雷公藤甲素和雷公藤红素在制备抗肿瘤药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明属于抗肿瘤药物制备【技术领域】，公开了雷公藤甲素和雷公藤红素联合用药在制备抗肿瘤药物中的应用。雷公藤甲素和雷公藤红素联合用药，在本发明的用量比例范围内，两者具有明显的协同作用，有效提高疗效，相对于单一组分或两组分简单疗效叠加更显著，提高了对肿瘤细胞的杀伤性；有效降低彼此的用药量，从而减少毒副作用；两者联合使用也可节约成本，减轻病人的经济负担了，为肿瘤的防治提供了一条新途径，在医药学领域的应用前景广阔。
【专利说明】雷公藤甲素和雷公藤红素在制备抗肿瘤药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于抗肿瘤药物制备【技术领域】，特别涉及雷公藤甲素和雷公藤红素联合用 药在制备抗肿瘤药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 恶性肿瘤是世界上严重威胁人类健康的常见病和多发病，目前治疗肿瘤的主要方 法有手术治疗、化学疗法和放射疗法。化疗作为肿瘤治疗的三大传统手段之一，在肿瘤治疗 中占据着重要地位。然而，目前临床上使用的化疗药物大多对肿瘤细胞杀伤的选择性不强， 且毒副作用大，并多具有免疫抑制作用。因此，从天然药物中研究开发高效低毒的新型抗肿 瘤药物一直是抗肿瘤药物研究的热点。联合用药是近年来肿瘤化疗领域的热点之一，大量 的临床和实验研究证明，联合药物疗法在肿瘤的防治和康复方面有特效。其与传统的单药 治疗相比具有多种优点，如可以同时靶向多种重要信号通路、克服肿瘤耐药、降低毒副作用 等。
[0003] 雷公藤甲素（Triptolide，Trip)是雷公藤属雷公藤、昆明山海棠等植物中的主要 有效成分，雷公藤红素（南蛇藤素，CelastroLCela)是雷公藤属雷公藤和南蛇藤属南蛇藤 等植物中的主要有效成分。现有研究表明雷公藤甲素和雷公藤红素对实体瘤均有良好的抗 肿瘤活性，但明显的毒副作用限制了其临床应用。联合用药的目的是获得协同作用，从而提 高疗效，降低毒副作用，减缓耐药性的发生。目前，尚没有雷公藤甲素和雷公藤红素联合使 用的相关文献报道。本发明在体内外都研究了雷公藤甲素和雷公藤红素联合用药的抗肿瘤 活性。
【发明内容】
[0004] 为了克服上述现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供雷公藤甲素和 雷公藤红素联合用药在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0005] 本发明的目的通过下述方案实现：
[0006] 雷公藤甲素（Triptolide)和雷公藤红素（Celastrol)联合用药在制备抗肿瘤药 物中的应用。
[0007] 本发明所述的雷公藤甲素与雷公藤红素的用量摩尔比为0. 001:1?1:1。
[0008] 本发明所述的雷公藤甲素和雷公藤红素的联合用药可显著的引起肿瘤细胞周期 阻滞作用，使肿瘤细胞阻滞在G2/M期，从而抑制肿瘤细胞增殖，主要用于但不局限于制备 治疗肺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、肝癌及结肠癌的药物。
[0009] 所述的联合用药可提高肿瘤细胞对雷公藤甲素和雷公藤红素相互的敏感性，引起 肿瘤细胞内ROS含量剧增，并可有效地提高对肿瘤细胞的杀伤能力，能极大促进肿瘤细胞 凋亡的发生。
[0010] 所述的雷公藤甲素的有效剂量为〇. 4mg/kg，雷公藤红素的有效剂量为2mg/kg。
[0011] 所述的药物含有一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
[0012] 本发明所述雷公藤甲素和雷公藤红素联合用药在制备抗肿瘤药物中的应用，指可 通过抑制H1299、H157、H460、H1650、H1944、0VCAR3、SK0V3、SIHA、HELA、BGC823、BEL7402 和 SW480等不同类型的肿瘤细胞的生长以达到治疗肿瘤的作用；可以引起H1299和H157细胞 周期阻滞，使细胞阻滞在G2/M期，从而抑制肿瘤细胞增殖；可以引起H1299和H157细胞发 生凋亡，从而抑制肿瘤细胞增殖；可通过引起H1299和H157细胞内活性氧含量剧增，从而 诱发细胞发生凋亡，从而抑制肿瘤细胞增殖；也可通过抑制热休克家族蛋白HSP90、HSP70、 HSP27以及HSP90客户蛋白的表达来诱导肿瘤细胞凋亡。本发明所述雷公藤甲素和雷公藤 红素联合用药可以抑制裸鼠移植瘤生长。
[0013] 本发明相对于现有技术，具有如下的优点及有益效果：
[0014] 1、雷公藤甲素和雷公藤红素联合用药，在本发明的用量比例范围内，两者具有明 显的协同作用，有效提高疗效，相对于单一组分或两组分简单疗效叠加更显著，提高了对肿 瘤细胞的杀伤性。
[0015] 2、在保证同样治疗效果的情况下，雷公藤甲素和雷公藤红素的联合使用可以降低 彼此的用药量，从而减少毒副作用。
[0016] 3、雷公藤甲素和雷公藤红素的联合使用也可节约成本，减轻病人的经济负担了， 本发明为肿瘤的防治提供了一条新途径，在医药学领域的应用前景广阔。
【专利附图】
【附图说明】
[0017] 图1为利用MTT方法检测不同肿瘤细胞在雷公藤甲素或雷公藤红素单独处理后的 存活率。
[0018] 图2为用MTT方法检测肺癌细胞H1299、H157、H460、H1650经雷公藤甲素和雷公 藤红素单独处理及联合处理后细胞的存活率。
[0019] 图3为用MTT方法检测肺癌细胞H1944、卵巢癌细胞0VCAR3和SK0V3、宫颈癌细胞 SIHA和HELA、胃癌细胞BGC823、肝癌细胞BEL7402和结肠癌细胞SW480经雷公藤甲素和雷 公藤红素单独处理及联合处理后细胞的存活率。
[0020] 图4为利用流式细胞术对经雷公藤甲素和雷公藤红素分别单独处理及联合处理 后肺癌细胞H1299和H157的细胞周期分布。
[0021] 图5为利用流式细胞术对经雷公藤甲素和雷公藤红素分别单独处理及联合处理 后肺癌细胞H1299和H157的细胞凋亡检测结果。
[0022] 图6为利用荧光显微镜检测对经雷公藤甲素和雷公藤红素分别单独处理及联合 处理后肺癌细胞H1299和H157胞内活性氧水平（ROS)。
[0023] 图7为利用WesternBlot法评价经雷公藤甲素和雷公藤红素分别单独处理及联合 处理后肺癌细胞H1299和H157胞内热休克蛋白家族及其他相关蛋白的影响。
[0024] 图8为在裸鼠动物中，雷公藤甲素和雷公藤红素单独给药及联合给药后小鼠移植 瘤体积的生长曲线。
【具体实施方式】
[0025] 下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限 于此。
[0026] 本发明实施例使用的所有细胞株均来源于ATCC，本发明使用的雷公藤甲素和雷公 藤红素购于上海源叶生物科技有限公司
[0027]实施例1:检测不同肿瘤细胞对雷公藤甲素或雷公藤红素的敏感性
[0028] 用MTT法检测不同肿瘤细胞对雷公藤甲素或雷公藤红素的敏感性。将人肺癌细胞 H1299、H157、H460、H1650 和H1944、卵巢癌细胞 0VCAR3 和SK0V3、宫颈癌细胞SIHA和HELA、 胃癌细胞BGC823、肝癌细胞BEL7402和结肠癌细胞SW480以每孔3000?5000个细胞的数 量接种到96孔板，待细胞贴壁后，分别加入不同浓度的雷公藤甲素或雷公藤红素的PBS溶 液。培养68h后，每孔加入10μL浓度为5mg/ml的MTT再培养4h，然后弃培养液每孔加入 100μL的DMS0,用酶标仪在490nm读取每孔的吸光值。用Bliss法计算半数抑制浓度值 (IC5tl)15具体结果见表1和图1。
[0029] 从表1可以看出，雷公藤甲素和雷公藤红素对不同的肿瘤细胞的IC5tl值都处在一 个比较小的范围内，其中雷公藤甲素对不同的肿瘤细胞的IC5tl值在0. 007?0. 124μM范围 内，而雷公藤红素对不同的肿瘤细胞的IC5tl值在1. 53?6. 44μM范围内。表明雷公藤甲素 和雷公藤红素对不同的肿瘤细胞都具有较好的抑制增殖作用。
[0030] 实施例2 :检测雷公藤甲素或雷公藤红素单独使用以及联合使用对不同肿瘤细胞 存活率的影响
[0031]将人肺癌细胞Η1299、Η157、Η460、Η1650 和Η1944、卵巢癌细胞 0VCAR3 和SK0V3、 宫颈癌细胞SIHA和HELA、胃癌细胞BGC823、肝癌细胞BEL7402和结肠癌细胞SW480以每孔 3000?5000个细胞的数量接种到96孔板，待细胞贴壁后，加入不同的雷公藤甲素和雷公藤 红素的配比的PBS溶液。培养68h后，每孔加入10μL浓度为5mg/ml的MTT再培养4h，然 后弃培养液每孔加入100μL的DMS0,用酶标仪在490nm读取每孔的吸光值。用CompuSyn 软件进行协同作用综合因子（Combinationindex,Cl)分析。结果见图2、图3和表1。
[0032] CI值表示药物联合作用时的一个复合指数，CI值小于、等于和大于1分别表示药 物具有协同作用、增效作用和拮抗作用。从表1可以看出，雷公藤甲素和雷公藤红素对不同 的肿瘤细胞联合使用时，其CI值基本都在小于1的范围内，表示雷公藤甲素和雷公藤红素 在本发明的用量范围内联合使用具有很好的协同作用。
[0033] 表1雷公藤甲素或雷公藤红素单独使用的不同肿瘤细胞的IC5tl值及联合使用时的 CI值
[0034]
【权利要求】
1. 雷公藤甲素和雷公藤红素在制备抗肿瘤药物中的应用。
2. 根据权利要求1所述的雷公藤甲素和雷公藤红素在制备抗肿瘤药物中的应用，其特 征在于：所述的雷公藤甲素与雷公藤红素的用量摩尔比为0.001:1?1:1。
3. 根据权利要求1所述的雷公藤甲素和雷公藤红素在制备抗肿瘤药物中的应用，其特 征在于：所述的肿瘤包括肺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、肝癌及结肠癌。
4. 根据权利要求1所述的雷公藤甲素和雷公藤红素在制备抗肿瘤药物中的应用，其 特征在于：所述的雷公藤甲素的有效剂量为0. 4mg/kg，所述雷公藤红素的有效剂量为2mg/ kg。
5. 根据权利要求1所述的雷公藤甲素和雷公藤红素在制备抗肿瘤药物中的应用，其特 征在于：所述的药物含有一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
【文档编号】A61K31/585GK104398526SQ201410609274
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年10月31日 优先权日:2014年10月31日
【发明者】石智, 蒋起韦, 程科军, 魏星, 吕敏, 张旭 申请人:暨南大学, 丽水市农业科学研究院, 丽水市纳丽斯生物科技有限公司, 浙江中医药大学, 南京中医药大学