专利名称：包含cFms胞外片段的融合蛋白质及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物医药工程技术，尤其涉及一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质及其制备方法和应用。
背景技术：
白细胞介素-34(IL_34)和巨噬细胞刺激因子(M-CSF)属于细胞生长因子。虽然在DNA序列上没有相似性，它们却共用受体cFms。虽然彼此间有许多生物学功能相似，但与受体结合后所利用的细胞内信号传递通路不完全相同，并且彼此在组织中表达也有差异。白细胞介素-34和巨噬细胞刺激因子参与单核细胞/巨噬细胞系细胞的生存、增殖、分化和激活。在免疫反应和炎症中，白细胞介素-34和巨噬细胞刺激因子与其受体(cFms)结合激活单核细胞/巨噬细胞，促进细胞毒性功能，细胞吞噬功能，化学趋向性和细胞因子的产生，调节树突状细胞的功能。IL-34/M-CSF/cFms也在骨骼代谢方面发挥重要作用。IL-34/M-CSF与核因子kappa-B受体配体活化子(RANKL) —道参与人破骨细胞前体的增殖、分化和融合，并参与后期骨质的吸收。致炎因子白细胞介素-1 (IL-1)和肿瘤坏死因子a (TNFa)能刺激人成纤维细胞、软骨细胞、类风湿性关节炎(RA)关节滑膜血管内皮细胞生成IL-34和M-CSF。在自身免疫性疾病患者的血浆和关节滑膜液中，IL-34和M-CSF水平明显增高。M-CSF敲除的小鼠(Csflop/op)不能诱发关节炎。在小鼠关节炎模型，应用抗M-CSF抗体或M-CSF抑制剂能减少小鼠关节中巨噬细胞数目及降低IL-1和TNFa水平，抑制破骨细胞形成和激活，减轻骨骼和软骨的破坏，减弱疾病活动性，降低疾病的整体临床评分。
在骨巨细胞瘤，IL-34表达水平增高，参与RANKL诱导的破骨细胞溶骨作用。给小鼠腹腔内注射外源性IL-34，增加单核细胞/巨噬细胞系分化和增殖，并且诱导破骨细胞分化和骨质吸收，引起骨质疏松。用基因工程方法在M-CSF缺失小鼠(Csflop/op)体内表达IL-34，可以恢复动物由于M-CSF缺失所致的骨质、破骨细胞、组织巨噬细胞、生育等方面缺陷。在RA病人，TNF a促使成纤维样滑膜细胞产生IL-34，参与破骨细胞的形成和激活。除了在自身免疫性炎性疾病中扮演重要角色外，IL-34/M-CSF也在肿瘤生长、发育和转移中起重要作用。M-CSF水平与许多恶性肿瘤的预后相关。在许多恶性肿瘤，血中M-CSF水平增高，肿瘤的预后则差。在肿瘤异种移植模型动物上，抑制cFms则能抑制肿瘤转移导致的溶骨性骨质破坏。用细胞毒性疗法(如化学疗法)治疗乳腺癌时，乳腺上皮细胞增加分泌IL-34和M-CSF，通过与受体cFms结合，促进巨噬细胞浸润。在小鼠乳癌模型，联合细胞毒性疗法和cFms受体阻段剂或酪氨酸激酶抑制剂，减少肿瘤相关巨噬细胞(TAM)数量，延长动物的生存率，减慢原发肿瘤的发展和降低肺脏转移。在原发癌组织中，肿瘤相关巨噬细胞数量减少可增加细胞毒性T细胞的数量。而细胞毒性T细胞能增强癌细胞对化疗的敏感性，加强癌症治疗效果。cFms受体含有554个氨基酸，分为三个主要区域(参见图1) :5个IgG样胞外结构域(分别记作Dl、D2、D3、D4、D5)、一个跨膜区域和一个络氨酸激酶的胞内结构域(UniProtKB/Swiss-Prot entry P07333)。在5个IgG样胞外结构域中，结构域D2和结构域D3与IL-34/M-CSF的结合和功能是必需的，结构域Dl与IL-34和M-CSF的稳定结合是必要的。在一定程度上，结构域D4和结构域D5能提高IL-34与cFms的结合及随后引起的细胞内信号传递。
发明内容
本发明的目的，就是为了提供一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质。为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质，由cFms受体的细胞外片段与人免疫球蛋白Fe通过一连接肽相连构成,命名为cFmsE⑶-Fe ;所述cFms受体的细胞外片段由5个IgG样胞外结构域中的至少两个构成,5个IgG样胞外结构域分别记作Dl、D2、D3、D4和D5 ;所述免疫球蛋白Fe来自于IgGl，其编码氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 3所示；所述连接肽的编码氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 4所示。上述一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质,其中，所述的cFms受体的细胞外片段为D1-D2-D3，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 5所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 12所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-001，其编码核苷酸序列如SEQ IDNO. 19所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 26所示。上述一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其中，所述的cFms受体的细胞外片段为D2-D3-D4，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 6所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 13所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-002，其编码核苷酸序列如SEQ IDNO. 20所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 27所示。
上述一种包含cFm s胞外片段的融合蛋白质，其中，所述的cFms受体的细胞外片段为D3-D4，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 7所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQID NO. 14所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-003，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 21所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 28所示。上述一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其中，所述的cFms受体的细胞外片段为D3-D4-D5，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 8所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 15所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-004，其编码核苷酸序列如SEQ IDNO. 22所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 29所示。上述一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其中，所述的cFms受体的细胞外片段为D1-D2-D3-D4，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 9所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 16所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-005，其编码核苷酸序列如SEQ IDNO. 23所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 30所示。上述一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其中，所述的cFms受体的细胞外片段为D2-D3-D4-D5，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 10所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 17所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-006，其编码核苷酸序列如SEQID NO. 24所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 31所示。上述一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质,其中，所述的cFms受体的细胞外片段为D1-D3-D5，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 11所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 18所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-007，其编码核苷酸序列如SEQ IDNO. 25所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 32所示。上述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质的制备方法，包括以下步骤a)合成cFms受体的细胞外片段及连接肽核酸片段；b)将人IgG Fe片段的编码基因克隆到pSec(Invitrogen)质粒中，构成质粒pSec—Fc ；
c)将步骤a)获得的cFms受体的细胞外片段及连接肽核酸片段克隆到步骤b)获得的质粒pSec-Fc中，构建pSec_cFmsEQ)-Fc质粒；d)将步骤c)获得的质粒pSec-cFmsE⑶-Fe转化到宿主细胞中，得到融合蛋白质；所述cFms受体的细胞外片段为D1-D2-D3或D2-D3-D4或D3-D4或D3-D4-D5或D1-D2-D3-D4 或 D2-D3-D4-D5 或 D1-D3-D5 ；所述宿主细胞选自293细胞、CHO-Kl细胞、CHO-S细胞、DG44细胞、COS细胞、BHK细胞、NSO细胞、PerC6细胞、Sf9细胞、Sf21细胞或酵母细胞。上述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质的应用，是用于制备抑制炎症性疾病的药物、抑制破骨细胞引起的骨质疏松症的药物或抑制肿瘤生长和转移的药物。所述的抑制炎症性疾病的药物是用于治疗自身免疫性疾病，炎性疾病，移植物抗宿主病，系统性红斑狼疮，哮喘和牛皮癣，炎性肠道疾病(Inflammatory Bowel Diseases)多发性硬化症和动脉粥样硬化症的药物。所述的抑制破骨细胞引起的骨质疏松症的药物是用于治疗类风湿性关节炎、关节炎、肿瘤转移引起的骨组织吸收过多所致的骨质疏松症的药物。所述的抑制肿瘤生长和转移的药物是用于治疗乳腺癌、肺癌、结直肠癌、前列腺癌或子宫卵巢癌的药物。所述的药物的组合剂型是注射剂、冷冻干燥剂或喷雾剂。本发明是依据IL-34/M-CSF与其受体的结合位点在真核细胞中表达的一种融合蛋白质；该融合蛋白质主要包含两个区域，第一个区域是cFms的细胞外区域，能与IL-34/M-CSF结合，第二个区域是IgG的Fe片段，该片段功能一是增加该融合蛋白质与IL-34/M-CSF的结合能力，二是增加融合蛋白质的血液半衰期，从而减少临床用药次数。进一步，在该融合蛋白质中插入了一个连接肽，其目的是在增加该融合蛋白各功能区域的相对独立性，同时也增加了该融合蛋白质各功能区的结构稳定。本发明描述了cFmsECD-Fc 融合蛋白质 YY-001 至 YY-007 与 IL-34/M-CSF的离体结合实验。本实验中，融合蛋白YY-001与IL-34/M-CSF的结合最好，分别为O. 101-0. 149/0. 099-0. 169nM。本发明描述了cFmsECD-Fc 融合蛋白质 YY-001、YY-003、YY_004 和 YY-005 对 IL-34和M-CSF刺激人全血中性粒细胞趋化因子MCP-1释放的抑制。其中，融合蛋白ΥΥ-001的抑制效应分别达 96% (P < O. 05)和 92% (P < O. 05)。本发明描述了 cFmsECD-Fc融合蛋白质YY-001在离体对IL-34和M-CSF协同RANKL刺激破骨细胞形成的抑制作用。本发明提供的融合蛋白质，具有结合IL-34和结合M-CSF，阻断IL-34/M-CSF配体跟共用受体cFms的结合的作用。该融合蛋白适合治疗异常情况下由IL-34/M-CSF所引起的疾病。对自身免疫性疾病、炎症性疾病、骨质疏松症和肿瘤具有潜在的治疗前景。应用含有本发明融合蛋白质的药物组合能减少或抑制破骨细胞的形成，从而用于骨质疏松症的治疗。应用含有本发明融合蛋白质的药物组合能降低和抑制促炎性因子的释放，减轻炎症引起的组织功能破坏，缓解临床症状，用于治疗自身免疫性疾病，炎症性疾病，如RA，移植物抗宿主病，系统性红斑狼疮，哮喘和牛皮癣，炎性肠道疾病(Inflammatory BowelDiseases)多发性硬化症和动脉粥样硬化症等由IL_34/M_CSF异常引起的疾病。应用含有本发明融合蛋白质的药物组合还能抑制肿瘤生长、转移。
图1显示了 cFms分子的三个主要区域含有五个免疫球蛋白样的胞外结构区域，一个跨膜结构区域和一个胞内酪氨酸激酶结构域。图2显示了融合蛋白YY-001至YY-007的构建模拟图，Dl至D5表示免疫球蛋白样区域，人免疫球蛋白Fe区域表示为Fe，在免疫球蛋白样区域和Fe之间有一连接肽。图3 显不了 YY-001 至 YY-007 的蛋白质印迹(Western Blot)。图4显示了 YY-001至YY-007分别与IL-34的亲和力。图5显示了 YY-001至YY-007分别与M-CSF的亲合力。图6、图7显示了 Y Y-001与IL-34和M-CSF的亲合力。图8 显示了 YY-001、YY-003、YY-004 和 ΥΥ-005 对 IL-34 和 M-CSF 刺激人全血单核细胞趋化因子(MCP-1)释放水平的影响。图9、图10小结ΥΥ-001对IL-34和M-CSF刺激人全血单核细胞趋化因子(MCP-1)释放水平的影响(培养20小时)。图11显示了 ΥΥ-001对破骨细胞形成的抑制作用。
具体实施例方式实施例1表达质粒的构建cFms细胞外区域的编码序列是依据GenBank(BC04752L I)用基因合成法得到。Fe片段(684bp)是以淋巴结cDNA(BD)为模版，以引物1、引物2PCR扩增所得弓丨物1:5，-ctatctcacacatcgacaattcgaagacaaaactcacacatgcccac_3，弓L 2 :5， _aagggaatctagagcggccgctcatttacccggagacagggag_3，YY-001由cFms细胞外区域的第1、第2和第3免疫球蛋白样区(D1、D2、D3)(配合参见图2)与人免疫球蛋白Fe融合而成。在胞外结构域D3和Fe之间，加有一连接肽。所获得的YY-001的DNA序列如SEQ ID NO. 19所示。其中，Dl至D3的PCR片段(831bp)是以引物3、引物4PCR扩增所得引物3:5’ -ccgctcgagatcccagtgatagagcccagt-3!引物 4 :5，-gcataccggttaccacccggaagaacatgga-3!YY-002由cFms细胞外区域的第2、第3和第4免疫球蛋白样区(D2、D3、D4)(配合参见图2)与人免疫球蛋白Fe融合而成。所获得的YY-002的DNA序列如SEQ ID NO. 20所示。其中，D2至D4的PCR片段(921bp)是以引物5和引物6PCR扩增所得引物5:5’ -ccgctcgagtatgtcaaagaccctgcccg-3!引物6:5’ -gcataccggtgacgcttacctctgggg-3!YY-003由cFms细胞外区域第3和第4免疫球蛋白样区(D3、D4)(配合参见图2)与人免疫球蛋白Fe融合而成。其中，D3和D4的PCR片段(615bp)是以合成基因为模版，以引物7和引物6PCR扩增所得。所获得的YY-004的DNA序列如SEQ ID NO. 21所示。引物7 :5，-ccgctcgagcccccagccttgacact-3，YY-004由cFms细胞外区域第3、第4和第5免疫球蛋白样区(D3、D4、D5)(配合参见图2)与人免疫球蛋白Fe融合而成。其中，D3至D5的PCR片段(915bp)是以引物7和引物8PCR扩增所得。所获得的YY-004的DNA序列如SEQ ID NO. 22所示。引物 8 :5，-ttaaccggtgtgggctcctgcagagat-3'YY-005由cFms细胞外区域的第1、第2、第3和第4免疫球蛋白样区(D1、D2、D3、D4)(配合参见图2)与人免疫球蛋白Fe融合而成。所获得的YY-005的DNA序列如SEQ IDNO. 23所示。其中，Dl至D4的PCR片段(1161bp)是以引物3和引物6PCR扩增所得YY-006由cFms细胞外区域的第2、第3、第4和第5免疫球蛋白样区(D2、D3、D4、D5)(配合参见图2)与人免疫球蛋白Fe融合而成。所获得的YY-006的DNA序列如SEQ IDNO. 24所示。其中，D2至D 5的PCR片段(1221bp)是以合成基因为摸版，以引物5和引物8PCR扩增所得。YY-007由cFms细胞外区域的第1、第3和第5免疫球蛋白样区(DU D3、D5)(配合参见图2)与人免疫球蛋白Fe融合而成。其中，D1、D3和D5的PCR片段(849bp)是以合成基因为摸版，先用引物3和引物9PCR扩增得Dl片段；用引物10和引物IlPCR扩增得到D3片段；用引物12和引物8PCR扩增得到D5片段。然后，将Dl、D3和D5三个片段通过连接PCR连在一起。最后，用引物3和引物8将连接后的片段放大，与Fe片段融合而成。所获得的YY-007的DNA序列如SEQ ID NO. 25所示。引物9:5’ -ccagtgtcaaggcagggtctttgacatagagg-3'引物 10 :5，-agaccctgccttgacactggtgcctgcagag-3'引物 11 :5，-ttacctctggctctaccacccggaagaacatg-3'引物I2 :5，-gggtggtagagccagaggtaagcgtcatatgg-3/通过PCR扩增的片段，先用限制性内切酶XolI和AgeI (Invitrogen公司)切割，纯化，插入到改造后的pSecDNA载体,得到表达质粒pSec-cFmsEMD-Fc。对每个表达质粒的编码序列进行了核苷酸序列分析，确认所有表达质粒的序列是正确的。实施例2宿主细胞的转染和融合蛋白质的生产本发明中的多个融合蛋白质是在CH0-KUCH0-S和DG44细胞中表达并分泌到培养液中，用葡萄球菌A蛋白亲和沉析法纯化所得。瞬时表达本发明中YY-001至YY-007融合蛋白，重组质粒用DNA纯化试剂盒(Qiagen公司)提纯后，用脂质体2000 (Invitrogen公司)转染到CH0-K1 (ATCC#CCL61)细胞。在无血清培养液OPT1-MII中培养3天后收集上清液。纯化后的融合蛋白，经ELISA测定浓度后，用SDS-PAGE和免疫印迹分析得到验证。稳定表达本发明中YY-001至YY-007的融合蛋白，用电穿孔法将纯化后的质粒转染到CHO-S细胞或DG44细胞(Invitrogen公司)。48小时后，添加Zeocin或MTX(Invitrogen公司)到培养液中。四周后，用有限密度稀释法进行克隆培养。第八周，用ELISA法测定各克隆细胞株蛋白表达量，挑选高产克隆细胞株进行放大培养。稳定转染的CHO-S或DG44细胞能持久表达大量的融合蛋白，纯化后的融合蛋白用于下面所述的实验验证。实施例3融合蛋白与IL-34和M-CSF体外结合实验本发明应用高灵敏度和高特异性的IL-34和M-CSF检测试剂盒(R&D Systems公司)来测定各融合蛋白与IL-34和M-CSF的亲和力。将不同浓度(O到IOOnM)的融合蛋白(YY-001 至 YY-007)跟 250pM 人 IL-34 或跟 50pM 人 M-CSF (R&D Systems 公司)在室温下孵育过夜，然后用IL-34或M-CSF检测试剂盒检测没有被融合蛋白结合的游离的IL-34和游离的M-CSF。实验结果用软件程序Prism5 (GraphPad公司)非线性拟合后得到的亲和力如表I所示。表I
权利要求
1.一种包含cFms胞外片段的融合蛋白质,其特征在于由cFms受体的细胞外片段与人免疫球蛋白Fe通过一连接肽相连构成，命名为cFmsE⑶-Fe ;所述cFms受体的细胞外片段由5个IgG样胞外结构域中的至少两个构成，5个IgG样胞外结构域分别记作D1、D2、D3、D4和D5;所述免疫球蛋白Fe来自于IgGl，其编码氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 3所示；所述连接肽的编码氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 4所示。
2.根据权利要求1所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其特征在于所述的cFms受体的细胞外片段为D1-D2-D3，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 5所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 12所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-001，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 19所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 26所示。
3.根据权利要求1所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其特征在于所述的cFms受体的细胞外片段为D2-D3-D4，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 6所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 13所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-002，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 20所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 27所示。
4.根据权利要求1所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其特征在于所述的cFms受体的细胞外片段为D3-D4，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 7所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 14所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-003，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 21所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 28所示。
5.根据权利要求1所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其特征在于所述的cFms受体的细胞外片段为D3-D4-D5，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 8所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 15所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-004，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 22所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 29所示。
6.根据权利要求1所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其特征在于所述的cFms受体的细胞外片段为D1-D2-D3-D4，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 9所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 16所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-005，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 23所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 30所示。
7.根据权利要求1所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其特征在于所述的cFms受体的细胞外片段为D2-D3-D4-D5，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 10所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 17所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-006，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 24所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 31所示。
8.根据权利要求1所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质，其特征在于所述的cFms受体的细胞外片段为D1-D3-D5，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 11所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 18所示；所构成的融合蛋白质命名为YY-007，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO. 25所示，其核苷酸序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 32所示。
9.根据权利要求1至8中任意一项所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤 a)合成cFms受体的细胞外片段及连接肽核酸片段； b)将人IgGFe片段的编码基因克隆到pSec (Invitrogen)质粒中，构成质粒pSec_Fc ； c)将步骤a)获得的cFms受体的细胞外片段及连接肽核酸片段克隆到步骤b)获得的质粒 pSec-Fc 中，构建 pSec_cFmsEQ)-Fc 质粒； d)将步骤c)获得的质粒pSec-cFmsECD-Fc转化到宿主细胞中，得到融合蛋白质； 所述cFms受体的细胞外片段为D1-D2-D3或D2-D3-D4或D3-D4或D3-D4-D5或D1-D2-D3-D4 或 D2-D3-D4-D5 或 D1-D3-D5 ； 所述宿主细胞选自293细胞、CHO-Kl细胞、CHO-S细胞、DG44细胞、COS细胞、BHK细胞、NSO细胞、PerC6细胞、Sf9细胞、Sf21细胞或酵母细胞。
10.根据权利要求1至8中任意一项所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质的应用，其特征在于用于制备抑制炎症性疾病的药物、抑制破骨细胞引起的骨质疏松症的药物或抑制肿瘤生长和转移的药物。
11.根据权利要求10所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质的应用，其特征在于所述的抑制炎症性疾病的药物是用于治疗自身免疫性疾病，炎性疾病，移植物抗宿主病，系统性红斑狼疮，哮喘和牛皮癖，炎性肠道疾病(Inflammatory Bowel Diseases),多发性硬化症和动脉粥样硬化症的药物。
12.根据权利要求10所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质的应用，其特征在于所述的抑制破骨细胞引起的骨质疏松症的药物是用于治疗类风湿性关节炎、关节炎、肿瘤转移引起的骨组织吸收过多所致的骨质疏松症的药物。
13.根据权利要求10所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质的应用，其特征在于所述的抑制肿瘤生长和转移的药物是用于治疗乳腺癌、肺癌、结直肠癌、前列腺癌或子宫卵巢癌的药物。
14.根据权利要求10所述的包含cFms胞外片段的融合蛋白质的应用，其特征在于所述的药物的组合剂型是注射剂、冷冻干燥剂或喷雾剂。
全文摘要
本发明提供了一种包含巨噬细胞刺激因子受体(cFms)胞外片段的融合蛋白质，它由cFms受体的细胞外片段与人免疫球蛋白Fc通过一连接肽相连构成，命名为cFmsECD-Fc；cFms受体的细胞外片段由5个免疫球蛋白(IgG)样胞外结构域中的至少两个构成。构成的融合蛋白质包括YY-001、YY-002、YY-003、YY-004、YY-005、YY-006和YY-007。本发明提供的融合蛋白质，具有结合白细胞介素-34(IL-34)和结合巨噬细胞刺激因子(M-CSF)，阻断IL-34/M-CSF配体跟共用受体cFms的结合的作用，适合治疗异常情况下由IL-34/M-CSF所引起的疾病。对自身免疫性疾病、炎症性疾病、骨质疏松症和肿瘤具有潜在的治疗前景。用于制备抑制炎症性疾病的药物、抑制破骨细胞引起的骨质疏松症的药物或抑制肿瘤生长和转移的药物。
文档编号A61P17/06GK103044555SQ201210232648
公开日2013年4月17日 申请日期2012年7月5日 优先权日2012年7月5日
发明者殷勇, 郑学初 申请人:雷克塞德(苏州)生物医药有限公司