专利名称：小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗的制备方法
技术领域：
本发明为一种小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗的制备方法，属于生物工程技术领域。
背景技术：
小鹅瘟是由鹅细小病毒引起的一种主要侵害雏鹅和雏番鸭的烈性传染病，发病率和死亡率都很高，发病雏鹅的死亡率最高可达90% 100%。长期以来，小鹅瘟疫苗是预防小鹅瘟疫病的主要措施。虽然我国目前已具有预防小鹅瘟的活疫苗冻干产品如小鹅瘟活疫苗(SYG株)和小鹅瘟活疫苗(GD株)等，但仍存在一些不足之处，如疫苗必须通过注射途径使用，不但费时费力，而且无法避免因人工围捕和注射疫苗等引起的各种严重应激反应， 如减食、减蛋，生长受抑等，这也是目前种鹅养殖者不愿意加强免疫，特别是在种鹅产蛋期间不愿意加强免疫的主要原因。另外，因现行的小鹅瘟冻干活疫苗不具有缓释功能，免疫期短，保护率低；加上目前培育的种鹅新品种产蛋期都比较长，如果种鹅在产蛋期间不加强免疫就无法避免雏鹅发生小鹅瘟。由此可见这些问题的存在不但制约了小鹅瘟疫苗预防效力的充分发挥，而且影响到种鹅的生产性能、生长速度和经济效益。
发明内容
本发明的目的是针对现有小鹅瘟冻干活疫苗所存在的缺点，提供一种小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗的制备方法，原理是利用多孔淀粉对小鹅瘟病毒进行高效吸附，再使用肠溶性高分子材料进行微胶囊化包埋，最后通过流化床进行干燥脱水。本发明充分利用微胶囊的优异特性，解决现行小鹅瘟冻干活疫苗存在的免疫期短，使用不便，影响种鹅生产性能等不足之处，可以在种鹅产蛋期进行口服免疫，而不会产生应激反应。从而延长了免疫期， 弥补了常规活疫苗的缺陷。本发明的目的是通过以下技术途径实现的，小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗的制备方法，包括如下步骤(1)将小鹅瘟SYG毒株(购自中国兽医药品监察所)通过鹅胚增殖培养后制成疫苗半成品；(2)半成品经无菌检合格后，加入5%的蔗糖脱脂乳溶液，搅拌混勻后再加入 20% -40%的多孔淀粉，37°C控温搅拌20-40分钟；(3)将步骤( 制得的液体与等体积-2. 5%的海藻酸钠溶液混合，充分搅拌后经流化床脱水干燥，制成小鹅瘟微胶囊化疫苗干粉。所述的制成小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗干粉粒径范围在5-15 μ m，每克所含病毒效价为0. 7X IO7-L 5X IO7ELD5tl，该疫苗可以通过口服途径免疫。小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗半成品的制造是采用鹅胚增殖的培养方法。本发明方法科学，简单，生产稳定可靠，疫苗效价损耗较少。通过使用多孔淀粉作为微胶囊骨架，使制成的微胶囊粒径均勻，易干燥脱水，分散性较好。制成的疫苗不仅具有抗原含量高、缓释时间长、毒副作用小、成本低廉，使用方便、保存期长、无任何有害残留等优点，还可以通过口服途径免疫，减少了应激反应，可以使种鹅在产蛋期进行加强免疫。用本方法生产的小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗干粉每克效价为0. 7X IO7-L SXlO7ELD500产品不加任何防腐剂，在2-8°C密封条件下可保存2年效价不降低。疫苗经口服途径(饮水或拌料)一次免疫接种后，可产生2个月左右的免疫保护期。
图1是本发明的小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗低倍扫描电镜图片；图2是本发明的小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗高倍扫描电镜图片；
具体实施例方式实施例一将购自中国兽医药品监察所的小鹅瘟SYG毒株通过鹅胚增殖培养后制成疫苗半成品，无菌检验合格后加入5%的蔗糖脱脂乳溶液，混勻后再加入20%的多孔淀粉，37°C控温搅拌40分钟。将上述液体与等体积1 %的海藻酸钠溶液混合，充分搅拌后经流化床脱水干燥，制成小鹅瘟微胶囊化疫苗干粉，疫苗干粉粒径范围在5-15 μ m。将制成的疫苗接种非免疫鹅胚，经测定每克疫苗所含毒价为1.5X IO7ELD5tlt5将疫苗加入含增稠剂的稀释液中充分混勻，经饮水途径对50只健康成年鹅进行免疫接种，另设30只健康成年鹅作为非免疫对照组，两组健康成年鹅分开饲养。在免疫后的7、14、28、42、56、70天，从免疫组与对照组中随机抽检10份血清，测定相应的ELD5tl，求得中和指数(中和指数=试验组ELD5tl/对照组 ELD50) 0结果表明，免疫7、14、28、42、56、70天后的血清中和指数分别为IOl4UO2 0UO21, IO2 2UO2 0UOl50根据《中国兽药典》附录27页中的要求(血清中和指数应彡IO18)，可以判断，小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗在免疫后的第14天即可产生坚强保护力，免疫保护期达 56天以上。实施例二将购自中国兽医药品监察所的小鹅瘟SYG毒株通过鹅胚增殖培养后制成疫苗半成品，无菌检验合格后加入5%的蔗糖脱脂乳溶液，混勻后再加入40%的多孔淀粉，37°C控温搅拌20分钟。将上述液体与等体积2. 5%的海藻酸钠溶液混合，充分搅拌后经流化床脱水干燥，制成小鹅瘟微胶囊化疫苗干粉，疫苗干粉粒径范围在5-15 μ m。将制成的疫苗接种非免疫鹅胚，经测定每克疫苗所含毒价为0. 7 X IO7ELD500将疫苗加入饲料中混和均勻，经拌料途径对45只健康成年鹅进行免疫接种，另设30只健康成年鹅作为非免疫对照组，两组健康成年鹅分开饲养。在免疫后的7、14、28、42、56、70天，从免疫组与对照组中随机抽检10 份血清，测定相应的ELD5tl，求得中和指数(中和指数=试验组ELD5tl/对照组ELD5tl)。结果表明，免疫7、14、28、42、56、70天后的血清中和指数分别为10L2U0L8U02 0U02 °U0L8U0L2o 根据《中国兽药典》附录27页中的要求(血清中和指数应> 1018)，可以判断，小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗在免疫后的第14天即可产生坚强保护力，免疫保护期达56天。实施例三按实施例一所述制备方法制成的疫苗经饮水途径免疫开产种鹅40只，另设30只健康成年鹅作为非免疫对照组。取免疫组和对照组在免疫后不同时间段O0-30天，31-40 天，41-50天，51-60天)所产蛋孵出的雏鹅各10只，于5日龄时攻击致死量的小鹅瘟病毒液，观察10天。结果试验组不同时间段的免疫保护率分别为90 %、100 %、100 %、80 %，而对照组不同时间段的死亡率分别为ΙΟΟ^ΑΟ^ΑΟ^ΑΟ^。由此可见，该疫苗对雏鹅具有较好的保护效果。实施例四按实施例一所述制备方法制成的疫苗经饮水途径免疫80只健康成年番鸭，另设 40只健康成年番鸭作为非免疫对照组，两组番鸭分开饲养。在免疫后的7、14、28、42、56、70 天，从免疫组与对照组中随机抽检10份血清，测定相应的ELD5tl，求得中和指数(中和指数= 试验组ELD5tl/对照组ELD5tl)。结果表明，免疫7、14、28、42、56、70天后的血清中和指数分别为10L1、10L8、102 °、10L9、10L7、10L2。根据《中国兽药典》附录27页中的要求(血清中和指数应彡1018)，可以判断，小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗对番鸭的保护期达42天以上。同时， 取免疫组与对照组番鸭在免疫后20-25天所产蛋孵出的雏番鸭各10只，于5日龄时攻击致死量的小鹅瘟病毒液。结果免疫组番鸭全部保护，而对照组番鸭有70%发病死亡。由此可见，该疫苗对番鸭也具有较好的保护效果。
权利要求
1.小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗的制备方法，其特征包括如下步骤(1)将购自中国兽医药品监察所的小鹅瘟SYG毒株通过鹅胚增殖培养后制成疫苗半成品 ；(2)半成品经无菌检合格后，加入5%的蔗糖脱脂乳溶液，搅拌混勻后再加入 20% -40%的多孔淀粉，37°C控温搅拌20-40分钟；(3)将步骤( 制得的液体与等体积-2.5%的海藻酸钠溶液混合，充分搅拌后经流化床脱水干燥，制成小鹅瘟微胶囊化疫苗干粉。
2.根据权利要求1所述的小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗的制备方法，其特征是所述的小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗干粉粒径范围在5-15 μ m。
3.根据权利要求1所述的小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗的制备方法，其特征是所述的小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗每克所含病毒效价为0. 7X IO7-L 5X 107ELD5Q。
4.根据权利要求1所述的小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗的制备方法，其特征是所述的小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗通过口服途径免疫。
5.根据权利要求1所述的小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗的制备方法，其特征是所述的小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗一次免疫接种后，产生至少56天的免疫保护期。
全文摘要
本发明公开了一种小鹅瘟微胶囊化口服活疫苗的制备方法。该疫苗的制造方法是将小鹅瘟SYG毒株通过鹅胚增殖培养后制成疫苗半成品，无菌检验合格后加入5％的蔗糖脱脂乳溶液，搅拌混匀；在上述半成品溶液中加入20％-40％的多孔淀粉，37℃控温搅拌20-40分钟；将上述液体与等体积1％-2.5％的海藻酸钠溶液混合，充分搅拌后经流化床脱水干燥，制成小鹅瘟微胶囊化疫苗干粉。本发明方法科学，简单，生产稳定可靠，疫苗效价损耗较少。采用疫苗微胶囊化技术，不仅使小鹅瘟活疫苗可以通过口服途径免疫，减小了应激反应，而且赋予该活疫苗以缓释功能，产蛋期间的种鹅可照常使用。
文档编号A61K39/23GK102397541SQ201010286400
公开日2012年4月4日 申请日期2010年9月17日 优先权日2010年9月17日
发明者刘学贤, 吕晓娟, 徐步, 戴有理, 李新华, 龚建森 申请人:江苏省家禽科学研究所