胶原基复合止血粉剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了胶原基复合止血粉剂及其制备方法，其特点是：使用三七素对I型胶原进行改性，用多聚赖氨酸修饰的壳聚糖，将改性后的I型胶原配制成浓度为1%～2%的溶液，将医用明胶配制成1%～3%溶液，又将修饰的壳聚糖配制成1%～3%的溶液，再将上述三种溶液按质量比为0.5～1∶2～8∶8～2共混，在温度4～10℃搅拌8～10h，冷冻干燥制成复合海绵。在室温下，于超声波清洗器中将复合海绵先后浸渍于改性剂和凝血因子中，充分水洗，经冷冻干燥，粉碎机粉碎制备得到胶原基复合止血粉剂。该粉剂既具有快速有效止血、抗菌、消炎镇痛、促进创面愈合和修复的功能，又具备较好的粘附性、亲水性、生物降解性和生物相容性，并且价格便宜，适用于创伤止血或修复。
【专利说明】胶原基复合止血粉剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种胶原基复合止血粉剂的制备方法，属于创面愈合和修复的止血粉剂领域。
【背景技术】
[0002]在各类外科手术或创伤治疗中，减少出血、降低出血时间，并隔离伤口与外界接触，避免感染，有利于患者伤口的愈合。临床上常规的粉状止血剂的主要成分为无机物，或在其中添加一些快速止血的物质，如凝血酶、氨甲环酸，但这类材料止血效果差，有一定的免疫原性，不能被机体吸收或不能促进组织再生，已经不能满足人们的需求。近年来，人们研制出了一类生物可吸收止血材料，其中胶原类止血材料受到人们的广泛关注。1953年研究者发现了胶原具有止血作用，胶原可局部刺激血小板的粘附与凝聚，激活凝血系统。当血管壁受损破坏时，血液中的血小板会在胶原的刺激下迅速接触、粘附，发生凝聚作用，生成纤维蛋白，形成血栓而阻止血液流动。目前，已有大量的胶原类止血剂出现，胶原类止血粉剂也有相关报道。粉状止血剂具有不受创面大小及部位的限制的优点，与创面接触面积大，有利于达到快速有效止血。中国专利CN1406628A以胶原纤维为原料，使用醛类对其进行改性，在密闭的容器中，向胶原纤维加入过量的干燥剂、醇和盐酸溶液，搅拌24~72h，再经甘油水溶液清洗、真空干燥、粉碎机研磨得到粉剂止血剂。该止血剂止血较为迅速，促进伤口愈合。商品Endo—Avitene是一种15mmX 50mm棍压的Avitene (干燥、疏松的粉状或片状的微晶胶原止血剂)，有一定的止血效果，可在2.6min内有效止血，观察15min 后无再出血现象[Low RK, Moran ME, Goodnight JE Jr.Clinical correspondenceMicrofibrillar collagen hemostat during laparoscopicalIy directed liverbiopsy [J].J Lapa roendoscopic Surg, 1993，3:15]。美国专利 US6221357B1 公开了“一种具有促进止血作用的皮肤软膏”，它由热塑性树脂或橡胶，与胶原、明胶或壳聚糖粉末组成，止血效果较好。胶原类止血材料能够有效止血，促进组织再生和功能恢复作用。但是，现有的胶原基止血粉剂尚存在以下不足:
[0003]1.粘附性较差，给手术操作造成不必要的麻烦。
[0004]2.止血性能一般，功能单一，不能满足市场的要求。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是针对现有技术的不足而提供的一种胶原基复合止血粉剂的制备方法。其特点是该止血粉剂具有较好的粘附性、亲水性、良好的生物降解性能、生物相容性优良性能，又能够快速有效止血、抗菌、消炎镇痛、促进创面愈合和修复的胶原基复合止血粉剂。
[0006]本发明的目的由以下技术措施实现，其中所述原料份数除特殊说明外，均为重量份数。
[0007]胶原基复合止血粉剂的制备方法包括以下步骤:[0008]I)三七素的制备
[0009]在超声波频率均为20~40kHz，功率为50~120w，将三七粉100份浸溃在浓度为75~95wt%的乙醇溶液10~20倍中15~20h，再重复浸溃在浓度为75~95wt%的乙醇溶液5~10倍中5~10h，静置0.5~1.0h分离，合并两次浸溃液，留作它用；残洛晾干,加入10~15倍的水浸提15~20h ;再用5~10倍水重复浸提6~IOh,离心分离得到滤液，将滤液直接经过葡聚糖凝胶柱和0001X7离子交换树脂进行过滤层析，流速为0.5~3ml/min，合并滤液，用3~7%的活性炭除色，再将滤液减压浓缩，喷雾干燥制得三七素粉末；
[0010]2)胶原基复合止血粉的制备
[0011](I)三七素改性I型胶原的制备:
[0012] 将I~2份的I型胶原溶解于在浓度为0.05~0.5M的醋酸溶液100份中，配制成浓度为I~2wt%的胶原溶液；将三七素0.05~0.5份加入到上述胶原溶液中，使得三七素与I型胶原的质量比为0.5~2: 8~9.5，于温度4-10°C，搅拌2~10h，得到复合母液A ；
[0013](2)多聚赖氨酸修饰壳聚糖的制备:
[0014]将I~3份脱乙酰度50%~95%的壳聚糖溶解在浓度为0.05~0.5M的醋酸溶液100份中，配制成浓度为1%~3wt%的溶液；再将0.1~3份的多聚赖氨酸加入到上述溶液中，使其多聚赖氨酸浓度为0.1~3wt%，在室温下搅拌10~60min，得到复合母液B ；
[0015](3)胶原基复合海绵的制备:
[0016]将0.5~1.0份的医用明胶溶解在浓度为0.05~0.5M的醋酸溶液100份中，配制成0.5%~1.0wt%的溶液，得复合母液C ;再将上述复合母液A、复合母液B和复合母液C按质量比为0.5~1: 2~8: 8~2共混，在温度4-10°C，搅拌8~10h，冷冻干燥得到复合海绵；
[0017](4)复合海绵的改性及胶原基复合止血粉的制备:
[0018]在超声波频率均为20~40kHz，功率为50~120w，将上述复合海绵浸溃在浓度为IOmmol~50mmol或0.01~10%的改性剂100份中0.5~10h，用超纯水反复清洗，继续在上述超声波条件下，再将复合海绵浸溃于浓度为100~500U/ml或10~50mmol/L的凝血因子100份中0.5~lh，最后经冷冻干燥、粉碎机粉碎，用剂量为6~30KGy6°Co消毒灭菌，成型包装，获得胶原基复合止血粉剂。
[0019]所述I型胶原是从猪皮、猪腱、牛皮、牛腱、驴皮、鼠皮或鼠尾腱中的任一种。
[0020]所述改性剂为戊二醛、甲醛、甲基乙二醛、碳化二亚胺、京尼平、环氧化合物、铝钛金属配合物和琥珀酸酐中的至少一种。
[0021]所述凝血因子为凝血酶、纤维蛋白原、纤连蛋白和氯化钙中的至少一种。
[0022]所述壳聚糖的脱乙酰度为50~95%。
[0023]所述胶原基复合止血粉剂的制备方法制备得到的胶原基复合止血粉剂。
[0024]性能测试
[0025]1、胶原基复合止血粉剂的性能参数指标的测定方法如表1所示。
[0026]表1胶原基复合止血粉剂所具有的性能参数指标的测定方法
[0027]
【权利要求】
1.一种胶原基复合止血粉剂的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤: 1)三七素的制备 在超声波频率均为20~40kHz，功率为50~120W，将三七粉100份浸溃在浓度为75~95wt%的乙醇溶液10~20倍中15~20h，再重复浸溃在浓度为75~95wt%的乙醇溶液5~10倍中5~IOh,静置0.5~1.0h分离，合并两次浸溃液，留作它用；残洛晾干，加入10~15倍的水浸提15~20h ;再用5~10倍水重复浸提6~10h，离心分离得到滤液,将滤液直接经过葡聚糖凝胶柱和0001X7离子交换树脂进行过滤层析，流速为0.5~3ml/min，合并滤液，用3~7%的活性炭除色，再将滤液减压浓缩，喷雾干燥制得三七素粉末； 2)胶原基复合止血粉的制备 (1)三七素改性I型胶原的制备: 将I~2重量份的I型胶原溶解于在浓度为0.0500.5M的醋酸溶液100重量份中，配制成浓度为I~2wt%的胶原溶液；将三七素0.05~0.5份加入到上述胶原溶液中，使得三七素与I型胶原的质量比为0.5~2: 8~9.5，于温度4-10°C，搅拌2~10h，得到复合母液A ; (2)多聚赖氨酸修饰壳聚糖的制备: 将I~3重量份脱乙酰度50%~95%的壳聚糖溶解在浓度为0.05~0.5M的醋酸溶液100重量份中，配制成浓度为1%~3wt%的溶液；再将0.1~3重量份的多聚赖氨酸加入到上述溶液中，使其多聚赖氨酸浓度为0.1~3wt%，在室温下搅拌10~60min，得到复合母液B ； (3)胶原基复合海绵的制备: 将0.5~1.0重量份的医用明胶溶解在浓度为0.05~0.5M的醋酸溶液100重量份中，配制成0.5%~1.0wt%的溶液，得复合母液C ;再将上述复合母液A、复合母液B和复合母液C按质量比为0.5~1: 2~8: 8~2共混，在温度4-10°C，搅拌8~10h，冷冻干燥得到复合海绵； (4)复合海绵的改性及胶原基复合止血粉的制备: 在超声波频率均为20~40kHz，功率为50~120w，将上述复合海绵浸溃在浓度为IOmmol~50mmol或0.01~10%的改性剂100重量份中0.5~10h，用超纯水反复清洗，继续在上述超声波条件下，再将复合海绵浸溃于浓度为100~500U/ml或10~50mmol/L的凝血因子100重量份中0.5~lh，最后经冷冻干燥、粉碎机粉碎，用剂量为6~30KGy6°Co消毒灭菌，成型包装，获得胶原基复合止血粉剂。
2.如权利要求1所述胶原基复合止血粉剂的制备方法，其特征在于所述I型胶原是从猪皮、猪腱、牛皮、牛腱、驴皮、鼠皮或鼠尾腱中的任一种。
3.如权利要求1所述胶原基复合止血粉剂的制备方法，其特征在于改性剂为戊二醛、甲醛、甲基乙二醛、碳化二亚胺、京尼平、环氧化合物、铝钛金属配合物和琥珀酸酐中的至少一种。
4.如权利要求1所述胶原基复合止血粉剂的制备方法，其特征在于凝血因子为凝血酶、纤维蛋白原、纤连蛋白和氯化钙中的至少一种。
5.如权利要求1所述胶原基复合止血粉剂的制备方法，其特征在于壳聚糖的脱乙酰度为50~95%。
6.如权利要求1所述胶原基复合止血粉剂的制备方法制备得到的胶原基复合止血粉剂，其性能符合以下要求: (1)氯化钠含量:<3%(m/m)； (2)重金属含量:<10 μ g/g(m/m)； (3)羟脯氨酸含量:不小于总蛋白含量的8%(m / m)； (4)粒度:10~120目； (5)细胞毒性 :细胞毒性反应不大于I级。
【文档编号】A61P7/04GK103721247SQ201410009613
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2014年1月9日 优先权日:2014年1月9日
【发明者】但年华, 刘新华, 但卫华, 马文杰, 富勇 申请人:北京华信佳音医疗科技发展有限责任公司, 四川大学