专利名称：促进水通道蛋白-5表达的中药组合物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种促进水通道蛋白-5表达的中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
干燥综合征(Siccasyndrome,SS)又名斯耶格伦综合征(Sjoren’S syndromeSS),是一种主要累及外分泌腺体的慢性炎症性自身免疫性疾病。以淋巴细胞介导的病变主要侵犯泪腺和大小唾液腺等外分泌腺，导致腺体破坏和分泌减少，同时可累及全身多个系统组织，引起内脏损害。近年来有学者证实水分子通道蛋白-5 (aquaporins-5, AQP5)与涎腺的分布以及腺泡细胞的转运异常上密切相关。水通道蛋白(aquaporins,AQP)是近10年来陆续发现的一族细胞膜水转运蛋白，它能介导自由水被动跨运生物膜。迄今为止，在哺乳动物体内至少发现有13种水通道蛋白(AQP0-12)，它们形成一个AQPS家族。近年来，国内外专家对AQP5在干燥综合征发病中的作用进行不懈探索，国外学者研究报道=AQPl和AQP5被证实与唾液的分泌密切相关，AQP5在毛细血管内皮细胞和肌上皮细胞中AQPl的协调下，将唾液转移至纹状管、分泌管中，对调节水分转运的速率，维持唾液的分泌起了重要作用。研究发现AQP5亦存在于角膜上皮和泪腺中，与唾液、泪液的分泌均均有关。国内专家在此方面也进行相关研究，但大多从养阴生津或清热润燥角度探讨中药方对干燥综合征的作用，而本研究根据中医“气能生津、津能载气”的原理，首次从气阴两虚的着手，探讨“益气养阴、布津通络”对SS的作用，从AQP5角度探究增液布津汤对SS模型鼠的干预作用，为治疗SS提供了靶点，也使我们能够从细胞分子水平上明确SS的发病机制。
发明内容
解决的技术问题本发明提供一种促进水通道蛋白-5表达的中药组合物及其制备方法和应用。技术方案促进水通道蛋白-5表达的中药组合物，按质量份由以下中药组成黄苗(Astragali Radix) 15-20 份，麦冬(Ophipogonis Radix) 15-20 份，太子参(Pseudostellariae Radix) 10-15 份，枸杞子(Lych Fructus) 10-15 份，生地(PehmanniaeRadix) 15-20 份，赤苟药(Paeoniae Radix Rubra) 10 份，白苟药(Paeoniae Radix Alba)10 份，桃仁(Persicae Semen) 10 份和紫毙(Asteris Radix ET Rhizoma) 10 份。中药组合物制备增液布津汤的方法，向药材组合物中加入8-10倍水，浸泡I小时，煎煮两次，每次煎煮40min，合并滤液，水浴蒸发浓缩至每毫升含生药I. 365g，置于4°C冰箱保存备用。上述中药组合物在制备治疗干燥综合征药物中的应用。上述中药组合物在制备干预干燥综合征模型鼠颌下腺水通道蛋白-5药物中的应用。、
鉴于对干燥综合征病因病机的深刻认识，根据气阴两虚、肺失宣布、络道瘀滞的基本病理变化特点，提出益气养阴、布津通络为干燥综合征的治疗大法，并依法组方，反复实践和摸索，创造出了中药复方制剂一益气增液汤。在养阴生津的同时应注意疏导布散津液，通行络道。一则护正，阴津充足，津有所布，五脏六腑得以充灌，功能恢复常态。气能生津、气能行津，有利津液补充、络道通畅。二则祛邪，阴津充足，津道充盈，有助于清除燥热。配合凉血散瘀，养血敛阴之品，营阴得以收敛补养。少佐辛润活血之药，通经络，开玄府，畅通津液运行的道路，使津液布达于五官 九窍，五脏六腑，四肢白骸，发挥濡润作用。增液布津汤由麦冬20g、黄芪20g、太子参10g、枸杞子10g、生地15g、赤芍药10g、白芍药log、桃仁10g、紫菀IOg九味药物组成。方中重用麦冬为君药。古人云“治火可用苦寒，治燥必用甘寒。”麦冬味甘，性微寒。色兼黄白，能入胃以养胃液，入脾以助脾散精于肺，引肺气清肃下行，统调水道以归膀肤，升降濡润之中，兼具开通之力，达清热滋阴润燥之旨，防燥热阴伤之患。重用黄芪为君药。黄芪味甘，性微温，归肺、脾经。具有补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌功效。明《本草纲目》载“耆长也，黄芪色黄，为补者之长故名……”《本草汇言》载“黄芪，补肺健脾，卫实敛汗，驱风运毒之药也……”《本草逢原》载“黄芪能补五脏诸虚，治脉弦自汗，泻阴火，去肺热，无汗则发，有汗则止。”本病肺脾之气俱虚，运用黄芪能达补肺健脾之效。太子参为臣药，性甘、微苦、平。归脾、肺经。具有补气健脾，生津润肺功效。用于脾肺气阴两虚证。本品能补脾肺之气，兼能养阴生津，其性略偏寒凉，属补气药中的清补之品。宜用于热病之后，气阴两亏，倦怠自汗，饮食减少，口干少津，而不宜温补者。因其作用平和，多入复方作病后调补之药。治疗脾气虚弱、胃阴不足所致食少倦怠，口干舌燥，宜与山药、石斛等益脾气、养胃阴之品同用，与黄芪共同发挥补气作用。枸杞子为臣药甘，平。归肝、肾经。滋补肝肾，益精明目。用于虚劳精亏，腰膝酸痛，眩晕耳鸣，内热消渴，血虚萎黄，目昏不明。明代《药鉴》指出枸杞子“滋阴，不致阴衰……”。《食疗本草》记载枸杞坚筋耐老，祛风，补益筋骨，能益人，去虚老。《名医别录》记载枸杞下胸肋气，客热头痛，补内伤大劳，嘘吸强阴，利大小便。《本草纲目》记载枸杞性味甘平，归肝，肾经，滋补肝肾，益精明目。《本草备要》记载枸杞润肝清肝，滋肾益气，生精助阳，补虚劳，强筋骨，祛风明目，利大小便。生地黄味甘、苦，性寒。归心、肝、肺经。既能凉血，又能滋阴，具清热滋阴、凉血止血、生津止渴的功效。在《神农本草经》记载生地黄能“逐血痹”、“除寒热积聚”、“除痹”，《珍珠囊》中记载“生地黄凉血，生血，补肾水真阴”，“为清热凉血养阴生津之要药发”。因此，生地黄为臣药，与麦冬二药合用，金水相生，畅利三焦。赤芍药酸苦性平，有散邪行血之功，《别录》言“通顺血脉，缓中，散恶血，逐贼血。”白芍药酸苦，性平，有敛阴益营之力，“收阴气而泄邪气”、“敛津液而益荣”一泻一补，有相辅相成之效。白芍药敛阴、赤芍药凉血，合用敛阴凉血而不恋邪。桃仁味苦甘，性平，入心、肝、大肠经。具有破血行瘀，润燥滑肠的功效。《本草纲目》记载桃仁主血滞风痹，《用药心法》曰“桃仁，苦以泄滞血，甘以生新血，故凝血须用。又去血中之热。”李杲用桃仁治疗“热入血室，腹中滞血，皮肤血热燥痒，皮肤凝聚之血”。紫菀虽苦辛而温，但柔润有余，非燥烈可比。专能开泄肺郁，宣通窒滞，兼疏肺家气血，达宣开肺气，输布津液之效，以助药力，引诸药直达病所。以上五药共为佐使。诸药合用，共奏养阴益气、宣肺布津、活血化瘀之功效。在临床研究中证实，增液布津汤能有效缓解患者在口干、口腔烧灼感、眼干、眼异物感、鼻干方面的主观症状，提高生活质量；与我们观察到患者舌质、舌面、舌苔、舌下唾液聚集的临床体征相吻合。在实验室指标方面，增液布津汤能有效增加患者的唾液流量、泪流量；并且能纠正T淋巴细胞亚群等异常的实验室指标。说明中药不仅能缓解患者口、眼干症状，而且能够纠正免疫紊乱。增液布津汤的组成药物大多数具有调节免疫的作用。现代药理证明，麦冬含多种沿阶草留体皂苷、P —谷留醇、氨基酸、多量葡萄糖及其葡萄糖苷等。具多种药理作用。其中对免疫系统的调节主要体现在麦冬多糖及皂苷上。国内外大量的研究表明，多糖对体液免疫、细胞免疫功能的促进和诱生多种细胞因子，是多糖发挥药效作用的机制之一。麦冬多糖能显著增加小鼠脾重量、增强小鼠碳粒廓清作用、刺激小鼠血清中溶血素的产生，可显著对抗环磷酰胺引起的小鼠白细胞下降，并能抑制淋巴细胞粘附于细胞外基质，改善由淋巴 细胞浸润所致肝功能损伤。同时短葶山麦冬皂苷C能显著的增加小鼠免疫器官胸腺、脾脏的重量，可显著增加小鼠的碳粒廓清作用。黄芪能增强网状内皮系统的吞噬功能，使血白细胞及多核白细胞数量显著增加，使巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数显著上升，对体液免疫、细胞免疫均有促进作用。正常人服用后，血浆IgM，IgE显著增加，以全草效果最好。黄芪能促进血清溶血素形成，提高空斑形成细胞的溶血能力，具明显的碳粒廓清作用和增加脾重的作用。黄芪具有增强病毒诱生干扰素的能力，易感冒者在感冒流行季节服用黄芪，不仅可使感冒次数明显减少，而且可使感冒症状较轻，病程较短。黄芪多糖有明显的抗疲劳作用，能显著延长氢化可的松耗竭小鼠的游泳时间和增加肾上腺素重量，对小鼠多种缺氧模型均具有显著的耐受能力，可明显减少全身性耗氧以及增加组织耐缺氧能力。黄芪多糖有明显的耐低温作用，能使正常以及虚损小鼠的抗生存时间明显延长。黄芪可使细胞的生理代谢增强，这可能是通过细胞内cAMP，cGMP的调节作用来完成的。黄芪还能促进血清和肝脏的蛋白质更新，对蛋白质代谢有促进作用，同时还有降压作用、保肝作用、调节血糖、抗菌及抑制病毒作用、激素样作用。太子参含氨基酸、多糖、皂苷、黄酮、鞣质、香豆素、留醇、三萜及多种微量元素等。太子参总皂甙对小鼠抗疲劳、耐缺氧、耐低温有明显的作用。太子参总皂甙能增加小鼠免疫器官的重量，对小鼠网状内皮系统(RES)吞噬功能有明显的激活作用，对小鼠免疫后血清中溶血素的生成有一定的促进趋势。太子参对淋巴细胞有明显的刺激作用。枸杞子有增强非特异性免疫作用，对白细胞介素II也有双向调解作用。小鼠灌服枸杞子水提取物或肌注醇提取物和枸杞多糖，均有提高巨噬细胞的吞噬功能，增强血清溶菌酶的作用，提高血清中抗绵羊红细胞抗体的效价，还能增加鼠脾脏中抗绵羊红细胞的抗体形成细胞的数量。从枸杞子提取的枸杞多糖可见到对动物有放射增敏现象，可保护小鼠免受因放射损伤引起的免疫功能低下，对下降的白血球有提升效果。生地药血清和麦冬药血清均能够明显促进VEC线粒体代谢MTT，具有良好的促VEC增殖的作用。赤芍有抗血栓形成、抗血小板聚集、抗凝血、激活纤溶作用，与其清热凉血功效有关；其还有保肝、镇痛、镇静、解痉等作用，与其散瘀止痛功效有关。研究表明赤芍抑制血小板聚集是通过增加cAMP水平来实现的。当血小板内cAMP水平升高时，血小板的黏附、聚集、释放功能均会受到抑制。桃仁及其多种水提物具有良好的抗炎作用，从其水溶性组织分离出的蛋白质PR-B抗酶活性研究证实，其抗炎机制是对炎症化学介质缓激肽的抑制；有研究表明，桃仁水提物、苦杏仁苷、桃仁脂肪油对二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集都有不同程度的抑制作用，作用强度以桃仁水提物最强；桃仁还有非常明显的抑制醋酸扭体反应的作用；桃仁对免疫功能也有良好的调节作用，能提高患者NK细胞活性及血清补体C3、C4水平，促进血中免疫复合物的清除。有益效果当SS颌下腺重度破坏时，AQP5的表达量显著减少，导致水分转运失代偿，引起唾液分泌减少，出现口干症状。本发明中药组合物可通过抑制SS模型小鼠颌下腺萎缩，淋巴细胞浸润的病理进程，促进AQP5的表达，从而改善唾液腺分泌功能、增加唾液流量，缓解SS 口腔干燥症状。
图I为增液布津汤对SS模型鼠唾液流量的影响；图2为各组AQP5表达的Western blot检测结果；图3为图2中Western blot检测条带的相对灰度值；
图4为增液布津汤对SS模型小鼠颌下腺组织结构变化的影响(HEX200)，其中a正常对照组b模型组c增液布津汤低剂量组d增液布津汤中剂量组e增液布津汤高剂量组f环戊硫酮组。
具体实施例方式以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。实施例I :I实验材料I. I实验动物清洁级SD大鼠，早，220 250g，BALb / C小鼠60只，10周龄，重20_22g左右，早，SPF级，均有苏州爱尔麦特科技有限公司提供(动物合格证号SCXK (苏)2009-0001号)。I. 2实验药物增液布津汤(由黄芪20g，麦冬20g，太子参10g，枸杞子10g，生地15g，赤芍药10g，白芍药10g，桃仁IOg和紫菀IOg组成，原料药材购自南京中医药大学附属医院门诊部)，向药材组合物中加入8-10倍水，浸泡I小时,煎煮两次,每次煎煮40min，合并滤液，水浴蒸发浓缩至每毫升含生药I. 365g，置于4°C冰箱保存备用。环戍硫酮片(山东博士伦福瑞达制药有限公司提供，每片25mg)。25mg溶于50mL蒸馏水中，配制成0. 5mg/mL的药液，4°C冰箱中保存使用。I. 3实验试剂弗氏完全佐剂，SIGMA公司，USA，L0T:129K8700 ;考马斯亮蓝(G250，RD公司进口分装，批号911010);吸附无细胞百日咳、白喉、破伤风联合疫苗，武汉生物制品研究所，批号091147-4 ;卡介苗(BCG)，上海生物制品研究所，批号09061301 ;小牛血清(BSA)，杭州四季青生物公司，批号080517 ;AQP5抗体购自美国Santa Cruz公司；二抗(羊抗兔二抗)购自上海博奥森公司；PMSF(苯甲基磺酰氟)购自南京生兴生物技术公司；丙烯酰胺、亚甲双丙烯酰胺、SDS (十二烧基磺酸钠)、P -巯基乙醇、Glycine (甘氨酸)、Tris-base、溴酹蓝、TEMED (四甲基二乙胺)、AP (过硫酸胺)均购自Sigma公司，北京夏斯生物技术公司分装；Western blotting electrochemiluminescence (ECL):购自 Amersham 公司；硝酸纤维膜(NC):购自Amersham公司；脱脂奶粉光明公司；蛋白定量试剂盒购自BIO-RAD公司。I. 4实验仪器Sff-CJ-IFD型单人单面净化工作台(苏州净化设备有限公司);5810R型低温超速离心机(德国EPPEND0RE公司);XHF-1高速匀浆器(上海金达生化仪器厂);JA1203型电子天平(上海天平仪器厂)；MAX190型酶标仪(美国AD公司)；ELISA试剂盒(Ra D公司分装)。医用X光片购自Kodak公司；Power Pac Basic电泳仪购自BI0-RAD公司。 2实验方法2. ISS小鼠模型制作及分组给药取BALB/C小鼠60只，随机分为6组，正常对照组(生理盐水20mL. kg—1);模型组(生理盐水20mL. kg^1);增液布津汤低剂量组(6. 8g. kg—1);增液布津汤中剂量组(13. 6g. kg—1)；增液布津汤高剂量组(27. 3g. kg-1);环戊硫酮组(I. 25g. kg—1)。取5只SD大鼠颌下腺，分离包膜及结缔组织，剔除淋巴结，每0. Ig置入IOmL无菌试管中，加氯化钠注射液2mL，在冰浴中用匀浆器匀浆，再在4°C低温离心机中离心。离心后利用考马斯亮蓝比色法测定其蛋白含量。根据预实验及参考文献[3]，将该上清液加入灭菌生理盐水中稀释成0. 4g L-1的上清液，再与弗氏完全佐剂混合，制备终浓度为0. 2gL_i乳化抗原液。于小鼠两后脚掌及两侧腹股沟sc乳化抗原，每只0. 2mL (含卡介苗3. 75g - L4)，同时sc白喉-百日咳-破伤风三联疫苗，每只0. lmL。首次免疫后第3，7天，用乳化抗原对模型组和用药组加强免疫，剂量0. 2mL，多点背部sc。以后每隔14d用乳化抗原加强免疫I次，剂量同首次，共加强免疫2次，多点背部sc，正常对照组不作任何处理。于免疫后当天开始灌胃增液布津汤，剂量分别为:增液布津汤地剂低剂量组(ZYBJ I 6. 8g. kg—1)冲剂量组(ZYBJ II 13. 6g. kg-1);高剂量组(ZYBJ III 27. 3g. kg—1);环戊硫酮组(12. 5mg. Kg—1);正常对照组(生理盐水(20mL. Kg—1);模型组对照组(生理盐水ZOmLKg-1 )。以上各组每日灌胃I次，连续5天，停药2天，第50日眼球放血处死，立即取一侧颌下腺，置于-70°C冰箱中用于Western blot分析AQP5表达量的变化。2. 2唾液流量的测定于免疫后第10、20、30、40、50天分别测定给药后小鼠唾液分泌量。测量前禁食lh，不禁水。将无菌脱脂棉球制成干重5mg的棉球。测唾液分泌时将已经称好干重的棉球放入小鼠后颊部，3min后取出，电子天平上称湿重。唾液分泌量(mg)=棉球湿重一棉球干重2. 3镜下观察颌下腺病理变化实验结束第50天时，眼眶取血，处死小鼠，立即取一侧颌下腺经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，HE染色。
2. 3ffestern 印迹分析2. 2. I组织总蛋白提取(I)取出-70°C冰箱中的标本，称取各组标本500mg，将组织置于2mL匀浆器中球状部位，用干净的剪刀将组织块尽量剪碎；(2)加400ul单去污剂裂解液(含PMSF)于匀浆器中，进行匀浆。裂解30min后，即用移液器将裂解液移至I. 5mL离心管，进行超声，然后在4°C下12000rpm离心5min，取上清分装于0. 5mL离心管中并置于_20°C保存。2.2. 2Bradford方法定量蛋白浓度(I)将标准蛋白稀释为以下6个浓度(mg/mL) :0. 02、0. 05、0. 10、0. 20、0. 40和
0.80，各取2、5、10、20、40、80ii L,再加入 buffer 和双蒸水(ddH20)，使总体积为 150u L ；Sample为20倍稀释，取20 iiL，加入130 y L双蒸水(ddH20)，室温作用20min。(2)各孔加入150 U L经三倍稀释的蛋白定量试剂(Coomassie ProteinReagent),共300 ii L反应溶液,室温下作用lOmin。酶标仪550nm处测得吸光度。以蛋白标准浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标作曲线(利用Excel绘制回归曲线)，得线性回归方程Y=O. 8004X+0. 5398，R2=O. 9737，将测定OD值代入方程式，计算蛋白质浓度。(3)测样本浓度将待测标本吸光度值在标准曲线上查出其对应的浓度，乘以适当稀释倍数即为样本浓度。2. 2. 3免疫印迹测定方法和步骤(I)样品中按比例加入6X上样缓冲液，100°C加热5min使蛋白变性。⑵根据蛋白定量结果上样，使最终上样总蛋白为60 yg。取适量处理后的样品完全加入上样孔。Tris-Glycine电泳缓冲液以100V恒压电泳，至溴酚兰到电泳槽最下端。(3)卸下电泳装置，撬开玻璃板，取下凝胶。(4)将凝胶进行转膜(湿转)，以95mA电压转膜75min，将分离的蛋白条转移至硝酸纤维素膜上；(5)蛋白质标记一抗孵育用PBS-T (PBS，0. 05%Tween-20)洗膜两次，5min/次。使用阻断剂(无菌PBS中含5%脱脂牛奶)37°C孵育I小时，阻断硝酸纤维素膜上的非特异性蛋白结合位点。置于I :1000 (或按抗体生产厂家建议的稀释度)稀释的特异性抗体反应液(无菌PBS，抗体，1%脱脂牛奶)，放在脱色摇床上，4°C过夜。(6) 二抗孵育弃一抗，用PBS-T洗膜2次，5min/次，去除多余的一抗反应液和非特异性吸附的抗体。加入含1:5000稀释的过氧化物酶酶联二抗反应液(无菌PBS，抗体，1%脱脂牛奶)，37°C摇动，孵育2小时。(7)曝片=PBS-T洗膜3次，5min/次。加ECL-plus发光显色液，室温作用Imin后暗盒曝片。显影之后根据Western Blot彩色标准电泳指示条带(Marker)的位置，分析所测电泳条带的性质。以GAPDH作为内参。电泳条带经Image J软件处理，分析各实验组条带与对照组条带面积、灰度比值，进一步用SPSS15. 0软件进行统计分析。2. 4统计方法实验数据均用SPSS15. 0统计软件包进行统计学处理。计量资料全部采用均数土标准差(I ±S)表示，采用多组重复测量设计资料的方差分析，若方差不齐用秩和检验。设P〈0. 05有统计学意义的界值，以P〈0. 05和P〈0. 01分别表示差异显著和非常显著。2. 5实验结果2. 5. I各组小鼠唾液量变化比较实验过程中，动态测定各组小鼠唾液流量的变化，结果显示、
(I)实验第10-20天，各组模型小鼠唾液流量间差异不显著(P>0. 05)；(2)从第30天开始，与正常对照组相比，模型组小鼠唾液流量明显减少(P〈0.01)；与模型组比较，中药中、高剂量组小鼠唾液流量明显增加(P〈0. 05)。(3)第50天，与正常对照组相比，模型组，中药低剂量组小鼠唾液流量明显减少(P〈0.01，P<0. 05);与模型组相比，中药各剂量组，环戊硫酮组小鼠唾液流量明显增加(P〈0.01)。(见表 1，图 I)
表2-1-4增液布津汤对SS模型小鼠唾液流量的影响(X±S) (n=10)
唾液流量(mg )
J.-1-1-^^-
__第10天__第20天__第30天__第40天__第50天
正常对照11.66 士 2.4111.81 士2.36 12.39士 2.57__12.59^2.73__12.73 土2.48
模型11.03 土 1.7810.11 士 1.419.40 土 1.39* 岵 840±L30^## 7.61 士 1.25**##
ZYBJI11.29 土2.3311.32±2.239.96土2.09* 10.24±2.17^ 10.54±1.65^aa
ZYBJ i[11.4.5+4.22I] 1.03.64“ I 1.90-2.HSa^ 12.1a
ZYBJIIi1L46±2.2211.77士2.2511.84土2.36“ 12.01=1.98^ 12.53±I.93aa
环戊硫幽11.34士2.1211.47土1.631L30士L8511.账1.53“__11.67^1,604 4注与正常对照组比较，朴〈O. 05，#P〈0. 01 ;与模型对照组比较，▲ P〈0. 05，▲ ▲ P〈0. 01 ;与 ZYBJ III组比较，#P<0. 05，##P<0. 012. 5. 2光镜观察颌下腺病理变化光镜下显示正常对照组颌下腺呈分叶状，腺泡大小规则，排列紧密，腺泡上皮和导管未见变性、坏死，间质未见充血及淋巴细胞浸润等病理变化。模型组大部分可见腺体中度萎缩，腺泡大小不等，数量减少，上皮变性、坏死，导管扩张，腺泡周围中重度淋巴细胞浸润。而增液布津汤中、高剂量及环戊硫酮组腺体萎缩程度减轻，腺泡排列紧密，腺泡上皮轻度变性，坏死，导管轻度扩张，腺泡周围组织有轻度淋巴细胞浸润，尤其是高剂量组仅见个别淋巴细胞浸润，腺泡、导管、腺泡上皮等接近于正常表现。(见图4)2. 5. 3 免疫印迹(western blot)结果不以GAPDH作为内参照，用Image J软件处理，分析各实验组条带与对照组条带面积，灰度比值，分别出现分子量为35KD，37KD的条带。(见图2、3)。各组AQP5表达量的比较结果示与正常对照组比较，模型组AQP5表达量下降了 27. 90%(p<0. 01);与模型组相比，增液布津汤高、中、低剂量组AQP5表达量分别升高了 32. 84%(p<0. 01),12. 54%(p<0. 05)、
4.51%，同时环戊硫酮组AQP5表达量升高了 20. 40%(p<0. 01)。说明增液布津汤可以增加颌下腺AQP5的表达量，促进唾液分泌，改善SS模型小鼠口干症状。效果模型组的AQP-5表达水平与正常对照组比较下降了 27. 9% (p<0. 01);予以增液布津汤高、中、低剂量组的AQP-5表达水平与模型组比较分别升高了 32. 84%(p〈0. 01)、12.54% (p〈0. 05)、4. 51%，同时阳性药物组AQP-5表达水平与模型组比较升高了 20. 40%(p〈0. 01)。结论增液布津汤可能通过抑制SS模型小鼠颌下腺萎缩，淋巴细胞浸润的病理进程，促进AQP5的表达，从而改善唾液腺分泌功能、增加唾液流量，缓解SS 口腔干燥症状的。
综上所述当SS颌下腺重度破坏时，AQP5的表达量显著减少，导致水分转运失代偿，引起唾液分泌减少，出现口干症状。本实验结果初步 表明增液布津汤可能通过抑制SS模型小鼠颌下腺萎缩，淋巴细胞浸润的病理进程，促进AQP5的表达，从而改善唾液腺分泌功能、增加唾液流量，缓解SS 口腔干燥症状的。
权利要求
1.促进水通道蛋白-5表达的中药组合物，其特征在于按质量份由以下中药组成黄苗(Astragali Radix) 15-20 份，麦冬(Ophipogonis Radix) 15-20 份，太子参(Pseudostellariae Radix) 10-15 份，枸杞子(Lych Fructus) 10-15 份，生地(PehmanniaeRadix) 15-20 份，赤苟药(Paeoniae Radix Rubra) 10 份，白苟药(Paeoniae Radix Alba)10 份，桃仁(Persicae Semen) 10 份和紫毙(Asteris Radix ET Rhizoma) 10 份。
2.权利要求I所述中药组合物制备增液布津汤的方法，其特征在于向药材组合物中加入8-10倍水，浸泡I小时，煎煮两次，每次煎煮40min，合并滤液，水浴蒸发浓缩至每毫升含生药I. 365g，置于4°C冰箱保存备用。
3.权利要求I所述中药组合物在制备治疗干燥综合征药物中的应用。
4.权利要求I所述中药组合物在制备干预干燥综合征模型鼠颌下腺水通道蛋白-5药物中的应用。
全文摘要
促进水通道蛋白-5表达的中药组合物及其制备方法和应用，按质量份由以下中药组成黄芪15-20份，麦冬15-20份，太子参10-15份，枸杞子10-15份，生地15-20份，赤芍药10份，白芍药10份，桃仁10份和紫菀10份。本发明中药组合物可通过抑制SS模型小鼠颌下腺萎缩，淋巴细胞浸润的病理进程，促进AQP5的表达，从而改善唾液腺分泌功能、增加唾液流量，缓解SS口腔干燥症状。
文档编号A61P29/00GK102743577SQ201210236469
公开日2012年10月24日 申请日期2012年7月9日 优先权日2012年7月9日
发明者何慧珍, 金桂兰 申请人:南京中医药大学