一种具有抗血小板聚集活性的提取物的制作方法
【专利摘要】本发明属于中药【技术领域】，本发明涉及一种具有抗血小板聚集活性提取物及其制备方法。其制备方法为以麦冬药材为原料，用有机溶剂提取，大孔树脂分离，乙醇洗脱，干燥而得。本发明的提取方法简单、易行，适于工业化生产。得到的提取物具有较好的抗血小板聚集作用。
【专利说明】一种具有抗血小板聚集活性的提取物
【技术领域】:
[0001]本发明属于中药【技术领域】，具体涉及一种提取物及其制备方法，以及该提取物在抗血小板聚集作用方面的应用。【背景技术】:
[0002]血小板是一种多功能细胞，是由骨髓中成熟的巨核细胞的细胞质脱落而成，平均分布在血液中，具有粘附、聚集、释放和分泌颗粒内容物(如5-羟色胺，ADP)的功能。在血栓形成的过程中，血小板的粘附起着重要的始动作用，随之又激发了内源性与外源性的凝血过程。当血流缓慢、涡流形成、血液凝固性增高及心血管内膜受损等诸多因素出现时，或以某种因素为主时，靠近血管内皮的血小板则黏附在裸露的胶原纤维上，并释放ADP和血栓素A2，促使更多的血小板黏附，但当凝血过程启动后，血浆中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，后者使血小板牢固地凝集于受损内膜表面。上述过程反复进行，血小板黏集堆不断增大、增多，构成多个血小板小丘，阻塞血流，从而引起血栓。因此血小板聚集性是预示血栓形成趋势的重要参数，血小板活化聚集可导致或促进某些疾病的发生和发展，所以，对于抗血小板药物的研究具有很重要的意义。
[0003]麦冬为百合科植物麦冬的干燥块根，其味甘、微苦，微寒，归心、肺、胃经，具有养阴润肺、益胃生津、清心除烦之功效，临床用于治疗支气管炎、肺炎等炎症性疾病以及心律失常及心肌缺血等心血管疾病。药理研究表明麦冬正丁醇萃取部位能加强心肌收缩力、改善血液流态及增强冠脉血流量，并对心血管内皮细胞有一定的保护作用，从而具有一定的抗心肌缺血、抗心律失常以及抗血栓作用。现代药理实验证明麦冬中所含的单体成分具有明确的药理活性，如麦冬皂苷D具有抗氧化活性，短葶山麦冬皂苷C具有明确的抗肿瘤细胞转移的作用和麦冬皂苷B可以抑制肺癌细胞的生长等。但单体类成分制备过程较繁琐，得率很低，且成本较高。所以我们选用该提取物作为出发点，优化其分离及制备提纯方法，目的是可以得到具有治疗效果明确的、可以直接用于医疗领域、并被制作成各种制剂的新活性成分，使其原料得到充分的利用。
【发明内容】
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[0004]本发明的目的是提供一种抗血小板聚集的提取物。
[0005]本发明的目的还在于提供上述提取物在抗血小板聚集方面的应用。
[0006]本发明经过大量实验筛选，优选出提取物及其制备方法，制备方法包括:以麦冬药材为原料，以相对于麦冬原料重量至少2倍量的有机溶剂提取，提取液离心，通过大孔树脂柱，先以水洗脱至糖反应为阴性，再以〈50%乙醇除杂，最后以> 50%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥即得。
[0007]上述以有机溶剂提取过程中，选用的溶剂为水、甲醇、乙醇、丙酮、丁醇，本发明通过多个实施例更优选为乙醇提取。
[0008]上述提取过程中，提取方法可以为回流、超声、浸溃等，本发明优选采用回流法提取。
[0009]上述提取过程中所用的乙醇为一定浓度的乙醇水溶液，更优选为50% -95%的乙醇溶液提取。
[0010]上述提取过程中，以麦冬药材重量至少2倍量的溶剂提取，经过大量实验优化，本发明更优选为5-30倍量的乙醇溶液提取。
[0011]上述分离过程所选用的树脂包括DlOl、AB-8、HPD100, D4020、NK-9，本发明经过大量实验更优选为DlOl型大孔树脂分离。
[0012]上述分离过程中，麦冬药材与大孔树脂的料液比为1: 0.8~5，更优选为1:1~2。
[0013]由于麦冬含糖量较高，过滤较不方便，容易受温度的影响，所以提取液在上柱之前直接采用离心技术，弃去不溶物，取上清液，过大孔树脂柱分离。洗脱的步骤主要为，先用水洗脱至α-萘酚反应为阴性，再以〈50%乙醇除杂，最后用> 50%乙醇溶液洗脱，洗脱时收集洗脱液一般为至少I倍柱体积。本发明通过优选实施例，更优选为1-19倍柱体积，即可达到本发明的目的和效果。上述柱体积是指大孔树脂填料的体积。
[0014]本发明提供的提取物，尽可能除去糖类和小分子及低极性化合物等杂质，具有显著的抗血小板聚集活性。
[0015]本发明还提供了该提取物在抗血小板聚集方面的应用，为抗凝血药物的研究提供依据。以下是试验方法与结果:
[0016]麦冬提取物抑制二磷酸腺苷(ADP)诱导的家兔血小板聚集活性
`[0017]实验动物:家兔
[0018]诱导剂:二磷酸腺苷(ADP)
[0019]方法和结果:
[0020]选用符合实验要求的家兔，乙醚麻醉，固定，颈动脉插管取血，3.8%的枸橼酸钠1: 9 抗凝，以 1000r / min 离心 18min,取富血小板血衆(platelet-rich plasma, PRP),剩余部分以3000r / min离心15min,取贫血小板血衆(platelet-poor plasma, PPP)。聚集诱导剂用ADP (终浓度5μ M / ml)。采用比浊法测定，每管275 μ I PRP中加入不同浓度的药物15 μ 1，对照组PRP中加入生理盐水15μ 1，37°C温育3min，加入诱导剂ADPlOul，检
测5min内血小板最大聚集率，然后计算抑制率，公式如下:
[0021]
【权利要求】
1.一种具有抗血小板聚集活性的提取物的制备方法，该方法包括:以麦冬药材为原料，用有机溶剂提取，提取液离心，大孔树脂分离，以乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，干燥即得提取物。
2.权利要求1所述的制备方法，其中提取过程如下:以麦冬药材为原料，以相对于麦冬原料重量的至少2倍量的有机溶剂提取。
3.权利要求2所述的提取过程，其中提取溶剂包括水、甲醇、乙醇、丙酮、丁醇。
4.权利要求1所述的制备方法中，大孔树脂包括D101、AB-8、HPD100、D4020、NK-9。
5.权利要求1所述的制备方法，其中麦冬药材与大孔树脂的料液比为1: 0.8~5。
6.权利要求1所述制备方法得到的提取物。
7.权利要求6 所述的提取物在抗血小板聚集作用方面的应用。
【文档编号】A61K36/8968GK103638295SQ201310710650
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2013年12月23日 优先权日:2013年12月23日
【发明者】余伯阳, 张剑, 李玲玲, 杨洁 申请人:中国药科大学