专利名称：二咖啡酰奎尼酸衍生物在制备用于治疗支原体感染疾病药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体涉及二咖啡酰奎尼酸衍生物在制备用于治疗支原体感染疾病药物中的用途。
背景技术：
支原体是一种不同于细菌和真菌的另一类微小病原体，与人类泌尿生殖道感染有 关的致病支原体有解脲支原体(UU)、人型支原体(MH)和生殖道支原体(MG)，相关疾病如支 原体尿道炎、宫颈炎、阴道炎、盆腔炎、附件炎、前列腺炎等。治疗常用药物有强力霉素、美满 霉素、阿奇霉素、克拉霉素、氧氟沙星等抗生素。抗生素治疗目前存在较多问题，一是四环素 类和大环类酯类抗生素胃肠道反应大，对肝功能有副作用影响，依从性差。二是由于抗生素 的滥用及不规范使用，造成支原体的耐药菌株日益增多，耐药周期不断缩短，严重危害人类 的生命与健康。因此，寻找敏感性高，副作用小，不易产生耐药性的新型抗支原体药物，对于 提高疗效，减轻患者痛苦，保护机体微生态平衡，有非常重要意义。中药是祖国医学宝库，许多中药制剂与抗生素药物比较，临床疗效好，毒副作用 小，在人类面临支原体耐药性和抗生素不良反应不断增加的严峻形势下，从具有临床基础 及独特理论体系的抗感染中药中寻找及发现抗支原体药物具有重要的科学意义。二咖啡酰奎尼酸在菊科、豆科、伞形科、忍冬科及旋花科植物中广泛存在，常见的 有1，5_ 二 -0-咖啡酰奎尼酸、3，5- 二 -0-咖啡酰奎尼酸、4，5- 二 -0-咖啡酰奎尼酸及3， 4- 二 -0-咖啡酰奎尼酸等。本发明人在中药药效物质基础研究过程中，出人意料地发现二 咖啡酰奎尼酸衍生物对支原体有显著的抑制作用。本发明基于上述发现得以完成。本发明的第一个目的涉及式1 (若存在对映体，包括两对映体)的二咖啡酰奎尼酸
衍生物及类似物在制备用于治疗支原体感染疾病药物中的用途，
<formula>formula see original document page 4</formula>式1其中q1 为一价键，或 ch2、ch0h, ch2ch2、ch2choh, chohch2、chc00h、ch2ch2choh, CHoHCH2CH2、CH2CHoHCH2、ch2chohchoh 或 chohchohch2 ；q2 和 q3 可分别为 h 或合在一起表示 ch2ch2、ch2choh, chohch2、ch2ch2choh, chohch2ch2、ch2chohch2、ch2ch0hch0h、ch0hch0hch2、ch2coh (cooh) ch2、ch2ch2coh (cooh) ch2、 ch2coh (cooh) ch2ch2、ch0hch2c0h (cooh) ch2 或 ch2coh (cooh) ch2choh,从而形成环状结构，
X1 为 0、NH、CH2 或 CHCOOH ；X2 为 0、NH、CH2 或 CHCOOH ；Y” Y2、Y3 和 Y4 各为一价键、0 或 NH;当Y” \、Y3 和 Y4 各为一价键时，R” R2> R3> R4 为 H、CH2COOH, CH2CH2COOH 或 CH2CH2CH2COOH ；当Y” \、Y3 和 Y4 各为 0 或 NH 时，R” R2, R3> R4 为 H、CH3> CH3CO, CH3CH2CO 或 CH3CH2CH2CO ；丫5、￥6、￥7、￥8、￥9、丫1(1为!1、(1、81~或1 ；Z1和Z2为H、C00H、C00M，其中M表示Cl_6烷基、苄基、碱金属或碱土金属。本发明的再一目的涉及含式1化合物的药物组合物，该药物组合物对支原体有显 著的抑制作用。根据本发明，该药物组合物可加有各种药用赋形剂、添加剂及载体。根据本发明，本发明式1化合物或含式1化合物的药物组合物可用于治疗支原体 感染，如支原体感染引起的生殖道疾病及泌尿道疾病。其中生殖道疾病是指解脲支原体、人 型支原体、生殖道支原体或混合感染引起的宫颈炎、阴道炎、盆腔炎及附件炎。支原体引起 的泌尿道疾病是指解脲支原体、人型支原体、生殖道支原体或混合感染引起尿道炎、前列腺 炎。根据本发明，本发明的药物组合物可与药学上可接受的载体组成药物组合物，制 成各种制剂，包括胶囊、片剂、颗粒剂、滴丸、口服液、栓剂、泡腾片、凝胶剂等肠道或非肠道 给药的制剂。根据本发明，本发明式1化合物，主要来自菊科、忍冬科等多种植物，如杏香兔耳
M Ainsliaea fr^gr已ns、H5# Lonicer已 j&ponic&、i€§# Inul已 japonic已·。
全合成或半合成方法制备。根据本发明，本发明优选的抗支原体化合物为二咖啡酰奎尼酸。根据本发明，本发明最优选的抗支原体化合物为3，5_ 二-0-咖啡酰奎尼酸、4， 5- 二 -0-咖啡酰奎尼酸、3，4- 二 -0-咖啡酰奎尼酸。根据本发明，二咖啡酰奎尼酸可从上述植物中通过以下提取、分离路线制备取植 物(杏香兔耳风、金银花等)，加70%乙醇回流提取，减压回收至无醇味，浓缩液采用乙酸乙 酯萃取，继续通过柱层析(硅胶、C18)分离，得到单体化合物。或取浓缩液上样于大孔吸附 树脂柱，乙醇_水梯度洗脱，收集60%乙醇洗脱液，减压回收至干，得到二咖啡酰奎尼酸有 效部位提取物。根据本发明，二咖啡酰奎尼酸可通过3，4_ 二羟基被保护的咖啡酰氯与羟基被选 择性保护的奎尼酸通过酯化反应制备。下面将通过二咖啡酰奎尼酸的体外及体内抗支原体作用来进一步阐述本发明。实验一二咖啡酰基奎尼酸的抗支原体体外活性研究1 材料1. 1测试药物:3，5_ 二 -0-咖啡酰奎尼酸(1)，4，5_ 二 _0_咖啡酰奎尼酸(2)3， 4- 二 -0-咖啡酰奎尼酸(3)，化合物1 3的分子式均为=C25H24O12，纯度> 95%，以上化合 物均为中国药科大学天然药物化学教研室提供；阳性药阿奇霉素(Bio Basic Inc, Lot GS1219B508C)，环丙沙星(Bio Basic Inc，Lot :0916S06)。
1. 2支原体株解脲支原体标准株(UU，Tl)由东南大学公共卫生学院流行病学实 验室提供；人型支原体标准株(MH，ATCC25114)购置于美国国家菌种保存中心；解脲支原体 (UU)临床株(12株)及人型支原体(UH)临床株(12株)均为东南大学中大医院妇科门诊 泌尿生殖道感染患者标本中分离获得。1.3培养基购于南京黎明生物制品有限公司，进口分装。2实验方法采用液体培养基稀释法。在96孔聚乙烯板上以UU或UH培养基倍比稀释待检药物和对照药物，各孔药液量 为180 μ 1。每孔接种浓度约为IO4CCU的UU或UH标准株或临床分离株培养物20 μ 1，加盖 密封。同时设立阴、阳性对照。接种后置36. 5°C培养箱孵育，24 48hr后观察结果。根 据培养基颜色变化判断结果培养基由黄色变为红色表明有支原体生长。24h内观察UU生 长变化，如加药孔出现与对照孔相同的颜色变化，表示所加药物的对应浓度对UU无抑制作 用，24h仍不出现颜色变化为有效抑制UU生长的药物浓度；24 48h内观察MH生长变化， 如加 药孔出现与对照孔相同的颜色变化，表示所加药物的对应浓度对MH无抑制作用，48h 仍不出现颜色变化为有效抑制MH生长的药物浓度。加药组以不出现颜色变化的最小浓度 为最小有效抑制支原体生长的药物浓度(MIC)。实验采用UU标准株、UU临床株、MH标准株 及MH临床株作参照。3 结果实验结果表明，3，5- 二 -0-咖啡酰奎尼酸(1) ,4,5- 二 _0_咖啡酰奎尼酸⑵、及 3,4- 二 -0-咖啡酰奎尼酸(3)对UU的MIC50分别0. 625,0. 625，及1. 25mg/ml,阳性药阿奇 霉素对UU的MIC5tl值为1. 25mg/ml。化合物1 3对UH的MIC5tl值分别为1. 25，1. 25，及 0. 625mg/ml,阳性药阿奇霉素对UU的MIC5tl值为1. 25mg/ml。受试药物的体外抗UU与MH作 用测定结果见表1。表1 二咖啡酰奎尼酸衍生物体外对UU及UH的抑制活性
支原体 药物MIC 范围(mg/ml)MIC\ (mg/ml)—
j^YJ^ -^ (I625"-3K250625
20.312-1.250.625
30.625 2.51.25阿奇霉素1.25 2.51.25 UH (12 株) 11.25 2.51.25
20.625 2.51.25
30.312-1.250.625 ___ 阿奇霉素_ 0.312-0.625 0.312体外抗支原体药效筛选显示，二咖啡酰奎尼酸衍生物1 3对解脲支原体(UU)及 人型支原体(UH)均有较好的抑制作用。以上化合物来源于中药，与临床运用的大环类酯 类、四环素类、喹诺酮类抗生素类化学结构差异较大，适用于治疗耐药支原体引起的生殖泌 尿道感染疾病。实验二二咖啡酰基奎尼酸的抗支原体体内活性研究1.实验动物与材料雌性BALB/C小鼠60只，8 10周，购于中国科学院动物研究所；解脲支原体标准 株(UU，T1)由东南大学公共卫生学院流行病学实验室提供。UU液体培养基，购自南京黎明 生物制品有限公司。阿奇霉素，0.25g/片，江苏扬子江制药有限公司。苯甲酸雌二醇注射液，lmg/ml，广州白云山明兴制药有限公司。3，5- 二 -O-咖啡酰奎尼酸，纯度>95%，中国 药科大学天然药物化学教研室提供。2.方法2. IUU培养及其CCU (Colour changing unit,颜色变化单位测定)按文献 (Robertson JA，1982 年)方法。2. 2菌液制备将UU菌株连续传代3次，取第3代对数生长期菌液( 106(XU/ml)，用 培养基稀释至2. OX 105(XU/ml，作为工作菌液。2. 3小鼠解脲支原体感染动物模型的制备BALB/C小鼠，6 8周，皮下注射苯甲酸雌二醇0. 125mg,浓度lmg/ml，连续4周， 每周1次；用药的第2周，阴道接种UU菌株50 μ 1，浓度2. 0X105(XU/ml。接种1周后，取 阴道分泌物，UU培养，结果显示48个培养基变为粉红色，显示造模成功率80% ；培养阴性 者，继续接种菌株，量同前，1周后UU培养，所有培养基均变为粉红色，显示造模成功。造模 结果第3周阳性个数49只，阳性率80% ；第4周阳性个数60只，阳性率100%。2. 4药物干预与标本采集将造模成功小鼠随机分为模型组、受试药物组、阳性阿奇霉素组，模型组给予生理 盐水，受试药物组灌胃给药3，5- 二 -0-咖啡酰奎尼酸(100mg/kg)，阳性组灌胃给药阿奇霉 素组(100mg/kg)，给药体积均为0.4ml，每日1次，连续干预2周。取阴道分泌物，UU培养。3 结果3，5- 二 -0-咖啡酰奎尼酸受试药物组18例转阴，2例阳性，转阴率90% ；阿奇霉素 组12例转阴，7例阳性，1例死亡，转阴率60%，死亡率5% ；模型组2例阴性，16例阳性，3 例死亡，转阴率10%，死亡率15%。3，5-二-0-咖啡酰奎尼酸、阿奇霉素组与模型组比较， P < 0. 01，有显著差异。3，5- 二 -0-咖啡酰奎尼酸与阿奇霉素组比较，P < 0. 05，有统计学 意义。体内药效结果显示，二咖啡酰奎尼酸对支原体生殖道感染具有较好的治疗作用。三、急性毒性试验小鼠急性毒性试验结果显示，口服给药3，5- 二 -0-咖啡酰奎尼酸的LD5tl值> 3g/
kg ο
权利要求
下式的二咖啡酰奎尼酸衍生物在制备用于治疗支原体感染疾病药物中的用途，式1其中Q1为一价键，或CH2、CHOH、CH2CH2、CH2CHOH、CHOHCH2、CHCOOH、CH2CH2CHOH、CHOHCH2CH2、CH2CHOHCH2、CH2CHOHCHOH或CHOHCHOHCH2；Q2和Q3可分别为H或合在一起表示CH2CH2、CH2CHOH、CHOHCH2、CH2CH2CHOH、CHOHCH2CH2、CH2CHOHCH2、CH2CHOHCHOH、CHOHCHOHCH2、CH2COH(COOH)CH2、CH2CH2COH(COOH)CH2、CH2COH(COOH)CH2CH2、CHOHCH2COH(COOH)CH2或CH2COH(COOH)CH2CHOH，从而形成环状结构，X1为O、NH、CH2或CHCOOH；X2为O、NH、CH2或CHCOOH；Y1、Y2、Y3和Y4各为一价键、O或NH；当Y1、Y2、Y3和Y4各为一价键时，R1、R2、R3、R4为H、CH2COOH、CH2CH2COOH或CH2CH2CH2COOH；当Y1、Y2、Y3和Y4各为O或NH时，R1、R2、R3、R4为H、CH3、CH3CO、CH3CH2CO或CH3CH2CH2CO；Y5、Y6、Y7、Y8、Y9、Y10为H、Cl、Br或I；Z1和Z2为H、COOH、COOM，其中M表示C1-6烷基、苄基、碱金属或碱土金属。FSA00000129515100011.tif
2.权利要求1的用途，当式1存在两对映体时，包括两对映体。
3.根据权利要求1的用途，其中二咖啡酰奎尼酸衍生物为3，5_二-0-咖啡酰奎尼 酸、4，5-二-0-咖啡酰奎尼酸、3，4-二-0-咖啡酰奎尼酸、1，5-二-0-咖啡酰奎尼酸、1， 3- 二 -0-咖啡酰奎尼酸、1，4- 二 -0-咖啡酰奎尼酸，它们的乙酰化衍生物及其相应的盐。式2 <formula>formula see original document page 2</formula>:3，5- 二 -0-咖啡酰奎尼酸式3 <formula>formula see original document page 2</formula>:4，5- 二 -0-咖啡酰奎尼酸式4 <formula>formula see original document page 2</formula>:3，4- 二 -0-咖啡酰奎尼酸式5 <formula>formula see original document page 2</formula>:1，5- 二 -0-咖啡酰奎尼酸<formula>formula see original document page 3</formula> 式6 1，3- 二 -0-咖啡酰奎尼酸式7 1，4- 二 -0-咖啡酰奎尼酸
4.根据权利要求1的用途，其中二咖啡酰奎尼酸衍生物为3，5-二 -0-咖啡酰奎尼酸、 4，5- 二 -0-咖啡酰奎尼酸、3，4- 二 -0-咖啡酰奎尼酸。
5.权利要求1的用途，其中支原体感染疾病是支原体引起的泌尿生殖道疾病，包括支 原体感染引起的宫颈炎、阴道炎、盆腔炎、附件炎、尿道炎、前列腺炎。
全文摘要
本发明涉及二咖啡酰奎尼酸衍生物在制备用于治疗支原体感染疾病药物中的用途。
文档编号A61P31/00GK101829077SQ20101018259
公开日2010年9月15日 申请日期2010年5月26日 优先权日2010年5月26日
发明者严明, 叶文才, 张陆勇, 江振洲, 汪豪, 赵守训 申请人:中国药科大学