专利名称：人尿激肽原酶在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物化学领域。具体而言，本发明涉及人尿激肽原酶的新医药用途，即 人尿激肽原酶在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用。
背景技术：
人尿激肽原酶(Human Urinary Kallidinogenase)，是从健康男性人尿中提取精 制的糖蛋白，分子量约54000道尔顿，具有激活人血浆激肽原转化为激肽，扩张血管增加血 流量，改善血液循环的作用，并且还有增加红细胞的变形性和抑制血小板聚集，延长再钙化 时间改善血液粘稠的作用。本申请人的在先专利申请“200610127956. 3人尿激肽原酶在制 备治疗糖尿病合并脑梗死药物中的应用”公开了它的一种医药用途，发现人尿激肽原酶对 合并有糖尿病的脑梗死患者有良好的治疗作用。本发明人经过认真研究和动物试验证明， 人尿激肽原酶对糖尿病肾病也有明显的治疗作用。糖尿病肾病(DN)是糖尿病的常见慢性并发症之一，由糖尿病微血管病变引起。本 病确切的发病机制尚未阐明，肾血流动力学紊乱可能是DN发生发展的直接原因，而肾血流 量减少，主要与一些血管活性物质如Ν0、ΕΤ等因子失衡有关。炎症是DN肾小球硬化和肾间 质纤维化病理机制的中心，并且可加快DN的进展。激肽原酶-激肽系统对血管功能具有多 方面的调节作用。有研究表明，糖尿病形成8周时，激肽原酶的活性无明显改变，而至18周 时，激肽原酶活性明显降低，仅为正常对照组的20 25%，严重影响它对血管的调节功能。人尿激肽原酶是在肾小球远曲小管和血管极的上皮细胞产生的一种内源性血管 活性物质，对调节肾血流动力学发挥重要作用，此外，人尿激肽原酶还具有一定的抗炎抗氧 化等肾脏保护作用。
发明内容
本发明的目的是提供人尿激肽原酶用于治疗糖尿病肾病的用途，即用于制备治疗 糖尿病肾病药物的用途。本发明的另一目的是提供一种用于治疗糖尿病肾病的含有人尿激 肽原酶的药物组合物。本发明的人尿激肽原酶对糖尿病肾病有明显的治疗作用，一般以药物组合物的形 式使用，这种组合物含有治疗有效量的作为活性成分的人尿激肽原酶和可药用辅料，其每 计量单位中含有15 25 μ g的人尿激肽原酶和10 50mg的可药用辅料，主要剂型包括冻 干粉针剂和注射液剂，通常以静脉注射途径给药。经静脉注射给药的人尿激肽原酶组合物，一般是固体的灭菌组合物形式，即冻干 粉针剂型，这些组合物含有的可药用辅料是甘露醇、右旋糖苷、水解明胶、柠檬酸钠、甘氨酸 等中的一种或多种。在使用时溶解于灭菌注射用水或其它注射用灭菌介质中。经静脉注射给药的人尿激肽原酶组合物也可以是水溶液形式，即注射液剂，这些 组合物含有的可药用辅料是甘露醇、氯化钠、葡萄糖等中的一种或多种。人尿激肽原酶组合物治疗糖尿病肾病的剂量根据病情的严重程度、治疗时间而定，一般静脉注射给药每次0. 1-0. 2PNA单位，每天给药1-2次。通过我们的研究发现，人尿激肽原酶能够减轻糖尿病肾病导致的肾功能损伤，减 少尿蛋白的排泄，其机制与人尿激肽原酶能调节肾血流动力学，增加肾脏血流，改善肾脏微 循环有关。同时人尿激肽原酶还能够抑制肾组织内氧化应激和炎症反应，减轻肾组织损伤 重要的病理生理过程，对糖尿病肾病起到良好的治疗作用。
具体实施例方式以下通过具体实施例对本发明作进一步说明。实施例1制备人尿激肽原酶干粉针取过滤灭菌的人尿激肽原酶150PNA单位，加7. 5克甘露醇、2克右旋糖酐40、5克 柠檬酸钠溶解，调节PH至中性，加注射用水至500毫升，无菌过滤，分装1000个安瓿中，无 菌条件下冷冻干燥，即得。实施例2制备人尿激肽原酶注射液取过滤灭菌的人尿激肽原酶水溶150PNA单位，调节PH至中性，加注射用水至500 毫升，加氯化钠调节等渗，无菌过滤，分装1000个安瓿中，即得。实施例3人尿激肽原酶对糖尿病肾病大鼠的治疗作用实验方法采用单侧肾切除加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)致糖尿病肾病大鼠动物模型。选 用180 220g SD大鼠60只，雌雄不限，随机分为5组假手术组；DN模型组；人尿激肽 原酶I组(3. 85X I(T3PNAu)；人尿激肽原酶II组(8. 75X I(T3PNAu)；人尿激肽原酶III组 (17. 5X IO-3PNAu)，各治疗组大鼠在造模后尾静脉注射人尿激肽原酶，每日一次，连续4周。 假手术组和DN模型组尾静脉给予相同体积的生理盐水。观察指标4周后收集各组大鼠24h尿液，置-20°C冷藏待测24h尿蛋白。留尿后大鼠用4% 水合氯醛腹腔注射麻醉，采用激光多普勒血流仪测定造模后及治疗后双侧肾脏血流量，取 平均值作为单只动物肾血流量；眶后静脉采血，采用自动分析仪测定血糖、血肌酐(Scr)、 血尿素氮(BUN)；取肾制备肾组织切片，SABC法测定肾组织中MCP-I的表达；制备10%肾皮 质勻浆，测定肾皮质MDA和SOD含量。实验结果1.人尿激肽原酶可增加糖尿病肾病大鼠肾血流量
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*p < 0. 05vs糖尿病肾病模型组2.人尿激肽原酶对糖尿病肾病大鼠肾功能具保护作用模型组大鼠较假手术组大鼠24小时尿蛋白量显著升高，达到113. 83士31. 04mg ； 中、高剂量人尿激肽原酶组大鼠24小时尿蛋白量显著低于模型组(ρ < 0. 05)，三个药物治 疗组对大鼠24小时尿蛋白量的减少具有剂量依赖性，说明人尿激肽原酶能改善糖尿病肾 病所致的肾小球血管调节功能障碍，减少蛋白的排出。模型组大鼠静脉给予生理盐水治疗后，血清BUN为(22. 47士2. 35)mmol/L, Cre为 (153. 72士20. 13)umol/L，明显高于假手术组，说明模型组动物肾功能损害严重。中、高剂量 人尿激肽原酶能剂量依赖性地改善糖尿病肾病大鼠的肾功能(P < 0. 05)。血糖在各组间无 明显差异(P > 0.05)。见表1。表1各试验组大鼠肾功能指标比较 *p < 0. 05vs糖尿病肾病模型组3.人尿激肽原酶能抑制糖尿病肾病大鼠肾组织氧化应激和炎性反应糖尿病肾病大鼠肾皮质勻浆中MDA含量为(12. 94士2. 68)nmol/ml,明显高于假手 术组，说明模型组动物肾皮质氧自由基损伤严重。中、高剂量人尿激肽原酶能剂量依赖性地 减轻氧化应激(P < 0. 05)。糖尿病肾病大鼠肾皮质勻浆中SOD含量为(92. 17士 18. 92)NU/ ml,明显低于假手术组，说明模型组动物肾皮质内源性抗氧化因子减少。中、高剂量人尿激 肽原酶能剂量依赖性地增强抗氧化损伤作用(P < 0. 05)。糖尿病肾病模型组大鼠肾小球中MCP-I阳性细胞明显多于假手术组(ρ < 0. 05)，中、高剂量人尿激肽原酶能剂量依赖性地减 少MCP-I的表达(ρ < 0. 05)，从而减少糖尿病肾病时单核巨噬细胞在肾组织中的浸润，减轻 炎性反应。见表2。表2各试验组大鼠氧自由基损伤和炎症反应指标比较 *p < 0. 05vs糖尿病肾病模型组讨论糖尿病肾病(DN)是糖尿病的常见慢性并发症之一，由糖尿病微血管病变引起。本 病确切的发病机制尚未阐明，可能是多因素共同作用的结果。炎症和氧化应激是DN肾小球 硬化和肾间质纤维化病理机制的中心，并且可加快DN的进展。人尿激肽原酶能剂量依赖性 地减少尿蛋白量，改善肾功能指标，说明人尿激肽原酶可通过调节肾小球微循环功能，增加 肾血流量，对糖尿病大鼠具有治疗作用。氧化应激和炎症反应是DN肾组织损伤的重要病理过程，且相互影响。MDA是氧自 由基与生物膜多聚不饱和脂肪酸发生脂质过氧化的产物，其产量与氧自由基的量相平行， 因此测定MDA可反映氧自由基的水平，间接反映细胞损伤的程度。而超氧化物歧化酶(SOD) 是重要的抗氧自由基损伤的物质。单核趋化蛋白-I(MCP-I)是CC家族中一种特异的趋化 因子，能够促使单核细胞由外周循环迁移到炎症部位聚集并激活，损伤肾脏组织。MCP-I在 炎症参与DN的发生发展中起重要的介导作用。在本实验中，人尿激肽原酶能抑制DN大鼠 肾组织的氧自由基损伤和炎症反应，是人尿激肽原酶能够改善DN大鼠肾功能指标的重要 原因。
权利要求
人尿激肽原酶在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述药物的给药量是每天给药1-3次，每次给药 0. 01 0. 2PNA单位/支(瓶)。
3.根据权利要求2所述的用途，其中所述药物是冻干粉针剂。
4.根据权利要求2所述的用途，其中所述药物是注射液。
5.根据权利要求3所述的用途，其中所述的药物还含有选自甘露醇、右旋糖苷、水解明 胶、柠檬酸钠或甘氨酸的添加剂。
6.根据权利要求4所述的用途，其中所述的药物还含有选自甘露醇、氯化钠或葡萄糖 的添加剂。
全文摘要
本发明涉及人尿激肽原酶的新医药用途，即人尿激肽原酶在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用。
文档编号A61P3/10GK101879310SQ201010200140
公开日2010年11月10日 申请日期2010年6月13日 优先权日2010年6月13日
发明者傅和亮, 吴蓉蓉, 孙莉, 孙铁, 邹春芽 申请人:广东天普生化医药股份有限公司