一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种治疗脂肪肝的中药组合物及制备方法。该组合物是由以下重量份的药用植物或饮片经提取制备而成：黄芩100~600份，黄连100~600份，该组合物具有利湿化瘀、清热解毒、保肝降浊之功效，广泛用于多种原因引起的脂肪肝、慢性肝炎和肝纤维化，对肥胖、糖尿病、高血压、肝炎等引起的各种脂肪肝有较好的疗效。
【专利说明】一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种中药领域，具体涉及一种以中药饮片为原料制成的用于治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002]非酒精性脂肪性肝(NAFL)是一种与胰岛素抵抗和遗传易感密切相关的代谢应激性肝脏损伤，其病理学改变与酒精性肝病相似，但患者无过量饮酒史，疾病谱包括非酒精性单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎及其相关肝硬化和肝细胞癌。流行病学显示，本病平均累及世界人口的10-24%，在肥胖人群中的患病率高达57~74%，明显超过乙型肝炎、丙型肝炎及酒精性肝病的患病率，已成为最常见的肝病。[0003]NAFL根据其临床表现，属中医“胁痛”、“积聚”等范畴，多与饮食失节、情志失调、久病体虚、形体肥胖等有关，其病机主要为肝失疏泄，脾失健运，湿热内蕴，痰浊内生，痹阻肝脉所致。目前，对脂肪肝的治疗，西医尚无疗效显著的药物，主要应用调节血脂的药物作为脂肪肝的辅助治疗。中医药在改善脂质代谢、促进NAFL逆转及治疗相关疾病等方面有独特优势。
[0004]黄芩茎叶主要成分包括野黄芩苷、黄芩苷、白杨素-7-0-β -D葡萄糖磷酸苷、芹菜素苷和黄酮类化合物，具有较强的解热、镇痛、抗氧化、抗炎、抗肿瘤、降压、降血脂、提高机体免疫力等药理学活性，降血脂作用:采用食饵性高脂家兔模型评价黄芩茎叶总黄酮调血脂和抗动脉粥样硬化作用，结果表明，高脂饲料喂养12周后家兔形成明显的高脂血症和AS，而在喂饲高脂饲料的同时给黄芩茎叶总黄酮不仅显著降低血脂水平，而且明显减轻AS的程度，提示TFSS具有明显调血脂作用，且其调脂作用可能是其抗AS机制之一。有报道通过实验得出TFSS对大鼠长期喂以高脂饲料所造成的血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的升高有明显的抑制作用，并使高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量有一定程度的升高，表明总黄酮对大鼠实验性高脂血症有明显的预防作用。TFSS对离体外翻小肠囊胆盐吸收的抑制性与考古来烯无显著性差异，提示抑制胆盐吸收可能是TFSS调血脂作用机理之一。研究显示通过在建立大鼠高脂血症模型的基础上，观察TFSS对大鼠血清及肝脏脂质水平、脂蛋白代谢酶，粪便胆汁酸代谢的影响，进而发现TFSS可能是通过增强血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)的活性和促进粪便中胆汁酸的排泄而达到降血脂的作用。黄芩还有较强的肝损伤保护作用:以四氯化碳(CC14)制备大鼠慢性肝损伤模型，研究TFSS对慢性肝损伤的保护作用，结果显示，TFSS对CC14慢性肝损伤具有明显的保护作用，肝功能指标、纤维化指标和病理组织学检测均提示:TFSS可保护肝细胞的正常结构，减轻肝细胞的变性和坏死，减少肝内胶原纤维合成。同时还发现，CC14诱导慢性肝损伤中，转化生长因子β UTGF-β I)表达明显升高，α-平滑肌肌动蛋白U-SMA)表达也明显高于正常组，而且模型组MDA较正常组高，SOD、GSH-PX活性较正常组低，表明氧化应激可能通过激活TGF-β I信号通路使星形细胞活化而起作用。而给予SSTF保护后，S0D、GSH-PX活性较模型组明显升高，而MDA显著降低，且随着SOD活性的提高，TGF- β I表达降低，a -SMA表达也显著降低，说明TFSS是通过清除自由基，抑制脂质过氧化反应产物MDA的产生，从而抑制了 TGF-β I诱导肝星形细胞的活化，减少了细胞外基质的形成和沉积，这可能是TFSS对慢性肝损伤有保护作用的重要机制之一。
[0005]黄连主要功能为清热燥湿、泻火解毒。用于湿热痞满、呕吐、泻痢、黄疸、高热神昏、心火亢盛、心烦不寐、目赤吞酸、牙痛、消渴及痈肿疔疮；外治湿疹、湿疮、耳道流脓.黄连是一味古老抗菌药，临床上长期以来用于降热镇痛、抗肠道细菌感染，《本草纲目》中记载“黄连治目及痢为要药”。现代药理研究表明，黄连根茎中含有多种异喹啉类生物碱，其中小檗碱(Berberine，Ber)又名黄连素，为黄连的主要成分，含量约为5%~8%，有极其广泛的抗菌谱，对某些革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有一定的抑制作用，其中对痢疾杆菌，大肠埃希菌、金色葡萄球菌、痢疾志贺氏菌、铜绿假单胞菌等肠道感染引起的菌痢、化脓性中耳炎和眼结膜炎等均有良好的治疗效果。近年来发现黄连还有抗感染、抗肿瘤、抗心律失常、降血脂、降血糖、抗血小板聚集等药理作用。
【发明内容】
[0006]本发明目的在于提供一种安全有效的治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物。
[0007]本发明的另一目的是提供该中药组合物的制备方法。
[0008]本发明所提供的中药组合物是由以下重量份的中药经提取制备而成:黄芩100^600份黄连100~600份
本发明所述的中药组合物的制备方法，包括以下步骤:
将黄芩和黄连用40-80%提取f 3次，每次0.5^1.5小时，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，减压干燥粉碎成细粉，加入适量的淀粉、糊精、硬脂酸镁，50%乙醇制粒，干燥，包薄膜衣。
[0009]本发明所述的中药组合物，期特征在于，该组合物可以加入药剂学上可接受的辅料混合后制成各种口服剂型，如片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂等。
[0010]本发明所提供的应用是所述中药组合物在制备用于治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用。
[0011]本发明的中药组合物，从组方上来看，方中黄芩清热燥湿，泻火解毒，配以黄连，增强其清热燥湿、泻火解毒之功效，可同时清上焦和中焦实火，现代药理表明该组方药物具有多靶点、多效应的综合作用，二者合用在非酒精性脂肪肝防治中具有良好的临床效果。
[0012]通过下述试验对本发明的疗效做进一步阐述。
[0013]本发明的中药组合物对非酒精性脂肪肝大鼠模型的治疗作用:
I 材料与仪器
1.1试验药品中药组合物:由南京欣昊医药科技有限公司制备，将黄芩500g，黄连500g用50%乙醇提取3次，每次I小时，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩药液浓度为2g生药/mL，4°C冰箱保存备用。复方蛋氨酸胆碱片，购自吉林万通药业有限公司，批号110603。
[0014] 1.2试验器材和试剂Beckman2_CS15R离心机，AU400全自动生化仪(日本奥林巴斯)，UV-1800紫外-可见光光度计(上海将来实验室设备有限公司)，CARY50紫外分光光度计(美国瓦里安公司)，SART0IUS BP211D电子分析天平(德国)。胆固醇(购自上海化学试剂站分装厂，分析纯)，脱氧胆酸钠(中国医药(集团)上海化学试剂公司，分析纯)，丙硫氧嘧啶片(上海信谊药厂有限公司)，三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)试剂盒(上海科华东菱诊断用品有限公司)；超氧化物歧化酶(SOD)、游离脂肪酸(FFA)、丙二醛(MDA)、总谷胱甘肽(T-GSH)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。
[0015]1.3试验动物
清洁级雄性SD大鼠，体重180~220g，由南京中医药大学实验动物中心提供，实验动物许可证号:SCXK(苏)2011-0001。
[0016]2 试验方法
2.1动物分组、模型建立、给药方法及标本的收集
闻脂闻糖乳剂的制备:称取25g猪油在水浴加热使其溶化,加入IOg胆固醇并不断搅拌，再加入5mL吐温-80使其完全溶解；将蔗糖20g加入少量蒸馏水的烧杯中，水浴上加热并搅拌使 其完全溶解，依次加入脱氧胆酸钠2g、丙硫氧嘧啶lg，充分搅拌至完全溶解；两种溶液混合后，再加入5mL吐温-80，使充分混匀，蒸馏水定容至lOOmL，即配制完成。保存于O~4°C冰箱以备用，使用时在37°C水浴中加热融化。
[0017]取大鼠60只，实验前先适应性饲养I周，按质量随机分为6组:正常对照组、模型组、阳性对照组(复方蛋氨酸胆碱片)、中药组合物高、中、低剂量组，每组10只。自造模第I天起，正常对照组给予普通饲料，其余各组分别灌服生理盐水及相应药物。正常对照组、模型组给予相应剂量的生理盐水灌胃，阳性对照组按0.09g蛋氨酸/kg剂量灌胃，中药组合物高、中、低剂量组分别按4g、8g、16g生药/kg剂量灌胃，连续给药9周。
[0018]给药至第9周末(标本采集前禁食不禁水12 h)，大鼠以氯胺酮(0.1g / kg)经腹腔麻醉，腹主动脉取血，离心分离血清，一 70°C冰箱保存备用。脱颈椎处死大鼠，称体重，立即摘取肝脏，生理盐水冲洗，滤纸吸干，称量肝脏质量。取左叶肝组织用于常规病理学检查，其余肝组织液氮速冻后，-70°C冰箱冻存待用，另取一部分肝组织块用10%甲醛溶液固定。
[0019]2.2观察指标及检测方法
2.2.1 —般情况观察大鼠的体重及存活情况。记录大鼠体重增长情况。实验结束处死动物时称量体重、肝湿重，并计算肝指数(肝湿重/体重X 100)。
[0020]2.2.2血清生化指标检测按照相应试剂盒说明书检测血清TC、TG、HDL-C, AST、ALT, FFA, LDL-C按检测按照说明书操作步骤在全自动生化分析上进行。
[0021]2.2.3肝脏指标检测从_70°C冰箱取出备用的肝脏组织小块(约Ig左右)，用氯仿-甲醇提取液(1: l，v/v)制成匀浆，然后用提取液定容至5 mL并混匀。经24h震荡抽提，3500rpm离心5min得上清液，肝脏中TC、TG的测定分别按照相应试剂盒说明书操作。
[0022]2.2.4 SOD、MDA、T-GSH的测定从-70 V冰箱取出备用的肝右叶组织(0.6、.Sg)，在冰浴中用生理盐水制成10%的肝组织匀浆液(w/v)，离心，取上清液，再分别按照相应试剂盒说明书测定SOD、MDA、T-GSH含量。SOD、MDA和T-GSH测定分别采用黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法和二硫代二硝基苯甲酸法。
[0023]2.2.5肝组织病理学检测取10%甲醛溶液固定的肝组织块，进行常规石蜡包埋、切片、HE染色，光镜下观察，对脂肪变性程度进行分级、评分。低倍镜观察含脂滴细胞数与总细胞数，将脂滴细胞数/总细胞数之比值记为1(，若K > 1/3即诊断为脂肪肝；若1(在1/3~1/2之间即诊断为轻度脂肪肝；若K在1/2~2/3之间即诊断为中度脂肪肝；若K > 2/3即诊断为重度脂肪肝。
[0024]2.3统计学处理
所得实验数据均经SPSS 10.0统计学软件进行方差分析，数据用T 土SD表示，两组间
比较采用LSD-t检验。显著性水平为P〈0.05。
[0025]3 结果
3.1对非酒精性脂肪肝大鼠血脂水平和FFA的影响与正常组比较，模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C、FFA显著升高，HDL-C显著降低，表明造模成功。给药9周后，阳性对照组、中药组合物高、中、第剂量组能显著降低血清TC、TG、FFA、LDL-C水平，阳性对照组、中药组合物中、高剂量组显著升高HDL-C水平，结果见表1。
[0026]表1中药组合物对非酒精性脂肪肝大鼠血脂水平和FFA的影响(歹土s，n=10)
【权利要求】
1.一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物，其特征在于该组合物是由以下重量份的药用植物或饮片经提取制备而成:黄芩100-600份黄连100-600份。
2.根据权利要求1所述的治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物，其特征在于所说的剂型是任何一种药剂学上所说的剂型。
3.根据权利要求2所述的治疗非酒精性脂肪肝的药物，其特征在于所说的剂型是片剂。
4.根据权利要求3所述的治疗非酒精性脂肪肝的片剂的制备方法，其特征在于:将黄芩和黄连用40-80%提取广3次，每次0.5^1.5小时，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，减压干燥粉碎成细粉，加入适量的淀粉、糊精、硬脂酸镁，50%乙醇制粒，干燥，包薄膜衣。
5.权利要求1所属 的中药组合物在制备用于非酒精性脂肪肝药物中的应用。
【文档编号】A61K36/718GK103948701SQ201410206434
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2014年5月16日 优先权日:2014年5月16日
【发明者】王宁, 白凤阁 申请人:南京欣昊医药科技有限公司