专利名称：竹节参提取物在制备抗骨质疏松药物中的应用的制作方法
技术领域：
:本发明属于中药制剂领域，具体涉及竹节参提取物在制备抗骨质疏松药物中的应用。
背景技术：
:竹节参又名竹节三七、竹节人参、白三七，为五加科植物竹节参(Panax japonicusC.A.Mey.)的干燥根茎，属《中国药典》多年收载的中药材品种。竹节参性温，味甘、微苦；滋补强壮，散瘀止痛，止血祛痰；用于病后虚弱、劳嗽咯血、咳嗽痰多、跌扑损伤。现代药理研究表明，竹节参主要活性成分为皂苷类，尚含少量挥发油、多糖和氨基酸等。骨质疏松(osteoporosis，0P)是以骨量减少，骨组织显微结构退行性改变为特征，骨脆性增加，易发生骨折的一种全身代谢性骨病。骨质疏松症的西药治疗主要有骨吸收抑制剂和骨形成刺激剂，常用药物为降钙素、维生素D、雌激素等。然而长期大量使用外源性雌激素会增加子宫内膜增生、子宫癌、乳腺癌、卵巢癌、静脉血栓形成等并发症的危险性，限制了雌激素的临床应用。从天然植物中筛选并提取分离抗骨质疏松症的天然有效活性成分已成为现代药物研究的热点。小鼠颅骨细胞来源的前成骨细胞MC3T3-E1细胞系是体外研究成骨过程的经典模型；维甲酸大鼠骨质疏松模型是体内研究抗骨质疏松常用的模型
发明内容
:本发明的目的在于提供竹节参提取物在制备抗骨质疏松药物中的应用。本发明的目的通过以下技术方案实现:
竹节参提取物在制备抗骨质疏松药物中的应用。所述的竹节参提取物为竹节参水提物、竹节参醇提物、竹节参粗提物和竹节参精提物中的任意一种或几种。所述竹节参水提物采用以下方法制备:取竹节参药材饮片加水浸泡后，以8 12倍量水直火煎煮至少2次，每次f 3h，合并水提液，水浴浓缩近干，在< 80°C条件下，减压干燥后得竹节参水提物。所述竹节参醇提物采用以下方法制备:取竹节参药材饮片加90%乙醇浸泡后，以8^12倍量90%乙醇水浴回流提取至少2次，每次f 3h，合并提取液，回收乙醇并浓缩近干，在< 80°C条件下，减压干燥后得竹节参醇提物粉末。所述竹节参粗提物采用以下方法制备:①将药材粉碎；②醇提:将粉碎后的药材加70%乙醇浸泡后，分别用8 12倍量的70%乙醇，回流提取3次，每次提取的时间为f 3h ；③树脂型号与用量:HPD722树脂、DlOl树脂或HP20树脂，树脂的干重与中试药材重量比=8:10 ;④上样液浓度:上样液浓度为0.08g生药/ml ;⑤水洗倍量与流速:工艺研究采用的水洗脱流速为2 BV/h,洗脱6 18个柱体积； 5%乙醇除杂倍量与流速:5%乙醇除杂倍量为6^14个柱体积，流速为1.5 BV/h ； 50%乙醇洗脱倍量与流速:50%乙醇洗脱的0.5个柱体积弃用或保存另用，50%乙醇洗脱流速为1.5 BV/h,收集50%乙醇洗脱的0.5飞个柱体积，回收乙醇，干燥，得竹节参粗提物(竹节参总皂苷)，所得竹节参粗提物(竹节参总皂苷)的纯度(控制指标成分为竹节参皂苷V、竹节参皂苷I b、竹节参皂苷V1、竹节参皂苷VI a)> 50%,R转移率> 70%ο所述竹节参精提物为竹节参皂苷V。所述的抗骨质疏松药物包括竹节参提取物和药学上可接受的载体或者常规食用辅料。药学上可接受的载体包括口服制剂辅料或胃肠外途径给药的辅料。给药途径可以是口服、注射、局部给药等。根据本发明的技术方案，该组合物可以是口服制剂或注射用制齐U，其中口服制剂包括胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、片剂、滴丸等。所用辅料包括:淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、异丙醇、吐温-80、甘油、丙二醇、微晶纤维素钠、糊精、环糊精、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸、硫代硫酸钠、亚硫酸钠、硬脂酸盐和明胶等常规辅料，制剂的后期制备工艺及设备均属制药领域的常规技术，本发明对此不作限定，故在此不予详述。本发明组合物口服给药的剂量为3次/天，2-4粒/次。本发明的有益效果: 本发明竹节参提取物是从天然的中药竹节参中提取得到的，竹节参是常用的中草药，有长期的中医用药经验，该药使用安全性高，无明显毒性作用记载。竹节参提取物具有抗骨质疏松的显著性作用，且不具有肝毒性，较之现有的依瞵片剂相对安全。因此，竹节参提取物有开发成抗骨质疏松药物的前景。
具体实施方式
:实施例一竹节参水提物、竹节参醇提物、竹节参粗提物(竹节参总皂苷)、竹节参精提物(竹节参皂苷V)的制备竹节参水提物的制备:取竹节参药材饮片500g，加水浸泡2h后，以10倍量水直火煎煮3次，每次2h，合并水提液，水浴浓缩近干，在80°C以下0.0SMpa的负压条件下干燥，得竹节参水提物粉末。将竹节参水提物粉末溶解定容为浓度Ig生药/mL的水溶液。备用于稀释到一定浓度，供体内外药效试验使用。竹节参醇提物的制备:取竹节参药材饮片500g，加90%乙醇浸泡2h后，以10倍量90%乙醇水浴回流提取3次，每次2h，合并提取液，回收乙醇并浓缩近干，在80°C以下0.0SMpa的负压条件下干燥，得竹节参醇提物粉末。将竹节参醇提物粉末溶解定容为浓度Ig生药/mL的水溶液。备用于稀释到一定浓度，供体内外药效试验使用。竹节参粗提物(竹节参总皂苷)的制备:1.药材的粉碎粒度:将药材粉碎粒度定为米粒大小。2.醇提工艺具体为:药材粉碎至米粒大小，用70%乙醇，浸泡2h后，依次用11倍量，10倍量，9倍量的70%乙醇回流提取3次，提取时间分别为2.5h、2h、l.5h。3.树脂型号与用量:HPD722树脂(沧州宝恩吸附材料科技有限公司生产，或者用D101、HP20)。树脂的湿重量(干重)与中试药材重量比=25 (8):10。4.上样液浓度:上样液浓度为0.08g生药/ml。
5.水洗倍量与流速:工艺研究采用的水洗脱流速为2 BV/h，洗脱18个柱体积。6.5%乙醇除杂倍量与流速:5%乙醇除杂倍量确定为14个柱体积，流速为1.5 BV/h07.50%乙醇洗脱倍量与流速:50%乙醇洗脱的0.5个柱体积弃用或保存另用，50%乙醇洗脱流速为1.5 BV/h，然后收集50%乙醇洗脱的0.5飞个柱体积，回收乙醇，干燥，得竹节参粗提物(竹节参总皂苷)，所得的竹节参粗提物(竹节参总皂苷)的纯度(控制指标成分为竹节参皂苷V、竹节参皂苷I b、竹节参皂苷V1、竹节参皂苷VI a) ^ 50%，总皂苷的转移率^ 70%ο8.下柱条件:采用95%乙醇洗脱2个柱体积，流速1.5 BV/h。9.树脂预处理方法:在树脂柱内加入高于树脂层IOcm的95%乙醇浸溃4小时，然后用乙醇冲洗，洗至流出液在试管中用水稀释不浑浊时为止。最后用水反复洗涤至乙醇含量小于1%或无明显乙醇气味后即可用于生产。10.每IOOg竹节参生药可以得到竹节参粗提物(竹节参总皂苷)10g (视药材的质量不同，得率不同)左右，竹节参粗提物(竹节参总皂苷)的纯度(控制指标成分为竹节参皂苷V、竹节参皂苷I b、竹节参皂苷V1、竹节参皂苷VI a) ^ 50%，总皂苷的转移率> 70%。竹节参精提物(竹节参皂苷V):竹节参皂苷V，又称人参皂苷Ro，Gisenoside Ro,购买于上海亚培生物科技有限公司，批号:A0522。竹节参皂苷V的纯度为98%。实施例二竹节参水提物、竹节参醇提物、竹节参粗提物(竹节参总皂苷)、竹节参精提物(竹节参皂苷V)体外抗骨质疏松作用本技术方案采用体外MC3T3-E1细胞模型和体内维甲酸大鼠骨质疏松模型，研究竹节参水提物、竹节参醇提物、竹节参粗提物(竹节参总皂苷)、竹节参精提物(竹节参皂苷V)在抗骨质疏松方面的活性。试验方法:将MC3T3-E1细胞(MC3T3-E1，购于中国医学科学院基础医学研究所)以2X104cell /mL密度接种于96孔培养板，每孔200μ L，培养24h后给药。实验组分别加入竹节参水提物和竹节参醇提物的终浓度为KT1Hig生药/mL，加入竹节参粗提物(竹节参总皂苷)、竹节参精提物(竹节参皂苷V)的终浓度分别为10' 10_2、10_3、10_4mg生药/mL，阳性对照组加入等体积终浓度为I X 10_8mOl -T1的雌二醇，空白对照组加入等体积的不含药的溶剂α-ΜΕΜ培养液，每组均设6个复孔。继续培养44h，每孔中加入5mg/ml的MTT溶液20 μ 1，37°C孵化4h，有蓝紫色沉淀生成。吸去培养液，每孔加入150 μ I/孔DMSO溶解，用酶标仪于490nm测定每孔的吸光度。应用SPSS 11.0对实验数据进行统计学分析，所有数据均以F±s表示，实验组与对照组比较，采用t检验，p<0.05表示有显著性差异，p<0.01为有极显著性差异。由表I可知，lO^ng/mL的竹节参水提物和竹节参95%乙醇提取物，以及竹节参粗提物(竹节参总皂苷)与竹节参精提物(竹节参皂苷V)的各剂量组具有明显促进MC3T3-E1增殖作用。表1竹节参各种提取物对MC3T3-E1细胞增殖的影响(n=6)
权利要求
1.竹节参提取物在制备抗骨质疏松药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的竹节参提取物为竹节参水提物、竹节参醇提物、竹节参粗提物和竹节参精提物中的任意一种或几种。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述竹节参水提物采用以下方法制备:取竹节参药材饮片加水浸泡后，以8 12倍量水直火煎煮至少2次，每次f 3h，合并水提液，水浴浓缩近干，在≤80°C条件下，减压干燥后得竹节参水提物。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述竹节参醇提物采用以下方法制备:取竹节参药材饮片加90%乙醇浸泡后，以8 12倍量90%乙醇水浴回流提取至少2次，每次f3h，合并提取液，回收乙醇并浓缩近干，在≤ 80°C条件下，减压干燥后得竹节参醇提物粉末。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述竹节参粗提物采用以下方法制备:①将药材粉碎醇提:将粉碎后的药材加70%乙醇浸泡后，分别用8 12倍量的70%乙醇，回流提取3次，每次提取的 时间为I 3h ;③树脂型号与用量:HPD722树脂、DlOl树脂或HP20树脂，树脂的干重与中试药材重量比=8:10 ;④上样液浓度:上样液浓度为0.08g生药/ml ；⑤水洗倍量与流速:工艺研究采用的水洗脱流速为2 BV/h,洗脱6 18个柱体积； 5%乙醇除杂倍量与流速:5%乙醇除杂倍量为6 14个柱体积，流速为1.5 BV/h ’⑦50%乙醇洗脱倍量与流速:50%乙醇洗脱0.5个柱体积弃用，50%乙醇洗脱流速为1.5 BV/h,收集50%乙醇洗脱的0.5飞个柱体积，回收乙醇，干燥，得竹节参粗提物，所得竹节参粗提物的纯度≥ 50%, R转移率≥ 70%。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述竹节参精提物为竹节参皂苷V。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的抗骨质疏松药物包括竹节参提取物和药学上可接受的载体或者常规食用辅料。
全文摘要
本发明公开了竹节参提取物在制备抗骨质疏松药物中的应用。本发明竹节参提取物是从天然的中药竹节参中提取得到的，竹节参是常用的中草药，有长期的中医用药经验，该药使用安全性高，无明显毒性作用记载。竹节参提取物具有抗骨质疏松的显著性作用，且不具有肝毒性，较之现有的依瞵片剂相对安全。因此，竹节参提取物有开发成抗骨质疏松药物的前景。
文档编号A61K31/704GK103110679SQ20131008173
公开日2013年5月22日 申请日期2013年3月14日 优先权日2013年3月14日
发明者杨小林 申请人:杨小林