专利名称：一种含有川红酚黄素的有效部位组合物的制作方法
技术领域：
本发明属于制药技术领域，具体涉及一种川红酚黄素有效部位及其三七总皂苷有 效部位组合物。
背景技术：
红花的主要化学成分红花黄色素为黄酮类化合物的混合物，其中主要包括红花黄 色素A、红花黄色素B、羟基红花黄色素A、SafTlomin C, Safflomin A等。多种研究结果表 明红花黄色素具有扩张冠状动脉、耐缺氧、改善心肌血液供应；降低血压、扩张血管、改善器 官供血；抗凝血、抑制血栓形成；镇静、镇痛等心血管疾病的作用。川芎的主要活性成分为酚酸类成分，其中含阿魏酸，川芎酚，原儿茶酸，亚油酸等。 从川芎中提取的川芎总酚酸可以较明显地扩张冠脉，增加冠脉流量及心肌营养血流量，使 心肌供氧量增加。阿魏酸也能增加冠脉血流量，保护缺血心肌。阿魏酸钠是一种IXA2合成 酶抑制剂。由于该酶的活性受到抑制，由花生四烯酸转化为TXA2的量明显减少，从而抑制 血小板聚集。现代研究表明，三七的化学成分中，具有多种药理活性的成分是皂苷。秦氏等研 究三七总皂苷(TSPNS或PNS)对劳累型心绞痛(AP)患者左室舒张功能的影响，结果表明， TSPNS能改善AP患者的心肌缺血状态，且能逆转仅有舒张功能不全的早期心衰患者的心功 能及已经发生的病理变化。而对高血压病左室舒张功能，TSPNS能明显改善左室舒张功能， 显著提高心肌细胞内肌浆网膜上Ca泵活性，减少心肌细胞内Ca++，减轻左室心肌重量。三七 皂苷单体Rbl，能抑制心肌收缩力，具有钙通道阻滞作用，而另一单体Rgl，无钙通道阻滞作 用。张氏等采用标准全细胞膜片钳技术，进一步证明Rbl为一钙通道阻滞剂，在一定范围 内，其抑制作用呈浓度依赖关系。罗氏等研究三七皂苷对慢性缺氧性肺动脉高压的影响，结 果表明，三七皂苷有抑制慢性缺氧性肺动脉高压的作用。关氏等观察三七皂苷对血管平滑 肌a受体引起45Ca外溢与内流的影响，结果三七总皂苷能特异阻断血管平滑肌a受体操纵 的Ca++通道而不影响胞内Ca++释放过程。潘氏等报道，体外试验，PNS能抑制胶原诱导的大 鼠血小板聚集，体内试验，能显著抑制大鼠实验性血栓形成。苏氏等研究结果显示三七三醇 皂苷(PTS)能明显抑制由ADP、胶原、花生四烯酸诱导的大鼠及家兔血小板聚集，同时亦抑 制胶原诱导大鼠血小板TXA2释放。PTS明显抑制大鼠实验性血栓形成，剂量与效应相关。 而徐氏等进一步观察表明了三七皂甙单体Rgl明显降低实验性血栓形成，对大鼠血浆纤溶 系统亦有明显作用，可升高血浆中组织纤溶酶原激活物(t-PA)活性和活性型t-PA百分比， 降低组织纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)活性，呈剂量依赖性提高大鼠血管内皮细胞一氧化 氮(NO)释放，以剂量依就方式抑制凝血酶诱导的血小板聚集，抑制凝血酶诱导的正常血压 及肾性高血压大鼠血小板内游离钗升高。张氏研究表明，PNS使大鼠脑血流量增加，脑组织 钙含量下降，具有钙通道阻断作用。伍氏等观察表明PNS降压作用确实，对SD大鼠脑循环 有明显作用。姜氏等观察PNS对氰化钠引起鸡胚脑神经细胞缺氧和大鼠全脑缺血纹状体细 胞外嘌吟类代谢产物的影响，提示PNS对神经细胞氰化钠损伤及大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用，其机理可能与改善能量代谢有关。简氏报道，PNS具有明显减轻脑缺血损伤的 复苏效应。马氏等研究结果表明PNS是钙离子拮抗剂。其脑保护机制可能与其抗兴奋性毒 性和缺氧性损伤的作用有关。此外，PNS可通过增加脑组织血液供应改善能量代谢，从而保 护脑组织。汤氏等探讨表明，三七皂苷Rgl能提高神经细胞的耐缺氧能力，并对神经细胞缺 氧损伤具有明显的保护作用。许氏等研究发现缺氧后30分钟脑组织NO含量和NOS活性均 显著升高(P < 0. 01)，而PNS能防止缺血后两者的升高，PNS通过降低NO的含量而起保护 脑组织作用。检索资料发现，有文献公开了三七、红花或川芎分别提取分离纯化得各组分的有 效部位组合物制成的制剂，此类制剂为中药现代复方，不属于中医理论指导下的复方有效 部位研究的范畴，在中医理论指导下运用现代分离纯化及检测手段的对市售中药进行二次 开发，减小现有产品的服用量，增加疗效，属于国家提倡和支持的研究领域。三七100g、红花100g、川芎200g是药典收录药品“舒胸片”的组分，由于传统工艺 得到的产品服用量大，质量标准不易控制，对其有效成分进行纯化得到服用量小，质量标准 容易控制的产品符合国家倡导的安全、有效、质量可控的药物开发原则。由于三味药混合提取后通过大孔树脂柱层析分离得到的有效部位群中三七总皂 苷含量较低，我们经过药效实验对比发现红花和川芎混合提取得到的川红酚红素与三七单 独提取得三七总皂苷，按药材处方比例得到的提取物不但质量可控，组合后药效也是最好 的。我们经过检索未发现红花和川芎复方提取直接得到川红酚黄素有效部位及其研 究工艺方面的报道，更未见该有效部位与三七总皂苷的组合物，由于在治疗心血管疾病方 面，红花中的黄色类成分和川芎中的酚酸类成分的药效响应与功能主治相符合，故确定川 芎、红花的有效部位为红花黄色素和川芎总酚，其提取物命名为川红酚黄素；三七的皂苷 类成分的药效响应与功能主治亦相符合，故确定三七有效部位的主要有效成分为三七总皂 苷，其主要化学成分为人参皂甙Rbl、Re、Rgl，三七皂甙Rl等。我们经过了大量的工艺摸索，研究结果表明提取物中有效成分红花黄色素和川芎 总酚的总含量大于52%，其中红花黄色素的含量大于50%，川芎总酚的含量大于2. 0%， 三七总皂苷含量大于70%，符合中药有效部位的质量标准，且有效部位的制备工艺稳定，具 有生产可行性。
发明内容
本发明公开了一种含有川红酚黄素的有效部位组合物，其中包含川红酚黄素 与三七总皂苷，重量比为0.8-1.2 1 ；川红酚黄素中红花黄色素与川芎总酚的比例为 0. 3-0. 8 10。本发明川红酚黄素有效部位，其制备方法如下取处方量的川芎加10-15倍量水 煎煮1-2小时，滤过，滤液另存，药渣与红花加水煎煮二次，每次1-2小时，合并三次煎液，滤 过，滤液减压浓缩至0. 3-0. 6g生药材/ml，离心，上清液用大孔吸附树脂纯化，先用水洗脱 至洗脱液近无色，再用5-10%乙醇洗脱至洗脱液近无色，最后用40-60%乙醇洗脱有效成 分，洗脱液减压浓缩喷雾干燥，收集喷干粉，即得。本发明三七总皂苷有效部位，其制备方法如下将三七药材粉碎成颗粒，用4-6倍量的60-80%乙醇回流提取3次，每次l_2h，滤过，合并滤液。滤液减压浓缩至无醇味，离心， 残渣用水洗涤两次，洗液与上清液合并，加水稀释至浓度为0. 3 0. 5g生药材/ml，滤过， 滤液上大孔吸附树脂柱纯化，先用蒸馏水洗脱糖类等成分，水洗液弃掉，再用70%乙醇洗脱 三七总皂苷，收集洗脱液，洗脱液减压浓缩，喷雾干燥即得三七总皂苷。本发明红花黄色素与川芎总酚，其中川芎总酚含量测定方法为照2005年版一部 《中国药典》中紫外_可见分光光度法，在320nm波长处测定吸光度，以阿魏酸(C10H1004) 计；红花黄色素含量测定方法为照2005年版一部《中国药典》中紫外_可见分光光度法， 在401nm波长处测定吸光度，以羟基红花黄色素A (C27H3tlO15)计；三七总皂苷含量测定方法 为照2005年版一部《中国药典》中紫外_可见分光光度法，在548nm波长处测定吸光度， 以人参皂苷Rg1 (C42H72O14)计；用高效液相色谱法分别测定三七皂苷R1 (C47H80O18)、人参皂苷 Rg1 (C42H72O14)人参皂苷Rb1 (C54H92O23)计，三者总量合计占三七总皂苷重量的50%以上。本发明含川红酚黄素的有效部位组合物，其中各有效部位提取物按照本发明制备 方法折合药材的重量份数为红花90-110g、川芎180-200g、三七90-110g。本发明含川红酚黄素的有效部位组合物，可以与药用辅料混合制成药剂学上的各 种剂型，制成的制剂，制成的药品用于瘀血阻滞所致的胸痹，症见胸闷、心前区刺痛；冠心病 心绞痛见上述证候者的治疗，疗效显著。本发明川红酚黄素有效部位组合物，其中检测方法如下川红酚黄素含量测定方法照紫外-可见分光光度法(《中华人民共和国药典》 2005版一部附录V A)测定。1、红花黄色素的测定方法1. 1对照品溶液的制备精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加水制成每Iml中 含0.015mg的溶液，即得。1. 2样品测定方法吸取样品溶液一定量，置比色杯中，以水为空白，在401nm的波 长处测定吸收度。用外标法计算含量，即得。2、川芎总酚的测定方法2. 1对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每Iml中含 0. 006mg的溶液，即得。2. 2样品测定方法吸取样品溶液一定量，加于预先处理好的凝胶色谱分离柱 (Sephadex LH-20，内径1. 2cm，填充物高20cm，滴速8 12滴/分钟)上，用三氯甲烷-甲 醇(70 30)混合溶液洗脱，收集30ml洗脱液，置50°C水浴上蒸发至干，残渣加75%乙醇溶 解，转移至IOml棕色量瓶中，加75%乙醇稀释至刻度，摇勻，离心(1000转/分钟，5分钟)， 在320nm波长处测定吸光度。用外标法计算含量，即得。3、三七总皂苷含量测定方法照紫外-可见分光光度法(《中华人民共和国药典》 2005版一部附录V A)测定。对照品溶液的制备取经60°C真空干燥2h的人参皂苷Rgl对照品1. 6mg,精密称 定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每Iml含人参皂苷Rgl约0. 064mg的溶 液，即得。供试品溶液的制备取本品23mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至 刻度，摇勻，精密量取2ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配成每Iml中含三七总皂苷
5约0. 073mg的甲醇溶液。测定法精密量取供试品溶液1. 5ml于IOml具塞试管中，同时作一空白溶液，在水 浴上蒸干，冷却至室温，加0. 2ml5%香荚兰醛冰乙酸液，加0. 8ml高氯酸，在70°C热水浴中 显色15min，放冷，加冰乙酸5ml，摇勻，在548nm波长处测定吸收度。计算含量，即得。本品以干燥品计算三七总皂苷含量不得少于70%。三七皂苷R1 (C47H80O18)、人参皂苷Rg1 (C42H72O14)及人参皂苷Rb1 (C54H92O23)照高效液 相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈 (A)和水(B)，按以下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm，理论板数按三七皂苷Rl 峰计算应不低于4000。对照品溶液的制备精密称取三七皂苷R1、人参皂苷Rgl和人参皂苷Rbl对照品适 量，加甲醇制成浓度分别为每Iml含三七皂苷RIO. 123mg、人参皂苷Rgl0.31mg、人参皂苷 Rbl 为 0. 48mg,即得。供试品溶液的制备取重量差异项下的本品，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形 瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率50kHz) 20分钟，放 冷，密塞，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测定， 即得。具体实施例一川红酚黄素7. 7g 三七总皂苷8. Og药材处方量为三七IOOg 红花IOOg川芎200g取处方量的川芎加10倍量水煎煮2小时，滤过，滤液另存，药渣与红花加10倍量 水煎煮二次，每次1小时，合并三次煎液，滤过，滤液减压浓缩(60°C)至0. 5g生药材/ml， 离心，上清液用AB-8型大孔吸附树脂纯化，先用水洗脱至洗脱液近无色，再用5%乙醇洗脱 至洗脱液近无色，最后用60%乙醇洗脱有效成分，洗脱液减压浓缩喷雾干燥，收集喷干粉， 即得川红酚黄素7. 7g，含量测定结果川红酚黄素的总含量为54%，符合有效部位的要求。取处方量三七药材粉碎成颗粒(4 7mm)，用6倍量的70%乙醇回流提取3次， 每次l.Oh，滤过，合并滤液。滤液于60°C减压浓缩至无醇味，离心(4000r、10min)，残渣用 水洗涤两次，洗液与上清液合并，加水稀释至浓度为0. 3 0. 5g生药材/ml，滤过，滤液上 DlOl大孔吸附树脂柱纯化，先用10倍于生药材量的蒸馏水洗脱糖类等成分，水洗液弃掉， 再用7倍于生药材量的70%乙醇洗脱三七总皂苷，收集洗脱液，洗脱液于60°C减压浓缩至 密度1. 05 1. 10 (600C )，喷雾干燥进风温度为110°C，出风温度为95°C，收集喷干粉，即 得三七总皂苷8. 0g，含量测定结果三七总皂苷含量为71.5%，符合有效部位的要求。制备滴丸制剂取以上三七总皂苷、川红酚黄素和PEG4000，将其混合均勻，置于90°C水浴中，加 热使之熔融；将熔融液倾倒入滴丸锅中，以15滴/分的滴速滴入冷凝剂甲基硅油中(5 IO0C )；待其成型后，收集滴丸，用滤纸吸除表面的甲基硅油，置于干燥器中干燥24小时，滴 制成1000粒，即得。具体实施例二
川红酚黄素8. Olg 三七总皂苷7.60g药材处方量为三七IOOg 红花IOOg川芎200g取处方量的川芎加10倍量水煎煮2小时，滤过，滤液另存，药渣与红花加10倍量 水煎煮二次，每次1小时，合并三次煎液，滤过，滤液减压浓缩(60°C)至0.5g生药材/ml，离 心，上清液用AB-8型大孔吸附树脂纯化，先用水洗脱至洗脱液近无色，再用5%乙醇洗脱至 洗脱液近无色，最后用70 %乙醇洗脱有效成分，洗脱液减压浓缩喷雾干燥，收集喷干粉，即 得川红酚黄素8. Olg，含量测定结果川红酚黄素的总含量为55. 1%，符合有效部位的要求。取处方量三七药材粉碎成颗粒(4 7mm)，用6倍量的70%乙醇回流提取3次， 每次l.Oh，滤过，合并滤液。滤液于60°C减压浓缩至无醇味，离心(4000r、10min)，残渣用 水洗涤两次，洗液与上清液合并，加水稀释至浓度为0. 3 0. 5g生药材/ml，滤过，滤液上 DlOl大孔吸附树脂柱纯化。先用10倍于生药材量的蒸馏水洗脱糖类等成分，水洗液弃掉， 再用7倍于生药材量的70%乙醇洗脱三七总皂苷，收集洗脱液，洗脱液于60°C减压浓缩至 密度1. 05 1. 10(60°C )，喷雾干燥进风温度为110°C，出风温度为95°C，收集喷干粉，即 得三七总皂苷7. 60g，含量测定结果三七总皂苷含量为72. 0%，符合有效部位的要求。制备滴丸制剂取以上三七总皂苷、川红酚黄素和PEG4000，将其混合均勻，置于90°C水浴中，加 热使之熔融；将熔融液倾倒入滴丸锅中，以15滴/分的滴速滴入冷凝剂甲基硅油中(5 IO0C )；待其成型后，收集滴丸，用滤纸吸除表面的甲基硅油，置于干燥器中干燥24小时，滴 制成1000粒，即得。具体实施例三川红酚黄素7. 35g 三七总皂苷8.40g药材处方量为三七IOOg 红花IOOg川芎200g取处方量的川芎加10倍量水煎煮2小时，滤过，滤液另存，药渣与红花加10倍量 水煎煮二次，每次1小时，合并三次煎液，滤过，滤液减压浓缩(60°c)至0.5g生药材/ml，离 心，上清液用AB-8型大孔吸附树脂纯化，先用水洗脱至洗脱液近无色，再用5%乙醇洗脱至 洗脱液近无色，最后用60 %乙醇洗脱有效成分，洗脱液减压浓缩喷雾干燥，收集喷干粉，即 得川红酚黄素7. 35g，含量测定结果川红酚黄素的总含量为53. 5%，符合有效部位的要求。取处方量三七药材粉碎成颗粒(4 7mm)，用6倍量的70%乙醇回流提取3次， 每次l.Oh，滤过，合并滤液。滤液于60°C减压浓缩至无醇味，离心(4000r、10min)，残渣用 水洗涤两次，洗液与上清液合并，加水稀释至浓度为0. 3 0. 5g生药材/ml，滤过，滤液上 DlOl大孔吸附树脂柱纯化。先用10倍于生药材量的蒸馏水洗脱糖类等成分，水洗液弃掉， 再用7倍于生药材量的70%乙醇洗脱三七总皂苷，收集洗脱液，洗脱液于60°C减压浓缩至 密度1. 05 1. 10 (600C )，喷雾干燥进风温度为110°C，出风温度为95°C，收集喷干粉，即 得三七总皂苷8. 40g，含量测定结果三七总皂苷含量为71.8%，符合有效部位的要求。制备滴丸制剂取以上三七总皂苷、川红酚黄素和PEG4000，将其混合均勻，置于90°C水浴中，加 热使之熔融；将熔融液倾倒入滴丸锅中，以15滴/分的滴速滴入冷凝剂甲基硅油中(5 IO0C )；待其成型后，收集滴丸，用滤纸吸除表面的甲基硅油，置于干燥器中干燥24小时，滴 制成1000粒，即得。
药效学实验(对大鼠心肌梗塞面积的影响)实验材料1.实验动物=Wistar种大鼠32只，雄性，体重240 270g。2.实验药物(1)提取物1 川红酚黄素(按照实施例中的方法制备)，三七总皂苷(按照实施 例中的方法制备)；(2)提取物2 川芎总酚、红花黄色素、三七总皂苷(按照实施例中的川红酚黄素方 法制备，按处方量增加三七药材)(3)阳性对照药舒心片实验方法动物随机分为4组模型组(生理盐水)，提取物1和提取物2分别用 无菌水稀释至所需浓度(按人用剂量折算成大鼠给药剂量)，给药体积均为lml/kg，给药途 径为口服每天一次，连续14天进行试验。心肌梗塞动物模型按照常规造模方式得到。实验结果各提取物对心肌梗塞程度的影响
权利要求
1.一种含有川红酚黄素的有效部位组合物，其特征在于包含川红酚黄素与三七总皂 苷，重量比为0.8-1. 2 1。
2.根据权利要求1所述川红酚黄素有效部位，其特征在于处方量的川芎和红花复方提 取制得，其制备方法如下取处方量的川芎加10-15倍量水煎煮1-2小时，滤过，滤液另存， 药渣与红花加水煎煮二次，每次1-2小时，合并三次煎液，滤过，滤液减压浓缩至0. 3-0. 6g 生药材/ml，离心，上清液用大孔吸附树脂纯化，先用水洗脱至洗脱液近无色，再用5-10% 乙醇洗脱至洗脱液近无色，最后用40-60 %乙醇洗脱有效成分，洗脱液减压浓缩喷雾干燥， 收集喷干粉，即得。
3.根据权利要求1-2的川红酚黄素有效部位，其特征在于红花黄色素与川芎总酚的重 量比为0. 3-0. 8 10。
4.根据权利要求1所述三七总皂苷，其特征在于制备方法如下将三七药材粉碎成颗 粒，用4-6倍量的60-80%乙醇回流提取3次，每次l_2h，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至 无醇味，离心，残渣用水洗涤两次，洗液与上清液合并，加水稀释至浓度为0. 3 0. 5g生药 材/ml，滤过，滤液上大孔吸附树脂柱纯化，先用蒸馏水洗脱糖类等成分，水洗液弃掉，再用 70%乙醇洗脱三七总皂苷，收集洗脱液，洗脱液减压浓缩，喷雾干燥即得三七总皂苷。
5.根据权利要求3中的川芎总酚与红花黄色素，其特征在于川芎总酚含量测定方法 为照2005年版一部《中国药典》中紫外-可见分光光度法，在320nm波长处测定吸光度，以 阿魏酸(C10H1004)计，川芎总酚占总提取物的含量大于2.0% ；红花黄色素含量测定方法 为照2005年版一部《中国药典》中紫外-可见分光光度法，在401nm波长处测定吸光度， 以羟基红花黄色素A(C27H3tlO15)计，红花黄色素占总提取物的含量大于50%。
6.根据权利要求4中的三七总皂苷，其特征在于三七总皂苷含量测定方法为照2005 年版一部《中国药典》中紫外-可见分光光度法，在548nm波长处测定吸光度，以人参皂 苷Rg1 (C42H72O14)计，三七总皂苷的含量大于70% ；用高效液相色谱法分别测定三七皂苷 R1 (C47H80O18)、人参皂苷Rg1 (C42H72O14)人参皂苷Rb1 (C54H92O23)计，三者总量合计占三七总皂苷 重量的50%以上。
7.根据权利要求1所述含川红酚黄素的有效部位组合物，其特征在于折合药材的重量 份数为红花90-110g、川芎180-200g、三七90_110g。
8.根据权利要求1所述含川红酚黄素的有效部位组合物，其特征在于可以与药用辅料 混合制成药剂学上的各种剂型。
9.根据权利要求8所述含川红酚黄素的有效部位组合物制成的制剂，其特征在于用于 瘀血阻滞所致的胸痹，症见胸闷、心前区刺痛；冠心病心绞痛见上述证候者的治疗。
全文摘要
本发明公开了一种川红酚黄素有效部位组合物及其制备方法，其中川红酚黄素与三七总皂苷的重量比为0.8-1.2∶1，川红酚黄素有效部位是通过川芎和红花复方提取直接得到，川芎总酚与红花黄色素的重量比为0.3-0.8∶10。
文档编号A61P9/10GK102091112SQ20091020037
公开日2011年6月15日 申请日期2009年12月11日 优先权日2009年12月11日
发明者冯育林, 张文芳, 杨世林, 王跃生, 范玫玫 申请人:苏州世林医药技术发展有限公司