专利名称：冬凌草甲素乳剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物医药领域，特别涉及冬凌草甲素乳剂及其制备方法。
背景技术：
冬凌草甲素(Rubescensin A)是从冬凌草(Rabdosia rubescens)中提取
的一种烯类二萜。冬凌草又名冰凌草，具有清热解毒、消炎止痛之功效，产于我国河南、河北、山西、四川等地，也是民间治疗食管癌和胃癌的一种草药。1991年我国卫生部批准将冬凌草干燥叶及地上部分作为中药材，收入部颁中药材标准。我国从二十世纪70年代起对冬凌草的化学成分、药理作用及临床应用开始研究，从中提取到多种贝壳杉烯类二萜，包括冬凌草甲素、乙素、丙素、丁素、戊素等，其中以冬凌草甲素为主(刘晨江，赵志鸿.冬凌草的研究进展.中国药学杂志，1998， 33 (10): 577)。用乙醚或乙醇提取即可得到冬凌草甲素。
体内外抗癌实验表明，冬凌草甲素对很多癌细胞系都有明显的抑制杀灭作用，包括对多种移植性小鼠肿瘤株和体外培养的人癌细胞如人体食道癌109细胞株、人体肝癌BEL 7402、人体食管鳞癌细胞株CAES-17、肝癌及组织细胞肉瘤实体型、L1210、 P388、艾氏腹水癌ECA、 S180腹水型，平均抑瘤率为41%，其中对食管癌CaEs-17和胃腺癌MGC80-3最敏感。50mg/L的冬凌草甲素对食管癌CaEs-17和胃腺癌MGC80-3可产生超过3个对数杀灭的细胞毒效应。冬凌草甲素能抑制DNA、 RNA的合成，对于DNA合成期(S)、有丝分裂期(M)及DNA合成后期或分裂前期(G2)的细胞有杀伤作用。它可以延长细胞周期时间，其中对G2期的延缓更加明显，可引起细胞在G2期及M期的堆积。这种抑制在一定范围内，会随药物作用时间和浓度的增加而增强，说明冬凌草甲素抗癌活性的作用位点可能是在核苷酸底物聚合形成DNA的过程中(林碧莲，等.冬凌草素的抗癌分子药理与临床应用策略.广东药学，2000， 10 (4): 8)。另外冬凌草甲素对K562/A02细胞有诱导凋亡、逆转耐药性的作用，是一种很有希望的抗白血病药(郭娟娟，等.安徽中医学院学报，2000， 19 (3): 34)。冬凌草甲素对活性氧自由基也有清除作用。
临床研究证明冬凌草粗提物和冬凌草甲素对食管癌、原发性肝癌、膀胱癌、胰腺癌、大肠癌和乳腺癌都有明显疗效(河南医学院第一附属医院肿瘤科.冬凌草单用及与化疗药物并用治疗恶性肿瘤50例临床疗效观察.河南医学院学报，1975,10(2):17;王瑞林.冬凌草与化疗合用治疗食管癌增效作用的探讨.中华肿瘤杂志，1986，8(4):291;陈绍棠，等.鲁山冬凌草治疗食管贲门癌80例疗效观察.中西医结合杂志，1988,8(1):43;王瑞林.食管癌437例临床疗效观察.中西医结合杂志，1989,9(12):74;河南省冬凌草研究协作组.冬凌草治疗食管癌、贲门癌95例临床疗效结果.肿瘤防治研究，1994,11 (2):86)。
冬凌草甲素为白色结晶性粉末，不溶于水，溶于乙醇和乙酸乙酯。在已报道的研究中，通常采用冬凌草甲素的口服制剂或采用冬凌草甲素乙醇溶液静脉注射。由于冬凌草甲素不溶于水，静脉注射采用乙醇，对人体产生一定刺激，影响了患者适应性，有时会很难给药。
乳剂(emulsions)系指互不相溶的两相液体混合，其中一相液体以液滴状态分散于另一相中形成的非均匀相液体分散体系。乳剂液滴大小一般在0.1 10微米之间。乳剂中的液滴分散度很大，药物吸收和药效的发挥很快，有利于提高生物利用度；脂溶性药物制成乳剂能保证剂量准确，而且使用方便；静脉注射乳剂注射后分布较快、药效高、有靶向性；静脉营养乳剂可以提供高能量。口服乳剂容易被淋巴系统摄取，静脉注射乳剂在体内可以被网状内皮系统吞噬(如肝、脾、肾)，具有靶向性。因此乳剂是抗癌药物常采用的剂型，如鸦胆子油乳、氟尿嘧啶乳剂、康莱特注射液等。乳剂中的油脂还可以提供一定营养能量。
发明内容
本发明人出乎意料地发现在配置合适处方的条件下，可以将冬凌草甲素 制备成乳剂。本发明因此设计并制备了冬凌草甲素乳剂。
本发明中的冬凌草甲素乳剂，其特征是该乳剂中含有0.01% 20%(重量) 的冬凌草甲素，5% 60% (重量)的油脂，0.5% 30% (重量)的乳化剂， 0.01% 30% (体积)的助溶剂；优选的是含有0.1% 10% (重量)的冬凌草 甲素，5% 50% (重量)的油脂，1% 20% (重量)的乳化剂，0.1% 20% (体积)的助溶剂；更优选的是含有1% 5% (重量)的冬凌草甲素，10% 40% (重量)的油脂，2% 10% (重量)的乳化剂，1% 10% (体积)的助 溶剂。
本发明中的冬凌草甲素乳剂含有的油脂可选自大豆油、玉米油、山茶油、 芝麻油、花生油、橄榄油、棉籽油、菜籽油、蓖麻油、油酸乙酯、矿物油， 优选的是大豆油、玉米油、山茶油、油酸乙酯，更优选的是大豆油和玉米油。
本发明中的冬凌草甲素乳剂含有的乳化剂可选自磷脂、氧乙烯氧丙烯嵌 段共聚物、司盘、聚山梨酯(吐温)、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯氢化蓖麻 油、蔗糖脂肪酸酯，优选的是磷脂、氧乙烯氧丙烯嵌段共聚物、聚山梨酯， 更优选的是大豆磷脂、泊洛沙姆、吐温80。
本发明人发现，由于冬凌草甲素的难溶性，需要将冬凌草溶于适当助溶 剂中后，才能方便地制得乳剂。因此本发明中的冬凌草甲素乳剂需添加助溶 剂。助溶剂包括水不溶性有机溶剂和水溶性有机溶剂，优选的是水溶性有机 溶剂。水不溶性有机溶剂选自乙酸乙酯、丙二醇二乙酯、三醋酸甘油酯。水 互溶性有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮、二甲基亚砜、N'，N-二甲基甲酰胺、 四氢呋喃、乙二醇、丙二醇、异丙醇、甘油、聚乙二醇，优选自乙醇、乙二 醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇，更优选自乙醇、丙二醇。
6本发明中的冬凌草甲素乳剂，其制备方法包括以下步骤
(1) 先用助溶剂将冬凌草甲素溶解；
(2) 将冬凌草甲素溶液与油相成分和乳化剂混匀；
(3) 加入水相成分，在高速剪切力条件下成乳。
得到的冬凌草甲素乳剂中的助溶剂可以通过某种方式除去部分助溶剂，方法包括减压、加热、透析。有些有机溶剂没有毒性或毒性很小，可以不除去，例如乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇。
本发明又设计了一种冬凌草甲素乳剂，该乳剂含有0.01% 20% (重量)的冬凌草甲素，5% 60% (重量)的油脂，0.5% 30% (重量)的乳化剂；优选的是含有0.1% 10% (重量)的冬凌草甲素，5% 50% (重量)的油脂，1% 20% (重量)的乳化剂；更优选的是含有1% 5% (重量)的冬凌草甲素，10% 40% (重量)的油脂，2% 10% (重量)的乳化剂。油脂和乳化剂选择的范围与前面相同。采用一般的乳剂制备方法就可以得到这种冬凌草甲素乳剂。制备方法中主要包括冬凌草甲素和油相成分、乳化剂的混合，然后和水相成分在高速剪切力条件下成乳。这种冬凌草甲素乳剂中不含助溶剂或分析仪器测不到助溶剂，但可采用制备过程中涉及助溶剂的方法。该乳剂的制备方法可采用以下步骤
(1) 先用0.01% 30% (体积)助溶剂将冬凌草甲素溶解；
(2) 将冬凌草甲素溶液与油相成分和乳化剂混匀；
(3) 加入水相成分，在高速剪切力条件下成乳；
(4) 从乳剂中除去全部助溶剂。
从本发明设计的冬凌草甲素乳剂中除去助溶剂的方法包括减压、加热、透析。
本发明中的冬凌草甲素乳剂，还可以含有制剂制备所需的药用辅料，选自等渗调节剂、pH调节剂、抗氧化剂、防腐剂。等渗调节剂选自氯化钠、葡萄糖、甘油、丙二醇、甘露醇、木糖醇、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠，优选自
7氯化钠、葡萄糖。pH调节剂可以选自乳酸、柠檬酸、盐酸、酒石酸、硼酸、醋酸、磷酸、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠、柠檬酸钠、醋酸钠、乳酸钠、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、酒石酸盐、氢氧化钠、硼砂、三羟甲基氨基甲垸。抗氧化剂可选自亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫
代硫酸钠、硫脲、维生素C、半胱氨酸、硫代甘油、维生素E叔丁基对羟基茴香醚、二丁甲苯酚、培酸丙酯，优选的是亚硫酸氢钠、维生素C。防腐剂可选自对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、苯甲酸及其盐、山梨酸及其盐。
本发明中的冬凌草甲素乳剂在IOO'C下灭菌条件下保持粒径没有明显变化，室温贮存l年内，乳剂粒径没有明显变化。
本发明中的冬凌草甲素乳剂可以用于静脉注射、肌肉注射或口服。本发明中的冬凌草甲素乳剂也可以与临床上可用的静脉输液混合后进行静脉输注。临床上可用的静脉输液可选自氯化钠输液、葡萄糖输液、氨基酸输液。如果用这种临用前与输液混合的方式给药，冬凌草甲素乳剂中可以不含等渗调节剂或含较少的等渗调节剂。通过静脉注射、肌肉注射或口服进行给药的冬凌草甲素乳剂也可以含等渗调节剂或不含，只要人体可耐受就可以。
上述所列举的成分范围和制备方法并不是本发明的限制，只要符合冬凌草甲素乳剂组成比例并能制备得到乳剂的方法都可以应用。
具体实施例方式
实施例l、冬凌草甲素乳剂l号
冬凌草甲素 &
乙醇 5ml
大豆油 120g
大豆磷脂 50g
氯化钠 9.0g注射用水 至1000ml
取大豆油、大豆磷脂加热至8(TC。另取处方量冬凌草甲素溶于乙醇中，并加入上述热的油相中，搅拌均匀。加入8(TC溶解氯化钠的注射用水700ml，一起加入组织捣碎机，并高速搅拌，8000转/分钟，每次持续3分钟，重复3次，得到白色乳剂。乳剂冷却后，加入注射用水至1000ml，在高压乳匀机中循环乳化3次。显微镜下观察，大部分乳滴粒径在l微米以下，只有5%左右的粒子直径在1 2微米。收集乳剂产品，加压过滤，滤膜孔径3微米。乳剂分装于10ml安瓿中，充入氮气，封口，在100'C条件下加热30分钟后，冷却，取出。取少量样品检测，冬凌草甲素含量没有变化，粒径没有明显变化。该乳剂室温避光保存1年后，取少量样品检测，冬凌草甲素含量没有变化，粒径没有明显变化。该乳剂用于静脉注射，没有明显刺激，癌症患者易接受，与空白对照组比较，治疗效果明显，患者愿意使用。
实施例2、冬凌草甲素乳剂2号
冬凌草甲素 5g
丙二醇 20ml
玉米油 160g
吐温80 60g
泊洛沙姆P188 10g注射用水 至1000ml
取玉米油、吐温80、泊洛沙姆P188加热至8(TC。另取处方量冬凌草甲素溶于丙二醇中，并加入上述热的油相中，搅拌均匀。加入8(TC的注射用水700ml，然后同实施例l制备得到冬凌草甲素乳剂。显微镜下观察，大部分乳滴粒径在1微米以下。该乳剂室温避光保存1年后，取少量样品检测，冬凌草甲素含量没有变化，粒径没有明显变化。该乳剂临用时，以20%比例加入氯化钠输液中进行静脉输注。
该乳剂在水相中添加适量甜味剂后，也可用于口服，无明显味道，无刺激，患者易接受。
实施例3、冬凌草甲素乳剂3号
冬凌草甲素 10g
乙醇 50ml
玉米油 160g
吐温80 90g
泊洛沙姆P188 10g注射用水 至1000ml
该乳剂采用与实施例2类似的制备方法，得到冬凌草甲素乳剂后，在减压条件下37。C加热，除去全部乙醇(气相色谱检测)。显微镜下观察，大部分乳滴粒径在l微米以下。
权利要求
1.一种冬凌草甲素乳剂，其特征是该乳剂中含有0.01％～20％(重量)的冬凌草甲素，5％～60％(重量)的油脂，0.5％～30％(重量)的乳化剂，0.01％～30％(体积)的助溶剂。
2. 如权利要求l所述的冬凌草甲素乳剂，含有0.1% 10% (重量)的冬凌草 甲素，5% 50% (重量)的油脂，1% 20% (重量)的乳化剂，0.1% 20%(体积)的助溶剂。
3. 如权利要求1所述的冬凌草甲素乳剂，含有制剂制备所需的药用辅料，选 自等渗调节剂、pH调节剂、抗氧化剂、防腐剂。
4. 如权利要求1所述的冬凌草甲素乳剂，含有的油脂选自大豆油、玉米油、 山茶油、芝麻油、花生油、橄榄油、棉籽油、菜籽油、蓖麻油、油酸乙酯、 矿物油。
5. 如权利要求1所述的冬凌草甲素乳剂，含有的乳化剂选自磷脂、氧乙烯氧 丙烯嵌段共聚物、司盘、聚山梨酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯氢化蓖 麻油、蔗糖脂肪酸酯。
6. 如权利要求1所述的冬凌草甲素乳剂，含有的助溶剂为水溶性有机溶剂， 选自甲醇、乙醇、丙酮、二甲基亚砜、N，,N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、乙二醇、丙二醇、异丙醇、甘油、聚乙二醇。
7. 如权利要求1所述的冬凌草甲素乳剂，其制备方法包括以下步骤(1) 先用助溶剂将冬凌草甲素溶解；(2) 将冬凌草甲素溶液与油相成分和乳化剂混匀；(3) 加入水相成分，在高速剪切力条件下成乳。
8. 如权利要求7所述的冬凌草甲素乳剂，在其制备成乳后，除去部分助溶剂。
9. 一种冬凌草甲素乳剂，其特征是该乳剂中含有0.01% 20% (重量)的冬 凌草甲素，5% 60% (重量)的油脂，0.5% 30% (重量)的乳化剂。
10.如权利要求9所述的冬凌草甲素乳剂，其制备方法包括以下步骤:(1) 先用0.01% 30% (体积)助溶剂将冬凌草甲素溶解；(2) 将冬凌草甲素溶液与油相成分和乳化剂混匀；(3) 加入水相成分，在高速剪切力条件下成乳；(4) 从乳剂中除去全部助溶剂。
全文摘要
本发明公开了冬凌草甲素乳剂及其制备方法。该乳剂稳定性好，粒径小，可用于静脉注射、肌肉注射或口服。该冬凌草甲素乳剂含有0.01％～20％的冬凌草甲素，5％～60％的油脂，0.5％～30％的乳化剂，0.01％～30％的助溶剂，其中助溶剂可以全部或部分除去。
文档编号A61K47/34GK101669907SQ20091018083
公开日2010年3月17日 申请日期2009年10月19日 优先权日2009年10月19日
发明者丽 佟, 常贵生 申请人:常贵生;佟 丽