专利名称：人尿激肽原酶在制备治疗糖尿病足药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物化学领域。具体而言，本发明涉及人尿激肽原酶的新医药用途，即 人尿激肽原酶在制备治疗糖尿病足药物中的应用。
背景技术：
人尿激肽原酶(Human Urinary Kallidinogenase)，是从健康男性人尿中提取精 制的糖蛋白，分子量约54000道尔顿，具有激活人血浆激肽原转化为激肽，扩张血管增加血 流量，改善血液循环的作用。本申请人的在先专利申请“200610127956. 3人尿激肽原酶在 制备治疗糖尿病合并脑梗死药物中的应用”公开了它的一种医药用途，发现人尿激肽原酶 对合并有糖尿病的脑梗死患者有良好的治疗作用。本发明人经过认真研究和动物试验证 明，人尿激肽原酶对糖尿病足也有明显的治疗作用。糖尿病足是糖尿病引起的足部疼痛、皮肤深溃疡、肢端坏疽等病变总称，是糖尿病 常见慢性并发症之一，严重影响患者生活质量，甚至危及患者生命。在糖尿病足的发生发展 过程中，四肢血管病变、血流量下降、血液循环中血液黏度等流变学的改变是重要的影响因 素。此外，糖尿病足部炎症反应和血管病变相互作用形成恶性循环，导致足部炎症增强和血 管损伤，参与并加重了糖尿病足的发生与发展。人尿激肽原酶是一种内源性血管活性物质，既往的研究表明人尿激肽原酶具有 一定的抗血小板聚集，延长再钙化时间改善血液粘稠的作用。并且能够增强红细胞的变形 能力，扩张股动脉，增加组织的血供和氧供，此外，人尿激肽原酶还具有一定的抗炎抗氧化 作用，对血管病变起到一定的抑制作用。
发明内容
本发明的目的是提供人尿激肽原酶用于治疗糖尿病足的用途，即用于制备治疗糖 尿病足药物的用途。本发明的另一目的是提供一种用于治疗糖尿病足的含有人尿激肽原酶 的药物组合物。本发明的人尿激肽原酶对糖尿病足有明显的治疗作用，一般以药物组合物的形式 使用，这种组合物含有治疗有效量的作为活性成分的人尿激肽原酶和可药用辅料，其每计 量单位中含有15 25 μ g的人尿激肽原酶和10 50mg的可药用辅料，主要剂型包括冻干 粉针剂和注射液剂，通常以静脉注射途径给药。经静脉注射给药的人尿激肽原酶组合物，一般是固体的灭菌组合物形式，即冻干 粉针剂型，这些组合物含有的可药用辅料是甘露醇、右旋糖苷、水解明胶、柠檬酸钠、甘氨酸 等中的一种或多种。在使用时溶解于灭菌注射用水或其它注射用灭菌介质中。经静脉注射给药的人尿激肽原酶组合物也可以是水溶液形式，即注射液剂，这些 组合物含有的可药用辅料是甘露醇、氯化钠、葡萄糖等中的一种或多种。人尿激肽原酶组合物治疗糖尿病足的剂量根据病情的严重程度、治疗时间而定， 一般静脉注射给药每次0. 1-0. 2PNA单位，每天给药1-2次。
通过我们的研究发现，人尿激肽原酶能够改善糖尿病足的肢端坏疽症状，减轻足 部皮肤和组织的溃疡和坏死。人尿激肽原酶通过激活体内的激肽原酶-激肽系统，释放血 管活性物质如N0、EDHF和前列环素等，舒张肢体血管，增加肢体血流量。同时增强血液中的 红细胞压积、红细胞聚集和变形能力。此外，人尿激肽原酶能减轻糖尿病足局部炎症反应和 血管损伤，对糖尿病足起到良好的治疗作用。
具体实施例方式以下通过具体实施例对本发明作进一步说明。实施例1制备人尿激肽原酶干粉针取过滤灭菌的人尿激肽原酶150PNA单位，加7. 5克甘露醇、2克右旋糖酐40、5克 柠檬酸钠溶解，调节PH至中性，加注射用水至500毫升，无菌过滤，分装1000个安瓿中，无 菌条件下冷冻干燥，即得。实施例2制备人尿激肽原酶注射液取过滤灭菌的人尿激肽原酶水溶150PNA单位，调节PH至中性，加注射用水至500 毫升，加氯化钠调节等渗，无菌过滤，分装1000个安瓿中，即得。实施例3人尿激肽原酶对糖尿病足大鼠的治疗作用实验方法选用180 220g Wistar大鼠60只，雌雄不限，随机分为5组假手术组；糖尿病 足模型组；人尿激肽原酶I组(3. 85X I(T3PNAu)；人尿激肽原酶II组(8. 75X I(T3PNAU) ’人 尿激肽原酶III组(17. 5X I(T3PNAu)。模型组和药物治疗组大鼠腹腔注射STZ 55. Omg/kg, 一周后有多饮、多尿，且空腹血糖在12. Ommol/mL以上者入选制作模型，第二周前两天室温 逐渐降至10度，后五天室温再降至6度左右，其它条件不变，此后室温恢复正常。假手术组 同时腹腔注射生理盐水且不经历降温处理。第三周末各治疗组大鼠尾静脉注射人尿激肽原 酶，每日一次，连续3周。假手术组和糖尿病足模型组大鼠尾静脉给予相同体积的生理盐 水，天数同治疗组。观察指标给药3周后对各组大鼠行糖尿病足症状评分，评分标准如下1分皮肤无开放性 病灶，颜色发黑；2分皮肤有轻度开放病灶，可见水泡、血泡，但病灶未涉及深部组织；3分 病灶已侵入深部肌肉组织，可见感染、溃疡及较多的脓性分泌物。用以上三个等级对糖尿病 足大鼠的四肢进行评分，然后计算每只大鼠的总积分；采用激光多普勒血流仪测定造模前 及治疗后四肢血流变化，取四肢血流量平均值作为单只动物肢体血流量；随后行股静脉采 血，检测各组大鼠的空腹血糖、空腹血清胰岛素、血液流变学指标(高切变率、低切变率、血 浆黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数、红细胞变形指数)，同时ELISA法测定血浆TNF-α和 vffF的变化。实验结果1.人尿激肽原酶能改善糖尿病足大鼠四肢坏疽症状评分模型组大鼠造模6周后四肢糖尿病足症状明显，肢端坏疽严重，四肢症状评分为 10. 3士4. 2 ；中、高剂量人尿激肽原酶组大鼠6周后四肢糖尿病足症状较模型组大鼠轻，肢 端坏疽有明显改善(P < 0. 05)，不同剂量人尿激肽原酶治疗组大鼠的四肢症状评分具剂量依赖性降低，分别为I组9. 1 士4. 5，II组7. 8士4. 3，III组5. 5士3. 7，说明人尿激肽原酶能
改善糖尿病足大鼠的四肢肢端坏疽症状。 2.人尿激肽原酶可增加糖尿病足大鼠肢体血流量 *p < 0. 05vs糖尿病足模型组3.人尿激肽原酶能改善糖尿病足大鼠血液流变学指标各组大鼠空腹血糖和空腹血清胰岛素无显著差异，不具统计学意义(ρ > 0. 05)。 模型组大鼠血液流变学指标中高切变率、低切变率及血浆黏度均显著升高，提示模型组大 鼠足部血液循环不畅；人尿激肽原酶高、中剂量组能剂量依赖性降低糖尿病足大鼠血液的 高切变率、低切变率及血浆黏度(P < 0. 05)。模型组大鼠血液中红细胞的变形能力和聚 集能力明显下降，提示由体循环向模型大鼠足部提供氧的能力下降；人尿激肽原酶高、中剂 量组能剂量依赖性的增加糖尿病足大鼠血液中的红细胞压积、红细胞聚集和变形能力(P < 0. 05)。见表 1。表1各试验组大鼠血液流变学指标比较 *p < 0. 05vs糖尿病足模型组4.人尿激肽原酶能减轻糖尿病足大鼠足部炎症反应和血管损伤糖尿病足模型大鼠炎症反应严重，血浆中TNF-α含量达到26. 7士3. 8pg/ml，经 高、中剂量人尿激肽原酶治疗的糖尿病足大鼠血浆TNF-α含量显著下降(ρ < 0. 05)。vWF 是内皮细胞和巨核细胞合成的内皮下黏附蛋白，当血管内皮受损时，vWF大量释放入血液中 促进血小板粘附并聚集于受损的血管壁上，增加发生血管病变的危险。糖尿病足模型大鼠血浆中vWF含量达到984. 3士31. 5%，提示模型大鼠血管损伤较为严重。不同剂量人尿激肽 原酶对大鼠血管损伤的改善具有剂量依赖性，其中高、中剂量组与模型组比较具有统计学 差异(ρ < 0.05)。见表2。 表2各试验组大鼠炎症反应和血管损伤指标比较 *p < 0. 05vs糖尿病足模型组讨论血糖、血脂升高引发血管病变及周围神经病变，是糖尿病性肢端坏疽发生的内因， 而适当降低室温是加速其发生发展的外因。利用中等剂量STZ结合温度控制来造模，可在4 周内成功建立糖尿病足动物模型，并且具有临床糖尿病性肢端坏疽患者的发病特点三多 一少、血糖、血脂升高，胰岛素水平下降，可作为研究糖尿病性肢端坏疽发病机理及药物治 疗效果评价的较好的动物模型。在本实验中，人尿激肽原酶能抑制糖尿病足大鼠的血管损 伤，增加肢体血流量，改善大鼠体循环血液流变学指标，并且对局部炎性反应有一定的抑制 作用，因此能够明显的改善糖尿病足大鼠四肢坏疽症状，对糖尿病足起到一定的治疗作用。
权利要求
人尿激肽原酶在制备治疗糖尿病足药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述药物的给药量是每天给药1-3次，每次给药 0. 01 0. 2PNA单位/支(瓶)。
3.根据权利要求2所述的用途，其中所述药物是冻干粉针剂。
4.根据权利要求2所述的用途，其中所述药物是注射液。
5.根据权利要求3所述的用途，其中所述的药物还含有选自甘露醇、右旋糖苷、水解明 胶、柠檬酸钠或甘氨酸的添加剂。
6.根据权利要求4所述的用途，其中所述的药物还含有选自甘露醇、氯化钠或葡萄糖 的添加剂。全文摘要
本发明涉及人尿激肽原酶的新医药用途，即人尿激肽原酶在制备治疗糖尿病足药物中的应用。
文档编号A61K38/48GK101879309SQ20101020014
公开日2010年11月10日 申请日期2010年6月13日 优先权日2010年6月13日
发明者傅和亮, 吴蓉蓉, 孙莉, 孙铁, 邹春芽 申请人:广东天普生化医药股份有限公司