专利名称：治疗肿瘤的棉酚静脉注射脂肪乳剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种抗肿瘤药物组合物，特别涉及一种含棉酚的静脉注射制剂。
背景技术：
棉酚(gossypol)，又称为棉籽醇，是一种黄色的酚类化合物，天然存在于锦葵科棉 属植物棉花的种子、叶、茎及根部等器官中的。常温下，棉酚呈黄色结晶，易溶于乙醇、乙醚、 丙酮、三氯甲烷等有机溶剂，亦溶于油脂，但不溶于水、己烷及低沸点的石油醚，其中大部分 有机溶剂对人体毒性较大，不适于作为药物载体。棉酚作为男性节育药已为人们所熟知。近年来，其抗肿瘤作用日益也受到重视，其 对肿瘤细胞的具有广泛的杀伤作用如子宫肌瘤、前列腺癌、结肠癌、肺癌、肝癌、喉癌、头颈 部肿瘤、胶质瘤等。棉酚作为一种广谱抗肿瘤药物，具有来源丰富、成本低等优势，并可与化学治疗、 放射治疗等发挥协同治疗作用。我国是产棉大国，棉酚来源丰富，加强棉酚肿瘤制剂的研发 将具有良好的经济和社会效益。目前上市的棉酚制剂只有醋酸棉酚口服制剂，作口服男用避孕药或用于治疗妇科 疾病，包括月经过多或失调、子宫内膜异位症等。但由于棉酚及醋酸棉酚不溶于水，其口服 制剂生物利用度低，对胃肠道刺激性食欲减退、恶心、呕吐等胃肠道反应，并出现“峰谷”现象。中国专利200510022777. 9 (申请人沈阳药科大学，公开号CN1827117，
公开日
2006年09月06日，授权公告日期2009年12月16日)公开了一种醋酸棉酚缓释片剂将 醋酸棉酚加入缓释材料形成缓释制剂避免出现“峰谷”现象，用于解决“峰谷”现象。但缓释 制剂在加入众多缓释辅料后其载药量受限且仍无法避免其对胃肠道的刺激作用。而醋酸棉 酚用于治疗肿瘤的剂量相对较高，美国专利US5385936(申请日期1990年7月12日，公开 日1995年1月31日)公开的醋酸棉酚用于肿瘤的治疗方法表明，醋酸棉酚用于治疗肿瘤 的人用剂量为40-100mg/天。其一期临床试验中对部分肿瘤剂量达到70mg/天仍无效果。 可见醋酸棉酚单位剂量至少为40-60mg，才能减少患者给药次数并获得较好的疗效。并且上 述制剂无法实现靶向性给药。脂肪乳剂是一种可以显著提高药物溶解度的药物剂型，对改善水难溶性药物的载 药量及药剂学特征具有很大帮助，目前国内已研究了几种药物的脂肪乳剂。但是由于不同 药物如要获得稳定的脂肪乳剂，对辅料即药物载体的种类及用量的要求存在较大差异，需 要对组方进行大量筛选实验才能获得最佳的药物载体及配比。目前，现有技术中并没有关 于棉酚的脂肪乳剂的报道。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种用于治疗肿瘤的棉酚静脉注射制剂，具体 地说是一种棉酚静脉注射脂肪乳剂。
本发明是通过以下技术方案实现的一种治疗肿瘤的棉酚静脉注射脂肪乳剂，每IOOOml由以下组分组成棉酚的药用 盐40 80g，油酸乙酯或中链脂肪酸甘油三酸酯200 300g (作为油相)，大豆卵磷脂30 50g (作为表面活性剂)，无水乙醇或PEG400 10 40g (作为助表面活性剂)，余量为水。所述棉酚静脉注射脂肪乳剂乳滴平均粒径为70 150nm。
所述棉酚的药用盐为醋酸棉酚或甲酸棉酚。所述中链脂肪酸是指C8 ClO的脂肪酸。本发明的棉酚静脉注射脂肪乳剂可以通过以下方式制备(1)将棉酚的药用盐溶于乙醚后与油相及表面活性剂和助表面活性剂加热下搅拌 混勻，减压蒸发去掉乙醚作为油相药液，恒温加热备用；(2)将适量灭菌注射用水加热至60 70°C，作为水相液；(3)在恒温下将油相药液缓慢滴入水相液，边加入边搅拌，至形成透明均一的溶 液，用灭菌注射用水定容，然后用均质机反复勻化，即得。另外，制备时，也可将部分助表面活性剂与灭菌注射用水混合后作为水相液；还可 将棉酚的药用盐直接与油相及表面活性剂和助表面活性剂混合均勻作为油相，而不使用乙醚。本发明的棉酚脂肪乳剂经研究表明，其药物载体按照所述用量使用时对棉酚的载 药量显著高于口服制剂及普通注射制剂，每毫升棉酚静脉注射制剂对棉酚的药用盐的载药 量最大可达到90毫克，且稳定均一，不易出现药物结晶析出或分层。本发明的棉酚静脉注 射制剂与口服制剂相比生物利用度显著提高，乳滴平均粒径为70 150nm时稳定性最佳， 具有缓释效果，且对肿瘤组织有显著的靶向性，可避免药物对胃肠道的刺激。本制剂制备工 艺简单，利于工业化生产。综上，本发明具备突出的实质性特点和显著的进步。
图1为醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂大鼠单次尾静脉注射后的药时曲线；图2为醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂荷瘤小鼠单次尾静脉注射后的组织含量。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明实施例1醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂的配制组方醋酸棉酚 40g油酸乙酯 207g大豆卵磷脂35g无水乙醇 18g_无菌注射用水至IOOOml制备将处方量醋酸棉酚溶于乙醚，然后在60°C恒温水浴下加入油酸乙酯、大豆卵磷脂、无水乙醇，边加入边搅拌，搅拌速度为1600rpm，搅拌2小时，减压蒸发去掉乙醚，作为油相药液，60°C恒温水浴保存备用；将适量灭菌注射用水，60°C恒温水浴保存作为水相液；在60°C恒温下将油相液缓慢滴入水相液，边加入边搅拌，搅拌速度为2200rpm，搅 拌1小时至形成透明均一的溶液，用灭菌注射用水定容至1000ml，然后用均质机(NS10012k 高压均质机，意大利Niro Soavi S. p. Α.公司)60Mpa下反复勻化5次，0. 45 μ m微孔滤膜过 滤。分装成1000份，灭菌保存。所得样品，乳滴平均粒径为104nm，包封率为87.2%。实施例2醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂的配制组方醋酸棉酚60g油酸乙酯220g大豆卵磷脂43gPEG400 35g_无菌注射用水至IOOOml制备将处方量醋酸棉酚溶于乙醚，然后在70°C恒温水浴下加入油酸乙酯、大豆卵磷脂、 PEG400,边加入边搅拌，搅拌速度为1700rpm，搅拌1. 5小时，减压蒸发去掉乙醚，作为油相 液，70°C恒温水浴保存备用；将适量灭菌注射用水70°C恒温水浴保存作为水相液；在70°C恒温下将油相液缓慢滴入水相液，边加入边搅拌，搅拌速度为2000rpm，搅 拌1小时至形成透明均一的溶液，用灭菌注射用水定容至1000ml，然后用均质机(NS10012k 高压均质机，意大利Niro Soavi S. p. Α.公司)60Mpa下反复勻化6次，0. 45 μ m微孔滤膜过 滤。分装成1000份，灭菌保存。所得样品，乳滴平均粒径为142nm，包封率为93. 6 %。实施例3醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂的配制组方醋酸棉酚80g中链脂肪酸(C8-C10)甘油三酸酯297g大豆卵磷脂36gPEG400 29g_无菌注射用水至IOOOml制备将处方量醋酸棉酚溶于乙醚，然后在70°C恒温水浴下加入中链脂肪酸(C8-C10) 甘油三酸酯、大豆卵磷脂、PEG400，边加入边搅拌，搅拌速度为ISOOrpm，搅拌2小时，减压蒸 发去掉乙醚，作为油相液，70°C恒温水浴保存备用；将适量灭菌注射用水70°C恒温水浴保存作为水相液；
在70°C恒温下将油相液缓慢滴入水相液，边加入边搅拌，搅拌速度为2400rpm，搅 拌1小时至形成透明均一的溶液，用灭菌注射用水定容至1000ml，然后用均质机(NS10012k 高压均质机，意大利Niro Soavi S. p. Α.公司)40Mpa下反复勻化6次，0.45 μ m微孔滤膜过 滤。分装成1000份，灭菌保存。所得样品，乳滴平均粒径为93nm，包封率为97. 4%。实施例4醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂的配制组方醋酸棉酚50g中链脂肪酸(C8-C10)甘油三酸酯242g大豆卵磷脂47g无水乙醇24g_无菌注射用水至IOOOml制备70°C恒温水浴下将处方量醋酸棉酚与中链脂肪酸(C8-C10)甘油三酸酯、大豆卵 磷脂、无水乙醇(15g)混合，边加入边搅拌，搅拌速度为ISOOrpm，搅拌1小时，作为油相液， 70°C恒温水浴保存备用；将适量灭菌注射用水，加入剩余量无水乙醇，70°C恒温水浴保存作为水相液；在70°C恒温下将油相液缓慢滴入水相液，边加入边搅拌，搅拌速度为2000rpm，搅 拌1小时至形成透明均一的溶液，用灭菌注射用水定容至1000ml，然后用均质机(NS10012k 高压均质机，意大利Niro Soavi S. p. Α.公司)50Mpa下反复勻化6次，0. 45 μ m微孔滤膜过 滤。分装成1000份，灭菌保存。所得样品，乳滴平均粒径为129nm，包封率为80. 1 %。实施例5甲酸棉酚静脉注射脂肪乳剂的配制组方甲酸棉酚6Og中链脂肪酸(C8-C10)甘油三酸酯263g大豆卵磷脂35g无水乙醇20g_无菌注射用水至IOOOml制备70°C恒温水浴下将处方量甲酸棉酚与中链脂肪酸(C8-C10)甘油三酸酯、大豆卵 磷脂、无水乙醇混合，边加入边搅拌，搅拌速度为1600rpm，搅拌2小时，作为油相液，70°C恒 温水浴保存备用；将适量灭菌注射用水，70°C恒温水浴保存作为水相液；在70°C恒温下将油相液缓慢滴入水相液，边加入边搅拌，搅拌速度为2400rpm，搅 拌1小时至形成透明均一的溶液，用灭菌注射用水定容至1000ml，然后用均质机(NS10012k 高压均质机，意大利Niro Soavi S. p. Α.公司)40Mpa下反复勻化5次，0. 45 μ m微孔滤膜过滤。分装成1000份，灭菌保存。所得样品，乳滴平均粒径为87nm，包封率为79. 4%。实施例6醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂在大鼠体内的药代动力学实验Wister大鼠12只，180_240g，雌雄各半实验前禁食一夜，随机分为2组，每组6只，实验组单次尾静脉注射给予实施例1所制静脉注射脂肪乳剂(以醋酸棉酚40mg/kg体重给 药)，对照组将醋酸棉酚混悬与0. 25%的羧甲基纤维素制成混悬液经口灌胃给药(以醋酸 棉酚40mg/kg体重给药)。给要后第0、30、60分钟及第2、8、16、24小时分别采血测定血浆中醋酸棉酚含量， 绘制药时曲线图，结果见图1。从药时曲线图可见，静脉注射脂肪乳剂具有显著的缓释特点， 且生物利用度显著高于口服给药。实施例7醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂在荷瘤小鼠体内的组织分布实验荷Lewis肺癌C-57模型小鼠由陕西中医研究院实验动物中心购得，C-57小鼠由第 四军医大学实验动物中心提供，4-6周龄，体重15-25g，共60只，雄性。将模型的肿瘤剪下， 研磨制成细胞勻浆，接种于C-57实验小鼠右前肢根部腹侧皮下，每只接种2. OX IO7个肿瘤 细胞，总体积0.20ml。2周后肿块长大，用于实验。将荷瘤小鼠随机分为2组，每组30只，实验组单次尾静脉注射给予实施例2所制 静脉注射脂肪乳剂(以醋酸棉酚40mg/kg体重给药)，对照组将醋酸棉酚混悬于0. 25%的 羧甲基纤维素制成混悬液经口灌胃给药(以醋酸棉酚40mg/kg体重给药)。给药后1、2、8、 12、16、24小时每组各处死5只小鼠，取出肿瘤组织及心、肝、脾、肺、肾、脑测定其组织含量。 根据组织中药物的浓度及组织重量计算其相对含量，结果见图2。由组织分布图可见醋酸棉酚静脉注射剂给药后肿瘤组织中醋酸棉酚含量显著高 于经口给药制剂。醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂对肿瘤组织具有一定的靶向性。实施例8醋酸棉酚静脉注射脂肪乳剂的毒性实验SPF级KM小鼠100只，体重为30 40g，雌雄各半随机分为5组每组20，实验组 三组，分别尾静脉注射给予实施例1、3、4所制静脉注射剂(以醋酸棉酚80mg/kg体重给 药)，阳性对照组对照组将醋酸棉酚混悬于0. 25%的羧甲基纤维素制成混悬液经口灌胃给 药(以醋酸棉酚80mg/kg体重给药)，空白对照组尾静脉注射给予生理盐水，2ml/只，每日 给药1次，连续给药7天，给药期间及给药后1-7天每日进行进行大体观察、血液学、血生 化、尿生化检查，给药后第1、3、5、7天每天各组每天处死5只动物进行病理解剖，光学显微 镜下进行病理检查。大体观察发现阳性对照组给药后呕吐发生率为65%，实验组呕吐发生率为5% (实施例1所制静脉注射剂)、0% (实施例3所制静脉注射剂)、0% (实施例4所制静脉注 射剂)，各实验组与对照组二者相比均差异显著(P < 0. 05)。且实验组呕吐症状相对较轻。 实验组与阳性对照组低血钾症状发生率分别为35%实施例1所制静脉注射剂)、20% (实 施例3所制静脉注射剂)、40% (实施例4所制静脉注射剂)、80%，各实验组与对照组二者 相比均差异显著(ρ <0.05)。。病理解剖未见显著的组织损伤。空白对照组无异常症状。结果表明棉酚静脉注射脂肪乳剂静脉给药的不良反应发生率显著低于口服给药。 其较低的胃肠道刺激性与给药途径有关，而较低的低血钾发生率可能与药物的释放速度较 慢等有关。
实施例9棉酚静脉注射脂肪乳剂的稳定性实验对实施例1-5所得静脉注射脂肪乳剂进行稳定性实验。(1)强光照射试验将棉酚静脉注射脂肪乳剂在40001x光照下分别放置5天和10 天后进行观测，结果发现，与放置前相比，注射剂仍保持澄清透明，未见油水分层。(2)高湿度试验将棉酚静脉注射脂肪乳剂放在密闭器皿中分别于25%、75%及 92. 5%相对湿度条件下放置，5天和10天后考察稳定性。与放置前相比，静脉注射剂仍保持 澄清透明，未见油水分层。(3)高温试验将棉酚静脉注射脂肪乳剂放在密闭器皿中并分别置于40、60、80°C 条件下，5天和10天后考察稳定性。与放置前相比，仍保持澄清透明，未见油水分层。(4)加速试验将棉酚静脉注射脂肪乳剂4000rpm离心lOmin，仍保持澄清透明，未 见油水分层。(5)常温留样考察将棉酚静脉注射脂肪乳剂在温度25°C、相对湿度75%条件下 分别放置1、2、3、6、12、24月，仍保持澄清透明，未见油水分层及药物析出。
权利要求
一种治疗肿瘤的棉酚静脉注射脂肪乳剂，其特征在于所述棉酚静脉注射脂肪乳剂每1000ml由以下组分组成棉酚的药用盐40～80g，油酸乙酯或中链脂肪酸甘油三酸酯200～300g，大豆卵磷脂30～50g，无水乙醇或PEG400 10～40g，余量为水。
2.权利要求1所述的治疗肿瘤的棉酚静脉注射脂肪乳剂，其特征在于，所述棉酚的药 用盐为醋酸棉酚或甲酸棉酚。
全文摘要
本发明公开了一种治疗肿瘤的棉酚静脉注射脂肪乳剂，每1000ml由以下组分组成棉酚的药用盐40～80g，油酸乙酯或中链脂肪酸甘油三酸酯200～300g(作为油相)，大豆卵磷脂30～50g(作为表面活性剂)，无水乙醇或PEG400 10～40g(作为助表面活性剂)，余量为水。本发明的棉酚脂肪乳剂经研究表明，其药物载体按照所述用量使用时对棉酚的载药量显著高于口服制剂及普通注射制剂，且稳定均一，不易出现药物结晶析出或分层。与口服制剂相比生物利用度显著提高，乳滴平均粒径为70～150nm时稳定性最佳，具有缓释效果，且对肿瘤组织有显著的靶向性，可避免药物对胃肠道的刺激。
文档编号A61K47/24GK101810577SQ201010164008
公开日2010年8月25日 申请日期2010年5月6日 优先权日2010年5月6日
发明者厉保秋 申请人:山东大学