专利名称：：一种补骨脂素有效成分及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及医药
技术领域：
，具体涉及一种补骨脂素中药有效成分。
背景技术：
：2007年10月1日实施的《药品注册管理办法》对创新性药物的研发给予较大的鼓励，国内创新药物申报数量也呈现明显上升的趋势。但与发达国家新药杂质研究相比，我国的研究水平仍有一定差距。杂质研究的主要差距体现在对杂质研究的系统性和规范性。这也就直接限制了我国药品研究水平和药品质量的提高。针对杂质明确研究目的、研究思路以及相关技术的研究是很多医药工作者急需解决的难题。中药补骨脂为豆科植物补骨脂(PsoraleacorylifoliaL)果实，性温，味辛，具补肾助阳之功效。主治肾虚冷泻，小便频数，阳萎，腰膝冷痛，虚寒喘咳，外用治白癜风。现代研究表明，补骨脂具有扩张血管，增加心肌收缩力，抗菌，雌性激素样作用，治疗白癜风等生理活性。近年来，国内外学者对补骨脂的化学成分进行了多方面的研究，取得一些新成果。但到目前为止还没有任何以补骨脂为原料提取的有效成分制备的新药，特别是对有效成分杂质的研究。
发明内容本院的科研人员通过创造性的劳动得到了补骨脂素有效成分，针对该有效成分进行的长期的研究，发现并分离出其杂质为补骨脂乙素和补骨脂酚，通过药效学实验表明补骨脂素具有治疗男性勃起障碍的作用，再通过系统的药效学实验表明，杂质补骨脂乙素和补骨脂素具有协同药理作用，补骨脂酚与补骨脂素是拮抗药理作用，通过上述研究，我们针对杂质补骨脂酚进行含量限定，同时对起到协同作用的补骨脂乙素，从安全性方面考虑，也进行含量研究。本发明通过以下技术方案实现的。一种补骨脂素，补骨脂素含量为90%_97%，含有两个杂质，杂质补骨脂乙素的含量为3%_8%，杂质补骨酚含量低于1%。其中补骨脂素含量为95%-97%,杂质补骨脂乙素含量为3%-4.5%，杂质补骨酚含量低于0.5%。其中补骨脂素含量96%-97%,杂质补骨脂乙素含量为3%-4%，杂质补骨酚含量低于0.1%。补骨脂素的制备方法为取补骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，浓缩，加水溶解完全，静置，过滤，滤液浓缩，上大孔吸附树脂，水洗，水洗液去除，用30%-70%乙醇洗脱，保留洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，干燥物用有机溶剂提取，提取液回收有机溶剂，浓缩干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脱，浓缩，干燥，得到补骨脂素。其中所述大孔吸附树脂为D101、AB-8、NKA中的一种。3其中所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇中的一种。所述的补骨脂素在制备治疗阴茎勃起障碍药物中的应用。含量分析照高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水=5545为流动相；检测波长为246nm，理论板数按补骨脂素计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取补骨脂素对照品、补骨脂乙素对照品、补骨脂酚对照品适量，加甲醇制成每Iml各含20μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本发明有效成分，精密称定，加甲醇溶解，转移至IOOml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-10μ1，注入液相色谱仪中，测定，即得。实验结果见表1表1补骨脂素有效成分含量测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>实验结论分析实验表明，本发明有效成分的含量为补骨脂素含量为90%-97%,含有两个杂质，杂质补骨脂乙素的含量为3%_8%，杂质补骨酚含量低于；或补骨脂素含量为95%-97%，杂质补骨脂乙素含量为3%-4.5%，杂质补骨酚含量低于0.5%；或补骨脂素含量96%-97%，杂质补骨脂乙素含量为3%_4%，杂质补骨酚含量低于0.1%。药效学实验(一)雄性激素样作用的研究1、对切除睾丸大鼠的作用实验动物大白鼠包选用30d雄性WiStar大白鼠实验方法取大鼠，在无菌条件下，切除其双侧睾丸，术后14d随机分为不同实验组(实验分组如下)，灌胃给药，给药组给药量相同，对照组给予等溶的生理盐水，连用30d，末次给药24h后处死，取包皮腺、前列腺及精囊腺称湿重。实验结果见表2。实验分组组别1补骨脂素；组别2补骨脂素+补骨脂乙素；组别3补骨脂素+补骨脂酚；表2对切除睾丸大鼠附性器官影响<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注与对照组比较<0.01；*P<0.052、对正常大鼠的作用实验动物大白鼠包选用30d雄性WiStar大白鼠实验方法取大鼠，随机分为组，灌胃给药，给药组给药量相同，对照组给予等溶的生理盐水，连用30d，末次给药24h后处死，取包皮腺、前列腺及精囊腺称湿重。实验结果见表3o<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>实验结论药效学初步实验表明，本发明有效成分中补骨脂酚对补骨脂素具有拮抗作用，补骨脂乙素对补骨脂素具有协同药理作用。(二)对生殖系统实验1、雄性动物睾丸重，睾丸/体重比值，雌性动物子宫重、卵巢重、及卵巢/体重比值，子宫/体重比值；2、雄性动物辜丸间质细胞计数及曲精管直径测量；3、睾丸精原细胞、精母细胞、间质细胞形态活跃程度的变化；4、雌性大鼠卵巢、子宫病理组织学检查；5、性腺超微形态观察睾丸间质细胞、曲细精管、卵巢；6、大鼠血清性激素水平测定。结果表明本发明药物具有显著促进性腺内分泌功能的作用，尤其对雄性动物效果更加明显。表现为睾丸重量增加显著，睾丸间质细胞数量增多及曲细精管直径增大。血清性激素检测结果与组织形态学所见相符合。(三)对生殖药效学研究1、对阴茎刺激试验实验结果表明一定剂量本发明药物能提高去势大鼠阴茎对外部刺激的兴奋性，在局部微量电刺激作用下，动物阴茎勃起潜伏期明显缩短(P<0.01和0.05)。2、交配试验试验给予不同剂量本发明药物14天后，雄性交配能力明显增强。表现为合笼后扑捉雌鼠潜伏期及射精潜伏期明显缩短，20分钟内完成的扑捉及射精次数明显增加，特别大剂量组达到100%。3、对肾虚动物的药效试验应用本发明药物的肾虚动物(去势大鼠)各生殖器官重量与脏器指数均高于去势模型组，其中大剂量组更为明显(p<0.01)，说明本发明药物具有很好的作用。4、对幼年雄鼠睾丸发育的影响实验结果表明应用不同剂量本发明，睾丸重量与脏器指数均高于正常对照组，且具有显著差异(P<0.01或0.05)，从而证明本发明具有促进幼年大鼠皋丸发育的作用。实验结论本发明有效成分补骨脂素含量为90%_97%，含有两个杂质，杂质补骨脂乙素的含量为3%-8%，杂质补骨酚含量低于1%；或补骨脂素含量为95%-97%,杂质补骨脂乙素含量为3%-4.5%，杂质补骨酚含量低于0.5%；或补骨脂素含量96%-97%,杂质补骨脂乙素含量为3%_4%，杂质补骨酚含量低于0.具有很好的药理作用。临床实验在包括19例阳痿个体的安慰剂对照的临床试验中，测试组给予本发明药物。安慰剂给予不含有本发明药物。15例男性中有14例观察到勃起完全，而安慰剂治疗的4例男性中未有1例体验到勃起。毒理实验本发明有效成分对小鼠毒理实验，LD50为1235mg/kg；对大鼠进行长期毒理实验，给药剂量是临床给药剂量50倍、75倍、100倍，未发现大鼠异常反应，解剖后，未发现大鼠脏器异常反应。制备实施例实施例1一种补骨脂素，补骨脂素含量为90.01%，含有两个杂质，杂质补骨脂乙素的含量%7.92%,杂质补骨酚含量0.99%。实施例2一种补骨脂素，补骨脂素含量为96.92%，含有两个杂质，杂质补骨脂乙素的含量为2.80%，杂质补骨酚含量0.24%。实施例3一种补骨脂素，补骨脂素含量为94.37%，含有两个杂质，杂质补骨脂乙素的含量为4.29%，杂质补骨酚含量0.51%。实施例4一种补骨脂素，其中补骨脂素含量为94.99%，杂质补骨脂乙素含量为4.46%，杂质补骨酚含量0.48%。实施例5根据权利要求1所述的补骨脂素，其中补骨脂素含量为95.58%，杂质补骨脂乙素含量为4.01%，杂质补骨酚含量0.37%。实施例6一种补骨脂素，其中补骨脂素含量96.03%，杂质补骨脂乙素含量为3.98%，杂质补骨酚含量低于0.07%。实施例7取补骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，浓缩，加水溶解完全，静置，过滤，滤液浓缩，上大DlOl孔吸附树脂，水洗，水洗液去除，用30%乙醇洗脱，保留洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，干燥物用有机溶剂甲醇提取，提取液回收有机溶剂，浓缩干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脱，浓缩，干燥，得到补骨脂素。实施例8取补骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，浓缩，加水溶解完全，静置，过滤，滤液浓缩，上AB-8大孔吸附树脂，水洗，水洗液去除，用70%乙醇洗脱，保留洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，干燥物用有机溶剂乙醇提取，提取液回收有机溶剂，浓缩干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脱，浓缩，干燥，得到补骨脂素。实施例8取补骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，浓缩，加水溶解完全，静置，过滤，滤液浓缩，上NKA大孔吸附树脂，水洗，水洗液去除，用40%乙醇洗脱，保留洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，干燥物用有机溶剂丙醇提取，提取液回收有机溶剂，浓缩干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脱，浓缩，干燥，得到补骨脂素。实施例9取补骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，浓缩，加水溶解完全，静置，过滤，滤液浓缩，上DlOl大孔吸附树脂，水洗，水洗液去除，用70%乙醇洗脱，保留洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，干燥物用有机溶剂正丁醇提取，提取液回收有机溶剂，浓缩干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脱，浓缩，干燥，得到补骨脂素。实施例10取补骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，浓缩，加水溶解完全，静置，过滤，滤液浓缩，上AB-8大孔吸附树脂，水洗，水洗液去除，用35%乙醇洗脱，保留洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，干燥物用有机溶剂丙醇提取，提取液回收有机溶剂，浓缩干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脱，浓缩，干燥，得到补骨脂素。实施例11取补骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，浓缩，加水溶解完全，静置，过滤，滤液浓缩，上NKA大孔吸附树脂，水洗，水洗液去除，用30%乙醇洗脱，保留洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，干燥物用有机溶剂正丁醇提取，提取液回收有机溶剂，浓缩干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脱，浓缩，干燥，得到补骨脂素。实施例12取补骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，浓缩，加水溶解完全，静置，过滤，滤液浓缩，上DlOl大孔吸附树脂，水洗，水洗液去除，用45%乙醇洗脱，保留洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，干燥物用有机溶剂丙醇提取，提取液回收有机溶剂，浓缩干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脱，浓缩，干燥，得到补骨脂素。实施例13取补骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，浓缩，加水溶解完全，静置，过滤，滤液浓缩，上AB-8大孔吸附树脂，水洗，水洗液去除，用65%乙醇洗脱，保留洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，干燥物用有机溶剂甲醇提取，提取液回收有机溶剂，浓缩干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脱，浓缩，干燥，得到补骨脂素。上述实施例中补骨脂素在制备治疗阴茎勃起障碍药物中的应用。权利要求一种补骨脂素，其特征在于补骨脂素含量为90％-97％，含有两个杂质，杂质补骨脂乙素的含量为3％-8％，杂质补骨酚含量低于1％。2.根据权利要求1所述的补骨脂素，其中补骨脂素含量为95%-97%，杂质补骨脂乙素含量为3%-4.5%，杂质补骨酚含量低于0.5%。3.根据权利要求1所述的补骨脂素，其中补骨脂素含量96%-97%，杂质补骨脂乙素含量为3%_4%，杂质补骨酚含量低于0.1%。4.根据权利要求1-3任一项所述的补骨脂素，其特征在于制备方法为取补骨脂，粉碎，乙醇提取，回收乙醇，浓缩，加水溶解完全，静置，过滤，滤液浓缩，上大孔吸附树脂，水洗，水洗液去除，用30%-70%乙醇洗脱，保留洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，干燥物用有机溶剂提取，提取液回收有机溶剂，浓缩干燥，干燥物，加水溶解，活性炭炭脱，浓缩，干燥，得到补骨脂素。5.根据权利要求4所述的补骨脂素，其中所述大孔吸附树脂为D101、AB-8、NKA中的一种。6.根据权利要求4所述的一种补骨脂素，其中所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇中的一种。7.根据权利要求1-3任一项所述的补骨脂素在制备治疗阴茎勃起障碍药物中的应用。全文摘要本发明公开了一种天然药物有效成分及其制备方法，其特征在于补骨脂素含量为90％-97％，含有两个杂质，杂质补骨脂乙素的含量为3％-8％，杂质补骨酚含量低于1％。优选为补骨脂素含量为95％-97％，杂质补骨脂乙素含量为3％-4.5％，杂质补骨酚含量低于0.5％。优选为补骨脂素含量96％-97％，杂质补骨脂乙素含量为3％-4％，杂质补骨酚含量低于0.1％。药效学实验表明，本发明有效成分具有很好的治疗男性勃起障碍的作用。文档编号A61P15/10GK101824040SQ20091007950公开日2010年9月8日申请日期2009年3月6日优先权日2009年3月6日发明者周亚君,安晓雪,王爱民申请人:北京卓越同创药物研究院