一种有抗菌及增效抗菌活性的药物及其制备方法与应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种药物物质，及其制备方法。本发明药物物质由连翘饮经过乙醇提取、大孔吸附树脂纯化得到，富集了连翘饮中的环烯醚萜类和酚类类成分，同时经过体内外抗菌试验证明，本发明药物物质体外联合口服抗生素头孢克洛胶囊有抗菌增效作用，体内试验对金黄色葡萄球菌感染模型小鼠具有保护性作用，使细菌感染模型小鼠死亡率降低，延长存活时间，显示出良好的抗菌及抗菌增效活性。
【专利说明】一种有抗菌及增效抗菌活性的药物及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物研究开发领域，涉及一种药物物质，特别涉及一种具有抗菌及增 效抗菌活性的药物物质及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 随着抗生素在临床上的广泛使用，耐药性问题也日益突出，寻找新的抗菌药物或 逆转细菌耐药已成为国际上研究的热点，现有不少研究显示中药具有抗菌活性或逆转细菌 耐药的作用，很多中药复方制剂作用又优于单味中药，因此研究合理的中西药联用既能提 高疗效，又可缩短疗程，并能抑制临床上耐药菌株出现的频繁性，具有重大的意义。
[0003] 连翘饮，来源于《类证活人书》卷二十，异名连翘散（《斑论萃英》）、防风散（《普 济方》卷三六九）、上清连翘散（《丹溪心法附余》卷十）。由连翘、防风、甘草（炙）、山桅 子等分组成。功用，疏风清热。主治，小儿风热感冒、诸疮肿毒、咽喉疼痛。方中连翘、桅子 对多种病原微生物都有抑制作用，如抗细菌、抗真菌、抗病毒、杀钩端螺旋体作用等。防风、 甘草具有很好的清热解毒、抗炎作用，同时也具有抗菌作用。目前临床上，连翘饮及其加减 方多用于治疗小儿发热等疾病。
[0004] 本发明人以连翘饮为研究载体，以自然药学观为基本指导思想，运用笔者所创立 的药物成分药代-药效动力学与相互作用性关联研究方法学体系（PK-PD-DI)，以药物体系 所体现的自然性、协同性、亲和性为线索寻找连翘饮抗菌药物体系，并以药物体系为主导进 行药物制备工艺研究，目前，未见从连翘饮中制备抗菌药物物质的报道，本发明基于药物体 系研究结果，将连翘饮中的有关萜类成分和酚类成分作为药物物质基本组成采用大孔吸附 树脂进行分离富集，得到连翘饮具有抗菌及增效抗菌作用的药物物质，有利于进一步创新 药物的研发。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种具有抗菌及增效抗菌作用的中药药物物质，其药物体 系由环烯醚萜、酚类等组成。本发明的另一个目的在于提供其制备方法及工艺，本发明的第 三个目的在于提供其质量检测及其控制方法。本发明的第四个目的在于提供其体外抗菌及 增效抗菌活性，以及对金黄色葡菌感染小鼠的保护作用。本发明的第五个目的在于提供该 中药药物物质组合物的制品及其在药品、食品领域的应用。
[0006] 本发明的目的是通过如下途径实现的：
[0007] 本发明中药药物物质组合可由如下4组药用植物及其代用品种，包括其药用部位 及非药用部位，药材及其饮片组合制成。
[0008] 组1:连翘、青翘、黄翘、秦连翘、金钟花、卵形连翘、丽江连翘、奇异连翘等木犀科 植物.
[0009]组2:防风、川防风、云防风、小防风等伞形科植物。
[0010] 组3 :桅子、水桅子等茜草科及其同属植物。
[0011] 组4:甘草、胀果甘草、光果甘草、粗毛甘草、云南甘草、圆果甘草等甘草属及同科 植物及其炮制品。
[0012] 本发明中药药物物质，可经上述原料药组合后以乙醇、或其他醇类、稀醇、或其他 有机溶剂或水提取再通过大孔吸附树脂或其他色谱方法，如聚酰胺色谱法等，或溶剂萃取 法等纯化得到。
[0013] 本发明中药药物物质可由上述原料药的提取物经进一步富集纯化后或上述原料 药的大孔树脂制备物混合而成。
[0014] 本发明中药药物物质可经化学合成或结构修饰，生物合成或生物转等途径获得。
[0015] 本发明中药药物组合优选由如下原料药制成：
[0016] 连翘100-250重量份防风100-250重量份
[0017] 振子 100-250重量份甘草 100-250重量份。
[0018] 本发明药物物质的制备方法包括如下步骤：
[0019] 步骤1 :选取上述原料药；
[0020] 步骤2:乙醇提取；
[0021] 步骤3 :弱极性或非极性大孔吸附树脂纯化；
[0022] 该药物物质的制备部位1中总环烯醚萜含量为4-50%，总酚含量为5% -50%，桅 子苷含量2-30 %，优选总环烯醚萜含量25-40 %，总酚含量25-40 %，桅子苷含量15-30 %。 制备部位2中总酚含量10-70 %，连翘酯苷A含量0. 12-2.0%，甘草酸含量0.4-5. 0%，升 麻素含量〇. 04-0. 65 %，连翘苷含量0. 03-0. 7 %，优选总酚含量50-70 %，连翘酯苷A含量 1. 0-2. 0 %，甘草酸含量3. 5-5. 0 %，升麻素含量0. 40-0. 65 %，连翘苷含量0. 5-0. 7 %。
[0023] 上述步骤2中，将原料药用8-12倍量，0-80 %乙醇回流提取1-4次，每次提取 0. 5-2小时，合并提取液减压浓缩，至相对密度1. 15-1. 25g/ml的清膏，加水分散，使上样液 浓度为 〇? 02-0. 2g/ml。
[0024] 上述步骤3中，将步骤2所得提取物加水分散溶解，使水溶液浓度为0. 02-0.2g/ mL，通过弱极性或非极性大孔吸附树脂，生药量与树脂体积比为0. 2-0.7:1，树脂柱径高 比为1 : 4-10,上样液浓度为0. 02-0.2g/mL，吸附流速为1. 0-4. OBV/h，水洗脱1-4倍树脂 体积进行除杂，除杂流速为1. 0-4. OBV/h，10-30 %乙醇洗脱10-15倍树脂体积，洗脱流速为 1. 0-4. OBV/h，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得环烯醚萜部位，优选15-20%乙醇 洗脱；50-90 %乙醇洗脱3-7倍树脂体积，洗脱流速为1. 0-4. OBV/h，收集乙醇洗脱液，回收 溶剂，减压干燥，即得总酚部位，优选75-85 %乙醇洗脱；
[0025] 将以上所得药物物质，加入常规辅料，按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任 意常规剂型，包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液等。
[0026] 本发明药物物质由连翘饮经过乙醇提取、大孔吸附树脂纯化得到，富集了连翘饮 中的环烯醚萜类成分和酚类成分，同时经过体内外抗菌试验证明，本发明药物物质体外联 合口服抗生素头孢克洛胶囊有抗菌增效作用，体内试验对金黄色葡萄球菌感染模型小鼠具 有保护性作用，使细菌感染模型小鼠死亡率降低，延长存活时间。
[0027] 实验例1本发明抗菌活性部位体外联用抗生素具有抗菌增效的作用
[0028](一）实验材料
[0029] 1?菌种
[0030] 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus) (CMCC26112)购自北京北纳创联生物 技术研究院。
[0031] 2?药品及试剂
[0032] 头孢克洛胶囊（昆明贝克诺顿制药有限公司批号：国药准字H53021942)
[0033] 3?仪器设备
[0034] HD-1360洁净工作台（北京东联哈尔仪器制药有限公司）、HZQ-X100震荡培养箱 (中国.哈尔滨市东联电子技术开发有限公司）、DHG-9053A型电热恒温鼓风干燥箱（上 海-恒科技有限公司）、MLS-3780日本三洋高压蒸汽灭菌器（北京得尔贝经贸有限公司）、 MP6001电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）、Sartorius BT25S型1/100000电子 分析天平（北京赛多利斯仪器有限公司）、KQ-500DE型数控超声清洗器（昆山超声仪器有 限公司）。
[0035] (二）实验方法及结果
[0036] L液体培养基及LB平板制备
[0037] LB液体培养基：精密称取胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，加IL去离子 水超声溶解，用I. Omol/L NaOH溶液调pH约7. 2,置高压蒸汽灭菌锅灭菌30min，冷却待用。
[0038] LB平板制备：精密称取胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂10g，加IL 去离子水溶解，用I. 〇mol/L NaOH溶液调pH约7. 2,置高压蒸汽灭菌锅灭菌30min，趁热倒 入已灭菌的玻璃培养皿中，冷却凝固后形成厚度为4_的平板，取出一个LB平板置于37°C 恒温箱内培养18h做无菌试验，其余用封口膜密封置4°C冰箱保存，7d内用完。
[0039] 2?菌液制备
[0040] 金黄色葡萄球菌一代菌液以菌液体积：培养液体积=1 : 10,接种于液体培养基 内，置37°C培养箱内振荡培养（200r/min) 18h，作为原菌液。以生理盐水稀释菌液至1/2麦 氏比浊度，按1 : 1000稀释菌液至含菌量约1〇~6个/ml，作为待用菌液。
[0041] 3.供试品及载药纸片制备
[0042] 3. 1供试品溶液制备：去本发明药物物质适量，以去离子水溶解并定容，制成每个 供试品浓度相当于I. 25g全方生药量/ml，记作A1。将Al样品进行2倍稀释，定容，得A2 溶液。
[0043] 3. 2抗生素溶液制备：精密称取头孢克洛胶囊内容物I. 93mg，置IOml容量瓶中，去 离子水溶解定容，得Bl溶液；精密移取Bl溶液5ml，置IOml容量瓶中，去离子水溶解定容， 得B2溶液；再精密移取B2溶液5ml，置IOml容量瓶中，去离子水溶解定容，得B3溶液；再 精密移取B3溶液5ml，置IOml容量瓶中，去离子水溶解定容，得B4溶液，过0. 22 ii m无菌滤 膜除菌待用。
[0044] 3. 3载药纸片的制备：用打孔器将滤纸达成直径6_的滤纸片，高压蒸汽灭菌后至 烘箱内烘干，得空白纸片。分别按照表1分组进行载药纸片的制备，每片纸片载药5iU，吹 干待用。
[0045] 表1载药纸片制备方法表
[0046]
【权利要求】
1. 一种具有抗菌及增效抗菌作用的药物物质，其特征在于该药物物质的制备方法包括 如下步骤： 步骤1 :选取如下原料： 连翘100-250重量份防风100-250重量份 桅子10CK250重量份炎甘草100-250重量份 步骤2 :乙醇提取； 步骤3 :弱极性或非极性大孔吸附树脂纯化； 该药物物质的制备部位1中总环烯醚萜含量为10-40%，总酚含量为5% -40%，桅子 苷含量5-30 %，优选总环烯醚萜含量25-40 %，总酚含量25-40 %，桅子苷含量15-30 %。 制备部位2中总酚含量10-70%，连翘酯苷A含量0. 12-2.0%，甘草酸含量0.4-5. 0%，升 麻素含量〇. 04-0. 65 %，连翘苷含量0. 03-0. 7 %，优选总酚含量50-70 %，连翘酯苷A含量 1. 0-2. 0 %，甘草酸含量3. 5-5. 0 %，升麻素含量0. 40-0. 65 %，连翘苷含量0. 5-0. 7 %。
2. 如权利要求1所述的药物物质，其特征在于步骤1中原料药的组成为： 连翘100-250重量份防风100-250重量份 桅子10CK250重量份炎甘草100-250重量份。
3. 如权利要求1或2所述的药物物质，其特征在于步骤2中，将原料药用8-12倍量， 0-80%乙醇回流提取2-4次，每次提取0. 5-2小时。
4. 如权利要求1或2所述的药物物质，其特征在于步骤3中，将步骤2所得提取液合并 减压浓缩，至相对密度I. 15-1. 25g/ml的清膏，加水分散，是上样液浓度为0. 02-0. 2g/ml。
5. 如权利要求1或2所述的药物物质，其特征在于步骤3中，上样液通过弱极性或非极 性大孔吸附树脂，生药量与树脂体积比为0.2-0. 7 : 1，树脂柱径高比为1 : 4-10,上样液 浓度为〇. 02-0. 2g/mL，吸附流速为I. 0-4. OBV/h，水洗脱1-4倍树脂体积进行除杂，除杂流 速为I. 0-4. OBV/h，10-30%乙醇洗脱10-15倍树脂体积，洗脱流速为I. 0-4. OBV/h，收集乙 醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得环烯醚萜部位，优选15-20%乙醇洗脱；50-90%乙醇 洗脱3-7倍树脂体积，洗脱流速为I. 0-4. OBV/h，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即 得总酚部位。
6. 如权利1-5所述中药药物物质组合其特征在于可由如下4组药用植物及其代用品 种，包括其药用部位及非药用部位，药材及其饮片组合制成. 组1 :连翘、青翘、黄翘、秦连翘、金钟花、卵形连翘、丽江连翘、奇异连翘等木犀科植物 及其炮制品. 组2 :防风、川防风、云防风、小防风等伞形科植物及其炮制品。 组3 :桅子、水桅子等茜草科及其同属植物及其炮制品。 组4:甘草、胀果甘草、光果甘草、粗毛甘草、云南甘草、圆果甘草等甘草属及同科植物 及其炮制品。
7. 如权利1-5所述中药药物物质组合其特征在于可经上述原料药组合后以乙醇、或其 他醇类、稀醇、或其他有机溶剂或水提取再通过大孔吸附树脂或其他色谱方法，如聚酰胺色 谱法等，或溶剂萃取法等纯化得到。
8. 如权利1-5所述中药药物物质组合其特征在于可由权利6中所述原料药的提取物经 进一步富集纯化后或上述原料药的大孔树脂制备物混合而成。
9. 如权利1-5所述中药药物物质组合其特征在于可经化学合成或结构修饰，生物合成 或生物转等途径获得。
10. 如权利要求1-9所述中药药物物质组合，其特征在于可加入本领域公知的各种药 用辅料，按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，也可制成长效和缓释制剂、 控释制剂、靶向制剂等其他传输系统给药制剂。所制得药剂可作为人药、兽药、植物用药使 用或施用。
11. 如权利要求1-9所述中药药物物质组合，其特征在于可加入公知的食品添加剂如 防腐剂、抗氧化剂剂、着色剂、增稠剂和稳定剂、膨松剂、甜味剂、酸度剂、增白剂、香料等制 成具有预防保健功能的保健食品或饮品。
12. 如权利要求1-9任一所述的中药药物物质组合在制备具有抗菌及增效抗菌、抗炎、 解热、镇痛、止咳、化痰药物中的应用。
【文档编号】A61P29/00GK104306492SQ201410229646
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年5月27日 优先权日:2014年5月27日
【发明者】石任兵, 王永炎, 梅莹莹, 彭平, 姜艳艳, 许舒娅, 迟蕾, 卢广英, 王春梅 申请人:石任兵, 王永炎