专利名称：新的胰高血糖素类似物的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有改进的物理稳定性和溶解度并且具有延长的作用特征的新的胰高血糖素肽类似物，涉及所述肽在治疗中的用途，涉及包括将所述肽给予患者的治疗方法，并涉及所述肽在药物制备中的用途。
背景技术：
对血糖水平的精确控制对人以及其它哺乳动物都极其重要。十分确定的是胰岛素和胰高血糖素两种激素对于维持适当的血糖水平很重要。胰岛素通过葡萄糖的外周摄取增加和自肝脏输出的葡萄糖减少来降低血糖水平而作用于肝脏和外周组织，与此同时，胰高 血糖素通过糖异生和糖原分解上调来提高血糖水平而主要作用于胰腺和肝脏。另据报告，胰高血糖素增加脂解作用，诱导酮症并降低血浆中的血浆甘油三酯水平[Schade和Eaton，Acta Diabetologica,1977,14,62]。胰高血糖素是抵抗低血糖的防御机制的重要部分，给予低剂量的胰高血糖素可防止胰岛素诱导性低血糖或改善从低血糖恢复的能力。研究还表明胰高血糖素在大鼠和人中的确减少食物摄取和体重[Schulman等J. Appl. Physiol. 1957，11，419]。因此，胰高血糖素是似乎可信的可促使停止食物摄取的信号。此外，给予较低剂量的胰高血糖素可在不影响血糖的情况下引起饱满感。许多患有糖尿病、特别是2型糖尿病的人体重超重或肥胖。肥胖症表示严重的并且甚至是致命的常见病的高风险因素，对于大多数糖尿病患者，非常需要的是，对他们的治疗不引起体重增加。然而，胰高血糖素由于具有约5分钟的半寿期而在人血浆中快速清除，因此在医药品中具有有限的潜在应用。在需要在延长的时间内保持治疗剂的高血液水平的情况下，其高清除率是不方便的，因为重复给药因而是必须的。在一些情况下，通过应用合适的药物组合物来影响肽的释放特征是可能的，但这种方法有各种缺点，一般不适用。目前可获得作为冻干制剂的重组形式的胰高血糖素，其作用持续时间短，限于几小时，尽管胰高血糖素水平达到的峰值水平远高于内源性胰高血糖素的水平。因此需要化学修饰的胰高血糖素化合物以便按连续水平递送，使得达到较长的生物半寿期，即具有作用特征延长的修饰胰高血糖素肽。此外，胰高血糖素当溶于水溶液时，无法非常久地保持稳定，因为胰高血糖素的物理稳定性极差，且胰高血糖素的溶液在数小时或数天内形成凝胶和原纤维，这取决于肽的纯度、盐浓度、PH和温度。此外，人胰高血糖素在pH 3. 5-9. 5下的溶解度极低下。公开了不同的基于胰高血糖素的类似物和GLP-I/胰高血糖素受体协同激动剂的若干专利申请是本领域已知的，例如专利W02008/086086、W02008/101017、W02007/056362、W02008/152403和W096/29342。公开于这些专利的一些GLP-I/胰高血糖素受体协同激动剂涉及相对于天然人胰高血糖素的特定突变。所公开的其它胰高血糖素类似物在天然人胰高血糖素的特定位置上是聚乙二醇化的(例如W02007/056362)或者是酰化的(例如W096/29342)。用于防止低血糖的胰高血糖素公开于例如专利申请US 7314859中。除了提供在生理pH下呈稳定的药物组合物的这类修饰胰高血糖素肽以外，本发明的肽还提供具有延长的作用特征的新的修饰胰高血糖素肽。发明概述本发明涉及具有改进的物理稳定性和溶解度的新的胰高血糖素肽，涉及所述肽在治疗中的用途，涉及包括将所述肽给予患者的治疗方法，并涉及所述肽在制备用于治疗糖尿病、进食障碍、肥胖症及相关疾病和病况的药物中的用途。本发明人出人意料地发现，人胰高血糖素被包含亲脂部分和2个带负电荷的部分的取代基酰化的许多位置与胰高血糖素肽序列中的特 定突变的组合，导致产生具有改进的物理稳定性和溶解度并且对胰高血糖素受体具有保持的活性的胰高血糖素激动剂。在第一个实施方案(实施方案I)中，本发明涉及胰高血糖素肽或其药学上可接受的盐、酰胺、酸或前药，所述胰高血糖素肽包含=SEQID 1，其中X17表示Lys，X18表示Lys，X2I表不Glu ;在所述膜闻血糖素妝的氣基酸位置X2、X1(l、X12、X16、X2(l、X24、X25、乂28、和/或X30中的至多5个氨基酸取代；和包含两个或更多个带负电荷的部分的取代基，其中所述带负电荷的部分之一是亲脂部分的远端，且其中所述部分在所述胰高血糖素肽的一个或多个下列氨基酸位置中在Lys的ε位上、在Orn的δ位上或在Cys的硫上连接X1(I、X12> X20>乂24、父28、^29 和 I 或父3。。本发明还涉及本发明的化合物在治疗中的用途，涉及包含本发明化合物的药物组合物和本发明的化合物在制备药物中的用途。
图I表示胰高血糖素和类似物的pH依赖性溶解度(pH dependantsolubility)。将肽溶于水中至约lmg/ml，调整等分量至不同pH。将样品在室温下保存5天。离心后测量PH，使用内部胰高血糖素标准品，通过反相HPLC测定浓度。“I”为胰高血糖素(黑线条和(· ))，“2”为实施例3的胰高血糖素类似物(灰线条和(□))。图2表示在sc给予100nmol/kg、300nmol/kg或1000nmol/kg实施例3的胰高血糖素类似物后大鼠的累积食物摄取。数据=平均值+/_sem，η = 5_6。图3表示在sc给予300nmol/kg实施例4的胰高血糖素类似物后大鼠的累积食物摄取。数据=平均值+/-sem，η = 5-6。图4表示在sc给予300nmol/kg实施例5的胰高血糖素类似物后大鼠的累积食物摄取。数据=平均值+/-sem，η = 5-6。图5表示在iv和sc给予大鼠后实施例3的胰高血糖素类似物的PK。半寿期(iv.)约8. 6小时±0.5，半寿期(sc.)约9. 4小时±0. 9，数据=平均值+/-sem。图6表示仅给予实施例3的胰高血糖素类似物或与GLP-I类似物G3 —起给予的饮食诱导性肥胖(DIO)大鼠中的体重减轻。点画线分别表示开始给药和剂量降低。数据=平均值+/-sem。图7表示仅给予实施例3的胰高血糖素类似物或与GLP-I类似物G3 —起给予的饮食诱导性肥胖大鼠中第14天的Λ体重。误差棒表示显著差异(单因素方差分析，Bonferroni事后检验)。数据=平均值+/-sem。图8表示仅给予实施例3的胰高血糖素类似物或与GLP-I类似物G3 —起给予的饮食诱导性肥胖大鼠中给药第11天的血糖概况。点画线表示给药。数据=平均值+/-sem。
图9表示仅给予实施例3的胰高血糖素类似物或与GLP-I类似物G3 —起给予的饮食诱导性肥胖大鼠中的食物摄取。数据=平均值+/-sem。图10表示仅给予实施例3的胰高血糖素类似物或与GLP-I类似物G3 —起给予的饮食诱导性肥胖大鼠中在研究结束时测量的胰岛素水平。采用单因素方差分析和Dunnet事后检验将各组与溶媒高脂肪饲喂组进行比较来比较各组。数据=平均值+/-sem。图11表示仅给予实施例3的胰高血糖素类似物或与GLP-I类似物G3 —起给予的饮食诱导性肥胖大鼠中在研究结束时测量的胆固醇水平。采用单因素方差分析和Dunnet事后检验将各组与溶媒高脂肪饲喂组进行比较来比较各组。数据=平均值+/-sem。图12表示胰高血糖素类似物在IOmM HEPES缓冲液(pH = 7. 5)中的溶解度。将缓冲液加至胰高血糖素类似物中至250 μ M的标称浓度，I小时后，离心后测量浓度。采用化学发光氮特异性HPLC检测器，评价浓度。图13表示胰高血糖素类似物的稳定性。将胰高血糖素类似物加至缓冲液中至250 μ M的标称浓度，I小时后记录UPLC层析图。将溶液在30°C下保存6天，然后将样品过滤，记录新的UPLC。峰值(214nM)的曲线下面积用作溶液中肽的浓度的衡量。图14表示ThT(硫磺素T)原纤维形成测定法中得到的延迟时间(左Y轴)和回收率(右Y轴)。栏I :制剂I的延迟时间和回收率。栏2A :制剂2中实施例3的胰高血糖素类似物的延迟时间和回收率。栏2B:制剂2中胰岛素类似物G5的回收率。栏3A:制剂3中实施例3的胰高血糖素类似物的延迟时间和回收率。栏3B :制剂3中GLP-I类似物Gl的回收率。栏4 :制剂4中实施例3的胰高血糖素类似物的延迟时间和回收率(由于技术原因未测定GLP-I类似物G3回收率)。栏5 :制剂5中胰岛素类似物G5的延迟时间和回收率。栏6 :制剂6中GLP-I类似物Gl的延迟时间和回收率。图15表示与DPP-IV (2 μ g/ml) 一起在HEPES缓冲液中于37°C温育的GLP-1、胰高血糖素和实施例3的胰高血糖素类似物。测定半寿期分别为11分钟、32分钟和260分钟。发明描述本发明的其它实施方案包括如下实施方案2.实施方案I的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽在所述胰高血糖素肽中包含0、1、2、3、4或5个氨基酸残基取代。3.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽在所述胰高血糖素肽中包含O个氨基酸残基取代。4.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽在所述胰高血糖素肽中包含I个氨基酸残基取代。5.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽在所述胰高血糖素肽中包含2个氨基酸残基取代。6.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽在所述胰高血糖素肽中包含3个氨基酸残基取代。7.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽在所述胰高血糖素肽中包含4个氨基酸残基取代。8.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽在所述胰高血糖素肽中包含5个氨基酸残基取代。
9.实施方案I的胰高血糖素肽，其中所述氨基酸取代可位于所述胰高血糖素肽的下列位置上X2 表不 Ser、Aib 或 D-Ser ；X1。表示 Tyr、Lys、Cys 或 Orn ;X12 表不 Lys> Orn> Cys、Arg、Leu、Ile 或 His ;X16 表不 Ser、Glu、Thr、Val、Phe> Tyr> lie、Leu、Lys 或 Orn ；X2tl 表不 Gin、Cys、Ala、Lys 或 Orn ;X24 表不 Gin、Lys> Cys、Ala、Arg、His、Glu、Asp、Gly、Ser 或 Orn ；·
X25 表示 Trp> Phe> Tyr> (p) Tyr> His、Gin、Lys 或 Orn ；X27 表不 Met、Met (0)、Leu、Lys> Orn> lie、Leu、Gln 或 Glu ；X28 表不 Asn、Lys> Cys> Ser、Thr、Glu、Asp、Gln 或 Orn ；X29 表不 Thr、Glu、Cys、Asp、Lys> Pro 或 Orn ;和X30 不存在或表示 Cys、Lys、Pro 或 Orn。10.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述氨基酸取代可位于所述胰高血糖素肽的下列位置上.X1表示Ser, X10表示Tyr, X12表示Lys, X16表示Ser或Lys, X2tl表示 Gin, X24 表示 Gin、Lys 或 Orn, X25 表示 Trp, X27 表示 Leu, X28 表示 Asn、Ser 或 Asp, X29表示Thr、Lys, X30不存在或表示Lys。11.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X2表示Ser、Aib或D-Ser。12.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X2表示Ser。13.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中Xltl表示Tyr、Lys、Cys或Orn。14.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中Xltl表示Tyr。15.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中Xlt!表不Lys。16.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中Xltl表示Cys。17.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中Xltl表示Orn。18.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X12表示Lys、Orn、Cys、Arg、Leu、Ile 或 His。19.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X12表示Lys。20.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X12表示Orn。21.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X12表示Cys。22.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中乂16表示3虹、6111、1111'、￥&1、？1^、Tyr> lie、Leu> Lys 或 Orn023.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X16表示Ser或Lys。24.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X16表示Ser。25.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X16表不Lys。26.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X2tl表示Gin、Cys、Ala、Lys或Orn027.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X2tl表示Gin。28.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X2tl表示Cys。29.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X2tl表示Lys。
30.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X2tl表示Orn。31.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X24表示Gln、Lys、Cys、Ala、Arg、His、Glu、Asp、Gly、Ser 或 Orn。32.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X24表示Lys、Orn或Cys，X27表7j\ Leu033.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X24表示Lys、Cys或Orn。34.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X24表示Gin、Lys或Orn。35.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X24表示Lys或Orn。·36.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X24表示Gin。37.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X24表示Cys。38.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X24表示Lys。39.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X24表示Orn。40.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X25表示Trp、Phe、Tyr、(p)Tyr、His、Gin、Lys 或 Orn。41.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X25表示Phe、Tyr、(p)Tyr、His、Gin、Lys或 Orn。42.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X25表示Lys、His或(p) Tyr。43.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X25表示Trp。44.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X27表示Met、Met (0)、Leu、Lys、Orn、lie、Leu、Gln 或 Glu。45.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X27表不Leu。46.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X28表示Asn、Lys、Ser、Cys、Thr、Glu、Asp、Gln 或 Orn。47.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X28表示Asn、Ser或Asp。48.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X28表示Asn。49.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X28表示Ser。50.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X28表不Asp。51.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X28表示Lys、Cys或Orn。52.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X28表示Lys。53.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X28表示Cys。54.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X28表不Orn。55.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X29表示Thr、Glu、Asp、Cys、Lys、Pro 或 Orn056.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X29表示Cys、Lys或Orn。57.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X29表示Lys或Orn。58.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X29表示Thr或Lys。59.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X29表不Thr。60.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X29表示Lys。61.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X29表示Cys。
62.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X29表示Orn。63.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X3tl不存在或表示Cys、Lys、Pro或 Orn064.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X3tl不存在或表示Cys、Lys或Orn065.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X3tl不存在或表示Lys。66.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽,其中X3c!表不Cys。67.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X3tl表示Orn。
68.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X3tl不存在。69.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X3tl表示Lys。本发明的其它实施方案涉及70.前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基具有下式II Z1-Z2-Z3-Z4ElI]其中，Z1表示下式Ila、IIb或IIc之一的结构；
OH0
O O ,N-MO'儿
Hod*fjf ( m
π H
IIaIIbIIc其中式IIa中的η为6-20，式IIc 中的 m 为 5-11，式IIc的COOH基团可与苯环上的2、3或4位连接，式Ila、IIb和IIc中的符号*表示Z2中氮的连接点；如果Z2不存在，则Z1在符号*处与Z3的氮连接，如果Z2和Z3不存在，则Z1在符号*处与Z4的氮连接；Z2不存在或表示下式IIcU He、Hf、Hg、Ilh、Iii、IIj或IIk之一的结构；
权利要求
1.一种胰高血糖素肽或其药学上可接受的盐、酰胺、酸或前药，所述胰高血糖素肽包含SEQ ID I，其中X17表不Lys, X18表不Lys, X21表不Glu ;在所述膜闻血糖素妝的氣基酸位置X2、X1Q、X12、X16> X20> x24、X25> X27> X28> X29和/或X3O中的至多5个氨基酸取代；和包含两个或更多个带负电荷的部分的取代基，其中所述带负电荷的部分之一是亲脂部分的远端，且其中所述部分在所述胰高血糖素肽的一个或多个下列氨基酸位置中在Lys的ε位上、在Orn 的 δ 位上或在 Cys 的硫上连接X1(I、X12、X20> X24> X28> X29 和 / 或 X300
2.权利要求I的胰高血糖素肽，其中所述氨基酸取代位于所述胰高血糖素肽的下述所述位置上X2 表不 Ser > Aib 或 D-Ser ；Xi0 表示 Tyr > Lys > Cys 或 Orn ；X12 表不 Lys> Orn> Cys、Arg、Leu、Ile 或 His ；X16 表不 Ser> Glu、Thr> Val、Phe> Tyr> lie、Leu、Lys 或 Orn ；X20 表不 Gin、Cys、Ala、Lys 或 Orn ；X24 表不 Gin、Lys> Cys、Ala、Arg、His、Glu、Asp、Gly、Ser 或 Orn ；X25 表示 Trp> Phe> Tyr> (p) Tyr> His、Gin、Lys 或 Orn ；X27 表不 Met、Met (0)、Leu、Lys> Orn> lie、Leu、Gln 或 Glu ；X28 表不 Asn、Lys> Cys> Ser> Thr> Glu、Asp、Gln 或 Orn ；X29 表不 Thr、Glu、Cys、Asp、Lys、Pro 或 Orn ;和X30不存在或表示Cys、Lys、Pro或Orn。
3.权利要求1-2的胰高血糖素肽，其中所述取代基在式I化合物的一个或多个下列氨基酸位置中在Lys的ε位上或在Orn的δ位上或在Cys的硫上连接Χ1(Ι、Χ12、Χ2(Ι、Χ24、Χ28、X29 和 / 或 X300
4.权利要求1-3中任一项的胰高血糖素肽，其中所述取代基具有下式II Z1-Z2-Z3-Z4 [II] 其中， Z1表不下式Ila、IIb或IIc之一的结构； OH0 H0H Π HIIaIIbIIc 其中式IIa中的η为6-20， 式IIc中的m为5-11, 式IIc的COOH基团可与苯环上的2、3或4位连接， 式Ila、IIb和IIc中的符号*表示与Z2中氮的连接点， 如果Z2不存在，则Z1在符号*处与Z3的氮连接，如果Z2和Z3不存在，则Z1在符号*处与Z4的氮连接， Z2不存在或表示下式IIcU He、Hf、Hg、IIh, Iii, IIj或IIk之一的结构；
5.权利要求4的取代基，其选自下式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf或IIIg之一的结构
6.权利要求4的取代基，其选自下式IVa、IVb、IVc或IVd之一的结构
7.权利要求1-6的胰高血糖素肽，其选自 NE24-([2-[2-[2-[[(4S)-5-羟基-4-[(18-羟基-18-氧代十八烷酰基)氨基]5-氧代戊酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]])[Lys17,Lys18, Glu21, Lys24, Leu27]胰高血糖素
8.一种药物组合物，其包含权利要求1-5中任一项的胰高血糖素肽。
9.权利要求8的药物组合物，其还包含一种或多种其它的治疗活性化合物或物质。
10.权利要求9中任一项的药物组合物，其还包含GLP-I化合物。
11.权利要求8-10中任一项的药物组合物，其还包含胰岛素化合物。
12.权利要求8-11中任一项的药物组合物，其适于胃肠外给药。
13.用于治疗的权利要求1-5中任一项的胰高血糖素肽。
14.权利要求1-5中任一项的胰高血糖素肽在制备药物中的用途。
15.权利要求1-5中任一项的胰高血糖素肽在制备用于治疗或预防高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、I型糖尿病和肥胖症的药物中的用途。
16.权利要求1-5中任一项的胰高血糖素肽在制备用于以下方面的药物中的用途延迟或防止2型糖尿病的疾病进展、治疗肥胖症或预防体重超重、减少食物摄取、增加能量消耗、减轻体重、延迟从葡萄糖耐量减低(IGT)到2型糖尿病的进展；延迟从2型糖尿病到需要胰岛素的糖尿病的进展；调节食欲；引起饱满感；防止成功减轻体重后体重反弹；治疗与体重超重或肥胖症有关的疾病或状态；治疗贪食症；治疗暴食症；治疗动脉粥样硬化、高血压、2型糖尿病、IGT、血脂异常、冠心病、肝脂肪变性，治疗β_阻断剂中毒，抑制胃肠道蠕动，所述抑制可用于与采用X射线、CT扫描和NMR扫描等技术进行的胃肠道检查结合。
17.权利要求1-5中任一项的胰高血糖素肽在制备用于治疗或预防以下疾病的药物中的用途低血糖、胰岛素诱导性低血糖、反应性低血糖、糖尿病性低血糖、非糖尿病性低血糖、空腹低血糖、药物诱发性低血糖、胃旁路术诱发性低血糖、妊娠期低血糖、酒精诱发性低血糖、胰岛素瘤和Von Girkes病。
全文摘要
本发明涉及具有延长的作用特征和改进的溶解度和稳定性的新的肽化合物，涉及所述化合物在治疗中的用途，涉及包括将所述化合物给予有需要的患者的治疗方法，并涉及所述化合物在制备药物中的用途。就高血糖症、糖尿病和肥胖症以及与高血糖症、糖尿病和肥胖症有关的各种疾病或病况的治疗而言，本发明的化合物尤其引人关注。
文档编号A61K38/26GK102918056SQ201180025883
公开日2013年2月6日 申请日期2011年3月28日 优先权日2010年3月26日
发明者J.F.劳, T.克鲁泽, L.林德罗思, H.托格森, J.科福埃德, K.达尔 申请人:诺沃—诺迪斯克有限公司