一种灵芪加口服液含量的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药复方检测方法，具体涉及一种灵芪加口服液含量的检测方法。
【背景技术】
[0002] 灵芪加口服液，国家食品药品监督管理局国家药品标准中， WS-11254(ZD-1254)-2002中写明了含量的测定方法为薄层色谱分析方法，其中供试品溶液 的制备方法为：精密量取本品30ml，用氯仿振摇提取2次，每次25ml，弃去氯仿液，水液用 水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，弃 去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径lcm， 长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用30%乙醇50ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇 50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇 匀，作为供试品溶液。按相似相溶原理，氯仿是除去杂质；正丁醇是溶解有效成分；D101型 大孔吸附树脂柱为分离载体，起吸附作用，除去杂质。
[0003]总体来说，现有技术制备供试品实验步骤中应用氯仿有机试剂，毒性大，费用较 高，步骤繁杂，不利于实验研宄及药品生产、检验。含量测定方法为薄层色谱分析方法，其精 密度、准确性有待提高。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种解决现有技术的测定灵芪加口服液的方法。
[0005] 本发明提供的一种灵芪加口服液含量的测定方法，包括以下步骤：色谱条件、对照 品溶液的制备、供试品溶液的制备和检测。
[0006] 所述测定方法中：
[0007] 色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（30:70)为流动相； 用蒸发光散射器检测，理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于3500;
[0008] 对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含 〇? 5mg的溶液，即得；
[0009] 供试品溶液的制备：精密量取灵芪加口服液25_30ml，用水饱和正丁醇振摇提取3 次，每次25-30ml，合并正丁醇液，用氨试液20-25ml洗涤，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水 20-25ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇 匀，滤过，取续滤液，即得；
[0010] 测定：精密吸取对照品溶液2 y 1、5 y 1，供试品溶液10 y 1，注入液相色谱仪，测 定，以外标两点法对数方程计算。
[0011] 优选地，所述测定方法包括以下步骤：
[0012] 色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为30:70的乙腈-水 为流动相；用蒸发光散射器检测，理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于3500;
[0013] 对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含 〇? 5mg的溶液，即得；
[0014] 供试品溶液的制备：精密量取灵芪加口服液25ml，用水饱和正丁醇振摇提取3次， 每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液20ml洗涤，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水20ml洗涤， 分取正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续 滤液，即得；
[0015] 测定：精密吸取对照品溶液2 y 1、5 y 1，供试品溶液10 y 1，注入液相色谱仪，测 定，以外标两点法对数方程计算。
[0016] 本发明提供的检测方法最终检测每1ml灵芪加口服液中黄芪甲苷含量不低于 32 ug〇
[0017] 本发明提供的检测方法具有以下优点：
[0018] 1、供试品制备时采用正丁醇提取有效成分，未用氯仿达到了低毒、绿色实验的目 的；黄芪甲苷虽分子量较大，但毕竟具苷类性质，必须注意减少损失，萃取及洗涤体积应不 宜过大。
[0019] 2、也有报道，当归补血口服液中黄芪甲苷的检测方法，与本发明非常接近，如 CN200910064944. 4 (公开号为CN101551365A)，但是本发明使用乙腈-水（30:70)做为流动 相的检测结果准确度高、相对偏差小；
[0020] 供试品溶液的制备中萃取的次数少、洗涤时间短、省时、快捷、通过实验结果证明 可达到相同结果，得到了同量的有效成分。
[0021] 2、本发明提供的采用蒸发光色谱仪检测此含量的方法，准确度、精密度、耐用性都 符合相应标准，表明方法可行。
【具体实施方式】
[0022] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0023] 实施例1
[0024]1、仪器与试药
[0025] SEDEX75(法国），黄芪甲苷对照品，来源：中国药品生物制品检定所，乙腈：为色谱 纯，其余为分析纯。
[0026] 2、色谱条件
[0027] 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（5 y，150X4. 6mm);以乙腈-水（30:70)为流 动相；用蒸发光散射器检测，理论板数按黄芪甲苷峰算应不低于3500。
[0028] 2. 1对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含 〇? 5mg的溶液，即得。
[0029] 2. 2供试品溶液的制备：
[0030] 精密量取灵芪加口服液25ml，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁 醇液，用氨试液20ml洗涤，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水20ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干， 残渣用甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0031] 2. 3测定法：精密吸取对照品溶液2 y 1、5 y 1，供试品溶液10 y 1，注入液相色谱 仪，测定，以外标两点法对数方程计算。
[0032]3、方法验证
[0033] 3. 1阴性对照试验
[0034] 取灵芝15. 0g，刺五加40. 0g，按制法项下制成无黄芪溶液100ml，精密取25ml，按 照供试品溶液制备方法制成阴性对照液，按上述色谱法测定，结果表明灵芪加口服液中其 他成分对黄芪甲苷的测定无干扰。
[0035] 3. 2线性关系考察：精密量取对照品溶液（0. 864mg/ml) 1 y 1、2 y 1、3 y 1、4 y 1、 6 y 1、8 y 1、10 y 1、15 y 1，注入液相色谱仪测定峰面积，以进样量的对数为纵坐标，以峰面 积的对数为横坐标绘制标准曲线，得回归方程lgM = 0. 68591gA-3. 8713, r = 0. 99993,具 体结果见表1。
[0036] 表1黄芪甲苷线性关系试验结果
[0038] 表1结果显示：黄芪甲苷在进样量0.864~12. 96 yg内有良好的线性关系。
[0039] 3. 3仪器精密度试验：精密量取对照品溶液10 y 1 (0. 432mg/ml)，重复进样5次测 定峰面积，结果见表2。
[0040] 表2黄芪甲苷精密度试验结果
[0042]表2结果显示：RSD = 0. 3% (n = 5)，结果表明，仪器的精密度良好。
[0043] 3. 4重复性试验：取同一批号样品6份，分别按样品含量测定法测定，结果见表3。
[0044]表3黄芪甲苷重复性试验结果
[0046] 表3结果显示：RSD=1. 3% (n=6)，结果表明，本发明提供的检测方法重复性好。
[0047] 3. 5稳定性试验：取供试品溶液，隔一定时间进样1次，连续进样6次，测定峰面 积，结果见表4。
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