专利名称：N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属于化学医药技术领域，特别涉及N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻 唑-6-)-2-甲酰胺衍生物及其制备方法和用途。高效安全抗肿瘤药物的开发一直是世界性的难题。近年，随着对恶性肿瘤发病机 制的深入研究，针对肿瘤特异性分子靶点设计抗肿瘤治疗药物因其确切疗效和低毒副作用 而成为抗肿瘤药物开发的新方向和热点。肿瘤血管在实体瘤的发生发展中具有重要的作用，肿瘤新生血管靶向新药的研发 已成为当今肿瘤研究的热点领域。目前研究已证实许多与肿瘤血管生成密切相关的细胞因 子，如Tie2就是其中一个典型的受体酪氨酸激酶。Tie2是1992年在人的内皮细胞表面发现 一种新的受体型酪氨酸激酶，它是血管生成素(angiopoietin，Ang)l，2，3，4的受体。当配 体Angl与Tie2结合后，能通过一系列生化反应，使基底膜与细胞外基质降解，促进内皮细 胞迁移，从而诱导新生血管生成。在多种肿瘤中均可检测到肿瘤组织血管中Ang-I和Tie2 受体的表达增高，抑制Tie2的活性可以破坏肿瘤的血管生成，从而达到抑制肿瘤生长的目 的。故Tie2已经成为近年抗肿瘤药物开发的一个新的靶点，针对Tie2受体的小分子拮抗 剂有可能为肿瘤治疗提供新的希望。本发明的发明人使用分子对接(Docking)技术，对小分子化合物数据库中进行虚 拟筛选基础上发现了具有Tie2抑制效果的新型的骨架结构，然后通过有机合成获得了实 体化合物，通过体外抗肿瘤活性测试发现其具有抗肿瘤活性。
发明内容
本发明所要解决的第一个技术问题是为抗肿瘤血管生成药物提供一类新的化合 物，该类化合物为式I所示的N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物
背景技术：
优选的，R1为-(CH2)nC6H5、-(CH2)nC6H5_m (CH3) m、- (CH2)nC6H5_m (CH2CH3) m、-(CH2) I1C6H5-D1Fm> “ (CH2) nC6H5_mClm、- (CH2) nC6H5_mBrm、- (CH2) nC6H5_m (OCH3) m、- (CH2) nC6H5_m (OCH2CH3) m，η = 1 8,m=l 5;R2 为-CxH(2x+1)、-CxH(2x+1)_yFy、-CxH(2x+1)_yCly、-CxH(2x+1)_yBry、-C6H5_c (OCH3) c、-C6H5_c (CF3) c、-C6H5_c (OCH2CH3)c, χ = 1 8，y = 1 16，c = 1 5。进一步的，R1为-CH2C6H5、-CH2C6H4F、-CH2C6H5Cl、-CH2C6H5Br、-CH2C6H4OCH3 ；R2 为-CH2 F、-CH2Cl、-CH2Br、-C6H4OCH3^ -C6H4CF3O更进一步的，R1为 _CH2C6H5、-CH2C6H5Cl 或-CH2C6H4OCH3 ；R2 为-CH2Cl、-C6H4OCH3 或-C6H4CF315最优的，所述N-(2_(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物为式II VII所示化合物 本发明所要解决的第二个技术问题是提供上述式I所示的N-(2-(2-胺)氧乙硫 基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物的制备方法，其反应路线如下所示 即6-氨基-2-巯基苯并噻唑在碱性条件下与R1NHCOCH2CI进行烷基化反应得到 6_氨基I-Q-N-R1)氧乙硫基)苯并噻唑，然后再与R2COCl反应得到产物。本发明所要解决的第三个技术问题是提供上述式I所示的N-(2_(2-胺)氧乙硫 基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物在制备抗肿瘤药物中的用途。本发明还提供了一种药物组合物，是由上述式I所示的N-(2_(2-胺)氧乙硫基苯 并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物添加药学上可以接受的辅助性成分制备而成的。该药物组合 物可用于制备抗肿瘤药物。本发明的有益效果为本发明在大量筛选的基础上得到N-(2_(2-胺)氧乙硫基苯 并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物，具有抗肿瘤活性，为抗肿瘤药物的开发和应用提供了新的 选择。
具体实施例方式式I所示的N-(2_(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)_2-甲酰胺衍生物的制备方法
反应路线如下所示 R1NHCOCH2CI的合成方法为冰水浴下在R1取代胺、碱和二氯甲烷混合的反应液中缓慢滴加氯乙酰氯，滴加完 毕后加热回流，TLC(薄层色谱)鉴定反应完毕后加水淬灭反应。反应液用水洗，水相再用 二氯甲烷萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水NaSO4干燥，过滤，旋干得到白色固体。R2COCl的合成方法为室温下在R2COOH与二氯甲烷混合的溶液中滴加数滴(催化量)DMF,再缓慢滴加草 酰氯，室温搅拌，TLC监测反应完毕后旋干溶剂即得。
N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物的合成方法为将6-氨基-2-巯基苯并噻唑jiNHCOa^Cl、碱和丙酮混合并加热回流，TLC鉴定反 应完毕后减压除去有机溶剂，残余物用乙酸乙酯溶解后加水分液，水层用乙酸乙酯萃取，合 并有机相用饱和食盐水洗，无水NaSO4干燥，然后再减压除去有机溶剂，残余物经快速硅胶 柱层析纯化得到反应中间体。将制备好的R2COCl用二氯甲烷溶解后，滴加到上述反应中间体和NaHCO3的二氯 甲烷反应液中，室温搅拌，TLC鉴定反应完毕，饱和NaHCO3溶液洗，二氯甲烷萃取，合并有机 相，饱和食盐水洗，硅胶柱层析分离纯化，得到的样品经重结晶纯化，HPLC测定含量> 95% 后进行药效学实验。以下结合实施例对本发明作进一步的阐述。实施例仅用于说明本发明，而不是以 任何方式来限制本发明。本实施例所用的6-氨基-2-巯基苯并噻唑购买自Sigma-Aldrich公司，邻三氟甲
基苯 冰水浴下在溶有苄胺(60g，0.56mol)和 K2CO3 (90g, 1. 18mol)的二氯甲烷(550ml) 反应液中缓慢滴加氯乙酰氯(52. llml，0.65mol)，滴加完毕后加热回流，TLC鉴定(Rf = 0.53，展开剂石油醚乙酸乙酯=2 1)反应完毕后加水淬灭反应。反应液用水洗，水相 再用二氯甲烷萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水NaSO4干燥，过滤，旋干得到白色固体 82. 2g，产率为80. 0%，产品的结构鉴定数据如下1H-WrGOOMHz, CDCl3) δ 4. 10 (s，2Η)，4. 50 (d，J = 5. 6Hz,2H) ,6. 88 (s, broad, 1H)，7. 26-7. 38 (m, 5H)ESI-MS (m/z, % ) 184. O(M-H)+实施例2 N-对氯苄基-2-氯乙酰胺的合成冰水浴下在溶有4-氯代苄胺30克和K2CO3 34. 6克的二氯甲烷(270ml)反应液中 缓慢滴加氯乙酰氯19. 79ml，滴加完毕后加热回流，TLC鉴定反应完毕后加水淬灭反应。反 应液用水洗，水相再用二氯甲烷萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水NaSO4干燥，过滤，旋 干得到白色固体32. lg。产率为69. 2%，产品的结构鉴定数据如下1HwrGOOMHz, DMS0-d6) δ 4. 13 (s，2Η)，4. 29 (d，J = 6. 0Hz,2H) ,7. 28 (d, J =4. 4Hz，2H)，7. 39 (d, J = 8. OHz, 2H) ,8. 77 (s, 1H)ESI-MS (m/z, % ) 218. O(M-H)+实施例3 N-对甲氧苄基-2-氯乙酰胺的合成 冰水浴下在溶有4-甲氧基苄胺50克和K2CO3 80克的二氯甲烷(450ml)反应液中 缓慢滴加氯乙酰氯45ml，滴加完毕后加热回流，TLC鉴定反应完毕后加水淬灭反应。反应液 用水洗，水相再用二氯甲烷萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水NaSO4干燥，过滤，旋干得 到白色固体66. 2g。产率为85%，产品的结构鉴定数据如下1HNMR (400MHz, CDCl3) δ 3. 81 (s, 3H), 4. 09 (s, 2H), 4. 43 (d, J = 5·6Ηζ，2Η)， 6. 80 (s，1Η)，6· 88 (d, J = 8. 8Ηζ，2Η)，7· 23 (d, J = 8. 4Hz，2H)ESI-MS(m/z, % ) 214. O(M-H)+实施例4邻甲氧基苯甲酰氯的合成 室温下在溶有邻甲氧基苯甲酸(0. 152g，lmmol)的二氯甲烷4ml溶液中滴加数滴 DMF，再缓慢滴加草酰氯(0.4ml，4mmol)，室温搅拌，TLC监测反应完毕后旋干溶剂即得。该 化合物不稳定，须立即投人后续反应。实施例5 2- (2- (2-苄胺)_氧乙硫基)-6-氨基苯并噻唑的合成 6-氨基-2-巯基苯并噻唑0. 728g(4mmol)、实施例1制备的N-苄基_2_氯乙酰胺 1.468g(8mmol)和K2CO3 LKMg(Snmol)加入20ml丙酮中回流4小时，TLC鉴定反应完毕 后旋干丙酮，再用乙酸乙酯溶解并水洗，萃取，饱和食盐水洗，硅胶柱层析分离，依次用石油 醚乙酸乙酯=2 1和石油醚乙酸乙酯=1 1洗脱，TLC检测产品的Rf = 0.24，展 开剂石油醚乙酸乙酯=2 1，得到浅黄色固体1.26g，产率为95%。产品的结构鉴定数 据如下1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ 4. 08(s,2H) ,4. 31 (d, J = 5. 6Hz，2H)，5. 36 (s，2H)， 6. 72 (dd, J = 8. 8,2. OHz, 1H) ,7. 00 (d, J = 2. 4Hz，1H)，7· 20-7. 28 (m，5H)，7· 49 (d，J = 8. 8Hz, 1Η)，8. 75 (t, J = 6. OHz, 1Η)ESI-MS(m/z, % ) 330. O(M-H)+实施例6 2- (2- (Ν-4-氯苄氨)_2_氧乙硫基)_6_氨基苯并噻唑的合成
6-氨基-2-巯基苯并噻唑0. 091g(0. 5mmol)、实施例2制备的N-对氯苄基_2_氯 乙酰胺0. 218g(lmmol) ,K2CO3 0. 138g(Immol)和丙酮5ml混合后回流4小时，TLC鉴定反应 完毕。旋干丙酮，再用乙酸乙酯溶解并水洗，萃取，饱和食盐水洗，硅胶柱层析分离，依次用 石油醚乙酸乙酯=2 1和石油醚乙酸乙酯=1 1洗脱，TLC检测产品的Rf = 0.26， 展开剂石油醚乙酸乙酯=2 1，得到浅黄色固体0. 1619g，产率为89%。产品的结构鉴 定数据如下1H-WrgoomHzjDmso-CI6) δ 4. 09(s,2H) ,4. 29 (d, J = 5· 6Ηζ，2Η)，5· 72(s，2H)， 6. 76 (dd, J = 8. 8,2. OHz, 1H), 7. 05 (d, J = 2. 0Hz，1H)，7. 24-7. 231 (m，4H)，7. 50 (d，J = 8. 8Hz, 1H)，8· 80 (t, J = 5. 6Hz, 1H)ESI-MS (m/z, % ) 362. O(M-H)实施例7 2-(2-(N-(4-甲氧基)苄氨)_2_氧乙硫基)_6_氨基苯并噻唑的合成6-氨基-2-巯基苯并噻唑0. 182g (lmmol)、实施例3制备的N-对甲氧苄基-2-氯 乙酰胺0. 427g (2mmol) ,K2CO3 0. 276g (2mmol)和丙酮IOml混合后回流4小时，TLC鉴定反应 完毕。旋干丙酮，再用乙酸乙酯溶解并水洗，萃取，饱和食盐水洗，硅胶柱层析分离，依次用 石油醚乙酸乙酯=2 1和石油醚乙酸乙酯=1 1洗脱，TLC检测产品的Rf = 0.23， 展开剂石油醚乙酸乙酯=2 1，得到黄色固体0.316g，产率为89%。产品的结构鉴定数 据如下1H-WrGOOMHz, DMS0-d6) δ 3. 70 (s, 3H), 4. 08 (s, 2H), 4. 30 (d, J = 5·6Ηζ，2Η)， 5. 36(s，2H)，6· 73(dd，J = 8. 8，2. 0Hz，1H)，7. 00 (d，J = 2. 4Hz，1H)，7. 20-7. 27 (m，4H)， 7. 49 (d, J = 8. 8Hz, 1H)，8. 78 (t, J = 6. OHz, 1H)ESI-MS(m/z, % ) 360. O(M-H)+实施例8 N-(2-(2-(4-氯苄胺)-2-氧乙硫基)苯并噻唑-6_)-2-甲氧基苯甲酰 胺的制备氮气保护下，实施例6制备的2- (2- (N-4-氯苄胺)_2_氧乙硫基)_6_氨基苯并噻 唑0. 1269g(0. 33mmol)、碳酸氢钠0. 14g(l. 7mmol)和二氯甲烷15混合后，滴加实施例4制 备的邻甲氧基苯甲酰氯0. 17g(lmm0l)。室温搅拌，TLC鉴定反应完毕。用饱和碳酸氢钠溶 液洗涤收得的反应溶液，再用二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，硅胶柱层析分 离纯化，依次用石油醚乙酸乙酯=2 1和石油醚乙酸乙酯=1 1，TLC检测产品的 Rf = 0.21，展开剂石油醚乙酸乙酯=2 1，洗脱最终得到浅黄色固体0. 154g。产率为 89%。产品的结构鉴定数据如下1H-WrGOOMHz, DMS0-d6) δ 3. 91 (s, 3H), 4. 19 (s, 2H), 4. 31 (d, J = 6·0Ηζ，2Η)，7. 08 (t, J = 7. 6Hz, 1H) ,7. 20 (d, J = 8. 4Hz，1H)，7. 27-7. 34 (m，4H)，7. 50-7. 54 (m，1H)，
7.65 (dd, J = 7. 6,1. 6Hz, 1H), 7. 70 (dd, J = 8. 8，2. 0Hz，1H)，7. 78 (d，J = 8. 8Ηζ，1Η)，
8.53 (d, J = 2. OHz, 1H)，8· 85 (t, J = 6. OHz, 1H)，10. 35 (s, 1H)ESI-MS (m/z, % ) 520. O (M-Na) +实施例9 N-(2-(2-(4-甲氧基苄胺)-2-氧乙硫基)苯并噻唑-6_)-2-甲氧基苯
甲酰胺的制备 氮气保护下，实施例7制备的2-(2-(N_(4-甲氧基)苄氨)_2_氧乙硫基)_6_氨 基苯并噻唑0. 215g (0. 6mmol)、碳酸氢钠0. 252g (3mmol)和二氯甲烷30ml混合后，滴加实施 例4制备的邻甲氧基苯甲酰氯0.21g(1.2mmOl)。室温搅拌，TLC鉴定反应完毕。饱和碳酸 氢钠溶液洗涤，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，硅胶柱层析分离纯化，依次用 石油醚乙酸乙酯=2 1和石油醚乙酸乙酯=1 1洗脱，TLC检测产品的Rf = 0. 18， 展开剂石油醚乙酸乙酯=2 1，最终得到浅黄色固体0.26g，产率为88%。产品的结构 鉴定数据如下1H-WrGOOMHz, DMS0-d6) δ 3. 70(s，3H)，3· 91(s，3H)，4· 17(s，2H)，4· 246 (d，J = 6. 0Hz，2H)，6· 82 (d, J = 8. 4Hz，2H)，7· 08 (t, J = 7. 6Hz, 1H)，7. 15-7. 20 (m，3H)，7. 52 (t, J =7. OHz, 1H), 7. 64 (d, J = 7. 2Hz, 1H)，7. 69 (d, J = 7. 2Hz, 1H)，7. 78 (d, J = 8. 4Hz, 1H)， 8. 53 (s，1H)8. 74 (t, J = 5. 6Hz, 1H)，10. 35 (s, 1H)ESI-MS (m/z, %) :494. 0 (M-H)516. 0 (M-Na)+实施例10 N-苄基-2- (6- (2-氯乙酰胺)苯并噻唑_2_硫)乙酰胺的制备 氮气保护下，实施例5制备的2- (2- (N-苄氨)-2-氧乙硫基)-6-氨基苯并噻 唑0. 1316g(0. 4mmol)、碳酸氢钠0. lg(1.2mmol)和二氯甲烷20ml混合后，滴加氯乙酰氯 0.06ml。室温搅拌，TLC鉴定反应完毕。饱和碳酸氢钠溶液洗涤，二氯甲烷萃取，合并有机 相，饱和食盐水洗涤，硅胶柱层析分离纯化，依次用石油醚乙酸乙酯=2 1和石油醚 乙酸乙酯=1 1洗脱，TLC检测产品的Rf = 0.22，展开剂石油醚乙酸乙酯=2 1。最 终得到白色固体0. 146g，产率为90%。产品的结构鉴定数据如下1H-WrGOOMHz, DMS0-d6) δ 4. 19 (s, 2H), 4. 30 (s, 2H), 4. 33 (d, J = 5·6Ηζ，2Η)， 7. 21-7. 29(m，5H)，7. 56(dd，J = 8. 8，2. 2Hz，1Η)，7. 79 (d，J = 8. 8Hz，1H)，8. 37 (d，J = 2. OHz, 1H)，8. 82 (t, J = 5. 8Hz, 1H)，10. 54 (s，1H)
ESI-MS (m/z, % ) 404. O(M-H)实施例11 N-(2-(2-(4-苄胺)-2-氧乙硫基)苯并噻唑-6-)-2-三氟甲基苯甲
酰胺的制备 氮气保护下，实施例5制备的2-(2_(N-苄氨)-2_氧乙硫基)-6_氨基苯并噻唑 0. 1316g(0. 4mmol)、碳酸氢钠0. lg(l. 2mmol)和二氯甲烷20ml混合，滴加邻三氟甲基苯甲 酰氯0. 125g(0. 6mmol)。室温搅拌，TLC鉴定反应完毕。饱和碳酸氢钠溶液洗涤，二氯甲烷萃 取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，硅胶柱层析分离纯化，依次用石油醚乙酸乙酯=2 1 和石油醚乙酸乙酯=1 1洗脱，TLC检测产品的Rf = 0.2，展开剂石油醚乙酸乙酯= 2 1，最终得到白色固体0. 19g，产率为90%。产品的结构鉴定数据如下1H-WrGOOMHz, DMS0-d6) δ 4. 20(s，2H)，4· 33 (d, J = 6. 4Ηζ，2Η)，7· 22-7. 30 (m, 5H)，7· 64(dd, J = 8. 8,2. 4Hz, 1Η)，7. 71-7. 84(m，4H)，8· 49 (d, J = 2. OHz, 1Η)，8· 83 (t，J = 5. 8Hz, 1Η)，10. 82 (s，1Η)ESI-MS (m/z, % ) 524. 0 (M-Na) +实施例12 N-(2-(2-(4-氯苄胺)_2_氧乙硫基)苯并噻唑-6_)-2_三氟甲基苯 甲酰胺的制备 氮气保护下，实施例6制备的2-(2-(N-(4-氯)苄氨)_2_氧乙硫基)_6_氨基苯 并噻唑0. 27g(0. 74mmol)、碳酸氢钠0. 189g(2. 2mmol)和二氯甲烷50ml混合后，滴加邻三 氟甲基苯甲酰氯0.235g(l. lmmol)。室温搅拌，TLC鉴定反应完毕。饱和碳酸氢钠溶液洗 涤，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，硅胶柱层析分离纯化，依次用石油醚乙 酸乙酯=2 1和石油醚乙酸乙酯=1 1洗脱，TLC检测产品的Rf = 0. 19，展开剂石 油醚乙酸乙酯=2 1，最终得到白色固体0.39g，产率为96%。产品的结构鉴定数据如 下1H-WrGOOMHz, DMS0-d6) δ 4. 20 (s，2H)，4. 31 (d，J = 5. 6Hz,2H) ,7. 26-7. 33 (m, 4H)，7· 63(dd, J = 8. 8,2. OHz, 1Η)，7. 71-7. 88(m，5H)，8· 50 (d, J = 1. 6Hz, 1H)，8· 85 (t，J = 5. 8Hz, 1H)，10. 82 (s，1H)ESI-MS(m/z, % ) 534. O(M-H)实施例13 N-(2-(2-(4-甲氧基苄胺)_2_氧乙硫基)苯并噻唑_6-)-2_三氟甲 基苯甲酰胺的制备
氮气保护下，实施例7制备的2-(2-(N_(4-甲氧基)苄氨)_2_氧乙硫基)_6_氨 基苯并噻唑0. 2g(0. 55mmol)、碳酸氢钠0. 14g(l. 65mmol)和二氯甲烷40ml混合后，滴加邻 三氟甲基苯甲酰氯0. 175g(0.825mmol)。室温搅拌，TLC鉴定反应完毕。饱和碳酸氢钠溶液 洗涤，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，硅胶柱层析分离纯化，依次用石油醚 乙酸乙酯=2 1和石油醚乙酸乙酯=1 1洗脱，TLC检测产品的Rf = 0.16，展开剂 石油醚乙酸乙酯=2 1。最终得到白色固体0.29g，产率为97%。产品的结构鉴定数据 如下1H-NMR (400MHz, DMS0-d6) δ 3. 71 (s, 3H) , 4. 18(s,2H),4. 25 (d, J = 6. OHz, 2H) ,6. 82 (d, J = 9. 6Hz,2H) ,7. 17 (d, J = 8. 8Hz,2H) ,7. 63 (dd, J = 8. 8，2. 0Hz，1H)， 7. 71-7. 88 (m, 5H) 8. 49 (d, J = 2. OHz, 1H)，8. 74 (t, J = 5. 8Hz, 1H)，10. 81 (s, 1H)ESI-MS (m/z, % ) 530. O(M-H)药效学实验部分试验例细胞增殖抑制实验1、实验材料RPMI-1640, DMEM、胎牛血清、胰酶等购自 Gibco BRL 公司(Invitrogen Corporation，USA)，溴化噻唑蓝四唑(MTT)、二甲亚砜(DMSO)为Sigma公司(USA)产品。实 施例8 13制备得到的化合物在体外实验时用DMSO配制成IOmM储存液，置于4°C冰箱避 光保存备用，临用时再用培养基稀释至所需浓度。细胞系及培养本实验所用的人肝癌细胞株0fepG2)、人结肠癌细胞株(HCT116) 均购于美国ATCC公司。人肝癌细胞株0fepG2)，用含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100μ g/mL链霉素的 DMEM完全培养基、5% C02、37°C培养。人结肠癌细胞株(HCT116)用含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、ΙΟΟμ g/mL链霉素 的RPMI-1640完全培养基、5% C02、37°C培养。2、实验方法(MTT法)用完全培养液调整细胞浓度为2X 104/mL，接种于96孔板，每孔200 μ L，培养过 夜，次日分别用不同剂量的实施例8 13制备得到的化合物(终浓度分别为20，10，5，2. 5， 1. 25，0. 625,0. 312μ g/ml)处理细胞作为实验组，同时用等体积的空白溶剂作为对照组，对 照组的DMSO浓度为0. 1 % (0. 1 %的DMSO对细胞增殖无影响)。每个组设5个复孔，37°C， 5% CO2培养。分别于培养48、72小时后，取1个培养板，每孔加入5mg/mL MTT试剂20 μ L， 继续培养2h，弃上清，再加DMSO 150 μ L，振荡混勻15min，用酶标仪(λ = 570nm)测定吸光 度(A)值(A值与活细胞数成正比)，取其平均值。相对细胞增殖抑制率(％ )=(溶剂对 照组A57tl-实验组A57tl) /溶剂对照组A57tlX 100%。同时，根据相对细胞增殖抑制率计算出半 数抑制浓度(IC50)来表示化合物对肿瘤细胞增殖抑制作用。
3、实验结果实施例8 13制备得到的化合物在不同肿瘤细胞株上的相对细胞增殖抑制作用 见表1 表1体外抑制H印G2细胞增殖实验(相对细胞增殖抑制率，％ ) 表2体外抑制HCTl 16细胞增殖试验(相对细胞增殖抑制率，％ ) 表1说明了实施例8 13制备得到的化合物作用人肝癌细胞H印G2后，随化合物 浓度增高，抑制作用增强，其中实施例8、9、10、13制得的化合物有明显的抗H印G2细胞增殖 活性。表2说明了实施例8 13制备得到的化合物作用人结肠癌细胞株HCT116后，随 化合物浓度增高，抑制作用增强，其中实施例8，9，13有明显的抑制HCT116细胞增殖作用， 各剂量组与溶剂对照组相比，相对细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(P <0.05)。其中 尤其以实施例8、9制得的化合物的体外抑制效果明显。实施例8 13制备得到的化合物处理H印G2及HCTl 16细胞48h的半数抑制浓度 (IC50)见表 3。
表3体外抑制H印G2和HCTl 16细胞增殖试验(IC50, μ Μ)
权利要求
式I所示的N (2 (2 胺)氧乙硫基苯并噻唑 6 ) 2 甲酰胺衍生物其中，R1为 (CH2)nC6H5、 (CH2)nC6H5 m(CH3)m、 (CH2)nC6H5 m(CH2CH3)m、 (CH2)nC6H5 mFm、 (CH2)nC6H5 mClm、 (CH2)nC6H5 mBrm、 (CH2)nC6H5 m(OCH3)m或 (CH2)nC6H5 m(OCH2CH3)m，n＝1～8，m＝1～5；R2为 F、 Cl、 Br、 CxH(2x+1)、 CxH(2x+1) yFy、 CxH(2x+1) yCly、 CxH(2x+1) yBry、 C6H5 c(OCH3)c、 C6H5 c(CF3)c或 C6H5 c(OCH2CH3)c，x＝1～8，y＝1～16，c＝1～5。F2009103025230C0000011.tif
2.根据权利要求1所述的N-(2- (2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-) -2-甲酰胺衍 生物，其特征在于=R1 为-(CH2)nC6H5, -(CH2)nC6H5_m(CH3)m、_(CH2)nC6H5_m(CH2CH3)m、-(CH2) nC6H5_mFm、- (CH2) nC6H5_mClm、- (CH2) nC6H5_mBrm、_ (CH2) nC6H5_m (OCH3) m 或 _ (CH2) nC6H5_m (OCH2CH3) m，η =1 8,m=l 5;R2 为-CxH(2x+1)、-CxH(2x+1)_yFy、-CxH(2x+1)_yCly、-CxH(2x+1)_yBry、_C6H5_c (OCH3) c、_C6H5_c (CF3) c 或-C6H5_c (OCH2CH3)c, χ = 1 8，y = 1 16，c = 1 5。
3.根据权利要求2所述的N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物，其 特征在于=R1 为 _CH2C6H5、-CH2C6H4F, -CH2C6H5Cl、-CH2C6H5Br 或-CH2C6H4OCH3 ；R2 为-CH2F、-CH2Cl、-CH2Br、-C6H4OCH3 或 _C6H4CF3。
4.根据权利要求3所述的N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物，其 特征在于:Ri 为-CH2C6H5, -CH2C6H5Cl 或-CH2C6H4OCH3 ；R2 为-CH2Cl、-C6H4OCH3 或-C6H4CF30
5.根据权利要求4所述的N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物，其 特征在于所述N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物为式II VII所 示化合物
6.制备权利要求1 5任一项所述的N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰 胺衍生物的方法，其特征在于6_氨基-2-巯基苯并噻唑在碱性条件下与R1NHCOCH2CI进行 烷基化反应得到6-氨基-2-(2-N-Rl)氧乙硫基)苯并噻唑，然后再与R2COCl反应得到产 物，路线如下所示
7.权利要求1 5任一项所述的N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍 生物在制备抗肿瘤药物中的用途。
8.药物组合物，其特征在于是由权利要求1 5任一项所述式I所示的N-(2-(2-胺) 氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物添加药学上可以接受的辅助性成分制备而成的。
9.权利要求8所述药物组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
全文摘要
本发明属于化学医药技术领域，特别涉及N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物及其制备方法和用途。本发明所解决的技术问题是为抗肿瘤血管生成药物提供一类新的化合物，具体为式I所示的N-(2-(2-胺)氧乙硫基苯并噻唑-6-)-2-甲酰胺衍生物，其中，R1为-(CH2)nC6H5、-(CH2)nC6H5-m(CH3)m、-(CH2)nC6H5-m(CH2CH3)m、-(CH2)nC6H5-mFm、-(CH2)nC6H5-mClm、-(CH2)nC6H5-mBrm、-(CH2)nC6H5-m(OCH3)m或-(CH2)nC6H5-m(OCH2CH3)m，n＝1～8，m＝1～5；R2为-F、-Cl、-Br、-CxH(2x+1)、-CxH(2x+1)-yFy、-CxH(2x+1)-yCly、-CxH(2x+1)-yBry、-C6H5-c(OCH3)c、-C6H5-c(CF3)c或-C6H5-c(OCH2CH3)c，x＝1～8，y＝1～16，c＝1～5。该类衍生物可用于制备抗肿瘤药物。
文档编号C07D277/74GK101891704SQ20091030252
公开日2010年11月24日 申请日期2009年5月22日 优先权日2009年5月22日
发明者余洛汀, 杨胜勇, 杨黎, 赵瀛兰, 魏于全 申请人:四川大学