技术领域
本发明涉及一种中药的检测方法，即贝芪益肺片及鉴别和含量测定方法。用于肺痨的中药组合物贝芪益肺片，特别适用于继发性肺结核气阴耗伤证。
背景技术：
临床上按照西医分类以“继发性肺结核”为多见，继发性肺结核又称成人型肺结核，为已感染过结核病的儿童，在原发病变已静止或甚至痊愈一个时期后，又发生了活动性肺结核，其发病有两种可能：一为陈旧的原发灶内结核杆菌又重趋活动，引起病灶复燃，称内源性复发；一为原发感染已治愈后再次由外界感染结核杆菌而发病，称外源性重染。续发性肺结核多见于12岁以上年长儿童及少年，主要病型为浸润型肺结核。
肺结核临床以利福平、异烟肼、吡嗪酰胺、乙胺丁醇等化疗药品为主治疗，疗效确切，为法定治疗药品，不足之处是必须连续用药时间不低于九至十二个月才能停药，期间由于此类化疗药品不可避免的毒副作用导致一部分患者不能坚持服用到全疗程或因化疗方案中的某个药物不适合个体服用而频繁更换治疗方案，导致得不到有效控制，病情进展，部分病例予以外科肺切除手术治疗。
技术实现要素：
本发明的目的是针对上述不足而提供一种毒副作用小，疗效可靠，检测合理的贝芪益肺片及鉴别和含量测定方法。
本发明的技术解决方案是：一种贝芪益肺片及鉴别和含量测定方法，步骤如下：
一、贝芪益肺片制备：贝芪益肺片由黄芪200g，百合100g，麦冬100g，平贝母80g，炙百部150g，桔梗100g，胡黄连150g，猫爪草120g，鱼腥草150g，白及100g，三七50g制成；以上十一味，三七、白及粉碎成细粉，钴-60射线辐照灭菌；平贝母、百部、鱼腥草加70﹪乙醇提取2次，第一次2小时，第二次1小时，合并提取液，真空减压回收乙醇，浓缩至相对密度1.25～1.28的清膏；药渣与其余黄芪共六味原料药加水煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述清膏合并，浓缩至相对密度为1.30～1.32的稠膏，加入三七、白及细粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，加入淀粉，制成颗粒，干燥，加入硬脂酸镁4g，压制成1000片，包薄膜衣，即得。
二、鉴别
（1）白及的鉴别：
取本品10片，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，再加盐酸2ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取两次，每次40ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。
另取白及对照药材2g，同法制成对照药材溶液。
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯＝15:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸试液；供试品色谱中与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
（2）鱼腥草的鉴别：
取本品10片，研细，加乙酸乙酯20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
另取鱼腥草对照药材3g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝9：1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的兰色荧光斑点。
（3）百部的鉴别：
取本品8片，研细，加90﹪乙醇20ml与2﹪盐酸1ml，加热回流20分钟，放置过夜，滤过，蒸干，残渣加水10ml使溶解，加浓氨试液调pH值至10以上，用三氯甲烷提取三次，每次10ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加90%乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
另取百部对照药材2g，同法制成对照药材溶液。
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl，对照药材溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以三氯甲烷-甲醇＝10：1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同的红色斑点。
（4）三七的鉴别：取本品8片，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干；残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水10ml使溶解，放冷，通过中性氧化铝柱，以水50ml洗脱，弃去水液，再用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
另取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每１ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水＝15:40:22:10，10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
三、含量测定
取本品15片，研细，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇，水浴中加热回流提取4小时，提取液回收甲醇至干；残渣加水20ml使溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水10ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱，内径1.5cm，长12cm，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇50ml洗脱，弃去40％乙醇洗脱液，继用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每１ml含１mg的溶液，作为对照品溶液。
薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl与4μl，分别交叉点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝65:35:10，10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶带固定，照薄层色谱法进行扫描，波长：?S=530nm，?R=700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。
本发明的优点是：1、经临床，能迅速改善肺结核症状，提高机体免疫功能，减轻化疗毒副作用，促进痰菌阴转，病灶吸收和空洞闭合，毒副作用小，疗效可靠，有推广应用的价值。2、在镇咳、祛痰、止血、抗炎、调节免疫等几大方面有比较理想的效果。3、选取百部，鱼腥草，白及，三七为鉴别项，通过参数试验筛选，实现色谱条件较好、专属性及重现性良好、快速、经济实用。选取了黄芪含量测定方法，使得本方法专属性强，准确度高，有效提高了产品质量，更好的保证了产品的疗效。工艺、检测方法合理、适用、有效。
下面将结合实施例、实验例对本发明的实施方式作进一步详细描述。
具体实施方式
贝芪益肺片及鉴别和含量测定方法：
处方：黄芪200g，百合100g，麦冬100g，平贝母80g，炙百部150g，桔梗100g，胡黄连150g，猫爪草120g，鱼腥草150g，白及100g，三七50g。
性状：本品为薄膜衣片，除去包衣后显棕黄色；味微苦。
制法：以上十一味，三七、白及粉碎成细粉，钴-60射线辐照灭菌（6kGy）；平贝母、百部、鱼腥草加70﹪乙醇（体积分数）提取2次，第一次2小时，第二次1小时，合并提取液，真空减压回收乙醇，浓缩至相对密度1.25～1.28（50℃）的清膏；药渣与其余黄芪等六味加水煎煮二次，每次1.0小时，合并煎液，滤过，滤液与上述清膏合并，浓缩至相对密度为1.30～1.32（50℃）的稠膏，加入三七、白及细粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，加入适量淀粉，制成颗粒，干燥，加入硬脂酸镁4g，压制成1000片，包薄膜衣，即得。
鉴别：
（1）白及的鉴别：取本品10片，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，再加盐酸2ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取两次，每次40ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取白及对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(15:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸试液。供试品色谱中与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
（2）鱼腥草的鉴别：取本品10片，研细，加乙酸乙酯20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取鱼腥草对照药材3g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的兰色荧光斑点。
（3）百部的鉴别：取本品8片，研细，加90﹪乙醇20ml（体积分数）与2﹪盐酸1ml（体积分数），加热回流20分钟，放置过夜，滤过，蒸干，残渣加水10ml使溶解，加浓氨试液调PH值至10以上，用三氯甲烷提取三次，每次10ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加90%乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取百部对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取供试品溶液15μl，对照药材溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以三氯甲烷-甲醇（10：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同的红色斑点。
（4）三七的鉴别：取本品8片，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干。残渣加水20ml微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水10ml微热使溶解，放冷，通过中性氧化铝柱（中性氧化铝100～120目，3g，内径1cm，长10cm），以水50ml洗脱，弃去水液，再用70％乙醇80ml洗脱（体积分数），收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每１ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥＢ）试验，吸取供试品溶液15μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15:40:22:10）10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液（体积分数），在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
检查应符合片剂项下有关的各项规定（中国药典2010年版一部附录ⅠD）。
含量测定：取本品15片，研细，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，水浴中加热回流提取4小时，提取液回收甲醇至干。残渣加水20ml微热使溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水10ml微热使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，长12cm），以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇50ml洗脱（体积分数），弃去40％乙醇洗脱液，继用70％乙醇50ml洗脱（体积分数），收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每１ml含１mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥＢ）试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl与4μl，分别交叉点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（65:35:10）10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液（体积分数），在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶带固定，照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB薄层扫描法）进行扫描，波长：?S=530nm，?R=700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。
本品每片含黄芪以黄芪甲苷（Ｃ41Ｈ68Ｏ14）计，不得少于0.04mg。