专利名称：肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒及其制备方法
技术领域：
本发明涉及的是一种造影剂技术领域的制备方法，具体是一种肠壁识别性含钆纳
米造影剂颗粒及其制备方法。
背景技术：
磁共振成像技术在肿瘤、炎症等疾病的诊断中有着非常重要的作用，在临床中应用越来越广泛。其成像的效果很大一方面取决于其使用的造影剂，多胺多羧酸类钆(Gd)配合物及其衍生物是最常用的造影剂之一，为T1阳性造影剂，如Gd-DTPA， Gd-D0TA，Gd-DTPA-BMA， Gd-B0PTA等等。 肠壁的损伤是很多肠道疾病如肠炎肠癌的诊断依据之一，但目前临床上的磁共振造影剂对粘膜损伤成像效果差，很难在肠粘膜局部损失的情况下实现清晰的造影成像。而壳聚糖作为一种天然高分子，其能很好地通过肠黏膜而吸附，如能利用壳聚糖制备成含钆纳米颗粒，则有望实现对肠壁的强化识别成像，而壳聚糖具有生物安全性和降解性，且成本低廉，无生物毒性，有利于直接用于人体中。 目前壳聚糖微球的制备方法较多，但制备成纳米颗粒的方法很少。经过对现有技术的检索发现，中国专利文献号CN10115308A记载了一种"壳聚糖纳米颗粒的制备方法"，采用纳米空洞技术制备了几百个纳米大小的纳米颗粒，但这种方法采用机械搅拌，生成的颗粒均一性可能不好。 涉及包钆的壳聚糖纳米颗粒的方法则更少，且制备方法复杂。如Tokumitsu等人在"药物化学通报"(Chem. Pharm. Bull)杂志(1999年46期第838 842页)的"载钆壳聚糖药物微球用于癌症中子俘获治疗"中报道了一种利用双乳液微滴法制备载钆壳聚糖微球的方法，在这种方法中利用戊二醛作为连接剂，但戊二醛可能会影响壳聚糖上的自由氨基，会影响钆的包封和成像效果。Tokumitsu等人在"制药研究"(Pharmaceutical Research)杂志(1999年12期第1830 1835页)中发展了"钆喷酸葡胺复合纳米颗粒用于肿瘤中子俘获治疗新型双乳化微滴制备方法及表征"方法，利用NaOH作为交联试剂制备壳聚糖纳米颗粒，其利用双乳液微滴法，因涉及两个油相的制备，操作比较复杂，不利于批量生产。因此需要寻求一种简便而不影响壳聚糖对肠壁识别性能的制备方法，用于制备含钆壳聚糖纳米颗粒，且要粒径均一，分散性要较好。
发明内容
本发明针对现有技术存在的上述不足，提供一种肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒及其制备方法，利用壳聚糖对肠壁良好的亲和性和吸附性，以简便的一步乳化中和法，制备成含钆壳聚糖纳米颗粒。该方法制备的含钆纳米颗粒可提高和增强钆类造影剂对大肠和小肠壁的造影成像作用，且生物亲和性好、毒性较低。
本发明是通过以下技术方案实现的 本发明涉及肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒，其组分及其质量百分比含量为药物钆喷酸葡胺10 90%，壳聚糖90 10%，该肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒的平均粒径在250 1700nm。 本发明涉及上述肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒的制备方法，包括如下步骤 第一步、将钆类试剂溶液与壳聚糖溶液以i : i i : 20的体积比混合并充分溶
解，作为水相； 所述的钆类试剂溶液是指浓度为1 50mmol/L的钆喷酸葡胺(Gd-DTPA)及其衍生物的水溶液； 所述的壳聚糖溶液是指浓度为5 50mg/mL的壳聚糖醋酸溶液，其中醋酸溶液的质量百分比浓度为0. 5 2%，壳聚糖的分子量为10000 300000，脱乙酰度为70 100% ; 第二步、以液体石蜡作为油相，将水相和油相以i : 5 i : 20的体积比混合后
置于冰浴中进行乳化处理，制成乳化液； 所述的液体石蜡中含有质量百分比为2 15%的乳化剂，改乳化剂包括司盘85(Span85)或司盘83 (Span83)中的一种或其组合； 第三步、向乳化液中加入5 20%的体积比的碱性溶液并继续在冰浴中进行乳化处理，经搅拌离心分离去除上清液后进行混合清洗处理得到纳米悬浮液，最后将纳米悬浮液干燥处理后得到肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒； 所述的碱性溶液是指浓度为0. 5 5mol/L的氨水、NaOH水溶液或KOH水溶液；
所述的冰浴是指0 5°C的冰水溶液环境； 所述的乳化处理是指采用细胞粉碎仪或剪切乳化机以25000rpm 40000rpm进行搅拌乳化反应3 10分钟； 所述的混合清洗处理是指以甲苯、乙醚、乙醇和去离子水依次各清洗离心2次，或以甲苯、丙酮、乙醇和去离子水依次各清洗离心2次，每次离心分离时间均为30分钟；
所述的干燥处理包括冷冻干燥和真空干燥。 利用本发明制备的包钆壳聚糖纳米造影剂方法简单快速、成本较低、适合大批量生产，经冰浴下搅拌反应获得的颗粒粒径均一性和分散性都较好，肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒也具有较好的生物相容性和活性，无生物毒性，且能对肠壁产生识别吸附，可提高和增强肠壁的磁共振成像作用，从而有望在肠癌、肠粘膜炎症等疾病的诊断方面得到应用。
具体实施例方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。 实施例1 取25mmol/L的Gd-DTPA溶液2. 5mL，与2. 5mL含1 %醋酸溶液的壳聚糖溶液相混合，作为水相，壳聚糖的分子量为25000，脱乙酰度为86%。然后将此水相溶液加入至80mL含有5%的司盘85乳化剂的液体石蜡溶液中，将整个容器放在冰水浴中，利用剪切乳化机以30000rpm的速度高速搅拌3分钟，再加入7. 5mL3mol/L的NaOH溶液，以30000rpm的速度继续搅拌10分钟，以3000rpm的转速离心30分钟，倒掉上清后再以甲苯、丙酮、乙醇和去离子水各清洗离心2次，每次离心分离时间为30分钟，最后再放置在冷冻干燥机中进行冷
冻干燥48小时，获得干粉状纳米颗粒肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒。 本实施例制备所得含钆纳米造影剂颗粒的组分为钆喷葡胺质量含量为77. 1 % ，壳
聚糖质量含量为22. 9X，经激光粒度仪测得的粒径为452士38nm，多分散指数PDI小于O. 3，
溶液放置7天未见有沉淀，表明分散性较好。 实施例2 取25mmol/L的Gd-DTPA溶液0. 5mL，与0. 5mL含1 %醋酸溶液的壳聚糖溶液相混 合，作为水相，壳聚糖的分子量为180000，脱乙酰度为95% 。然后将此水相溶液加入至20mL 含有5%的司盘83乳化剂的液体石蜡溶液中，将整个容器放在冰水浴中，利用细胞粉碎仪 以25000rpm的速度高速搅拌5分钟，再加入1. 5mL3mol/L的KOH溶液，以25000rpm的速度 继续搅拌8分钟，以3000rpm的转速离心30分钟，弃上清，然后以甲苯、乙醚、乙醇和去离子 水各清洗离心2次，每次离心分离时间为30分钟，最后再放置在冷冻干燥机中进行冷冻干 燥48小时，获得干粉状纳米颗粒肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒。 本实施例制备所得含钆纳米造影剂颗粒的组分为钆喷葡胺质量含量为62. 4%，壳 聚糖质量含量为37. 6%，以激光粒度仪测得的粒径为768士69nm，多分散指数PDI小于O. 3， 溶液放置7天未见有沉淀，分散性较好。
权利要求
一种肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒，其特征在于，其组分及其质量百分比含量为药物钆喷酸葡胺10～90％，壳聚糖90～10％，该含钆纳米造影剂颗粒的平均粒径在250～1700nm，载药率为10～90％。
2. 根据权利要求1所述的肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒的制备方法，其特征在于， 包括如下步骤第一步、将钆类试剂溶液与壳聚糖溶液以1 : 1 1 : 20的体积比混合并充分溶解， 作为水相；第二步、以液体石蜡作为油相，将水相和油相以i : 5 i : 20的体积比混合后置于冰浴中进行乳化处理，制成乳化液；第三步、向乳化液中加入5 20%的体积比的碱性溶液并继续在冰浴中进行乳化处 理，经搅拌离心分离去除上清液后进行混合清洗处理得到纳米悬浮液，最后将纳米悬浮液 干燥处理后得到肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒。
3. 根据权利要求2所述的肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒的制备方法，其特征是，所 述的钆类试剂溶液是指浓度为1 50mmol/L的钆喷酸葡胺(Gd-DTPA)及其衍生物的水溶 液。
4. 根据权利要求2所述的肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒的制备方法，其特征是，所 述的壳聚糖溶液是指浓度为5 50mg/mL的壳聚糖醋酸溶液，其中醋酸溶液的质量百分 比浓度为0. 5 2%，壳聚糖的分子量为10000 300000，脱乙酰度为70 100%。
5. 根据权利要求2所述的肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒的制备方法，其特征是，所 述的液体石蜡中含有质量百分比为2 15%的乳化剂，乳化剂包括司盘85或司盘83中 的一种或其组合。
6. 根据权利要求2所述的肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒的制备方法，其特征是，所 述的碱性溶液是指浓度为0. 5 5mol/L的氨水、NaOH水溶液或KOH水溶液。
7. 根据权利要求2所述的肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒的制备方法，其特征是，所 述的冰浴是指0 5t:的冰水溶液环境。
8. 根据权利要求2所述的肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒的制备方法，其特征是，所 述的乳化处理是指采用细胞粉碎仪或剪切乳化机以25000rpm 40000rpm进行搅拌乳化 反应3 IO分钟。
9. 根据权利要求2所述的肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒的制备方法，其特征是，所 述的混合清洗处理是指以甲苯、乙醚、乙醇和去离子水依次各清洗离心2次，或以甲苯、丙 酮、乙醇和去离子水依次各清洗离心2次，每次离心分离时间均为30分钟。
全文摘要
一种造影剂技术领域的肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒及其制备方法，包括将钆类试剂溶液与壳聚糖溶液以1∶1～1∶20的体积比混合并充分溶解，作为水相；以液体石蜡作为油相，将水相和油相以1∶5～1∶20的体积比混合后置于冰浴中进行乳化处理，制成乳化液；向乳化液中加入5～20％的体积比的碱性溶液并继续在冰浴中进行乳化处理，经搅拌离心分离去除上清液后进行混合清洗处理得到纳米悬浮液，最后将纳米悬浮液干燥处理后得到肠壁识别性含钆纳米造影剂颗粒。本发明制备所得含钆纳米造影剂颗粒的平均粒径在250～1700nm，载药率10～90％。
文档编号A61K49/12GK101700402SQ20091019983
公开日2010年5月5日 申请日期2009年12月3日 优先权日2009年12月3日
发明者何丹农, 刘晓晟, 沈新程, 程杰军, 许建荣, 金彩虹, 龙玲 申请人:上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司