专利名称：：毛冬青总黄酮在制备防治短暂脑缺血综合症药物的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及医药领域，特别是一种毛冬青总黄酮在制备防治短暂脑缺血综合症(TIA)药物的应用。二
背景技术：
：毛冬青为冬青科植物毛冬青的根，含有多种黄酮类、酚性成分、甾醇、氨基酸、糖类、鞣质和三萜成分，具有清热解毒、活血通脉之功用，主要用于治风热感冒、肺热喘咳、喉头水肿、扁桃体炎、痢疾、冠心病、脑血管意外所致的偏瘫，血栓闭塞性脉管炎，丹毒、烫伤、中心性视网膜炎，葡萄膜炎，以及皮肤急性化脓性炎症，现代医学研究还表明毛冬青对心血管有影响，临床上有应用于降压，缓慢而持久，随着医学研究的深入，毛冬青的医用药物价值有了新开始，但毛冬青在防治短暂脑缺血综合症的应用中末见有报导，特别是毛冬青有效成分总黄酮作为制备治疗短暂脑缺血综合症药物应用无,有报导。三
发明内容针对上述情况，本发明之目的就是提供一种由毛冬青提取的毛冬青总黄酮在制备防治短暂脑缺血综合症药物的应用，有效解决防治短暂脑缺血综合症的药物问题，其解决的技术方案是，取毛冬青药材，粉碎，用8倍量的70%乙醇加热回流提取两次，合并提取液，滤过，回收乙醇，并浓縮至在5(TC时测定相对密度为1.10-1.20，浓縮液用水分散为药液药材=1:i的溶液，静置，滤过，滤液离心，离心液超滤，通过聚酰胺柱，先用2倍柱体积的水洗脱，弃去水液，再用8倍柱体积50%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液备用，合并两次的洗脱液，另换pH值为9-10的碳酸钠水溶液洗脱，收集洗脱液，用盐酸调pH为中性，减压浓縮，6CTC干燥粉碎，得毛冬青总黄酮，其中，总黄酮以芦丁计不少于54.0%，总皂苷以人参皂苷Re计不得超过5.0%，该毛冬青总黄酮有效用于制备治疗防治短暂脑缺血综合症的药物，实现对脑缺血综合症的治疗，造福于人类。四具体实施例方式以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。在制备毛冬青总黄酮时，本发明采用正交试验设计方法，选取对影响提取效果的主要因素如乙醇浓度、加醇量、提取时间、提取次数为考察因素，以总黄酮和总皂苷的含量为测定指标，确定最佳提取工艺为取毛冬青粗粉，故取毛冬青药材，粉碎，用8倍量的70%乙醇加热回流提取两次，合并提取液，滤过，回收乙醇，并浓縮至在5(TC时测定相对密度为1.101.20,浓縮液用水分散为药液药材=1:i的溶液，静置，滤过，滤液离心，离心液超滤，通过聚酰胺柱，先用2倍柱体积的水洗脱，弃去水液，再用8倍柱体积50%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液备用，合并两次的洗脱液，另换pH值为910的碳酸钠水溶液洗脱，收集洗脱液，用盐酸调pH为中性，减压浓缩，6(TC干燥粉碎，得毛冬青总黄酮。所说的药液药材=1:i的溶液是指将浓縮液用水分散成与药材重量体积相等的溶液，如100g总药材料，将浓縮液分散成(稀释成)100ml。本发明的毛冬青总黄酮有效解决用于制备防治短暂脑缺血综合症的药物，并经动物试验，毛冬青总黄酮对防治短暂脑缺血综合症有显著疗效，有关试验情况如下实验l、毛冬青总黄酮对小鼠急性脑缺血模型的影响l.实验材料1.1药物和试剂毛冬青总黄酮，河南中医学院化学室，含量〉60%;华佗苒造丸，广州奇星药业有限公司，批号060629;尼莫地平片，山东新华制药股份有限公司，批号0609118;生理盐水，郑州化学药业有限公司，批号060712。1.2仪器电子天平，由上海民桥精密仪器有限公司生产。1.3动物小鼠KM，清洁级，体重1820g;由河北省实验动物中心提供，动物合格证号DK0508068。1.4数据分析用SPSS11.5forwindows医用统计包进行数据资料的统^f学处理,计量资料用平均数士标准差(S士s)表示，组间比较采用方差分析。2.实验方法和结果取1820g雄性小鼠60只，随机分为6组，即毛冬青总黄酮(0.4g/kg，0.2g/kg，0.lg/kg，配成浓度为20mg/ml，10mg/ml，5mg/ml,)，尼莫地平组(为临床用量的10倍，20mg/kg,药液浓度为lmg/ml，给药体积0.2ml/10g)，华佗再造丸组(为临床用量的10倍，2.67g/kg，药液浓度0.134g/ml，给药体积0.2ml/10g)，空白对照组(每天灌同样体积的生理盐水)。每天给药l次，连续给药7天。于最后一次给药后lh，用剪刀于耳后2mm处迅速断头，造成急性脑缺血模型，然后记录小鼠的呼吸次数及呼吸维持时间(所有小鼠均以无张口喘息为标准)。结果断头时的实验室温度为2rc,时间是上午8点，结果见表l。表1毛冬青总黄酮对急性脑缺血小鼠呼吸次数及呼吸时间的影响(X±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注与空白对照组比，*尸<0.05;**尸<0.01从上表可以看出与空白对照组比较，大、中、小剂量毛冬青总黄酮组、和华佗再造丸组均可明显延长小鼠断头后的呼吸持续时间(代0.05)，尼莫地平组可显著延长小鼠呼吸持续时间(代0.01);与空白对照组比较，大、中剂量毛冬青总黄酮组、尼莫地平组均可明显增加小鼠断头后呼吸次数(代0.05)。说明毛冬青总黄酮能显著增加断头小鼠的呼吸次数和呼吸时间。4.结论实验结果提示，毛冬青总黄酮能显著增加断头小鼠的呼吸次数和呼吸时间。实验2、毛冬青总黄酮对小鼠短暂性脑缺血再灌注模型的影响1.实验材料1.1药物和试剂毛冬青总黄酮，河南中医学院化学室，含量〉60%;华佗再造丸，广州奇星药业有限公司，批号060629;尼莫地平片，山东新华制药股份有限公司，批号0609118;生理盐水，郑州化学药业有限公司，批号060712;水合氯醛，由上海山浦化工有限公司生产，批号20060517;甲醛溶液，由莱阳市双双有限公司生产，批号20060801;ATP检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产，批号20070713;LD检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产，批号20070725;考马斯亮兰蛋白测定试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产，批号200707251.2仪器UV_2000分光光度计，由尤尼柯(上海)仪器有限公司生产；FA(N)/JA(N)系列电子天平，由上海民桥精密仪器有限公司生产；TGL-16G高速冷冻离心机，由上海安亭科学仪器厂生产；DZKW-4型电子恒温水浴锅，由北京市永光明医疗仪器厂生产；可调式移液器，由上海雷勃分析仪器有限公司生产。1.3动物小鼠KM，清洁级。体重1820g;由河北省实验动物中心提供，小鼠合格证号DK0508068。1.4数据分析用SPSS11.5forwindows医用统计包进行数据资料的统计学处理，计量资料用平均数士标准差(S士s)表示，组间比较用方差分析；等级资料采用Ridit检验。2.实验方法和结果2.1动物分组及给药方式取体重为1820g左右的小鼠70只，雄性，随机均匀分为7组，其中6组造脑缺血再灌注模型，另设1组假手术组。造模型6组分别灌毛冬青总黄酮(0.4g/kg，0.2g/kg，0.lg/kg，配成浓度为20mg/ml，10mg/ml，5mg/ml,)、阳性对照组尼莫地平(为临床人的10倍，20mg/kg，药液浓度lmg/ml，给药体积0.2ml/10g)和华佗再造丸组(为临床用量的10倍，2.67g/kg，药液浓度0.134g/ml，给药体积0.2ml/10g)，模型组(灌同体积的生理盐水)，空白对照组作为假手术组。每天给药1次，连续给药7天。2.2造模方法及取材于第10天给药后lh，禁食后12h，4%水合氯醛0.1ml/10g腹腔注射麻醉(小鼠的翻正反射消失)，然后用剪刀剪取颈部的毛，用酒精擦拭干净颈部，用手术刀作颈部正中切口，逐渐分离周围肌肉，直到见到双侧颈总动脉(CCA)，再用弯头小镊子剥离周围神经，分离CCA,每个动脉下各置一条5cm长度的手术线，把直径约为0.3mm的针灸针与血管一起结扎，然后松开小鼠的四条腿的绳子，使其斜躺在笼子里，此过程注意其保温，室温保持在25'C。10min后轻轻抽出针灸针，完成再灌注，其中空白组作假手术处理，即除了不结扎CCA外，其它操作同造模各组。再灌15min后快速断头取脑，立即用毛细血管吸取血液测定凝血时间；同时立即在冰盘中分离脑，把脑从矢状线分开成对称的脑，一半取出海马区，迅速放于倒有10%福尔马林溶液中的瓶子中浸泡固定；另外一半放在滤纸上吸干净上面的血迹，然后用天平称量其重量，根据此重计算该加入的冰冷的生理盐水量，以脑组织(g):生理盐水(m1)4:9的比例在盛有冰块的玻璃匀浆机中匀浆。4°C，3000r/min离心20min。取上清液于-2(TC以下低温保存。制成10%的脑匀浆按测试盒说明操作，分别测定LD、Na+-K+-ATPaSe、CaW-ATPase、Mg，ATPase和Ca气MgW-ATPase活力。2.3结果毛冬青总黄酮对小鼠短暂性脑缺血再灌注模型血液凝血时间的影响，结果见表2,对脑能量代谢的影响，结果见表3、表4。表2毛冬青总黄酮对小鼠短暂性脑缺血再灌注模型凝血时间的影响(I±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>从上表可看出，与假手术组比，模型组凝血时间显著縮短(尸<0.01)，说明造脑缺血再灌注模型后凝血时间显著縮短。与模型组比，小剂量毛冬青总黄酮组和华佗再造丸组均可明显延长模型动物的凝血时间(P<0.05)，其他个剂量组有延长趋势。表3毛冬青总黄酮对小鼠短暂性脑缺血再灌注模型脑匀浆Na+-K+-ATP和Ca"-!^^*+-八1活力的影响(1±3)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注与模型组比较，*户<0.05;林尸<0.01从上表可以看出与假手术组(空白组)比较，模型组小鼠脑匀浆中ATP酶活力显著降低(尸O.Ol)，说明细胞膜的Na+-K+-ATP、Ca^—Mg气ATP酶活性降低，ATP耗竭，脑细胞能量代谢严重障碍，损伤机体脑功能。与模型组比，大、中、小剂量毛冬青总黄酮组可明显升高模型动物脑组织匀浆中的Na+—K+-ATP酶活力(/><0.05)，尼莫地平组和华佗再造丸组可显著升高脑组织匀浆中Na+—K+-ATP酶活力(户O.01);大剂量毛冬青总黄酮组和华佗再造丸组可显著升高脑组织匀浆中Ca++—Mg++-ATP酶活力显著升高(户O.Ol)，中剂量毛冬青总黄酮组和尼莫地平组可明显升高脑组织匀浆中Ca++—Mg++-ATP酶活力(/><0.05)。表明毛冬青总黄酮对小鼠短暂性脑缺血再灌注模型的1^+—K+-ATP、Ca++—Mg++-ATP活力有升高作用。表4毛冬青总黄酮对小鼠短暂性脑缺血再灌注模型脑匀桨Ca^-ATP和MgW-ATP活力的影响(I±s)组别动物数剂量Ca"-ATPMg"-ATP(只)(g/kg)(ymolPi/mgprot/h)(iimolPi/mgprot/h)手术组10—6.597±1.397"7.129±1.465**模型组10—4.512±1.3174.483±1.191大剂量毛冬青总黄酮组100.46.604±1.156**6.919±1.023"中剂量毛冬青总黄兩组100.25.987±1.3518*5.800±1.375*小剂量毛冬青总黄酮组100.15.125±1.8255.528±1.863尼莫地平组100.026.374±1.472*6,842±1.634"华佗再造丸组102.677.968±2.174**8,246±2.558**注与模型组比较，*尸<0.05:**尸<0.01从上表可以看出与假手术组(空白组)比较，模型组小鼠脑匀浆中ATP酶活力显著降低(尸O.Ol)，说明细胞膜的C-ATP和Mg气ATP酶活性降低，ATP耗竭，脑细胞能量代谢严重障碍，损伤机体脑功能。与模型组比，大剂量毛冬青总黄酮组和华佗再造丸组可显著升高模型动物脑组织匀浆中的Ca^-ATP酶活力(尸O.Ol)，中剂量毛冬青总黄酮组和尼莫地平组可明显升高脑组织匀浆中(^++-八1酶活力(/><0.05);大剂量毛冬青总黄酮组、尼莫地平组和华佗再造丸组可显著升高脑组织匀浆中MgW-ATP酶活力(尸<0.01)，中剂量毛冬青总黄酮组可明显升高脑组织匀浆中^^++41酶活力(尸<0.05)。表明毛冬青总黄酮对小鼠短暂性脑缺血再灌注模型的Ca^-ATP、Mg^-ATP活力有升高作用。毛冬青总黄酮对小鼠短暂性脑缺血再灌注模型脑匀浆中乳酸含量的影响，结果见表5。表5毛冬青总黄酮对小鼠短暂性脑缺血再灌注模型脑匀浆乳酸含量的影响(^±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注与模型组比较，VO.05;**尸<0.01从表5可以看出与假手术组(空白对照组)比，模型组乳酸含量明显升高(尸<0.05)，说明脑缺血使糖无氧代谢产生的乳酸增多，可引起酸中毒；与模型组比，大、中、小毛冬青总黄酮剂量组乳酸含量显著降低(尸O.01);尼莫地平组和华佗再造丸组乳酸含量明显降低(尸<0.05)。说明毛冬青总黄酮能减少小鼠短暂性脑缺血再灌注时的乳酸堆积。毛冬青总黄酮对小鼠短暂性脑缺血再灌注模型脑部海马区组织形态学观察的影响，结果见表6。假手术组(空白对照组)小鼠脑神经细胞均正常，神经细胞胞浆丰富，核及核仁均清晰可见，均为正常。模型组动物脑神经细胞大部分呈萎縮改变，细胞体积縮小，胞浆明显减少，核明显固縮等病理改变，部分神经细胞出现水肿病理改变，细胞胞浆增多而透明。大剂量毛冬青总黄酮组动物脑神经细胞大部分细胞胞浆丰富，明显恢复；中剂量毛冬青总黄酮组部分动物脑神经细胞得到明显的恢复，细胞体积增大，胞浆丰富；部分动物的脑神经细胞仍然呈萎縮状态，核固縮。小剂量毛冬青总黄酮组的大部分动物的脑神经细胞呈现不同程度的萎縮现象，胞浆不同程度的减少，细胞核固縮。华佗再造丸组动物脑神经细胞大部分细胞胞浆丰富，部分细胞发生萎縮现象，细胞体积縮小，核固縮。尼莫地平组多数动物脑神经细胞体积明显縮小，核固縮；小部分细胞胞桨丰富，体积改变不大，细胞核均正常。_表6毛冬青总黄酮对大鼠脑缺血模型脑组织病理变化的影响(只)_<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>假手术组10—10000模型组10一0127大剂量毛冬青总黄爾组100.42530中剂量毛冬青总黄酮组100.21630小剂量毛冬青总黄酮组100.10361尼莫地平组100.021630华佗再造丸组102.670640"一"动物脑神经细胞均正常，细胞胞浆丰富，核及核仁清晰可见；"+"动物脑神经细胞20%呈现萎縮现象，其它80%细胞正常；"++"动物脑神经细胞50%呈萎縮现象，其它细胞呈不同程度的恢复；"+++"动物脑神经细胞80%呈现萎縮现象，其它细胞得到不同程度的恢复。根据半定量指标对实验各组动物脑神经细胞进行测定。由上表可以看出经Ridit检验，假手术组与模型组比较有显著的统计意义，假手术组脑神经细胞均正常，模型组脑神经细胞大部分呈萎縮改变，细胞体积縮小，胞桨减少，核固縮，说明造模小鼠出现显著的脑神经细胞病理改变。与模型组比较，大、中剂量毛冬青总黄酮、尼莫地平和华佗再造丸组均可显著减轻缺血再灌注所致小鼠脑组织的损伤(尸O.Ol),大部分脑神经细胞胞浆丰富，核及核仁清晰可见；小剂量毛冬青总黄酮组均可明显减轻缺血再灌注所致小鼠脑组织的损伤(尸<0.05)。4.结论毛冬青总黄酮能改善大鼠短暂性脑缺血一再灌注模型的脑细胞能量代谢，预防酸中毒的发生；能减轻模型脑部海马区组织形态学的病变；提示毛冬青总黄酮对短暂性脑缺血动物模型有较好的作用。实验3、毛冬青总黄酮对大鼠脑缺血模型的影响1.实验材料1.1试剂与药品毛冬青总黄酮，河南中医学院化学室，含量〉60%;华佗再造丸，广州奇星药业有限公司，批号060629;尼莫地平片，山东新华制药股份有限公司，批号0609118;生理盐水，郑州化学药业有限公司，批号060712;MDA检测试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号20070405;ATP检测试剂盒，批号南京建成生物工程研究所，20070311;考马斯良兰蛋白测定试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号20070418。1.2仪器75-2分光光度计，上海第三分析仪器厂；玻璃匀浆器，上海玻璃仪器厂；恒温水浴锅，北京市光明仪器厂。1.3动物大鼠Wistar，雄性，体重180200g，由河南医学动物实验中心提供，SCXK(豫)20060231。2.实验方法与结果取大鼠70只，wistar，体重180-200g，雄性，随机均匀分为7组，分别灌服大、中、小剂量毛冬青总黄酮(0.2g/kg，0.1g/kg，0.05g/kg，配成浓度为10mg/ml，5mg/ml，2.5mg/ml，)、尼莫地平(0.01g/kg,配成0.5mg/ml，)、华佗再造丸(0.67g/kg,配成33.25mg/ml)及同体积(灌胃体积均为2ml/100g)的生理盐水(2组)，每天给药1次，连续给药7天，于第7天给药后lh，禁食后10h，水合氯醛麻醉，分离并结扎双侧颈总动脉30min后断头取血,取脑作病理切片及匀浆测ATP、LD、LDH、MDA等指标。对脑能量代谢的影响取大鼠脑匀浆(脑重生理盐水体积=1:9或再稀释成2%的脑匀浆)按测试盒说明操作分别测定Na乂、ATPase、Mg气ATPase、Ca^-ATPase、Ca气Mg^-ATPase活力，结果见表1，LD含量、LDH活力，结果见表2。表1毛冬青总黄酮对大鼠血瘀合并脑缺血模型脑匀浆能量代谢的影响(^土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>林:表示与模型组比PO.01;"表示与模型组比PO.05从上表可以看出，与假手术组比，模型组Na乂、ATPase、Mg^-ATPase、Ca"-ATPase活力均明显降低(P〈0.05)，Ca^-Mg^-ATP活力均显著降低(PO.Ol),说明造脑缺血模型成功。与模型组比，大、中、小剂量毛冬青总黄酮组可显著提高脑匀浆Na+K+-ATPase活力(PO.Ol)，华佗再造丸组可明显提高脑匀浆Na+K+-ATPaSe活力(PO.05);中、小剂量毛冬青总黄酮组可显著提高脑匀浆C-ATPase活力(PO.Ol)，大剂量毛冬青总黄酮组和华佗再造丸组可明显提高脑匀浆Ca^-ATPase活力(PO.05);大、中剂量毛冬青总黄酮组可显著提高脑匀浆Mg++-ATPaSe活力(PO.Ol)，小剂量毛冬青总黄酮组和华佗再造丸组可明显提高脑匀浆MgW-ATPase活力(P<0.05);中、小剂量毛冬青总黄酮组可显著提高脑匀浆Ca^-MgW-ATPase活力(PO.Ol)，大剂量毛冬青总黄酮组可明显提高脑匀浆Ca"-MgW-ATPase活力(P<0.05)。表明毛冬青总黄酮对大鼠脑缺血模型的各种ATP活力有改善作用。表2毛冬青总黄酮对大鼠血瘀合并脑缺血模型脑匀浆乳酸含量和乳酸脱氢酶活性的影响(i士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>**:表示与模型组比PO.01;&表示与模型组比P<0.05从上表可以看出，与假手术比，模型组乳酸含量显著增高(PO.Ol)，说明造脑缺血模型成功。与模型组比，中、小剂量毛冬青总黄酮组和尼莫地平组和华佗再造丸组均可明显降低脑匀浆乳酸含量(P<0.05)，大剂量毛冬青总黄酮组、尼莫地平组和华佗再造丸组均可显著降低脑匀浆乳酸脱氢酶活力(PO.Ol)。表明毛冬青总黄酮对大鼠血瘀合脑缺血模型的乳酸含量和乳酸脱氢酶活力有改善作用。对脑组织中抗氧化物质及氧自由基的影响取大鼠脑匀浆(脑重生理盐水体积=1:9〗按测试盒说明测定MDA，结果见表3。表3毛冬青总黄酮对大鼠脑缺血模型脑匀浆MDA水平的影响(^土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>神:表示与模型组比P〈0.01;+:表示与模型组比P<0.05从上表可以看出，与假手术组比，模型组脑匀浆MDA含量明显升高(P<0.05)，说明造脑缺血模型成功。与模型组比，大、中、小剂量毛冬青总黄酮组可显著降低模型MDA水平(PO.01)，尼莫地平组和华伦再造丸脑匀浆MDA含量明显降低(PO.Ol)。表明毛冬青总黄酮对大鼠脑缺血模型的MDA有明显降低作用。对大鼠脑缺血模型脑部组织的病理观察结果假手组实验动物脑神经细胞均正常，细胞体积大，胞浆丰富，核及核仁清晰可见；模型组的实验动物脑神经细胞体积縮小，细胞胞浆与细胞核已分界模糊不清，呈现明显的萎縮和自溶现象；大剂量毛冬青总黄酮组动物脑神经细胞多数得到恢复，细胞体积增大，胞浆丰富；中剂量毛冬青总黄酮组部分脑神经细胞得到不同程度的恢复，但一部分脑神经细胞仍然呈萎縮状态；小剂量毛冬青总黄酮组大部分动物脑神经细胞仍然呈萎縮及水肿状态，细胞体积明显缩小，细胞核模糊不清。华佗再造丸组部分脑神经细胞得到一定的恢复；尼莫地平组动物部分脑神经细胞呈萎縮状态，细胞体积明显縮小，有的核固縮，有的核模糊不清。结果见表4。_表4毛冬青总慌酮对大鼠脑缺血模型脑组织病理变化的影响(只)_组另U动物数剂量(g/kg)^+++~~"一"动物脑神经细胞均正常，细胞胞浆丰富，核及核仁清晰可见。"+"动物脑神经细胞20%出现萎縮现象，细胞胞浆减少，体积縮小，核固縮或自溶,核模糊不清。"++"动物脑神经细胞50%出现萎縮现象，细胞胞浆减少，体积縮小，核固縮或自溶，核模糊不清。"+++"动物脑神经细胞80%出现萎縮现象，细胞胞浆减少，体积縮小，核固縮或自溶现象，核模糊不清，有的出现水肿，核消失。根据半定量的标准对实验各组动物脑祌经病理改变进行测定。经Ridit检验，与假手术组比，模型组脑神经细胞出现显著的便利变化(PO.Ol)，神经细胞体积縮小，细胞胞浆与细胞核已分界模糊不清，呈现明显o7oo11oo233345o145543o1o32o12517o5oSo5c5riooooooo且经组组组平造地再手型剂剂剂莫伦假模大中小尼华的萎縮和自溶现象，说明造模大鼠出现脑神经细胞的损伤。与模型组比较，大、中剂量毛冬青总黄酮组、尼莫地平组和华佗再造丸组均可显著减轻缺血所致的脑组织损伤(PO.Ol)，脑神经细胞部分得到明显的恢复，细胞体积增大，胞浆丰富；小剂量毛冬青总黄酮组可明显减轻缺血所致的脑组织损伤(P<0.05)。毛冬青总黄酮能拮抗脑缺血损伤的病理改变，使大部分神经细胞得到恢复，随着剂量的增加作用增强。3.结论毛冬青总黄酮能改善大鼠脑缺血脑细胞的能量代谢，预防酸中毒的发生；减轻缺血造成的脑神经细胞的损伤；减少氧自由基的生成，增加抗氧化物质的生成，具有抗氧化作用；能改善脑组织的能量代谢；可显著改善脑缺血所致的脑组织病理改变。权利要求1.一种毛冬青总黄酮在制备防治短暂脑缺血综合症药物的应用，其特征在于，该毛冬青总黄酮是由取毛冬青药材，粉碎，用8倍量的70％乙醇加热回流提取两次，合并提取液，滤过，回收乙醇，并浓缩至在50℃时测定相对密度为1.10-1.20，浓缩液用水分散为药液:药材＝1∶1的溶液，静置，滤过，滤液离心，离心液超滤，通过聚酰胺柱，先用2倍柱体积的水洗脱，弃去水液，再用8倍柱体积50％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液备用，合并两次的洗脱液，另换pH值为9-10的碳酸钠水溶液洗脱，收集洗脱液，用盐酸调pH为中性，减压浓缩，60℃干燥粉碎，得毛冬青总黄酮，其中，总黄酮以芦丁计不少于54.0％，总皂苷以人参皂苷Re计不得超过5.0％。2、权利要求1所述的毛冬青总黄酮，其特征是毛冬青总黄酮在制备防治短暂脑缺血综合症药物的应用。全文摘要本发明涉及毛冬青总黄酮在制备防治短暂脑缺血综合症药物的应用，有效解决防治短暂脑缺血综合症的药物问题，其解决的技术方案是，取毛冬青药材，粉碎，用乙醇加热回流提取两次，合并提取液，滤过，回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.10-1.20，浓缩液用水分散为药液∶药材＝1∶1的溶液，静置，滤过，滤液离心，离心液超滤，通过聚酰胺柱，先用水洗脱，弃去水液，再用乙醇溶液洗脱，收集洗脱液备用，合并两次的洗脱液，另换碳酸钠水溶液洗脱，收集洗脱液，用盐酸调pH为中性，减压浓缩，干燥粉碎，得毛冬青总黄酮，该毛冬青总黄酮有效用于制备治疗防治短暂脑缺血综合症的药物，实现对脑缺血综合症的治疗，造福于人类。文档编号A61P9/00GK101366738SQ20081014158公开日2009年2月18日申请日期2008年10月9日优先权日2008年10月9日发明者苗明三申请人:河南中医学院