专利名称：一种抗真菌作用的金莲花药渣发酵物及其制备工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种抗真菌作用的金莲花药渣发酵物及其制备工艺，属于治疗真菌感染疾病技术领域。
背景技术：
我国中医药学历史悠久，中药业是我国传统产业之一。中药企业在生产出大量中成药的同时，会产生相当数量的药渣，药渣一般为湿物料，极易腐败，味道臭异。早期中药渣处理的形式主要包括填埋、焚烧、固定区域堆放等。这些处理方法不仅耗去大量资金，更造成了资源浪费和严重的污染，如何处理中药渣已经成为一个亟待解决的问题。所以，利用生物技术对中药药渣进行处理，以期达到变废为宝，提高中药资源的利用率备受人们的关·注。药渣中不仅含有丰富的蛋白质、纤维素等初生物质，而且由于现在的提取工艺比较单一(水煎煮)，这些经过提取、煎煮后的中药中的部分活性成分仍残留在药渣中，这些残留的初生及次生物质使得药渣具有很高的再利用价值，因此，药渣作为一种资源开始受到人们的重视，已成为中药现代化研究的重要内容之一。随着大量广谱抗生素的应用、骨髓及器官移植的开展、糖皮质激素及免疫抑制剂的应用，导管介入治疗，特别是艾滋病的流行，念珠菌血症和皮肤、粘膜等真菌感染疾病逐渐增多。真菌感染发生率不断上升，除了常见病原菌感染的数量不断增多外，一些罕见的真菌感染也时有报道，针对真菌病日趋严重的形势，对抗真菌药物的研究也日益增多，但目前疗效高、副作用低的抗真菌药物不多。因此，研究开发高校、无毒、价格低廉、应用方便的抗真菌药物具有深远的意义。金莲花是毛茛科植物金莲花(Trollius chinensis Bunge)的干燥花及花蕾,广泛分布于西南、西北、华北、东北等地区。金莲花具有悠久的药用历史，民间用开水沏当茶，具有清热解毒之功效。目，国内有数十家制药公司生产金莲花中药，有金莲花胶囊、金莲花片齐U、金莲花口服液、金莲花注射液等制剂，临床主要用于治疗感冒、发烧、慢性扁桃体炎、急性鼓膜炎、尿路感染等炎症。据不完全统计，全国每年利用金莲花制药产生的药渣有数百万吨，而绝大多数被废弃掉，不仅污染环境，而且药厂为处理药渣还要消耗大量费用。因此如何将金莲花药渣充分利用，变废为宝，意义深远。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗真菌作用的金莲花药渣发酵物及其制备工艺，工艺流程简单、成本低廉、应用方便，效果好，解决背景技术中存在的上述问题。本发明的目的是这样实现的一种抗真菌作用的金莲花药渣发酵物制备工艺，包含如下工艺步骤
①将干燥后的金莲花药渣粉碎成粉末；
②酵母菌活化增殖培养，取高压灭菌后的增菌液体培养基于无菌容器内，无菌环境下加安琪干酵母5-10克/100ml，置35-37°C恒温培养箱培养5_7 h ；③将活化增值的酵母菌液加入质量体积分数为40—60%的金莲花药渣粉末、4%蛋白胨、4%葡萄糖，混合均匀后继续发酵；
④发酵条件为培养温度30—37°C，培养时间72— 96小时；
⑤发酵结束后，将发酵物加入无水乙醇，使乙醇浓度达到60-80%，在提取器中70°C萃取2-4h，将提取液1500-2500转/分离心15-25分钟；取上清液在旋转蒸发仪上回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏状，80°C烤箱烤干，即得到金莲花药渣发酵物。所述的金莲花药渣发酵物提取率为4-8%，即100克金莲花药渣发酵后用乙醇提取获得4-8克金莲花药渣发酵物，每克金莲花药渣发酵物相当含药渣12. 5-25g。所述的增菌液体培养基比例为蛋白胨40 g、酵母浸粉20 g、葡萄糖40 g，置于1000 ml蒸馏水中。一种抗真菌作用的金莲花药渣发酵物，将干燥后的金莲花药渣粉碎成粉末作为原料，以安琪酵母菌为发酵菌种，同时加入酵母菌生长必须的蛋白胨、葡萄糖营养成分，提取金莲花药渣发酵物，所述金莲花药渣发酵物为发酵品的乙醇提取物，干燥后每克金莲花药渣发酵物相当含药渣12. 5-25g。金莲花药渣发酵物根据需要制成不同剂型，作为抗真菌药物，用于人体的体内、夕卜真菌感染治疗与畜禽真菌感染疾病治疗。将所述金莲花药渣发酵物研磨粉末后，可制成片齐U、胶囊或颗粒剂等剂型，用于口服治疗全身真菌感染疾病；也可以制成霜剂、软膏、洗剂或喷雾剂，治疗皮肤、粘膜等真菌感染。用金莲花药渣发酵物治疗动物体内不同途径真菌感染模型，观察其动物体内外感染真菌的治疗效果，同时观察了其毒性。结果表明金莲花药渣发酵物对感染真菌的实验动物有很好的治疗效果，并未发现任何毒副作用；体外直接抗真菌实验，结果表明对临床分离的致病及耐药真菌菌株有良好的抑制或杀灭效果，其抗真菌浓度明显低于常规的艾叶水煎剂和乙醇提取物。本发明为临床或牲蓄抗真菌药物提供一种新的选择，具有成本低廉、应用方便、效益高等特点。本发明的积极效果是(I)金莲花药渣资源丰富，把金莲花提取药用成分后的药渣和废弃物治理及其资源充分利用有效结合，符合可持续发展和循环经济的基本国策，对国家、企业、消费者都有益，具有推广应用前景，会产生经济效益和社会效益；(2)金莲花药渣发酵药用价值高，制药企业生产金莲花制剂绝大多数是水煎煮提物有效成分，部分有效成分残留在药渣中。本发明应用微生物发酵，经微生物酶的作用可以使一些成分进一步转化，另一方面一些有效成分可用乙醇进一步萃取出来，为金莲花资源的再利用和新用途提供科学依据；(3)制备工艺简单本方法工艺流程简单，不需要特殊仪器和设备，成本低，生产周期短，适合于工业化生产；(4)应用方便，效果明显该制剂用量小、效价比高、储存及应用均方便。并能明显增加真菌感染实验动物的治疗效果；(5)减少污染，增加经济效益金莲花药渣含水量较高，极易腐败，会对环境造成严重的污染，并且药渣的废弃物中尚含有蛋白质、多糖、各种微量元素和维生素及一定量可利用成分，及时对其进行综合利用，不仅可以解决污染问题，还可带来一定的经济效益，具有广阔的前景。
具体实施例方式以下通过实施例，对本发明作进一步说明。、
一种抗真菌作用的金莲花药渣发酵物制备工艺，包含如下工艺步骤
①将干燥后的金莲花药渣粉碎成粉末；
②酵母菌活化增殖培养，取高压灭菌后的增菌液体培养基于无菌容器内，无菌环境下加安琪干酵母5-10克/100ml，置35-37°C恒温培养箱培养5_7 h ；
③将活化增值的酵母菌液加入质量体积分数为40—60%的金莲花药渣粉末、4%蛋白胨、4%葡萄糖，混合均匀后继续发酵；
④发酵条件为培养温度30—37°C，培养时间72— 96小时；
⑤发酵结束后，将发酵物加入无水乙醇，使乙醇浓度达到60-80%，在提取器中70°C萃取2-4h，将提取液1500-2500转/分离心15-25分钟；取上清液在旋转蒸发仪上回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏状，80°C烤箱烤干，即得到金莲花药渣发酵物。在实施例中，本发明按上述制备工艺将金莲花药渣进行发酵，在规定的范围内进行了几个方案的制备，并对其发酵产物提取物进行了体外和体内动物实验，均得到一致的有益结果。实施例一
①酵母菌活化增殖培养增菌液体培养基酵母菌=IOOml :5g，35°C恒温培养箱培养7
h0②活化酵母菌与金莲花药渣比例活化酵母菌液金莲花药渣=IOOml :40g。③发酵条件为温度30°C，时间96小时。④发酵物提取方法发酵物加入无水乙醇，使乙醇浓度达到60%，70°C萃取2h，提取液1500转/分离心25min。上清液回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70 V水浴成膏状，80 V烤箱烤干，即得到金莲花药渣发酵提取物。实施例二
①酵母菌活化增殖培养增菌液体培养基酵母菌=IOOml :8g，36°C恒温培养箱培养6
h0②活化酵母菌与金莲花药渣比例活化酵母菌液金莲花药渣=IOOml :50g。③发酵条件为温度34°C，时间84小时。④发酵物提取方法发酵物加入无水乙醇，使乙醇浓度达到70%，70°C萃取4h，提取液2000转/分离心20min。上清液回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏状，80°C烤箱烤干，即得到金莲花药渣发酵提取物。实施例三
①酵母菌活化增殖培养=YPD液体培养基酵母菌=IOOml :10g，37°C恒温培养箱 培养5
h0②活化酵母菌与金莲花药渣比例活化酵母菌液金莲花药渣=IOOml :60g。③发酵条件为温度37°C，时间72小时。④发酵物提取方法发酵物加入无水乙醇，使乙醇浓度达到80%，70°C萃取3h，提取液2500转/分离心15min。上清液回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏状，80°C烤箱烤干，即得到金莲花药渣发酵提取物。将实施例一、二、三研磨成粉末，分别制成胶囊、片剂、颗粒口服用于动物体内实验，制成霜剂、软膏、洗剂外用进行皮肤粘膜抗真菌实验。
体外抗真菌实验
采用试管法和平皿法观察金莲花药渣发酵提取物(试样)对白色念珠菌和羊毛状小孢子菌体外抗真菌作用，并以氟康唑为阳性对照药，测定最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);结果见表I。表I结果显示，试样对白色念珠菌的抑制作用和杀灭作用几乎与氟康唑相近，只相差一个梯度；试样对羊毛状小孢子菌的抑制作用和杀灭作用与氟康唑一致。其最低抑真菌浓度MIC和杀真菌浓度均较低。表I.试样对白色念珠菌和羊毛状小孢子菌的MIC和MBC
权利要求
1.一种抗真菌作用的金莲花药渣发酵物制备工艺，其特征在于包含如下工艺步骤 ①将干燥后的金莲花药渣粉碎成粉末； ②酵母菌活化增殖培养，取高压灭菌后的增菌液体培养基于无菌容器内，无菌环境下加安琪干酵母5-10克/100ml，置35-37°C恒温培养箱培养5_7 h ； ③将活化增值的酵母菌液加入质量体积分数为40—60%的金莲花药渣粉末、4%蛋白胨、4%葡萄糖，混合均匀后继续发酵； ④发酵条件为培养温度30—37°C，培养时间72— 96小时； ⑤发酵结束后，将发酵物加入无水乙醇，使乙醇浓度达到60-80%，在提取器中70°C萃取2-4h，将提取液1500-2500转/分离心15-25分钟；取上清液在旋转蒸发仪上回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏状，80°C烤箱烤干，即得到金莲花药渣发酵物。
2.根据权利要求I所述之一种抗真菌作用的金莲花药渣发酵物制备工艺，其特征在于所述的金莲花药渣发酵物提取率为4-8%，即100克金莲花药渣发酵后用乙醇提取获得4-8克金莲花药渣发酵物，每克金莲花药渣发酵物相当含药渣12. 5-25g。
3.根据权利要求I或2所述之一种抗真菌作用的金莲花药渣发酵物制备工艺，其特征在于所述的增菌液体培养基比例为蛋白胨40 g、酵母浸粉20 g、葡萄糖40 g，置于1000ml蒸馏水中。
4.一种抗真菌作用的金莲花药渣发酵物，其特征在于将干燥后的金莲花药渣粉碎成粉末作为原料，以安琪酵母菌为发酵菌种，同时加入酵母菌生长必须的蛋白胨、葡萄糖营养成分，提取金莲花药渣发酵物，所述金莲花药渣发酵物为发酵品的乙醇提取物，干燥后每克金莲花药渣发酵物相当含药渣12. 5-25g。
5.根据权利要求4所述之一种抗真菌作用的金莲花药渣发酵物，其特征在于所述金莲花药渣发酵物作为抗真菌药物，用于人体的全身或局部真菌感染治疗与畜禽全身或局部真菌感染疾病的治疗。
6.根据权利要求5所述之一种抗真菌作用的金莲花药渣发酵物，其特征在于所述金莲花药渣发酵物研磨粉末后，制成片剂、胶囊或颗粒剂剂型，用于口服治疗全身真菌感染疾病；制成霜剂、软膏、洗剂或喷雾剂，治疗皮肤、粘膜等真菌感染。
全文摘要
本发明涉及一种抗真菌作用的金莲花药渣发酵物及其制备工艺，属于治疗真菌感染疾病技术领域。技术方案是将干燥后的金莲花药渣粉碎成粉末作为原料，以安琪酵母菌为发酵菌种，同时加入酵母菌生长必须的蛋白胨、葡萄糖营养成分，提取金莲花药渣发酵物，所述金莲花药渣发酵物为发酵品的乙醇提取物，干燥后每克金莲花药渣发酵物相当含药渣12.5-25g。试验结果表明金莲花药渣发酵物对感染真菌的实验动物有很好的治疗效果，并未发现任何毒副作用；对临床分离的致病及耐药真菌菌株有良好的抑制或杀灭效果，其抗真菌浓度与临床常用的抗真菌药物氟康唑、洁尔阴一致。本发明为临床或牲蓄抗真菌药物提供一种新的选择，具有成本低廉、应用方便、效益高等特点。
文档编号A61P31/10GK102727599SQ20121023618
公开日2012年10月17日 申请日期2012年7月10日 优先权日2012年7月10日
发明者储金秀, 勾向博, 安春娜, 张博男, 张潇, 王建行, 王志路, 王树华, 白静, 胡雷, 韩婷, 韩淑英 申请人:河北联合大学