一种葡聚糖的应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及到一类来源于海星的葡聚糖在制备帕金森病药物的应用。该葡聚糖主要为β（1→3）糖苷键连接，是从海洋海星等无脊椎类动物中提取并经过阴离子交换层析分离得到。该葡聚糖对神经毒素损伤两种细胞系具有明显的修复作用，表明它可以用于神经系统疾病如帕金森病和老年性痴呆的治疗药物和保健品的制备。
【专利说明】一种葡聚糖的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及葡聚糖在制备治疗或预防帕金森病和老年性痴呆药物或保健品中的应用。
【背景技术】
[0002]随着人类平均寿命的逐年增加，世界正步入全球老龄化时代。与年龄有关的神经退化性疾病也随之增加，在中枢神经系统方面，主要表现为兴奋与抑制过程减弱，大脑功能降低，记忆力减退和丧失，随后出现识别功能的进行性减退和情绪紊乱的加重等。老年性痴呆已成为心脑血管疾病和肿瘤之后的第四位疾病。目前，全世界65岁以上人群中老年性痴呆患病率约为5%。而老年性痴呆因其复杂的发病机理，近期在防治上不可能取得突破性进展，故西方有专家预言，老年性痴呆将是21世纪人类第一杀手。帕金森病又称震颤麻痹，是中老年人常见的中枢神经系统变性疾病，帕金森病的主要病理特征是是因位于中脑部位"黑质"中的细胞发生病理性改变后，多巴胺的合成减少，抑制乙酰胆碱的功能降低，则乙酰胆碱的兴奋作用相对增强。两者失衡的结果便出现了“震颤麻痹”。最新资料表明，中国有I 7 O万帕金森病患者，其中5 5岁以上的人群中每I O O人就有I个帕金森病人，估计每年新增帕金森病人约I Q万人。老年性痴呆和帕金森病对患者、家庭和社会都带来巨大的压力，使得全世界对其给予众多的关注，老年痴呆和帕金森病等神经退行性疾病的治疗药物研究成为老年医学领域中的一个重要课题。
[0003]海洋是地球上所占面积最大的区域，因此开发海洋药物越来越受到重视，而海洋物质提取在制备和开发抗帕金森药物及在神经保护方面有着不可估计的社会和经济效益。
[0004]海盘车，属于棘皮动物门，海星纲，生活在潮间带和近岸的平静海域，以吞食各种贝类、软体动物、海胆等为 食。海盘车作为中药已有几千年的历史，具有镇惊安神、和胃止痛、厚肠止泻，清热解毒等功效，主治胃酸过多、胃溃疡、腹泻、癫痫等症。近年来，海盘车体内的活性成分相继被发现，如留类糖苷，留醇，蛋白酶，氨基酸，多肽，蛋白多糖，脂类，生物碱等。但是以往的研究倾向于海盘车提取物中留类糖苷化合物的药理学活性及其作用机理。而对海盘车多糖的研究却不多。少量的文献报道了海盘车酸性粘多糖具有抗凝血，抑制红细胞凝聚及血栓形成等作用，但海盘车中其他多糖及生物活性却鲜有报道。
【发明内容】
[0005]为解决上述问题，本发明提供一种葡聚糖在制备治疗或预防帕金森病和老年性痴呆药物或保健品中的应用。
[0006]为实现上述目的，本发明提供的技术方案是:
一种葡聚糖的应用，所述葡聚糖可在制备治疗或预防帕金森病和老年性痴呆药物或保健品中应用。
[0007]进一步的，所述的葡聚糖按照以下方法制备:采用热水或稀酸提取海盘车中的水溶性多糖；然后所述水溶性多糖通过阴离子交换色谱进行分级，最后采用水洗脱并将得到的组分经过脱盐、浓缩、干燥后即得。
[0008]进一步的，所述的阴离子交换色谱用介质包括二乙氨乙基型弱阴离子凝胶或强阴离子凝胶。
[0009]进一步的，所述二乙氨乙基型弱阴离子凝胶为二乙氨乙基交联葡聚糖(DEAE-Sephadex), 二乙氨乙基纤维素(DEAE-纤维素)、二乙氨乙基交联琼脂糖凝胶(DEAE-琼脂糖)中一种。
[0010]进一步的，所述强阴离子凝胶为Q-sepharose凝胶或Q-sephadex。
[0011]进一步的，所述的葡聚糖从罗氏海盘车或多棘海盘车中提取。
[0012]进一步的，所述的葡聚糖分子量为IKD~1000KD。
[0013]进一步的，所述的葡聚糖具有如下结构特征:
(1)组成糖为葡萄糖，所述葡萄糖包括β-葡萄糖和α-葡萄糖(以β-葡萄糖为主，并含有部分α-葡萄糖);
(2)葡萄糖以(1— 3)糖苷键连接。
[0014]与现有技术相比，本发明的有益效果在于:首次发现海盘车来源的葡聚糖具有显著的神经保护作用，对帕金森病和老年性痴呆具有神经保护作用，可以用于制备治疗帕金森病的药物。
【专利附图】
【附图说明】
[0015]图1海盘车葡聚糖的红外光谱图；
图2海盘车葡聚糖的1H-NMR谱图；
图3海盘车葡聚糖的DEPT-Q谱图；
图4海盘车葡聚糖的HMBC谱图；
图5海盘车葡聚糖的HSQC谱图；
图6海盘车葡聚糖的1H, 1H-COSY谱图；
图7海盘车葡聚糖的TOCSY谱图。
【具体实施方式】
[0016]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附后权利要求书限定的范围。
[0017]本发明指出一种葡聚糖，可在制备治疗或预防帕金森病和老年性痴呆药物或保健品中应用。所述葡聚糖的制备方法如下:
实施例1，
罗氏海盘车中葡聚糖的制备:
(I)将100g干罗氏海盘车，分别用3倍体积的异丙醇和乙醇浸泡脱脂处理，弃去有机溶剂，将海盘车干燥，得率为80%。
[0018](2)将脱脂的海盘车80g，用15倍体积的蒸馏水100°C提取3小时，过滤，提取液用用截留分子量为3000 Da超滤膜超滤脱盐，超滤截留液减压浓缩，冻干得海盘车多糖7.2g。
[0019](3)取上述冻干得到的海盘车多糖溶于水，配成质量浓度为2.5% (质量浓度)的水溶液，上样到以DEAE-Sepharose-Fast Flow为载体的柱层析,依次用水和0.75 mol/L NaCl洗脱，收集各洗脱液，将水洗脱液和NaCl洗脱液分别用截留分子量为3000 Da的超滤膜超滤脱盐，将超滤截留液冻干，其中水洗多糖组分为2.4g。
[0020]对水洗多糖组分进行单糖组成分析，结果如表1所示。结果表明水洗多糖组分全部由葡萄糖组成，不含硫酸基，表明其为葡聚糖。
[0021]
实施例2，
多棘海盘车中葡聚糖的制备:
(I)取100g干的多棘海盘车，分别用3倍体积的异丙醇和乙醇浸泡处理，弃去有机溶剂，将海盘车干燥，得率为82%。
[0022](2)将脱脂的海盘车82g，用3倍体积的0.01 M HCl提取3小时，过滤，提取液用碱中和至PH 6，用截留分子量为3500Da透析袋透析2天，浓缩透析袋内透析截留液，冻干得海盘车多糖8.lg。
[0023](3)取上述冻干得到的海盘车多糖溶于水，配成质量浓度为2.5% (质量浓度)的水溶液，上样到以DEAE-Sepharose-Fast Flow为载体的柱层析,依次用水和0.75 mol/L NaCl洗脱，收集各洗脱液，将水洗脱液和NaCl洗脱液分别装入截留分子量为3500 Da的透析袋以自来水流水透析2天，蒸馏水透析I天、分别冻干，其中水洗多糖组分为2.4g。
[0024]对水洗多糖组分进行单糖组成分析，结果如表1所示。结果表明水洗多糖组分全部由葡萄糖组成，不含硫酸基，表明其为葡聚糖。
[0025]表1海盘车中葡聚糖的化学分析
【权利要求】
1.一种葡聚糖的应用，其特征在于，所述葡聚糖可在制备治疗或预防帕金森病和老年性痴呆药物或保健品中应用。
2.根据权利要求1所述的葡聚糖的应用，其特征在于，所述的葡聚糖按照以下方法制备:采用热水或稀酸提取海盘车中的水溶性多糖；然后所述水溶性多糖通过阴离子交换色谱进行分级，最后采用水洗脱并将得到的组分经过脱盐、浓缩、干燥后即得。
3.根据权利要求2所述的葡聚糖的应用，其特征在于，所述的阴离子交换色谱用介质包括二乙氨乙基型弱阴离子凝胶或强阴离子凝胶。
4.根据权利要求3所述的葡聚糖的应用，其特征在于，所述二乙氨乙基型弱阴离子凝胶为二乙氨乙基交联葡聚糖(DEAE-S印hadex)、二乙氨乙基纤维素(DEAE-纤维素)、二乙氨乙基交联琼脂糖凝胶(DEAE-琼脂糖)中一种。
5.根据权利要求3所述的葡聚糖的应用，其特征在于，所述强阴离子凝胶为Q-sepharose 凝胶或 Q-sephadex。
6.根据权利要求2所述的葡聚糖的应用，其特征在于，所述的葡聚糖从罗氏海盘车或多棘海盘车中提取。
7.根据权利要求2所述的葡聚糖的应用，其特征在于，所述的葡聚糖分子量为IKD~1000KDo
8.根据权利要求2所述的葡聚糖的应用，其特征在于，所述的葡聚糖具有如下结构特征: (1)组成糖为葡萄糖，所述葡萄糖包括葡萄糖和α-葡萄糖； (2)葡萄糖以(1— 3)糖苷键连接。
【文档编号】A61K31/716GK103919800SQ201310010388
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2013年1月11日 优先权日:2013年1月11日
【发明者】张全斌, 张文静, 金维华, 王晶 申请人:南通中国科学院海洋研究所海洋科学与技术研究发展中心, 中国科学院海洋研究所