)-4,5-二-(]^-8001^氨基酰氧曱基)-1，3-二硫 戊环；(5) 在4N氯化氢/乙酸乙酯溶液中将2-(2,2-曱氧基乙基)4,S-二-(N-Boc-L-氨基 酰氧曱基)-l，3-二硫戊环转化为2-(2,2-甲氧基乙基)-4,5-二-L-氨基酰氧曱基-l，3-二硫 戊环。
3、 按照权利权利要求2的方法，其特征在于步骤(4)中所述的Boc-L-氨基酸 选自Boc-L-Ala ， (Boc)rL-Arg ， Boc-L-Asn ， Boc-L-Gln-OH , Boc-Gly-OH , Boc-L-His-OH， Boc-L-Ile-OH, Boc-L-Leu-OH, (Boc)2-L-Lys-OH， Boc陽L陽Met-OH， Boc-L國Phe-OH, Boc-L-Pro-OH ， Boc-L-Ser-OH, Boc-L-Thr-OH, Boc-L-Val-OH, Boc-L陽Tyr-OH, Boc-L-Glu(C)tBut)-OH或Boc-L-Trp隱OH。
4、 一种治疗肿瘤的药物组合物，由有效量的权利要求1所述的通式I化合物 和药学上可接受的载体或辅料组成。
5、 权利要求1所述的通式I化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
全文摘要
本发明公开了2，4，5-三取代-1，3-二硫戊环、其合成方法、其应用。其制备方法包括(1)制备2-(2，2-甲氧基乙基)-4，5-二甲氧羰基-1，3-二硫戊环；(2)将2-(2，2-甲氧基乙基)-4，5-二甲氧羰基-1，3-二硫戊环还原为2-(2，2-甲氧基乙基)-4，5-二羟基-1，3-二硫戊环；(3)将Boc-L-氨基酸与2-(2，2-甲氧基乙基)-4，5-二羟基-1，3-二硫戊环偶联生成2-(2，2-甲氧基乙基)-4，5-二-(N-Boc-L-氨基酰氧甲基)-1，3-二硫戊环；脱保护基。体外和体内实验结果表明，本发明化合物具有优秀的抑制肿瘤细胞增殖的活性，临床上可作为抗肿瘤剂应用。
文档编号A61K31/405GK101497600SQ20081005712
公开日2009年8月5日 申请日期2008年1月29日 优先权日2008年1月29日
发明者崔国辉, 彭师奇, 明 赵, 飞 黄 申请人:首都医科大学