专利名称：茶红素在制药中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及茶红素的用途，尤其涉及在制药领域中的用途。
背景技术：
糖尿病是影响人类健康的常见和重大疾病，截止到2007年末，全世界 共有糖尿病患者2.5亿人，预计到2025年全世界患糖尿病将达到3亿人。目 前，中国约有6500万糖尿病患者，发病率为5%,发病率在世界占第二位。 在糖尿病患者中有80%是11型糖尿病，尚有5000万人是糖耐受者，他们进 一步发展也将成为糖尿病患者。目前，胰岛素以及部分化学合成药物(如盐 酸二甲双胍、罗格列酮等)在临床上已广泛应用，但副作用一直是困扰患者 的大问题。尤其对于胰岛素抵抗和化学药物抵抗糖尿病患者来说，开发安全、 副作用小、易于口服的天然药物是当今世界糖尿病治疗药物研究开发的重 点。
1992年，E. H. Fisher和E. G. Krebs因发现蛋白质磷酸酶和激酶而共同获 得诺贝尔生理和医学奖。多年研究发现，蛋白质磷酸酶和激酶与许多疾病关 系密切。近年来的研究证明了PTP1B是一个治疗II型糖尿病和肥胖症的药物 靶标。PTP1B先将被激活的胰岛素受体(IR)去磷酸化，使其不能磷酸化下游 的IRS，进而阻止了胰岛素的信号转导途径，进一步影响了胰岛素所执行的 生理功能，导致了糖尿病症状的发生。因此，任何与IR相关的PTP1B表达水 平和活力的变化都可能会影响胰岛素信号转导，并可能导致胰岛素阻抗的发 生，进而导致II型糖尿病的发生。痩蛋白是由OB基因编码的一种分泌性蛋 白质，与痩蛋白受体结合后可发挥调节体重和能量消耗的作用。许多肥胖以 痩蛋白抵抗为主要特征。缺乏PTP1B的痩蛋白基因敲除(ob/ob)大鼠表现为 体重不增加，脂肪组织减少及静息代谢率提高，而且对痩蛋白介导的体重减轻和食欲抑制有增强效应。在大鼠下丘脑痩蛋白应答神经元聚集区表达，实
验表明，PTP1B可通过对痩蛋白受体相关激酶JAK2的去磷酸化作用引起痩蛋 白抵抗。
近年来，国内外的很多研究人员一直都在寻找选择性的PTP1B抑制剂， 虽然特异的、有效的和安全的非肽类抑制剂还未发现，但PTP1B抑制剂的 研究已经取得了 一定的进展。目前已发现的大多数PTP1B抑制剂为肽类或 毒性较强的物质，例如非选择性的PTP抑制剂钒酸盐和过钒酸盐等，无法作 为药物进行开发。其它如中国专利申请CN1794989A，所提到的PTP1B抑制 剂为N-(((((l，3-噻唑-2-基)氨基)羰基沐基)磺酰基)苯丙氨酸衍生物及相关化 合物，需要通过多步化学合成得到，生产工艺复杂。从传统中药资源中筛选 PTP1B抑制剂是最有希望的方法之一，现已有从中药等天然植物中分离提取 得到的PTP1B抑制剂，如中国专利申请CN1521157A，在植物紫金牛和小连 翘中分离得到了一系列PTP1B抑制物对苯醌类化合物及其衍生物。还有在 中药厚朴制剂抑制PTP1B的专利申请(200710055256.2)。但至今尚未发现 茶叶中明确结构的茶色素抑制PTP1B的有关报道。
本发明人对茶叶，尤其是普洱茶在制药中的应用进行了系统的研究，对 普洱茶及其制剂在制备治疗或预防糖尿病的药中的应用，已于2008年11月 21日申请了中国发明专利(专利申请号200810233620.4 )。在此基础上， 本发明人对茶叶中的几种有效成份，作了更加深入细致的试验与研究，取得 多项令人感到振奋的进展。
发明内容
本发明的目的在于提供茶红素的新用途，即茶红素在制药中的新应用。
实际上，本发明涉及茶红素在制备治疗或预防n型糖尿病的药中的应用。
涉及茶红素在制备治疗或预防肥胖性糖尿病的药中的应用。 涉及茶红素在制备治疗或预防肥胖病的药中的应用。涉及茶红素在制备抑制蛋白质酪氨酸磷酸酶的药中的应用。 本发明的目的通过下述技术方案予以实现。
茶红素是茶叶在发酵过程中形成的一种多酚类化合物，其含量决定着茶 的品质。本发明要解决的技术问题是，从茶叶中提取茶红素，用于治疗II型 糖尿病和肥胖症，或以茶红素为原料制备用于治疗II型糖尿病和肥胖症的各 种制剂。
本发明所述的茶红素是以普洱茶为原料，通过萃取的方法从茶叶中提取 得到的天然产物，在体外能够显著抑制蛋白质酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B) 的活性。
本发明所述的茶红素制剂可以是通过以茶红素为原料或原料之一所制 备到的一种制剂，包括茶红素冲剂、茶红素粉剂、茶红素浸膏、茶红素丸剂、 茶红素口服液或茶红素胶囊。该茶红素制剂在体外能抑制蛋白质酪氨酸磷酸
酶1B的活性，可作为治疗与蛋白质酪氨酸磷酸酶1B相关疾病的食品、药
物或食品及药物的组合成分；并可作为治疗n型糖尿病、肥胖症等一系列和
PTP1B相关疾病的食品、药物或药物及食品的组合成分之一。 本发明所述茶红素的制备方法，采用以下步骤1. 干燥的茶叶水=1: 10~20(W/V),在IO(TC下煮沸10 ~ 30分钟， 用120目筛过滤去除残渣，收集水提液。重复此步骤2-4次，合并每次的 提取液。将总提取液分别用200目筛和0.45piM滤器过滤，经高温喷雾干燥 得到茶粉剂；
2. 将茶粉水=1: 25 (W/V)得到茶粉水溶物；
3. 将茶粉水溶物加入等体积的氯仿，萃取三次，保留水相；
4. 向水相中加入等体积的乙酸乙酯，萃取三次，保留乙酸乙酯相；
5. 向乙酸乙酯相加入等体积2.5。/oNaHC03，萃取，保留水相；
6. 将水相中的水蒸发去除，得到茶红素浸膏；
7. 将茶红素浸膏加热到8(TC 15(TC进行干燥以除去剩余的水，得到茶红素干粉。
.为了更好地理解本发明的实质，下面将用相应的药理试验及结果来说明 茶红素在制药领域中的新用途。
茶红素对PTP1B活性抑制作用的测定一一
A. 抑制性的测定原理
PTP1B是一种磷酸化酶，它可以使磷酸化的蛋白去磷酸化。对硝基苯磷 酸二钠盐(pNPP)可以被PTP1B去磷酸化，变成对硝基苯酚，颜色呈黄色。 检测410nm处光吸收值的变化来间接检测酶活性的变化情况。测定体系如 下25mM吗啉代丙烷磺酸(MOPS ), lmM牛血清白蛋白(BSA), lmM 二 硫苏糖醇(DTT), O.lmM乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)， 20mM对-硝基苯 磷酸(p-NPP)， 5nMPTPlB，在37。C反应30min，加入100|xl 0.2MNaHCO3 终止反应,在410nrn处测定光吸收的变化值。
B. PTP1B抑制性的测定方法
各种物质对PTP1B的抑制性的考察是通过测定半数抑制浓度(IC5o)来 衡量。将抑制组分按梯度进行稀释，将稀释后的各个梯度加入如上面所说的 反应体系中，测定37'C, 30min内光吸收的变化值之后，将各个梯度的吸收 值与未加抑制组分的相除，得出的数值为抑制百分数，当达到50%时，所对 应的稀释梯度的倍数作为K^。
C. PTP1B抑制性的考察标准及试验结果
将茶红素用蒸馏水配制成25mg/ml的贮液。按2倍梯度用蒸馏水稀释， 测定每个稀释浓度对PTP1B的抑制能力，测得IC5o,以茶制剂的浓度(mg/ml) 作为茶制剂的ICso的单位。经测定，茶红素的IC5o为0.027mg/ml。
本发明与现有技术相比，具有以下有益效果
试验结果清楚地表明，本发明提取的茶红素经体外研究证明可以显著抑 制蛋白质酪氨酸磷酸酶1B的活性，可作为与蛋白质酪氨酸磷酸酶1B相关疾 病的食品、药物或药物组合成分；并可作为治疗n型糖尿病、肥胖症等一系列和PTP1B相关疾病的食品、药物或药物组合。而且由于本发明是从茶叶中 提取得到的天然产物，对人体无毒副作用，服用安全可靠，这一点是现有技 术无法实现的。
图l是本发明的工艺流程示意图。
具体实施例方式
实施例l
干燥的普洱茶水=1: 10-20 (W/V)，在100'C下煮沸10 ~ 30分钟， 用120目篩过滤去除残渣，收集水提液。重复此步骤2 4次，合并每次的 提取液。将总提取液分别用200目筛和0.45pM滤器过滤，经高温喷雾干燥 得到普洱茶粉剂。
实施例2
将普洱茶茶粉剂水=1: 20~30 (W/V)得到茶粉水溶物。将茶粉水溶 物加入等体积的氯仿，萃取三次，保留水相。向水相中加入等体积的乙酸乙 酯，萃取三次，保留乙酸乙酯相。向乙酸乙酯相加入等体积2.5。/oNaHC03， 萃取，分别保留水相和乙酸乙酯相。将水相中的水蒸发去除，得到茶红素浸 奢。将茶红素浸膏加热到80—15(TC干燥以除去剩余的水，得到茶红素干粉。
实施例3
将茶红素干粉用蒸馏水配制成25mg/ml的贮液。按2倍梯度用蒸馏水稀 释，测定每个稀释浓度对PTP1B的抑制能力，测得ICso,以茶制剂的浓度 (mg/ml)作为茶红素的ICso的单位。经测定，茶红素的IC幼为0.027mg/ml。
最后还需要指出的是，以上列举的仅是本发明的具体实施例。显然，本 发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本 发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均认为是本发明的保护范 围。
权利要求
1. 茶红素及其制剂在制备治疗或预防II型糖尿病的药中的应用。
2. 茶红素及其制剂在制备治疗或预防肥胖性糖尿病的药中的应用。
3. 茶红素及其制剂在制备治疗或预防肥胖病的药中的应用。
4. 茶红素及其制剂在制备抑制蛋白质酪氨酸磷酸酶的药中的应用。
5. 根据权利要求1 4所述的应用，其中所述的茶红素以普洱茶为原料， 通过萃取的方法从茶叶中提取得到的天然产物。
6. 根据权利要求1 ~ 4所述的应用，其中所述的茶红素制剂是通过以茶红 素为原料或原料之一所制备到的一种制剂，包括茶红素冲剂、茶红素粉剂、 茶红素浸膏、茶红素丸剂、茶红素口服液或茶红素胶囊。
全文摘要
本发明公开了茶红素在制药领域中的新用途。本发明的茶红素是以普洱茶为原料，通过萃取的方法从茶叶中提取得到的天然产物，药理试验结果表明，茶红素具有显著地抑制蛋白质酪氨酸磷酸酶的功能。可用于治疗或预防II型糖尿病、治疗或预防肥胖性糖尿病、治疗或预防肥胖病。由于是从茶叶中提取的纯天然物质，具有无毒副作用，服用安全可靠的优点。
文档编号A61K36/185GK101518597SQ20091009407
公开日2009年9月2日 申请日期2009年2月2日 优先权日2009年2月2日
发明者付学奇, 季爱兵, 婷 李, 李艳华, 杨柳霞, 沈培平, 王亚军, 军 盛, 赵昌能, 郝淑美, 陈颖丽 申请人:普洱市人民政府茶产业发展办公室科技服务中心