专利名称：治疗骨关节炎的草本复方的制作方法
技术领域：
一个包含莴苣、沉香、稻米、乳香、白术、菟丝子的草本复方用来治疗骨关节炎。
背景技术：
罹患骨关节炎的人比任何其它关节疾病都多。根据美国疾病管制局(CDC)2005 年的统计，25岁以上的美国人，13. 9 %被骨关节炎影响，而65岁以上的人，有33. 6 % (12400000人)的人被影响。1997年估计花费7. 9千万美元来作膝及臀部关节的取代 手术。2000年估算每年治病费用是5700美元与工作有关的骨关节炎则每年花费3. 4至 13. 2 千万美元(www, cdc. gov/arthritis/osteoarthritis. html)。西方世界老人 有膝骨关节炎症状，中国则60岁以上15%女性，6%男性有骨关节炎(Lai，H-Y, et. al.， Intra—articular hyaluronic acid for treatment of osteoarthritis :a nationwide study among the older population of Taiwan. BMC Health Serv Res. 2008 ；8 :24)。在自宅居住的成年人中有五项最会导致失能的疾病，其中之一就是骨关节炎，罹 患者生活品质极度受影响。载力关节(膝、臀)出了毛病在临床上影响极大。大约35 50%的骨关节炎与遗传有关，其它危险因子包括体重过重、关节受伤、大量机械性压力、排 列不准、女性、老人(Weiss E and R. Jurmain. Osteoarthritis revisited :A contemporary review of aetiology. Int. J. Osteoarchaeology，2007，17 :437_450)。软骨、骨骼、关节滑 膜三者交互作用导致关节退化。软骨是由水分、胶原蛋白和蛋白多醣所组成。在健康软骨中，内部的再塑一直进 行，软骨细胞合成大分子来取代分解掉的分子。骨关节炎中，退化性改变导致失能，软骨 细胞的生成及分解活性失衡而使软骨胶退化和不正常的修补增加。不正常的修补形成骨 赘(osteophyte)和囊状空洞(subchondral cysts) 0软骨细胞维持及修补受损软骨表 面的能力不足是关节退化原因的一(Goldring MB and SR Goldring. Osteoarthritis. J. Cell. Physiol. 2007, 213 626-634.Krasnokutsky S. ,et. al. ,Current concepts in the pathogenesis of osteoarthritis. Osteoarthritis and Cartilage. 2008,16 :S1_S3)。骨关节炎不被归类到发炎性关节炎，发炎反应通常是轻微的，但是它会有偶发 的滑液囊炎，其症状包括疼痛、肿胀、僵硬、产生白三稀素(由5-脂肪氧合胸作用而来) 和前列腺素(由环加氧酶作用而来)。这些媒介质更进一步促进白间素-1 β (IL-Ιβ) 和瘤坏死因子-α (TNF-α)的表现而使分解酵素包括基质金属蛋白分解酵素(Matrix metalloproteinase, MMP)及聚蛋白分解酵素(aggrecanase)的表现增力口 (Pelletier H. W.，et. al.，Synthesis of interleukine 1 beta, tumor necrosis factor-alpha, and interstitial collagenase (MMP-I) is eicosanoid dependent in human osteoarthritis synovial membrane explants interactions with anti-inflammatory cytokines. 2002 ； J. Rheumatol. 29(3) :546_553)。老化是骨关节炎发生最重要的一个因子。与老化相关的改变包括细胞外基质分 子的改变，软骨细胞修复细胞基质的能力降低。老化也会使高度醣化终产物(advancedglycation end product)累积。软骨细胞有高度醣化终产物的受体(receptor for advanced glycation end product，RAGE)，其数目随年龄或退化性关节炎而增加。RAGE 讯号传递会使基质金属蛋白分解酵素_1，3，13增加，而这几个基质金属蛋白分解酵素是与 骨关节炎有关的代谢酵素(Loeser R F.，et. al.，Articular chondrocytes express the receptor for advanced glycation end products,potential role in osteoarthritis. Arthritis Rheum. 2005 ；52 (8) :2376_2385· ；Boileau C.，et. al.，The regulation of human MMP-13by licofelone,an inhibitor of cyclo-oxygenases and 5-lipoxygenase, in human osteoarthritic chondrocytes is mediated by the inhibition of the p38MAP kinase signalling pathway. Ann Rheum Dis 2005 ；64 :891_898· Nah SS.，et.al·， Advanced glycation end products increases matrix metalloproteinase-1, —3， -13 and TNF-alpha in human osteoarthritic chondrocytes. FEBS Lett. 2007 ；581 (9) 1928-1932)。动态的压力和剪切应力调节软骨的合成和分解作用，一般低压剌激合成活性[聚 蛋白质(aggrecm)和二型胶原蛋白质合成]，高压剌激分解活性(基质金属蛋白分解酵素 MMP 禾口聚蛋白质分角军酵素 aggrecanase) (Fitzgerald J. et. al.，Shear and compression differentially regulate clusters of functionally related temporal transcription patterns in cartilage tissue. J. Biol. Chem. 2006，281 (34) :34095_34103)。高剪切 应力，例如关节排列不准，引起环加氧酶二型的表现，消耗抗氧化剂，及引起软骨细胞凋 亡(Zachary R. H.，et. al.，Divergent responses of chondrocytes and endothelial cells to shear stress :Cross_talk among C0X—2， the phase 2 response， and apoptosis. Proc. Nat. Acad. Sci. 2005,102 (39) 14010-14015. Abulencia J. P. ， et. al., Shear-induced cyclooxygenase-2 via a JNK2/c-Jun-dependent pathway regulates prostaglandin receptor expression in chondrocytic cells. J. Biol. Chem.，2003 ； 278(31) =28388-28394) 0剪切应力也会刺激氧化氮合成酶活性而产生氧化氮，骨关节炎患 者的关节滑液中发现氧化氮增加，软骨内发现有氮氧化酪胺酸(nitrotyrosine)加成物， 这种氮氧化作用是引起软骨细胞活性作用降低、衰老和软骨退化的因子之一(Yudoh K.， et. al. . Potential involvement of oxidative stress in cartilage senescence and development of osteoarthritis :oxidative stress induces chondrocyte telomere instability and downregulation of chondrocyte function. Arthritis Res.Ther 2005,7 :R380-R391)。氧化氮、活性氧分子、氧化氢、过氧化氢、(N0，O2-, HO, H2O2)这些活性氧物质族 群可以使软骨细胞衰老、凋亡。在这种代谢缓慢细胞不再分裂的组织如软骨中，伤害尤 大。有实验显示骨关节炎的软骨细胞其死亡率达22. 3% (Sanshiro H.，et. al.，Linkage of chondrocyte apoptosis and cartilage degradation in human osteoarthritis. Arthritis Rheum. 1998 ；41 (9) 1632-1638. Marcello D.C.Jr. and Loeser R. F.. Increased oxidative stress with aging reduces chondrocyte survival Correlation with intracellular glutathione levels Arthritis Rheum. 2003 48(12) 3419~3430) 活性氧物质族群和老化使软骨细胞衰老不再能维持及修复软骨胶因而导致骨关节炎。目前骨关节炎的治疗方法大多为缓解症状的，例如休息、运动、减重、热/冷敷减痛、物理疗法、止痛剂、非类固醇抗发炎药物、皮质酮、滑润剂，最后的选择是关节置换手术 (Buckwalter J. A. and Martin J. Α. , Drug delivery in degenerative joint disease. Advanced Drug Delivery Reviews. 2006 ；58 (2) : 150-167)。一些食品补充剂例如葡萄糖胺 (Glucosamine)、软骨素硫酸盐(Chondroitin Sulfate)临床上有效性未确定，目前没有改 变疾病程序的药。
发明内容
本发明的目的是提供一个用于治疗骨关节炎的草药组合。本发明包含莴苣、沉 香、稻米、乳香、白术、菟丝子以5-20 0.2-1 1-5 0.2-1 0.1-1 0. 2_1的重量 百分比，较优的比例是5 0. 5 4 0. 5 0. 25 0. 5，在每日3_12克(g)生药剂 量下用来治疗骨关节炎。整株或植物的某一部分可以使用。较优的是沉香含树脂的树 干、稻米的种子、莴苣的种子、乳香的树脂。本发明可以以药剂可接受的稀释剂、载体及 辅型剂制成各种剂型。药剂可接受的稀释剂包括，但不限于，山梨醇(sorbitol)，甘露醇 (mannitol)，淀粉(starch)，乳糖(lactose)，粉状或微晶状纤维素(cellulose in powder form or microcrystalline form), 二 丐憐酸盐(dicalcium phosphate),三 丐憐酸盐 (tricalcium phosphates)，糖(sugar)和相似物。其它药剂可接受的载体及辅型剂包括， 但不限于，结合剂(binders)，崩解佐剂(disintegrants)，润滑剂(lubricants)，流动佐 齐[J (glidants),助溶或助湿齐[J (solubility or wet enhancers),复合形成齐[J (complex forming agents)，释放控齐[J (release controlling agents)，月莫衣齐[J (film formers), 塑化剂(plasticizers)，着色剂(colorants)，调味剂(flavoring agents)，甜味剂 (sweeteners)，黏度增强剂(viscosity enhancers)，保存剂(preservatives)，抗氧化剂 (antioxidants)和相似物，制成锭剂、软胶囊、散剂、粉剂、水剂、胶囊、溶液、霜剂、乳剂、喷 雾剂、植入剂、经皮贴片等剂型来使用于各种投予途程。本发明公开的是一个治疗骨关节炎的草本复方。它针对骨关节炎多因子病理，包 括机械性剪力(产生氧化氮攻击)、氧化压力(活性氧化族群；高度醣化终产物累积以及其 讯号传递)，老化引起软骨细胞失去活力(衰老、凋亡)，使用/耗损软骨(不足的取代、胶 原蛋白质/含醣蛋白的合成降低、基质金属蛋白分解酶/聚蛋白质分解酶活性增加)，滑膜 细胞释放的发炎介质(环加氧酶产生前列腺素、5-脂肪氧合胸产生白烯三酸)而导致的肿 胀疼痛症状以及软骨胶退化作用。如实施例1所揭示的草本复方，在实验1中所示，本发明可以刺激软骨细胞增生， 刺激的程度在取代老化失去细胞数的范围。实施例1如实验2中所示，可增加软骨细胞胶原 蛋白和糖胺聚多糖的沉积，在过氧化氢下，本发明仍具对抗过氧化的作用而增加胶原蛋白 及糖胺聚多糖的沉积。实施例1如实验3中所示，可增加骨髓间质干细胞胶原蛋白和糖胺 聚多糖的沉积，可以促进骨髓间质干细胞进行分化成软骨细胞。实施例1如实验4所示，可 以抑制二型环加氧酶。实施例1如实验5所示，可以抑制5-脂肪氧合胸。实施例1如实验 6所示，可以抑制基质金属蛋白分解酶-3(MMP-3)。实施例1如实验7所示，可以抑制基质 金属蛋白分解酶-13(MMP-13)。实施例1如实验8所示，可以抑制软骨细胞培养液内MMP-2 的活性。实施例1如实验9所示，可以抑制细胞外MMP-2的活性。实施例1如实验10所示， 具拟超氧化物歧化胸(Superoxide dismutase, SOD)去自由基作用。实施例1如实验11所
5示，具去除二苯代苦味胼基(2，2-diphenyl-l-picrylbydraZyl ；DPPH)自由基作用。实施例 1如实验12所示，含具抗氧化作用的多酚。实施例1如实验13所示，依剂量抑制脂质过氧 化。实施例1如实验14所示，可以刺激软骨细胞及人类骨髓干细胞与软骨胶代谢有关基因 的表现。实施例1如实验15所示，可以抑制福尔马林引起的小鼠急性及发炎疼痛。实施例 1如实验16所示，可以促进小鼠负重游泳的能力。实施例1如实验17人类使用经验所示， 腰背疼痛缓解67.3%，髋及膝部关节疼痛减缓65.8%，僵直程度减缓63. 8 %，日常生活行 动困难减少62.3%。参试者四肢更具活力，全身肌肉骨骼筋骨系统更具活动力。本发明萃取物显现它能刺激软骨细胞分裂来取代因骨关节炎引起的软骨细胞衰 老、凋亡。它也可以经由刺激二型胶原蛋白质及聚蛋白质基因的表现，抑制MMP活性来促 进软骨细胞沉积胶原蛋白质和糖胺聚多糖于软骨胶，它可以刺激骨髓干细胞朝向软骨细胞 系列的分化，例如使细胞聚集，就如在胚胎发育期，四肢芽发育时的情况。它也可以刺激骨 髓干细胞胶原蛋白质和糖胺聚多糖的合成。本发明萃取物(SOlOlC)也可以刺激在软骨 细胞中与软骨胶新陈代谢相关的基因表现，包括聚蛋白质、聚蛋白质分解酶、二型胶原蛋 白质、转形生长因子-β (TGF-β)、骨骼型态发育蛋白质-2(ΒΜΡ-2)。它也可以刺激骨髓 干细胞朝向软骨细胞分化的基因表现。本发明萃取物抑制软骨细胞内基质金属蛋白分解 酶-2(ΜΜΡ-2)的表现及活性。在细胞外系统中，它也可以抑制ΜΜΡ-3，-13的活性。本发明 萃取物含酚类化合物(Phenolics)具抗氧化作用，例如去除二苯代苦味胼基(DPPH)自由 基、抗脂质过氧化、拟超氧化物歧化胸(SOD)活性。同时，本发明萃取物也具抑制二型环加 氧酶，5-脂肪氧合胸的作用，抑制发炎及疼痛相关的媒介物质的产生。在动物模型中，它可 以抑制由福尔马林引起急性及慢性发炎的疼痛。本发明萃取物也可以加强负重游泳，四肢 筋骨活力。本发明萃取物在人类使用经验中证实它有治疗骨关节炎的作用。
图1显示二苯代苦味胼基(DPPH)自由基截取。图1 中1-空白对照；2-S0101C(本发明萃取物)0. 01mg/ml ；3-S0101C0. 03mg/ ml ；4-S0101C 0.lmg/ml ；5-S0101C 0.3mg/ml ；6-S0101C lmg/ml ；7-Vitamin C 0.OlmM ； 8-Vitamin C 0. 03mM ；9-Vitamin C 0. ImM ； 10-Vitamin E 0. OlmM ；Il-Vitamin E 0. 03mM ； 12-Vitamin E 0. ImM。图2显示抑制脂质过氧化的作用。图2 中1-空白对照；2-S0101C(本发明萃取物)0. 03mg/ml ；3-S0101C0. lmg/ml ； 4-S0101C 0. 3mg/ml ；5-Vitamin E 0. 003mM ；6-Vitamin E0. OlmM ；7-Vitamin E 0. 03mM。图3显示SOlOlC对福尔马林引起疼痛的镇痛作用。图4显示SOlOlC对小鼠负重游泳能力的促进作用。
具体实施例方式实施例11500克莴苣、150克沉香、600克稻米、150克乳香、75克白术、150克菟丝子于3公 升去离子水中以摄氏100士5°C加热2. 5小时。萃取液收集。再重复一次。二次萃取液合并 过100目筛。萃取液浓缩后喷雾干旱成粉末(是为S0101C)。
实验1 刺激软骨细胞增生人类软骨在病人知情同意下关节取代手术中取得，软骨以细菌二级/四级胶原 胃白_ (Collagenase, Worthington Chemical, Freehold, NJ) lmg/mlDMEM+10%月台+ 青 (FCS) +25 μ g/ml 艮他霉素(Gentamicin, Grand Island, NY) (C-DMEM)，在 37°C下隔夜消化， 取得的细胞以高密度培养于C-DMEM，5 % 二氧化碳，37°C下。每孔IX IO4细胞种植于96孔培养皿中，48小时后以含不同浓度本发明草本复方 培养液取代，72小时后，培养液吸掉，以内含3-(4，5_二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴 盐(3~(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)~2,5-diphenyltetrazolium bromide ；MTT)0. 5mg/ml 的PBS溶液取代。在5 % 二氧化碳，37 °C下培养四小时。吸掉MTT溶液后，形成的formazan 用含0. 04N盐酸的异丙醇(Isopropanol)溶解，吸光值在波长570nm下读取。
权利要求
一个用于治疗骨关节炎的草药组合，包括莴苣、沉香、稻米、乳香、白术、菟丝子，其重量百分比例为5 20∶0.2 1∶1 5∶0.2 1∶0.1 1∶0.2 1。
2.权利要求1所述的草药组合，其中，莴苣、沉香、稻米、乳香、白术、菟丝子的重量百分 比例为 5 0. 5 4 0. 5 0. 25 0. 5。
3.权利要求1所述的草药组合，有效剂量是每天生药重量在3到12克之间。
4.权利要求1所述的草药组合，其中，沉香是其含树脂的树干。
5.权利要求1所述的草药组合，其中，稻米是其种子。
6.权利要求1所述的草药组合，其中，莴苣是其种子。
7.权利要求1所述的草药组合，其中，乳香是其树脂。
8.权利要求1所述的草药组合，其中，草药组合具有之功用系选自下列群组所组成之 组刺激软骨细胞分裂、刺激软骨细胞沉积胶原蛋白及糖胺聚多糖胺、刺激人类骨髓干细胞 分化成软骨细胞、刺激软骨细胞与软骨胶代谢有关基因、刺激人类骨髓干细胞与软骨胶代 谢有关基因、抑制基质金属蛋白分解酵素MMP-2的活性、抑制基质金属蛋白分解酵素MMP-3 的活性、草药组合可以抑制基质金属蛋白分解酵素MMP-13的活性、具有抗氧化的活性、具 有抗发炎的活性、具有抑制疼痛的活性、以及具有增强筋骨活动的能力。
9.权利要求1所述的草药组合，其中，草药组合能与药学上可接受的辅型剂、载体或稀 释剂或各种剂型用于各种投予途径。
10.权利要求9所述的草药组合，其中，各种剂型为口含锭、锭剂、膜衣锭、胶囊软、胶 囊、颗粒、粉剂、丸剂、溶液、乳化液、针剂、软膏、霜剂、喷雾剂、鼻吸剂、软胶、水剂、乳液、植 入剂和经皮贴片。
全文摘要
一个草本复方包括莴苣、沉香、稻米、乳香、白术、和菟丝子，可以用来治疗退化性关节炎。
文档编号A61K36/899GK101954005SQ201010222438
公开日2011年1月26日 申请日期2010年7月5日 优先权日2009年7月13日
发明者刘素莹 申请人:佰研生化科技股份有限公司