专利名称：紫丹参乙素的医药用途的制作方法
技术领域：
本发明属于植物药用成分和抗血管新生化合物领域，特别涉及从中药甘西鼠尾草{Salvia przewalskii Maxim)中分离得到的紫丹参乙素在制备抗肿瘤及抑制血管异常新生药物中的用途。
背景技术：
近年来癌症的发病率和死亡率急剧上升，已成为威胁人类健康和生命的第一杀手。目前癌症的治疗手段主要有手术治疗、放射治疗、化学治疗，但因为这些治疗手段表现出的局限性以及缺乏特异性，导致上述手段在癌症治疗运用方面受到较大程度的限制。因此寻找一类对癌细胞有特异性杀伤作用且副作用小的抗肿瘤药物成为当下医药领域·的研究热点。近年来由于抑制肿瘤血管新生成为治疗癌症的新靶点，所以血管新生抑制剂有潜力成为特异性强、毒副作用小的一类新型抗癌药，因此从天然产物中寻找新的有血管新生抑制作用的化合物在癌症治疗方面具有较大前景。甘西鼠尾草przewalskii Maxim)为唇形科鼠尾草属植物,是我国广泛使用的中草药，民间多用其根入药，即藏药红秦艽；四川以其作为秦艽的代用品，云南被广泛用作丹参(Sahia miltiorrhiza Bunge)的替代物。其主要成分与丹参类似,主要为丹参醌类及丹酚酸类化合物。药理学实验证实了几种丹参醌类化合物具有扩冠、消炎、抗血小板凝聚等作用，近年来又有一些新的药理活性如抗肿瘤、消除自由基等活性。从甘西鼠尾草中分离得到的紫丹参乙素为二萜醌类化合物，目前尚未发现该化合物活性方面的相关研究，所以该化合物在抗肿瘤及血管新生抑制作用方面的研究未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种紫丹参乙素的新医药用途，即紫丹参乙素在制备抗肿瘤血管异常新生药物中的应用，即制备以抑制血管新生为治疗途径的抗癌药物中的应用。本发明中所述紫丹参乙素的化学结构式如下
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本发明中所述紫丹参乙素作为抗肿瘤血管异常新生药物的主要活性成分制成药物，作为血管新生抑制剂来治疗癌症。本发明所述应用中还可以加入一种或多种药物上可接受的辅料，所述辅料包括药学领域常规的填充剂、稀释剂、粘合剂、赋形剂、吸收促进剂、填充剂、表面活性剂和稳定剂等，必要时还可加入香味剂、色素和甜味剂等。
本发明所述应用除制成胶囊外，还可以制成丸齐 、粉剂、片齐IJ、粒剂、口服液和注射液等多种形式。本发明中所使用的紫丹参乙素是从中药材甘西鼠尾草中分离得到的单体化合物，实验采用石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇、丙酮和硅胶等低廉、常见的试剂提取分离，实验方法简单可靠，成本低，效率高，可进行工业化生长，有利于推广应用。本发明利用人肝癌细胞株H印G-2，通过MTT实验来测试紫丹参乙素对肿瘤细胞 的增殖影响，结果显示经紫丹参乙素处理的人肝癌细胞(IfepG-2)，在加药浓度为5. O、10. Omg/L时与不加药对照组比较，细胞增殖活性有明显下降，说明紫丹参乙素能够有效的抑制肿瘤细胞增殖。本发明采用鸡胚尿囊膜(CAM)模型来进行抑制血管新生的体内实验研究，实验结果显示经不同浓度(10、15 mg/L)紫丹参乙素处理的鸡胚尿囊膜与空白对照组比较，其血管新生受到明显的抑制，因此可以说明紫丹参乙素具有明显的血管新生抑制作用。以上实验结果证明紫丹参乙素能够抑制肿瘤细胞增殖、抑制血管的异常新生，所以紫丹参乙素可作为一种有效的抗肿瘤剂和抗血管异常新生药物，且疗效好，安全性高，适于实际推广利用。
图I为本发明从甘西鼠尾草中分离得到紫丹参乙素的工艺流程示意图。图2为本发明不同浓度紫丹参乙素对肿瘤细胞(HepG-2)作用后MTT实验结果示意图。图3为本发明不同浓度紫丹参乙素对H印G-2细胞株增殖影响的抑制率结果比较示意图。图4为本发明紫丹参乙素作用于鸡胚尿囊膜，经IPP图像处理软件处理后抑制血管生长的实验结果示意图。图5为本发明鸡胚尿囊膜经不同浓度的紫丹参乙素给药后，其所对应的血管生长面积统计结果比较示意图。
具体实施例方式以下结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明，但在本发明的的保护范围不限于下述的实施例，实施例中，未注明具体条件的实验方法，按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件进行实验。实施例I :紫丹参乙素的制备(下述实施例中使用的紫丹参乙素是采用如下方法制备得到的)
干燥甘西鼠尾草(全草)7. 3 kg，粉碎过60目筛，用100%丙酮(每次20 L)室温下超声提取5次，提取液减压浓缩得粗浸膏300 g ;将所得到的粗浸膏上正相硅胶(8(Γ100目，青岛海洋化工)柱(干法上样)，依次用纯石油醚、石油醚-乙酸乙酯混合液(石油醚乙酸乙酯为9:1、3:1、I: I、3:7 )洗脱，收集各部分洗脱液，减压浓缩，浓缩液分开转移至10 mL青霉素瓶中，用TLC进行检测，将成分大致相同的馏分进行合并；对石油醚乙酸乙酯=1:1洗脱液洗脱部分(52 g)进行分离，分离方法为正相硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯混合液(5:1、2:1、1:1、1:2)进行洗脱，在石油醚乙酸乙酯为2:1的洗脱馏分中析出大量棕色针晶，吸出母液，然后对析出的大量棕色针晶进行重结晶，即得到紫丹参乙素230 mg，其HPLC纯度检测结果为96. 782%，该化合物经核磁共振检测得到的1H-NMR和13C-NMR数据与文献《丹参有效化学成分的研究》中所述紫丹参乙素(przewaquinone B)的1H-NMR和13C-NMR数据基本一致，1H-NMR和13C-NMR数据如下
1H-NMR (400 MHz, C5D5N) δ 9. 57 (1Η, d, / = 8.0 Hz, H—1), 7. 75 (1H, d, J=8. 8 Hz, H-2), 7. 49 (1H, d, / = 6. 8 Hz, H—3)，8. 25 (1H, d, / = 8. 4 Hz, H—6)，7.99 (1H, d, / = 8.8 Hz, H—7)，7. 25 (1H, s, H—16), 5. 21 (3H, s, Me-17), 2. 51(3H, s, Me-18). 13C-NMR (100 MHz, C5D5N) δ 128.4 (C-I), 132.55 (C_2)，130.33(C-3), 133. 70 (C-4), 132.77 (C_5)，130. 33 (C_6)，118.89 (C_7)，128.81 (C_8)，123.77 (C-9), 129.44 (C-IO), 182.97 (C-Il), 175.33 (C-12), 119.67 (C-13),160.89 (C-14), 124.83 (C-15), 142.67 (C-16), 55. 74 (C-17), 19.45 (C-18)。根据以上波谱数据，确定该化合物即为紫丹参乙素。实施例2 :紫丹参乙素体外抗肿瘤作用实验MTT实验
按常规MTT实验流程进行，取对数期的人肝癌细胞株H印G-2，接种于96孔板上，接种量大约为每孔3000个细胞，37 °C培养24 h后，设6个不同浓度(O. 1、0. 5、I. 0、2. 5、5. O、10mg/L)的紫丹参乙素给药组和空白对照组，每个浓度的药物各加入5个孔中，37 °C培养72h，加入MTT (3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐)，每孔20 μ L，继续孵育4h，弃上清液，每孔加入150 yLDMSO，震荡I h，于酶标仪490 nm处测吸光度OD值。(见图2)
结果显示紫丹参乙素加药浓度为5. O mg/L和10 mg/L时肿瘤细胞增殖活性明显下降。图中显示，在紫丹参乙素浓度为2. 5 mg/L,5 mg/LUO mg/L时，该化合物对于细胞的抑制率显著提高(抑制率=1-加药组OD值/空白对照组OD值)。(见图3)
实施例3 :紫丹参乙素体内抗血管新生作用实验
取新鲜种鸡蛋在温度为37. 8°C, CO2浓度为5%，湿度适宜的条件下孵育7天，然后在气室端开窗(1X1 Cm),用直径为6 mm的无菌滤纸片作为给药载体,用移液枪精确吸取40 μ L的紫丹参乙素药液滴于无菌滤纸片上，待滤纸片挥干，然后将滤纸片放置于鸡胚尿囊膜上，给药组设置3个浓度(5 mg/LUO mg/LU5 mg/L)，并设置空白对照组(生理盐水组)和阳性对照药组(地塞米松组)，其中空白对照组和阳性对照组给药方法与上述方法一致，在完成给药操作后，用无菌透明胶带封窗，将鸡蛋在上述条件下继续孵育48 h，取下尿囊膜组织，将其放入脱水液(甲醇丙酮=1:1)中脱水固定15 min处理后，对尿囊膜组织表面血管用数码相机微距拍照，用IPP图像处理软件对图片中血管面积进行计算。(见图4-5)
图4显示加药后，给药浓度为10、15 mg/L相较于空白对照组，其尿囊膜新生血管受到明显抑制。图5显示了经面积计算后血管面积的柱状图，从图中可以看出当给药浓度为10. O、15. O mg/L，血管面积较生理盐水组明显降低。
权利要求
1.紫丹參こ素在制备抗肿瘤血管异常新生药物 中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种化合物紫丹参乙素在制备抗肿瘤血管异常新生药物中的应用，MTT实验证明，紫丹参乙素能够抑制肿瘤细胞的增殖，在加药浓度为5.0、10.0mg/L时细胞增殖活性有明显下降；鸡胚尿囊膜实验显示，浓度为10mg/L和15mg/L的紫丹参乙素对鸡胚尿囊膜的新生血管有较为明显的抑制作用，因此紫丹参乙素可以用于制备抗肿瘤血管异常新生的药物，且疗效好，安全性高，适于实际推广利用。
文档编号A61P35/00GK102949386SQ20121049385
公开日2013年3月6日 申请日期2012年11月28日 优先权日2012年11月28日
发明者李宝才, 庄文婷, 朱路平, 李鹏, 向诚, 何静, 秦谊, 戴伟锋, 张敉 申请人:昆明理工大学