一种采用大孔吸附树脂纯化鹿血低聚肽的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种采用大孔吸附树脂技术纯化鹿血低聚肽的方法。
【背景技术】
[0002]鹿血是传统名贵中药，自古以来就是宫廷皇族、达官显贵治病健身的珍品。许多学者对鹿血的各种功能进行了研究，表明鹿血具有增强免疫、补血、延缓衰老、抗疲劳、提高性功能、益精、安神、促进代谢和创伤愈合等功能。鹿血中含有多种有效活性成分，具有很多生理功能，如超氧化物歧化酶、免疫球蛋白、血红素等。
[0003]现代科学研究表明，人类对蛋白质的利用是将蛋白质酶解成小分子低聚肽吸收利用，而不是以前所认为的需要将蛋白质分解为氨基酸。低聚肽吸收机制的最大特点是不需要消化直接吸收，不需消耗人体能量，吸收速度快，优先吸收，在人体中合成蛋白质的速率较氨基酸快。因此只需将蛋白质水解为低聚肽即可满足人类的需要。
[0004]鹿血资源的利用，现有技术大多是对鹿血原血液的直接利用，例如与酒混合配制鹿血酒，但鹿血酒往往成色不好，有絮状沉淀产生，并且蛋白质和多肽会发生变性，致使生物活性和营养成分部分或全部丧失。中国专利(102199648 A)利用木瓜酶和碱性蛋白酶依次对鹿血进行酶解后，采用膜技术纯化，获得活性肽，开拓了其在分子生物学领域的应用。但是，该专利利用膜技术，使得生产活性肽的成本较高。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种采用大孔吸附树脂纯化鹿血低聚肽的方法。
[0006]本发明实现上述目的的技术方案如下:
为了拓宽鹿血资源的应用范围，使其营养成分更好地被吸收利用，据此获取高纯度低聚肽，我们利用大孔吸附树脂从鹿血中制备低聚肽的工艺方法。
[0007]采用中国专利(102199648 A)的方法对鹿血进行酶解，酶解后的上清液在大孔吸附树脂柱上按照串联吸附方式进行吸附。待吸附饱和后，用溶剂洗脱，洗脱液浓缩，干燥后得到不同纯度的低聚肽产品。
[0008]本发明以鹿血为原料，经酶解后的上清液在大孔吸附树脂柱上进行吸附，收集流出液，经酸或碱冲洗后，再用有机溶剂、水、酸或碱按照两元或多元组合溶剂洗脱树脂柱，流出液、酸或碱洗液和洗脱液分别减压浓缩，干燥后得到不同纯度的鹿血低聚肽产品。
[0009]一种采用大孔吸附树脂纯化鹿血低聚肽的方法，其特征在于该方法包括以下步骤:
A、鹿血酶解后，上清液为低聚肽产品的纯度为50%通过单根树脂柱或多根树脂柱按照串联吸附方式进行吸附，吸附后收集流出液；
B、吸附饱和后的树脂柱用广20BV体积浓度为f 20%的酸或质量浓度为f 20%的碱冲洗，收集酸或碱洗脱液；然后树脂柱再用广20 BV的解吸液洗脱，流速均为f 25 BV/h ;流出液、酸或碱洗脱液和解吸液经过减压浓缩回收溶剂后，经干燥后得到鹿血低聚肽。
[0010]本发明得到的鹿血低聚肽为白色或淡黄色固体粉末，纯度65、5%。
[0011]在A步骤中，所述的树脂是指中极性或极性的苯乙烯系大孔吸附树脂。
[0012]在A步骤中，大孔吸附树脂与鹿血质量比为0.5: f 10:1，树脂柱径高比为1:4?1:30，柱温为25?50。。。
[0013]在B步骤中，所述的解吸液是指第三类有机溶剂、水、食品级酸或碱按照两元或多元组合溶剂，洗脱时采用等度洗脱或梯度洗脱。
[0014]本发明的产品参照国标GB/T 22729-2008中液相色谱法进行测定。
[0015]色谱条件:
色谱柱:TSK gel G2000 SffXL 300 mmX7.8 mm或性能与此相近的同类型其它适用于测定蛋白质和多肽的凝胶柱。
[0016]流动相:乙腈:水:三氟乙酸=45:55:0.1 (v:v:v);流速:0.5 mL/min ;检测波长:220 nm ;参比波长:360 nm ;柱温:30 °C，进样量:20 μ?。
[0017]本发明与已有技术方法相比，特点在于提供了一种利用大孔吸附树脂技术从鹿血中制备低聚肽的工艺，其生产成本低、操作简单、易于实现工业化生产，制备的低聚肽纯度高、水溶性好、无腥味，可广泛应用于医药、保健品、食品、化妆品等行业。
【具体实施方式】
[0018]以下实施例用于进一步说明本发明，但不意味着这对本发明的任何限制。
[0019]实施例1
称取HPD750和LSD001树脂两份，每份300 g，湿法分别装入两根内径3 cm、柱高66 cm的玻璃柱(A柱和B柱)中，两柱串联，同时用输液泵输送吸附液。将鹿血酶解后的上清液(5L)依次流过该串联树脂柱，进行吸附，流速10 BV/h,树脂柱温度为50°C，收集流出液。流出液经减压浓缩，常压60°C干燥得到1000 g纯度为90%的低聚肽。以6 BV/h流速分别向吸附完成的A柱、B柱中加入5%醋酸溶液洗脱，用量为12 BV,收集酸洗脱液。洗脱液经减压浓缩，于50°C真空减压干燥得到200 g纯度为80%的低聚肽产品。然后用乙醇-10%乙二酸(3:7，v/v)对A柱、B柱进行洗脱，流速15 BV/h，洗脱液用量10 BV，得到的洗脱液经减压浓缩回收溶剂后，红外线干燥得到50 g纯度为66%的低聚肽产品。
[0020]实施例2
称取LX-28和DM 301树脂两份，每份200 g，湿法分别装入两根内径5 cm、柱高80 cm的玻璃柱(A柱和B柱)中，两柱串联，同时用输液泵输送吸附液。将鹿血酶解后的上清液(IL)依次流过该串联树脂柱，进行吸附，流速5 BV/h,树脂柱温度为30°C，收集流出液。流出液经减压浓缩，真空冷冻干燥得到220 g纯度为93%的低聚肽。以8 BV/h流速分别向吸附完成的A柱、B柱中加入10%碳酸氢钠溶液洗脱，用量为8 BV,收集洗脱液。得到的洗脱液经减压浓缩，60°C常压干燥得到45 g纯度为85%的低聚肽产品。然后用乙醇-20%碳酸氢钠(5:5，v/v)对A柱、B柱进行洗脱，流速25 BV/h，洗脱液用量8 BV0洗脱液经减压浓缩回收溶剂后，红外线干燥得到8 g纯度为70%的低聚肽产品。
[0021]实施例3
称取LSA-40树脂3000 g，湿法装入内径20 cm、柱高100 cm的玻璃柱中，同时用输液泵输送吸附液。将鹿血酶解后的上清液(20 L)依次流过该树脂柱，进行吸附，流速15 BV/h，树脂柱温度为20°C，收集流出液。流出液经减压浓缩，真空冷冻干燥得到8000 g纯度为90%的低聚肽。以I BV/h流速向吸附完成的树脂柱中加入10%醋酸溶液洗脱，用量为12BV，收集酸洗脱液。洗脱液经减压浓缩，50°C常压干燥得到3000 g纯度为75%的低聚肽产品。然后用乙醇-15%柠檬酸(2:8，v/v)对A柱、B柱进行洗脱，流速8 BV/h，洗脱液用量6BV,得到的洗脱液经减压浓缩回收溶剂后，40°C真空减压干燥得到500 g纯度为68%的低聚肽产品。
【主权项】
1.一种采用大孔吸附树脂纯化鹿血低聚肽的方法，其特征在于该方法包括以下步骤: A、鹿血酶解后，上清液为低聚肽产品的纯度为50%通过单根树脂柱或多根树脂柱按照串联吸附方式进行吸附，吸附后收集流出液； B、吸附饱和后的树脂柱用广20BV体积浓度为f 20%的酸或质量浓度为f 20%的碱冲洗，收集酸或碱洗脱液；然后树脂柱再用广20 BV的解吸液洗脱，流速均为广25 BV/h;流出液、酸或碱洗脱液和解吸液经过减压浓缩回收溶剂后，经干燥后得到鹿血低聚肽。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于:在A步骤中，所述的树脂是指中极性或极性的苯乙烯系大孔吸附树脂。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于:在A步骤中，大孔吸附树脂与鹿血质量比为0.5:广10:1，树脂柱径高比为1:4?1:30，柱温为25?50。。。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于:在B步骤中，所述的解吸液是指第三类有机溶剂、水、食品级酸或碱按照两元或多元组合溶剂，洗脱时采用等度洗脱或梯度洗脱。
【专利摘要】本发明公开了一种采用大孔吸附树脂纯化鹿血低聚肽的方法。本发明以鹿血为原料，经酶解后的上清液在大孔吸附树脂柱上进行吸附，收集流出液，经酸或碱冲洗后，再用有机溶剂、水、酸或碱按照两元或多元组合溶剂洗脱树脂柱，流出液、酸或碱洗液和洗脱液分别减压浓缩，干燥后得到不同纯度的鹿血低聚肽产品。所得鹿血低聚肽产品中低聚肽的含量为65~95%。本发明具有工艺简单、制备过程安全、整个提取工艺适合于工业化生产、降低生产成本的优点。
【IPC分类】C07K1-22
【公开号】CN104628812
【申请号】CN201310544988
【发明人】刘毅, 刘永峰, 裴栋, 魏鉴腾, 邸多隆
【申请人】中国科学院兰州化学物理研究所
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2013年11月7日