专利名称：一种用于细胞生长的胶原支架及其制备方法
技术领域：
本发明涉及生物支架和生物支架的制备方法。特别地，本发明涉及一种含有大于 80%的具有可提供机械强度和弹性的编织结构的I型胶原纤维或纤维束的生物支架。
背景技术：
生物支架是暂时地或永久地替代器官或组织以帮助恢复正常功能的结构。生物支架提供了一种可在其上进行细胞增殖和分化，最终替代生物支架并恢复正常器官或组织功能的底物。生物支架具有许多所需特性，其具有a)有助于组织整合和血管形成的互联孔； b)适当地生物降解和生物再吸收以便新生组织最终替代生物支架；c)促进细胞吸附、增殖和分化的表面化学性质；d)适合的机械特性；e)不会诱导负面的生物反应；以及f)易于加工成多种形状和大小。为了探寻具有上述所列特性的生物支架，组织工程师从合成的和天然来源的材料中加工支架。例如，生物支架可以由合成聚合物例如聚乙醇酸，聚乳酸和它们的共聚物制成。制备生物支架的天然来源的材料包括蛋白和碳水化合物聚合物。生物支架不但可由多种材料加工，而且可制备成不同形式，例如膜，微珠，羊毛状物质，纤维和凝胶。然而，目前可获得的生物支架具有许多缺陷。合成聚合物支架不具有与细胞亲和的表面化学性质，因此细胞吸附欠佳。进一步地，合成聚合物支架在降解时产生酸性副产物，从而降低局部PH并破坏细胞微环境，影响正常细胞生长。目前可获得的由天然来源材料加工的生物支架也具有许多不利。由于存在来自于分离材料的宿主的残余的外源细胞，这些生物支架通常会引发免疫反应。进一步地，这些支架的孔大小和结构通常无法最优地促进细胞生长和组织血管形成。最后，现有生物支架缺乏经受常规使用生物支架例如关节修复的恶劣环境所需的足够的机械特性。因此，需要研发一种能更好地促进细胞生长并具有改进的机械特性的生物支架。
发明内容
本发明的发明人研发了一种制备新型生物支架的方法，所述生物支架含有具有改进特性包括与现有胶原生物支架相比的优越的机械强度的胶原纤维或纤维束。因此，第一方面本发明提供了一种含有大于80%的具有编织结构且最大拉力负载强度大于20N的I型胶原纤维或纤维束(fibers or bundles)的生物支架(bioscaffold)。在一些实施方式中，所述生物支架的最大拉力负载强度(maximum tensile load strength)大于40N。在其他一些实施方式中，最大拉力负载强度大于60N。在另一些实施方式中，最大拉力负载强度大于120N。还有其他一些实施方式中，最大拉力负载强度大于 140N。在一些实施方式中，所述生物支架具有大于IOOMPa的模数。在其他一些实施方式中，模数大于200MPa。在另一些实施方式中，模数大于300MPa。还有其他实施方式中，模数大于400MPa。在更多其他实施方式中，模数大于500MPa。在一些实施方式中，所述生物支架在最大负载下的延伸小于85%。在其他一些实施方式中，在最大负载下的延伸小于80%。在一些实施方式中，所述生物支架含有大于85%的I型胶原。在其他一些实施方式中，所述生物支架含有大于90%的I型胶原。在一些实施方式中，所述生物支架具有含有第一组和第二组胶原纤维或纤维束的编织结构，其中，所述第一组中的纤维或纤维束主要在第一方向上延伸而所述第二组中的纤维或纤维束主要在第二方向上延伸。在一些实施方式中，胶原纤维或纤维束组的所述第一方向和第二方向是基本相互垂直的。在其他一些实施方式中，所述第一组中的纤维或纤维束通常相互间隔第一距离，而所述第二组中的纤维或纤维束通常相互间隔第二距离，其中，所述第一和第二距离相互不同。在更多其他实施方式中，所述第一组的不同的纤维或纤维束从上穿过(overly)或从下穿过(underlie)或穿梭通过(weave through)所述第二组的纤维或纤维束。第二方面，本发明提供了含有大于80%的具有编织结构且在最大负载下的延伸小于85%的I型胶原纤维或纤维束的生物支架。第三方面，本发明提供了含有大于80%的具有编织结构且最大拉力负载强度大于 20N，模数大于IOOMPa且在最大负载下的延伸小于85%的I型胶原纤维或纤维束的生物支
^K O第四方面，本发明提供了制备生物支架的方法，所述方法包括以下步骤(a)从哺乳动物分离胶原纤维或纤维束；(b)在NaOH、乙醇、丙酮、HCl和抗坏血酸的混合物中温育所述纤维或纤维束；以及(c)将所述纤维或纤维束进行机械处理以产生编织结构。在一些实施方式中，所述生物支架的所述胶原纤维或纤维束是来自于致密结缔组织。本文所述生物支架的实施方式中所用的致密结缔组织期望可以从任何含有致密结缔组织的组织中分离。在一些实施方式中，所述组织是腱。在其他一些实施方式中所述组织是腱鞘(印itendon)。所述腱或腱鞘可以来自于动物任何解剖部位的任何腱，并可以是旋转肌腱，冈上肌腱，肩胛下肌(subcapularis)腱，胸大肌(pectroalis major)腱，腓骨肌腱， 跟腱，胫骨前肌腱，前交叉韧带，后交叉韧带，胭(hamstring)腱，外侧韧带，内侧韧带，髌骨腱，二头肌腱，和三头肌腱。在一些实施方式中，所述致密结缔组织可以从任何哺乳动物中分离，所述哺乳动物包括但不限于绵羊，牛，猪或人。在其他一些实施方式中，所述致密结缔组织可以从人身上分离。还有其他一些实施方式中，所述致密结缔组织是自体的。 本发明还提供了修复哺乳动物组织缺陷的方法，所述方法包括在所述组织缺陷的部位植入一种根据本发明实施方式的生物支架。因此，第五方面，本发明提供了修复哺乳动物组织缺陷的方法，所述方法包括在所述组织缺陷的部位植入一种生物支架，所述生物支架含有大于80%的具有编织结构且最大拉力负载强度大于20N，模数大于IOOMI^且在最大负载下的延伸小于85%的I型胶原纤维或纤维束。在一些实施方式中，所述哺乳动物是人。
图1 根据本发明实施方式的生物支架的共焦照片(X20)；图2 图1所示的生物支架的扫描电子显微镜(SEM)照片(X100)；图3 本发明的生物支架的扫描电子显微镜(SEM)照片(X1000)；图4 商购的生物支架(SIS/Lycol胶原膜)的共焦照片；图5 商购的生物支架("Bio-gide")的扫描电子显微镜(SEM)照片(X200)；图6 商购的生物支架(Lycol胶原膜)的扫描电子显微镜(SEM)照片(X1500)；图7 是显示根据本发明实施方式的生物支架和另一商购的胶原膜的负载延伸的对比曲线图；图8 是显示根据本发明的生物支架和商购的Bio-gide胶原膜支架的平均模数的对比柱状图；图9 是显示根据本发明的生物支架和商购的Bio-gide胶原膜支架的平均最大负载的对比柱状图；图10 是显示根据本发明的生物支架和商购的Bio-gide胶原膜支架在最大负载下平均延伸的对比柱状图；图11 是显示根据本发明的生物支架和商购的Bio-gide胶原膜支架在屈服时的平均负载的对比柱状图；和，图12 是显示根据本发明的生物支架和商购的Bio-gide胶原膜支架在屈服时的平均延伸的对比柱状图。图13 是对比来自用苏木精和曙红染色的乳腺的疏松结缔组织(LCT)和致密结缔组织(DCT)的光学显微图(来自 Kastelic et al. "The Multicomposite structure of Tendon (腱的多复合结构)” Connective Tissue Research (结缔组织研究)，1978，卷 6， 11-23页)。也显示上皮组织(EP)。图 14:是腱的示意图(改编自 Kastelic et al."The Multicomposite structure of Tendon (腱的多复合结构)” Connective Tissue Research (结缔组织研究)，1978，卷 6，11-23 页)。
具体实施例方式在具体描述本发明实施方式之前，应该理解的是本发明不限于具体示例的方法， 并且当然是可以变化的。还应理解的是本文所用的术语仅是为了描述本发明具体的实施方式的目的，而不是旨在限制仅由所附权利要求所限制的范围。本文在上下文中引用的所有文献，专利和专利申请通过参考被全文引入本文。但是，本文所提及的文献是为描述和公开文献中报导的可与本发明结合使用的方案和试剂的目的而引用。本文的任何内容都不能解释为承认由于在前的发明而本发明不能比上述公开先获得授权。除非另有说明，本发明的操作将采用本领域技术人员熟知的细胞培养，细胞生物学和组织工程学的常规技术。这些技术在文献中有所描述。参见，例如Coligan et al., 1999 "Current protocols in Protein Science (蛋白质科学实验室操作指南)”卷I禾口 !!(John Wiley & Sons Inc. ) ；Ross et al. , 1995"Histology =Text and Atlas(组织学文本和图册)”，第三版，(Williams & Wilkins) ；Kruse & Patterson(eds.) 1977 "Tissue Culture (组织培养广，Academic Press (学术出版社)；和 Alberts et al. 2000"Molecular Biology of the Cell (细胞分子生物学)”(Garland Science)。必需注意到，除非上下文另外明确指出，本文和所附权利要求中使用的单数形式的“一个” “一种”和“该”包括复数形式。因此，例如提及“一个细胞”包括多个这种细胞， 提及“一种试剂”是指一种或多种试剂，等等。除非另外指明，本文所用的所有技术和科学术语具有如本发明所属技术领域普通技术人员通常理解的相同含义。尽管与本文所述类似或等效的任何材料和方法都可用于操作或检验本发明，现在描述优选的材料和方法。在一些实施方式中，本发明直接指向含有胶原纤维或纤维束的生物支架。胶原纤维束是由胶原纤维组成的。胶原纤维是由相互缠绕形成右手三螺旋的三条多肽链组成的。每条胶原多肽链被指定为α链并富含甘氨酸，脯氨酸和羟脯氨酸。存在对应不同类型胶原的许多不同的α链和这些α链的不同组合。在一些实施方式中，本发明的所述生物支架含有I型胶原。I型胶原是由两条α 1链和一条α 2链组成的。在一些实施方式中，胶原纤维或纤维束是由从来源中分离的致密结缔组织提供的。本文所用的术语“致密结缔组织”是指主要含有在所有哺乳动物的腱，韧带和真皮中发现的I型胶原纤维或纤维束的基质。如图13所示，致密结缔组织不同于“疏松结缔组织”。 疏松结缔组织特征在于疏松排列的纤维和丰富的细胞且存在于，例如，覆盖身体表面和排列内部器官的上皮以下。致密结缔组织可以是规则或不规则的。规则致密结缔组织在不同组织之间提供牢固的连接，在腱和韧带中发现。在规则致密结缔组织中的胶原纤维平行成束状。不规则致密结缔组织具有不像规则致密结缔组织中平行束状排列的纤维并含有很大比例的皮肤皮层。 本发明的所述生物支架可由规则致密结缔组织或不规则致密结缔组织，或它们的组合所组成。本文所用术语“来源”是指含有任何哺乳动物致密结缔组织的任何组织。在一些实施方式中，含有致密结缔组织的组织是腱。腱是连接哺乳动物肌肉和骨骼的组织。在其他一些实施方式中，所述组织是腱鞘。腱鞘是围绕腱物质的薄结缔组织被膜，如图14所示。腱可来自于哺乳动物的任何解剖部位，并可以是旋转肌腱、网上肌腱、肩胛下肌腱、胸大肌腱、腓骨肌腱、跟腱、胫骨前肌腱、前交叉韧带、后交叉韧带、胭腱、外侧韧带、内侧韧带、髌骨腱、二头肌腱和三头肌腱。所述腱鞘也可以从以上任何腱中分离。腱可通过本领域技术人员已知的多种方式从来源中分离。在一些实施方式中，腱切片可通过采用常规方法的活组织检查进行分离。在一些实施方式中，含有致密结缔组织的组织可从任何哺乳动物中分离，包括但不限于羊、牛、猪或人。在其他一些实施方式中，含有致密结缔组织的组织是从人身上分离的。在一些实施方式中，含有致密结缔组织的组织是“自体的”，即从需要治疗的受试者身体中分离的。例如，旋转肌撕裂的哺乳动物受试者可对它们身体中的任何腱进行活组织检查。这些腱包括但不限于桡侧腕屈肌腱和跟骨腱。在一些实施方式中，本发明提供了含有大于80%的I型胶原的生物支架。在其他一些实施方式中，所述生物支架含有至少85%的I型胶原。还有其他一些实施方式中所述生物支架含有大于90%的I型胶原。所述生物支架的胶原纤维或纤维束形成编织结构。本文所用术语“编织结构”是指含有第一组和第二组纤维或纤维束的结构，其中所述第一组的纤维或纤维束主要在第一方向上延伸，而所述第二组的纤维或纤维束主要在第二方向上延伸，所述第一和第二方向相互是不相同的且所述第一组的纤维或纤维束与第二组的纤维或纤维束交错或以其他方式与其编织在一起。方向的不同可以是大约90°。图1-3描述了在渐增的分别放大20、100和1000倍数下所述生物支架的一种实施方式的物理结构。如这些图明显显示的，所述生物支架的实施方式特征在于纤维或纤维束的编织结构。这种编织结构适用于胶原纤维或纤维束和弹性蛋白纤维。所述编织结构含有在第一方向Dl上延伸的第一组纤维或纤维束和在第二方向D2上延伸的第二组纤维或纤维束，D2不同于D1，并事实上在该实施方式中两者大约成90°。每组的纤维或纤维束相互交织形成促进所述生物支架内细胞生长的多孔结构。图3描述了胶原纤维或纤维束10和弹性蛋白纤维12。胶原纤维或纤维束10是通过增加厚度和扭曲结构由弹性蛋白纤维12分化而成。图3进一步明示，所述生物支架的本实施方式是由大量胶原纤维或纤维束10组成的。特别地，所述胶原纤维或纤维束10由数量在大约80-90%的I型胶原纤维或纤维束以及数量在10-20%之间的弹性蛋白纤维12提供。所述生物支架的纤维含量的剩余部分由其他类型的胶原纤维或纤维束包括III型，IV型，V型和X型提供。据信本生物支架实施方式的所述编织结构提供了比目前已知的生物支架优越的机械特性。通过考虑图4-6所描述的目前可获得的生物支架举例说明了结构的不同。图4是商购SIS/Lycol胶原膜的共焦图。它清楚地描述了胶原纤维束和纤维的随机排列。图5提供了商购的bio-gide胶原膜放大200倍的扫描电子显微镜图。胶原和弹性蛋白纤维的随机排列是明显清楚的且很容易与图3所示的编织结构区分开。图6是商购的Lycol胶原膜放大1500倍的扫描电子显微镜图。它清楚地描述了胶原纤维在胶原“凝胶”基质中的随机分布。据信本发明实施方式中的所述编织结构提供了与目前可获得的支架相比增大的最大拉力负载强度。本文所用术语“最大拉力负载强度”是指所述生物支架可承受的最大拉力负载。在负载-延伸曲线上，它表现为曲线峰值负载。在一些实施方式中，所述生物支架具有大于20N的最大拉力负载强度。在一些实施方式中，本发明的所述生物支架具有大于25N，40N, 60N, 80N, 100N, 120N或140N的最大拉力负载强度。进一步地，据信所述生物支架实施方式的所述编织结构提供了在所述生物支架最大负载下延伸的降低同时提供了模数的增加。本文所用术语“模数”表示杨氏模数，其确定为压力和张力之间的比例。它提供了所述生物支架的刚度的量度。在一些实施方式中，所述生物支架具有大于IOOMPa的模数。在其他一些实施方式中，所述生物支架具有大于200MPa，300MPa，400MPa，或500MPa的模数。本文所用术语“最大负载下的延伸”表示在最大拉力负载强度下所述生物支架相对于在无负载状态下所述生物支架的原始长度的延伸。它与更大的最大延伸形成对比。在一些实施方式中，所述生物支架在最大负载下的延伸小于原始长度的85%。图7描述了根据本发明实施方式的生物支架如曲线A所示和现有的bio-gide胶原膜支架如曲线B所示的负载-延伸曲线的对比。两种支架的初始长度经检测都为10mm。 因此，在这个特定检测中，所述延伸也是以毫米表示的，以毫米表示的延伸符合延伸百分比的增加。例如，6mm的延伸表示静止的无负载支架60%的延伸。应注意曲线A具有近似在包括趾区，线性区和屈服失效区中的腱或韧带的负载-延伸曲线的向上凹的形状。在腱或韧带中，所述趾区特征在于通过延长去除褶皱。所述线性区特征在于被压迫胶原的分子交联。这个区域是所述腱或韧带表明的刚度。所述屈服和失效区特征在于交联的起动或导致最终失效的纤维损坏。图7曲线A的点Pl显示了所述生物支架实施方式检测的140. 63N的最大拉力负载强度。在该最大负载下所述生物支架的延伸是7. 67mm。当所检测的生物支架的初始静止长度是10mm，这表示了 76. 7%的延伸。相反地，曲线B所示现有技术支架的最大拉力负载强度P2大约是19N并提供了大约10. 9mm的长度延伸，相当于100. 9%的延伸。图7所示曲线A的点P3表示所述生物支架的本检测实施方式的屈服点。所述屈服点是所述生物支架开始失效的点。在所述屈服点之外，在释放拉力负载后，所述支架不能恢复至其原始长度。它保持了塑性变形。所述生物支架的检测的实施方式的屈服点是在大约114N的拉力负载下且提供了大约6. 25mm的延伸表示长度增加62. 5%。曲线B所示的现有支架，所述屈服点难以辨别但可通过在负载大约19. 4N下给出大约9mm或90%延伸的曲线B上的点P4估计。为了使腱的机械力传送效率最大化，希望肌腱在生理条件下经历低延伸。因此认为用于肌腱和韧带修复的生物支架在最大延伸下具有最小延伸是有益的。通过评估所述生物支架的所述模数也可以测量这个性质。因为模数是刚度的量度，希望具有相对高的模数。图8图示了六个样品的平均模数根据本发明的所述生物支架的实施方式，如柱A 所示，和现有技术Bio-gide胶原膜，如柱B所示。图9图示了本生物支架的实施方式(如柱A所示)和现有支架(如柱B所示)的平均最大负载(即平均最大拉力负载强度)的对比。柱A的上水平线相当于图7所示曲线 A上的点Pl。图9中的柱B的上水平线代表图7中曲线B上的点P2。图10图示了本生物支架的实施方式(如柱A所示)和现有支架(如柱B所示) 的在最大负载下的平均延伸。图10中柱A的上水平线相当于图7所示曲线A上点Pl的延伸。相同地，图10中柱B上的水平柱P2相当于图7中曲线B上点P2的延伸。图11描述了本生物支架的实施方式如柱A所示，和现有技术如柱B所示的平均屈服点(即屈服时的拉力负载)。图11中柱A的上水平线P3相当于图7中曲线A上点P3的负载。相同地，图11中柱B的上水平柱P4相当于图7上曲线B中所示的点P4的负载。图12描述了以柱A表示的本生物支架的实施方式和以柱B表示的现有支架在屈服时的平均延伸。图12中柱A的上水平线P3相当于图7中曲线A上点P3的延伸，同时图 12中柱B的上水平柱相当于图7中曲线B上点P4的延伸。
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自然地，本发明的方面还包括以上具体描述的所述支架的制备方法。如前所述，所述生物支架是由致密结缔组织组成。因此，制备所述支架的第一步包括从哺乳动物分离胶原纤维或纤维束。胶原纤维或纤维束的来源是本领域技术人员公知的，在前也有描述。胶原纤维或纤维束一旦分离则在冷热循环和真空条件下的NaOH、乙醇、丙酮、HCl 和抗坏血酸溶液中温育。然后对纤维或纤维束进行机械处理以便弄平所述支架的表面并产生上述的编织结构。本发明的所述生物支架可以用于修复哺乳动物中的组织缺陷。需要修复的组织期望可以是哺乳动物中发现的任何组织，包括但不限于上皮，结缔组织或肌肉。本文所用的术语“修复”或其语法同义词覆盖了哺乳动物中，优选人的组织缺陷的修复。“修复”是指在组织缺陷部位形成足以至少部分填充空位或结构断位的新组织。但是修复并不表示或并不必然表示完全治愈或治疗的过程，即100%有效地使组织缺陷恢复至缺陷前的生理/结构/机械状态。术语“组织缺陷”或“组织缺陷部位”是指上皮，结缔或肌肉组织的破坏。组织缺陷导致组织在欠佳水平下工作或处于欠佳状态。例如，组织缺陷可以是腱中部分厚度或全部厚度的撕裂或由于心肌梗塞造成的局部细胞死亡。组织缺陷可假定为“空位”的结构，其应理解为表示三维缺陷例如缺口，腔，洞或在上皮，结缔或肌肉组织的结构完整性中的其它实质破坏。在特定实施方式中，所述组织缺陷是指不能够内源或自发修复的那些。组织缺陷可以是意外，疾病，和/或手术操作的结果。例如，软骨缺陷可以是关节创伤例如撕裂的半月板组织位移至关节的结果。组织缺陷还可以是变性疾病例如关节炎的结果。通常地，本发明所述生物支架可通过本领域技术人员已知的任何常规方式植入组织缺陷部位并在合适的位置是安全的，例如缝合，缝合锚，骨骼固定装置和骨骼或可生物降解的聚合物螺丝。
权利要求
1.一种生物支架，所述生物支架含有大于80%的具有编织结构且最大拉力负载强度大于20N的I型胶原纤维或纤维束。
2.如权利要求1所述的生物支架，其中，所述最大拉力负载强度大于40N。
3.如权利要求1所述的生物支架，其中，所述最大拉力负载强度大于60N。
4.如权利要求1所述的生物支架，其中，所述最大拉力负载强度大于80N。
5.如权利要求1所述的生物支架，其中，所述最大拉力负载强度大于100N。
6.如权利要求1所述的生物支架，其中，所述最大拉力负载强度大于120N。
7.如权利要求1所述的生物支架，其中，所述最大拉力负载强度大于140N。
8.如权利要求1-7中任意一项所述的生物支架，其中，所述生物支架具有大于IOOMPa 的模数。
9.如权利要求1-7中任意一项所述的生物支架，其中，所述生物支架具有大于200MPa 的模数。
10.如权利要求1-7中任意一项所述的生物支架，其中，所述生物支架具有大于300MPa 的模数。
11.如权利要求1-7中任意一项所述的生物支架，其中，所述生物支架具有大于400MPa 的模数。
12.如权利要求1-7中任意一项所述的生物支架，其中，所述生物支架具有大于500MPa 的模数。
13.如权利要求1-12中任意一项所述的生物支架，其中，所述生物支架在最大负载下具有小于85%的延伸。
14.如权利要求1-12中任意一项所述的生物支架，其中，所述生物支架在最大负载下具有小于80%的延伸。
15.如权利要求1-14中任意一项所述的生物支架，其中，所述生物支架含有大于85% 的I型胶原。
16.如权利要求1-14中任意一项所述的生物支架，其中，所述生物支架含有大于90% 的I型胶原。
17.—种生物支架，所述生物支架含有大于80%的具有编织结构且最大拉力负载强度大于20N，模数大于IOOMPa且在最大负载下延伸小于85%的I型胶原纤维或纤维束。
18.—种生物支架，所述生物支架含有大于80%的具有编织结构且在最大负载下延伸小于85%的I型胶原纤维或纤维束。
19.一种生物支架，所述生物支架含有大于80%的具有编织结构且在最大负载下延伸小于80%的I型胶原纤维或纤维束。
20.如权利要求1-19中任意一项所述的生物支架，其中，所述编织结构含有第一组和第二组胶原纤维或纤维束，其中，所述第一组中的纤维或纤维束主要在第一方向上延伸，而所述第二组中的纤维或纤维束主要在第二方向上延伸。
21.如权利要求20所述的生物支架，其中，所述第一方向和第二方向基本上是相互垂直的。
22.如权利要求20或21所述的生物支架，其中，所述第一组中的纤维或纤维束通常相互间隔第一距离，而所述第二组中的纤维或纤维束通常相互间隔第二距离，其中，所述第一距离和第二距离相互不同。
23.如权利要求20-22中任意一项所述的生物支架，其中，所述第一组中的不同的纤维或纤维束从上穿过或从下穿过或穿梭通过所述第二组中的纤维或纤维束。
24.一种生物支架的制备方法，所述方法包括以下步骤(a)从哺乳动物分离胶原纤维或纤维束；(b)在NaOH、乙醇、丙酮、HCl和抗坏血酸的混合物中温育所述纤维或纤维束；以及(c)将所述纤维或纤维束进行机械处理以产生编织结构。
25.如权利要求M所述的方法，其中，所述胶原纤维或纤维束由致密结缔组织提供。
26.如权利要求25所述的方法，其中，所述致密结缔组织是从羊、母牛、猪或人身上分离的。
27.如权利要求25所述的方法，其中，所述致密结缔组织是从人身上分离的。
28.如权利要求25-27中任意一项所述的方法，其中，所述致密结缔组织是自体的。
29.如权利要求25-28中任意一项所述的方法，其中，所述致密结缔组织是从腱分离的。
30.如权利要求25-28中任意一项所述的方法，其中，所述致密结缔组织是从腱的腱鞘分离的。
31.如权利要求四或30所述的方法，其中，所述腱选自由旋转肌腱、R上肌腱、肩胛下肌腱、胸大肌腱、腓骨肌腱、跟腱、胫骨前肌腱、前交叉韧带、后交叉韧带、胭腱、外侧韧带、内侧韧带、髌骨腱、二头肌腱和三头肌腱组成的组。
32.一种修复哺乳动物组织缺陷的方法，所述方法包括将权利要求1-31中任意一项所述的生物支架植入所述组织缺陷的部位。
33.一种修复哺乳动物组织缺陷的方法，所述方法包括将含有大于80%的具有编织结构且最大拉力负载强度大于20N，模数大于IOOMI5a且在最大负载下延伸小于85%的I型胶原纤维或纤维束的生物支架植入所述组织缺陷的部位。
34.如权利要求32或33所述的方法，其中，所述哺乳动物是人。
全文摘要
本发明描述了一种生物支架及其制备方法。所述生物支架含有大于80％的具有能提供拉力负载强度的编织结构的I型胶原纤维或纤维束。所述制备方法包括以下步骤(a)分离胶原纤维或纤维束；(b)在NaOH、乙醇、丙酮、HCl和抗坏血酸的混合物中温育所述纤维或纤维束；以及(c)将所述纤维或纤维束进行机械处理以产生编织结构。
文档编号A61F2/08GK102159256SQ200980128993
公开日2011年8月17日 申请日期2009年7月24日 优先权日2008年7月24日
发明者郑铭豪 申请人:西澳大利亚大学