大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，包括以下步骤：麻黄提取液的制备、麻黄总生物碱的含量测定、麻黄中三种主要成分含量测定、大孔树脂的预处理、上样、洗脱，提供了一种纯化麻黄总生物碱的最佳工艺，操作简便，得率高，为进一步的制剂学和药效学研究提供借鉴。
【专利说明】大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺
【技术领域】
[0001]本发明属于中药领域，具体是一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺。
【背景技术】
[0002]餘黃Ephedrae ZferAa系麻黄植物草麻黄sinica Stapf,中麻黄intermedia Schrenk et CU.和木贼麻黄equisetina Bge的干燥草质茎，为《中国药典》收载的传统中药。现代研究表明，麻黄中的总生物碱具有兴奋中枢，镇咳平喘、松弛气管、降血压、影响组织抗氧化功能、降低血糖[等药理作用，是其发挥药效的有效部位。
[0003]然而，麻黄总生物碱的分离纯化研究鲜见报道，仅有使用树脂对麻黄中单一组分——盐酸麻黄碱进行纯化工艺的考察，未能表明对麻黄总生物碱的纯化情况。
[0004]
【发明内容】
[0005]为了解决上述技术问题，本发明提供了一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺。
[0006]一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，其特征在于包括以下步骤:
1)精密称取麻黄细粉适量，加入8倍量的0.5%盐酸水溶液，60°C、250W超声提取lh，抽滤，用旋转蒸发仪减压浓缩至所需浓度；` 2)精密吸取适量的麻黄供试品溶液，依次加入pH7.5磷酸盐缓冲液10 mL, 0.05%溴麝香草酚蓝溶液4 mL，络合3 min后，每次加入10 mL氯仿萃取两次，分取氯仿层，测定416nm波长处的吸光度值，以盐酸麻黄碱为对照，计算总生物碱的含量；
3)取适量的麻黄供试品溶液，进行HPLC分析，测定麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱三种主要成分的含量；
4)将大孔树脂置于烧杯中，用95%乙醇浸泡24h，使其充分膨胀，抽滤后加入95 %乙醇洗涤大孔树脂至洗涤液加适量蒸馏水无白色浑浊现象，再用蒸馏水洗净乙醇，真空抽滤后备用;
5)上样、洗脱，其中上样药液pH为5—6，上样浓度为0.1—0.15 g-mr1,上样流速为
0.3—0.7 mLiirr1，洗脱剂体积为7.5—8 BV，洗脱剂为95%的乙醇，洗脱流速为0.8—1.2mT,?min-1n
[0007]所述的一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，其特征在于步骤3)中色谱条件为:色谱柱 Agilent Zorbax SB-C18C250 mmX 4.6 mm, 5 U m), 0.1% 憐酸:乙臆=95:5,检测波长为210 nm;柱温30 V ;流速I mL.min—1，进样量20 UL0
[0008]所述的一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，其特征在于步骤4)中所述的大孔树脂为HPD100型大孔树脂。
[0009]所述的一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，其特征在于步骤5)中上样药液pH为5.3—5.7，上样浓度为0.11—0.13 g.mL—1，上样流速为0.4—0.6 mLmirr1，洗脱剂体积为7.7—7.9 BV，洗脱剂为95%的乙醇，洗脱流速为0.9—1.1mL-1nin^10
[0010]所述的一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，其特征在于步骤5)中上样药液pH为5.5，上样浓度为0.12 g.mL—1，上样流速为0.SmLmiiT1，洗脱剂体积为7.8 BV,洗脱剂为95%的乙醇，洗脱流速为1.0mLmin'
[0011]本发明的大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，提供了一种纯化麻黄总生物碱的最佳工艺，操作简便，得率高，为进一步的制剂学和药效学研究提供借鉴。
[0012]
【具体实施方式】[0013]仪器与试剂
Agilent 1260 Infinity 型高效液相色谱仪(美国 Agilent Technologies) ;UV_2800H型紫外可见分光光度计(尤尼克上海仪器有限公司)；SHA-A型恒温数显水浴振荡器(上海双舜实验发展有限公司)；KQ-250E型数控超声清洗机(昆山市超声仪器有限公司)，RE-52A型旋转蒸发仪(上海亚荣生物仪器厂);METTLER AL104型万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器公司)。
[0014]大孔树脂HPD100 (河北省沧州宝恩吸附材料科技有限公司)；溴麝香草酚蓝(香港Fisher Science公司)；乙腈为色谱纯(美国TEDIA公司)；乙醇、磷酸、盐酸、氨水、氯仿等均为分析纯；盐酸麻黄碱对照品N0.171241-201007、盐酸伪麻黄碱对照品N0.171237-201208、盐酸甲基麻黄碱对照品N0.171247-200301 (中国药品生物制品检定所)，玻璃层析柱(内径1.5cm，杭州汇普化工仪器有限公司订制)。
[0015]药材N0.201304购自浙江震元医药连锁有限公司，由浙江中医药大学资源与鉴定教研室陈锡林副教授鉴定为草麻黄sinica的草质莖。
[0016]方法与结果
1)精密称取麻黄细粉适量，加入8倍量的0.5%盐酸水溶液，60°C、250W超声提取lh，抽滤，用旋转蒸发仪减压浓缩至所需浓度；
2)精密吸取适量的麻黄供试品溶液，依次加入pH7.5磷酸盐缓冲液10 mL, 0.05%溴麝香草酚蓝溶液4 mL，络合3 min后，每次加入10 mL氯仿萃取两次，分取氯仿层，测定416nm波长处的吸光度值，以盐酸麻黄碱为对照，计算总生物碱的含量；
3)取适量的麻黄供试品溶液，进行HPLC分析，测定麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱三种主要成分的含量，色谱条件为:色谱柱Agilent Zorbax SB-C18 (250 mmX 4.6 mm, 5 u m),0.1%磷酸:乙腈=95:5，检测波长为210 nm ;柱温30°C ;流速I mL.mirT1，进样量20 u L ；
4)将HPD100型大孔树脂置于烧杯中，用95%乙醇浸泡24h，使其充分膨胀，抽滤后加入95%乙醇洗涤大孔树脂至洗涤液加适量蒸馏水无白色浑浊现象，再用蒸馏水洗净乙醇，真空抽滤后备用；
5)上样、洗脱，其中上样药液pH为5.5，上样浓度为0.12 g-mr1,上样流速为0.SmLmirT1，洗脱剂体积为7.8 BV，洗脱剂为95%的乙醇，洗脱流速为1.0mLmin'
[0017]经试验验证后，所得的麻黄总生物碱的综合指标比吸附量为5.58 mg.g'综合指标比解吸量为5.50 mg.g'接近预测值(综合值依据麻黄总生物碱和三种主要成分的比吸附量、比解吸量用熵权法赋予相应的权重后计算得到)。[0018]将洗脱液旋转蒸发仪蒸干得麻黄总生物碱纯化物，测定其中总生物碱的含量和三种主要成分的含量，计算所得麻黄总生物碱及其三种主要成分的得率分别达到30.01%和28.63%，提升为纯化前的2.18倍和2.25倍。
[0019]大孔树脂具有物理化学稳定性高、选择性好、再生处理方便等特点，本试验所用HPD100型非极性大孔树脂，相比其他大孔树脂对麻黄总生物碱的吸附和解吸性能具有明显优势。平衡吸附量可达15.49 mg.g—1，静态吸附率达到89.95 %和静态解吸率达到85.48 %。一般情况下，非极性吸附树脂适合从极性溶液吸附非极性物质，反之亦然。麻黄中生物碱成分极性较大，而HPD100型大孔树脂对其有较大吸附量，可能与它具有较大的比面积650-700 (m2*g^),适当的平均孔径90-100 (
I)有密切关系。
[0020]以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改 、等同替换和改进等，均包含在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，其特征在于包括以下步骤: 1)精密称取麻黄细粉适量，加入8倍量的0.5%盐酸水溶液，60°C、250W超声提取lh，抽滤，用旋转蒸发仪减压浓缩至所需浓度； 2)精密吸取适量的麻黄供试品溶液，依次加入pH7.5磷酸盐缓冲液10 mL, 0.05%溴麝香草酚蓝溶液4 mL，络合3 min后，每次加入10 mL氯仿萃取两次，分取氯仿层，测定416nm波长处的吸光度值，以盐酸麻黄碱为对照，计算总生物碱的含量； 3)取适量的麻黄供试品溶液，进行HPLC分析，测定麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱三种主要成分的含量； 4)将大孔树脂置于烧杯中，用95%乙醇浸泡24 h，使其充分膨胀，抽滤后加入95 %乙醇洗涤大孔树脂至洗涤液加适量蒸馏水无白色浑浊现象，再用蒸馏水洗净乙醇，真空抽滤后备用; 5)上样、洗脱，其中上样药液pH为5—6，上样浓度为0.1—0.15 g-mr1,上样流速为.0.3—0.7 mLiirr1，洗脱剂体积为7.5—8 BV，洗脱剂为95%的乙醇，洗脱流速为0.8—1.2mT.min-1n
2.如权利要求1所述的一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，其特征在于步骤3)中色谱条件为:色谱柱 Agilent Zorbax SB-C18 (250 mmX4.6 mm, 5 u m), 0.1% 磷酸:乙腈=95:5，检测波长为210 nm ;柱温30 V ;流速I mL.min—1，进样量20 u L。
3.如权利要求1所述的一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，其特征在于步骤4)中所述的大孔树脂为HPD100型大孔树脂。
4.如权利要求1所述的一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，其特征在于步骤5)中上样药液pH为5.3—5.7，上样浓度为0.11—0.13 g.mL'上样流速为0.4—0.6 mL*min_1,洗脱剂体积为7.7—7.9 BV，洗脱剂为95%的乙醇，洗脱流速为0.9— 1.1mL-1nin^10
5.如权利要求1所述的一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，其特征在于步骤5)中上样药液pH为5.5，上样浓度为0.12 g-mr1,上样流速为0.5mL*min^,洗脱剂体积为7.8BV，洗脱剂为95%的乙醇，洗脱流速为1.0mLmin'
【文档编号】A61K125/00GK103800397SQ201410047475
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2014年2月11日 优先权日:2014年2月11日
【发明者】何昱, 万海同, 郑孟凯, 周惠芬, 陶雪芬 申请人:浙江中医药大学