京尼平苷在治疗酒精性脂肪肝中的用途及其作用靶标的制作方法

本发明涉及京尼平苷在治疗酒精性脂肪肝中的用途及其作用靶标，属于药物领域。

背景技术：

酒精性脂肪肝(脂肪肝)是一种酒精性肝病的早期病理改变疾病，常发于大量摄入酒精的人群(如每天饮酒超过6杯)。其肝细胞中脂质的积累使肝脏容易受到炎症介质或其他有毒物质的影响，并最终可能导致肝炎和肝纤维化。酒精性脂肪肝是一个可逆的肝损伤阶段，应用药物干预减少脂肪变性可能会减缓或停止酒精性肝病的进展。

京尼平苷是栀子的主要活性成分。栀子为茜草科植物栀子(gardeniajasminoidesellis)的干燥成熟果实，属卫生部颁布的第一批药食两用资源，其性寒、味苦，归心、肝、肺、胃、三焦经，具有护肝、利胆、降压、镇静、止血、消肿等作用。是临床常用的保肝利胆药，在中医临床常用于治疗黄疸型肝炎、高血压、糖尿病等症。京尼平苷又称栀子苷，是一种环烯醚萜苷类化合物。现代研究表明，京尼平苷具有广泛的生物活性，如抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗血栓形成，并对退行性神经具有一定的保护作用。而且随着研究的不断深入，其新的应用价值正在逐渐被人们所发掘。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种有效治疗酒精性脂肪肝的药物，即京尼平苷，并利用高通量的转录因子富集分析策略，发现了其作用的靶标转录因子。

本发明首先提供了京尼平苷在制备预防和/或治疗酒精性脂肪肝的药物中的应用。

本发明进一步提供了京尼平苷在制备下述1)-4)中任一种产品中的应用：

1)降低血清中谷草转氨酶含量的产品；

2)降低血清中谷丙转氨酶含量的产品；

3)降低血清中甘油三酯含量的产品；

4)降低血清中总胆固醇含量的产品。

本发明更进一步地提供了京尼平苷在制备下述1)-2)中任一种产品中的应用：

1)增强肝细胞核因子的转录因子活性的产品；

2)增强过氧化物酶体增殖物激活受体的转录因子活性的产品。

上述的应用1)中，所述肝细胞核因子为肝细胞核因子1α或肝细胞核因子4α。

上述的应用2)中，所述氧化物酶体增殖物激活受体为氧化物酶体增殖物激活受体α。

活性成分为京尼平苷的预防和/或治疗酒精性脂肪肝的药物也属于本发明的保护范围。

本发明利用高通量的转录因子富集分析策略，分析了京尼平苷治疗酒精性脂肪肝作用的靶标转录因子。并利用q-pcr技术、蛋白质elisa试剂盒和转录因子elisa试剂盒，在候选靶标转录因子的mrna层次、蛋白质层次和转录活性层次上分别进行了验证。证实京尼平苷治疗酒精性脂肪肝作用的靶标转录因子为肝细胞核因子(hnf)1α、hnf4α和/或氧化物酶体增殖物激活受体(ppar)α。

附图说明

图1为本发明实施例1获得的大鼠血清生化和病理分析结果图。

图2为本发明实施例2获得的大鼠肝脏肝细胞核因子(hnf)1α分析验证结果图。

图3为本发明实施例3获得的大鼠肝脏hnf4α分析验证结果图

图4为本发明实施例4获得的大鼠肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体(ppar)α分析验证结果图。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、

为了考察本发明京尼平苷治疗酒精性脂肪肝的实际效果，选用酒精性脂肪肝模型大鼠进行效果评价。

实验动物选用sd大鼠，体重140～150克，采用tipoe-nanji酒精液体饲料进行连续喂服造模，时间为七周。

对照组、模型组和京尼平苷治疗组均采用眼眶采血，不抗凝，之后3000rpm离心15分钟制备血清，-20℃冻存。利用全自动生化分析仪测定ast、alt、甘油三酯和总胆固醇等指标。七周之后，处死对照组、模型组和京尼平苷治疗组实验大鼠，收集实验动物肝脏，进行油红o和he染色观察，具体结果如图1所示。

从图1可以看出，采用tipoe-nanji酒精液体饲料进行连续喂服造模七周后，模型组实验动物大鼠血清生化ast、alt、甘油三酯和总胆固醇均出现明显的升高，而使用本发明京尼平苷治疗之后，京尼平苷治疗组实验动物大鼠血清生化ast、alt、甘油三酯和总胆固醇值均出现明显的降低。采用tipoe-nanji酒精液体饲料进行连续喂服造模七周后，油红o染色显示模型组实验动物大鼠肝脏出现明显的脂肪变性情况，而使用本发明京尼平苷治疗之后，京尼平苷治疗组实验动物大鼠肝脏脂肪变性情况得到明显的改善。采用tipoe-nanji酒精液体饲料进行连续喂服造模七周后，he染色显示模型组实验动物大鼠肝脏出现明显的肝损伤情况，而使用本发明京尼平苷治疗之后，京尼平苷治疗组实验动物大鼠肝脏损伤情况得到明显的改善。这充分说明本发明京尼平苷对于酒精性脂肪肝具有良好的效果。同时，通过比较对照组与对照给本发明京尼平苷组实验动物大鼠血清生化ast、alt、甘油三酯和总胆固醇的结果发现，在连续喂服本发明京尼平苷七周之后，实验动物大鼠血清生化ast、alt、甘油三酯和总胆固醇值均没有发生明显变化，这充分说明本发明京尼平苷在对于酒精性脂肪肝具有良好治疗效果的同时，也具有良好的安全性。由此可见，本发明京尼平苷具有疗效确切和使用安全的特点。

实施例2、

选用酒精性脂肪肝模型大鼠，在评价本发明京尼平苷治疗酒精性脂肪肝效果的同时，对京尼平苷治疗酒精性脂肪肝作用的靶标转录因子进行研究。

实验动物选用sd大鼠，体重140～150克，采用tipoe-nanji酒精液体饲料进行连续喂服造模七周后，处死对照组、模型组和京尼平苷治疗组实验大鼠，收集实验动物肝脏，利用高通量的转录因子富集分析策略，分析其作用的靶标转录因子。并利用q-pcr技术、蛋白质elisa试剂盒和转录因子elisa试剂盒，在候选靶标转录因子的mrna层次、蛋白质层次和转录活性层次上分别进行验证，具体结果如图2所示。

从图2可以看出，采用tipoe-nanji酒精液体饲料进行连续喂服造模七周后，模型组实验动物大鼠肝脏肝细胞核因子(hnf)1α的转录活性明显降低，而使用本发明京尼平苷治疗之后，京尼平苷治疗组实验动物大鼠肝脏hnf1ɑ的转录活性得到明显改善。对照药锌(zn)和京尼平苷联合应用后，更能显著提升细胞核内与胞浆hnf1α蛋白的比例。这充分说明本发明京尼平苷治疗酒精性脂肪肝的靶标转录因子之一为hnf1α。而本发明京尼平苷对于实验动物大鼠肝脏hnf1α的mrna及细胞核内hnf1α蛋白水平没有显著影响。

实施例3、

选用酒精性脂肪肝模型大鼠，在评价本发明京尼平苷治疗酒精性脂肪肝效果的同时，对京尼平苷治疗酒精性脂肪肝作用的靶标转录因子进行研究。

实验动物选用sd大鼠，体重140～150克，采用tipoe-nanji酒精液体饲料进行连续喂服造模七周后，处死对照组、模型组和京尼平苷治疗组实验大鼠，收集实验动物肝脏，利用高通量的转录因子富集分析策略，分析其作用的靶标转录因子。并利用q-pcr技术、蛋白质elisa试剂盒和转录因子elisa试剂盒，在候选靶标转录因子的mrna层次、蛋白质层次和转录活性层次上分别进行验证，具体结果如图3所示。

从图3可以看出，采用tipoe-nanji酒精液体饲料进行连续喂服造模七周后，模型组实验动物大鼠肝脏肝细胞核因子(hnf)4α的转录活性明显降低，而使用本发明京尼平苷治疗之后，京尼平苷治疗组实验动物大鼠肝脏hnf4α的转录活性得到明显改善。这说明本发明京尼平苷治疗酒精性脂肪肝的靶标转录因子之一为hnf4α。而本发明京尼平苷对于实验动物大鼠肝脏hnf4α的mrna、细胞核内hnf4α蛋白水平及细胞核内与胞浆hnf4α蛋白比例没有显著影响。

实施例4、

选用酒精性脂肪肝模型大鼠，在评价本发明京尼平苷治疗酒精性脂肪肝效果的同时，对京尼平苷治疗酒精性脂肪肝作用的靶标转录因子进行研究。

实验动物选用sd大鼠，体重140～150克，采用tipoe-nanji酒精液体饲料进行连续喂服造模七周后，处死对照组、模型组和京尼平苷治疗组实验大鼠，收集实验动物肝脏，利用高通量的转录因子富集分析策略，分析其作用的靶标转录因子。并利用q-pcr技术、蛋白质elisa试剂盒和转录因子elisa试剂盒，在候选靶标转录因子的mrna层次、蛋白质层次和转录活性层次上分别进行验证，具体结果如图4所示。

从图4可以看出，采用tipoe-nanji酒精液体饲料进行连续喂服造模七周后，模型组实验动物大鼠肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体(ppar)α的转录活性降低，而使用本发明京尼平苷治疗之后，京尼平苷治疗组实验动物大鼠肝脏pparα的转录活性得到改善。这说明本发明京尼平苷治疗酒精性脂肪肝的候选靶标转录因子之一为pparα。而本发明京尼平苷对于实验动物大鼠肝脏pparα的mrna、细胞核内pparα蛋白水平及细胞核内与胞浆pparα蛋白比例没有显著影响。