地榆皂苷元口服乳剂及其制备方法和用途与流程

本发明涉及一种地榆皂苷元口服乳剂及其制备方法和用途，属药物领域。

背景技术：

骨髓抑制是临床上常见的造血系统疾病，它可发生于各系统肿瘤性疾病的放射治疗及(或)化学治疗、电离辐射引起的放射损伤、病毒性肝炎、微小病毒感染或药物(氯霉素、苯、磺胺、抗癫痈药、镇静剂、抗甲状腺药、抗糖尿病药、抗疟疾、安眠药)等因素。骨髓抑制可引起骨髓微环境、造血干细胞、造血细胞生长因子等的损伤，粒、红、巨核细胞系统一系、二系或三系细胞受抑制。粒细胞缺乏会引起严重感染；红细胞明显减少会引起严重贫血；血小板明显下降引起严重出血，甚至导致死亡。目前，临床上对于骨髓抑制，尤其是放化疗引起的骨髓抑制，尚缺乏有效的治疗手段，亟需开发出药效较好的治疗药物。

地榆皂苷元是从蔷薇科地榆属植物地榆(Sanguisorba officinalis L.)或长叶地榆[S.officinalis L.var.longifolia(Bertol.)Yu et Li]的根中提取得到的一种活性成分，化学名：3β，19α-羟基乌索-12烯-28-羧酸，其结构式如下所示：

目前尚未见以地榆皂苷元为活性成分制备口服乳剂，用于治疗和/或预防骨髓抑制的公开报道。

技术实现要素：

本发明的技术方案是提供了一种地榆皂苷元口服乳剂及其制备方法和用途。

本发明提供了一种地榆皂苷元口服乳剂，它是包含下述重量配比的原料制备而成的制剂：

地榆皂苷元0.5-10份、口服用油1-300份、乳化剂0.5-30份、稳定剂0.001-5份。

其中，它是包含下述重量配比的原料制备而成的制剂：

地榆皂苷元1份、口服用油10-300份、乳化剂0.5-30份、稳定剂0.005-5份。

其中，它是包含下述重量配比的原料制备而成的制剂：

地榆皂苷元1份、口服用油300份、乳化剂20份、稳定剂3份；

或地榆皂苷元2份、口服用油300份、乳化剂30份、稳定剂5份；

或地榆皂苷元1份、口服用油300份、乳化剂20份、稳定剂5份。

其中，所述的口服用油为大豆油、中链甘油三酸酯、橄榄油、油酸乙酯或蓖麻油中一种或两种以上的混合物；所述的乳化剂选自蛋黄卵磷脂、大豆磷脂中的一种或两种；所述的稳定剂为甘油。

其中，它是由下述重量配比的原料制备而成：地榆皂苷元1份、大豆油300份、蛋黄卵磷脂20份、甘油5份。

本发明还提供了制备上述口服乳剂的方法，包括下述步骤：

a、称取各重量配比的地榆皂苷元、口服用油及乳化剂，溶于有机溶剂，备用；

b、除去a步骤的有机溶剂，再加入甘油和水；

c、剪切，均质，灭菌，即得。

其中，步骤a中，所述的有机溶剂为乙醇；步骤b中，加入甘油和水后，使地榆皂苷元的含量为0.3mg/mL；步骤c中，所述剪切的条件为：10000rpm下剪切5min；所述均质的条件为：800bar压力下均质4次。

本发明还提供了上述包合物在制备治疗和/或预防骨髓抑制的药物的用途。

其中，所述的药物是治疗和/或预防化学物质导致的骨髓抑制的药物。

本发明还提供了上述包合物在制备升高外周血白细胞、中性粒细胞、红细胞、血小板和/或血红蛋白的药物中的用途。

本发明采用特定种类、配比的辅料制备的地榆皂苷元口服乳剂，可显著提高药物溶解度及溶出度，显著提高外周血白细胞、中性粒细胞、红细胞、血小板、血红蛋白和骨髓造血干细胞的数量，具有显著的治疗和/或预防骨髓抑制的作用。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1各实验组小鼠骨髓细胞CD34⁺抗原表达量

具体实施方式

本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。

实施例1本发明口服乳剂的制备

按下述配比称取原料：

地榆皂苷元1mg、大豆油100mg、蛋黄卵磷脂20mg、甘油2mg。

制备方法如下：

取地榆皂苷元、大豆油、蛋黄卵磷脂混合，以乙醇溶解，减压旋转蒸发除去乙醇，高速搅拌下加入甘油及适量水，使乳剂中地榆皂苷元的浓度为0.3mg/mL，10000rpm下高速剪切5min，800bar压力下高压均质4次，高压灭菌，即得本发明口服乳剂。

实施例2本发明口服乳剂的制备

按下述配比称取原料：

地榆皂苷元1mg、中链甘油三酸酯300mg、蛋黄卵磷脂20mg、甘油3mg。

制备方法如下：

取地榆皂苷元、中链甘油三酸酯、蛋黄卵磷脂混合，以乙醇溶解，减压旋转蒸发除去乙醇，高速搅拌下加入甘油及适量水，使乳剂中地榆皂苷元的浓度为0.3mg/mL，10000rpm下高速剪切5min，800bar压力下高压均质4次，高压灭菌，即得本发明口服乳剂。

实施例3本发明口服乳剂的制备

按下述配比称取原料：

地榆皂苷元2mg、鱼油300mg、蛋黄卵磷脂20mg、甘油5mg。

制备方法如下：

取地榆皂苷元、鱼油、蛋黄卵磷脂混合，以乙醇溶解，减压旋转蒸发除去乙醇，高速搅拌下加入甘油及适量水，使乳剂中地榆皂苷元的浓度为0.3mg/mL，10000rpm下高速剪切5min，800bar压力下高压均质4次，高压灭菌，即得本发明口服乳剂。

实施例4本发明口服乳剂的制备

按下述配比称取原料：

地榆皂苷元2mg、橄榄油300mg、蛋黄卵磷脂30mg、甘油5mg。

制备方法如下：

将地榆皂苷元、橄榄油、蛋黄卵磷脂混合，以乙醇溶解，减压旋转蒸发除去乙醇，高速搅拌下加入甘油及适量水，使乳剂中地榆皂苷元的浓度为0.3mg/mL，10000rpm下高速剪切5min，800bar压力下高压均质4次，高压灭菌，即得本发明口服乳剂。

实施例5本发明口服乳剂的制备

按下述配比称取原料：

地榆皂苷元5mg、油酸乙酯300mg、蛋黄卵磷脂30mg、甘油5mg。

制备方法如下：

取地榆皂苷元、油酸乙酯、蛋黄卵磷脂混合，以乙醇溶解，减压旋转蒸发除去乙醇，高速搅拌下加入甘油及适量水，使乳剂中地榆皂苷元的浓度为0.3mg/mL，10000rpm下高速剪切5min，800bar压力下高压均质4次，高压灭菌，即得本发明口服乳剂。

实施例6本发明口服乳剂的制备

按下述配比称取原料：

地榆皂苷元8mg、蓖麻油300mg、蛋黄卵磷脂30mg、甘油5mg。

制备方法如下：

取地榆皂苷元、蓖麻油、蛋黄卵磷脂混合，以乙醇溶解，减压旋转蒸发除去乙醇，高速搅拌下加入甘油及适量水，使乳剂中地榆皂苷元的浓度为0.3mg/mL，10000rpm下高速剪切5min，800bar压力下高压均质4次，高压灭菌，即得本发明口服乳剂。

实施例7本发明口服乳剂的制备

按下述配比称取原料：

地榆皂苷元10mg、大豆油300mg、大豆磷脂30mg、甘油10mg。

制备方法如下：

取地榆皂苷元、大豆油、大豆磷脂混合，以乙醇溶解，减压旋转蒸发除去乙醇，高速搅拌下加入甘油及适量水，使乳剂中地榆皂苷元的浓度为0.3mg/mL，10000rpm下高速剪切5min，800bar压力下高压均质4次，高压灭菌，即得本发明口服乳剂。

实施例8本发明口服乳剂的制备

按下述配比称取原料：

地榆皂苷元1mg、大豆油300mg、蛋黄卵磷脂20mg、甘油5mg。

制备方法如下：

取地榆皂苷元、大豆油、大豆磷脂混合，以乙醇溶解，减压旋转蒸发除去乙醇，高速搅拌下加入甘油及适量水，使乳剂中地榆皂苷元的浓度为0.3mg/mL，10000rpm下高速剪切5min，800bar压力下高压均质4次，高压灭菌，即得本发明口服乳剂。

以下通过具体实验证明本发明的有益效果。

实验例1采用不同口服用油制备的口服乳剂的质量评价

本研究前期根据地榆皂苷元的性质考察了多种口服用油，以下列出所得口服乳剂质量较好的七种材料。

1.大豆油

2.中链脂肪酸甘油三酯

3.鱼油

4.橄榄油

5.油酸乙酯

6.蓖麻油

7.肉豆寇酸异丙酯

大豆油，中链脂肪酸甘油三酯，均购于江苏曼氏生物科技有限公司；聚氧乙烯蓖麻油EL35、肉豆寇酸异丙酯购于德国BASF公司。

实验方法：

分别称取1mg地榆皂苷元及300mg的不同口服用油大豆油、中链脂肪酸甘油三酯、鱼油、橄榄油、油酸乙酯、蓖麻油或肉豆寇酸异丙酯，与乳化剂蛋黄卵磷脂20mg混合，以乙醇溶解，减压旋转蒸发除去乙醇，高速搅拌下加入5mg稳定剂甘油及适量水溶液，使乳剂中地榆皂苷元的浓度为0.3mg/mL，在10000rpm下高速剪切5min，800bar压力下高压均质4次，高压灭菌。

测定口服乳剂中地榆皂苷元含量及粒径分布，药物含量测定采用HPLC-ELSD测定地榆皂苷元的含量，平均粒径使用马尔文粒径测定仪测得粒径结果，PDI采用粒度测定仪测出来。结果见表1。

表1采用不同口服用油制备的口服乳剂的质量评价

注：与肉豆寇酸异丙酯组比较，*P<0.05。

实验结果：采用不同口服用油中，大豆油、橄榄油、油酸乙酯、蓖麻油或中链脂肪酸甘油三酯制备的口服乳剂中地榆皂苷元含量均高(大豆油能达到0.525mg/mL)，平均粒径较小，且分散指数(PDI)较小，表明所得口服乳剂的粒径非常均匀，药物含量、平均粒径、分散指数均显著优于使用肉豆寇酸异丙酯(P<0.05)；另两种材料——鱼油、肉豆寇酸异丙酯会导致药物含量或粒径均匀度较差，而且采用肉豆寇酸异丙酯得到的胶束平均粒径较大，使用鱼油同样存在药物含量下降的问题。

表明制备地榆皂苷元口服乳剂适宜的口服用油为大豆油、橄榄油、油酸乙酯、蓖麻油、中链脂肪酸甘油三酯，其中大豆油效果最佳。

实验例2采用不同乳化剂制备的口服乳剂的质量评价

本研究前期根据地榆皂苷元的性质考察了多种乳化剂，以下列出所得口服乳剂质量较好的七种材料。

1.蛋黄卵磷脂

2.大豆磷脂

3.Tween85

4.聚乙二醇-8甘油辛酸/癸酸酯

5.液态软磷脂

6.椰子油C8

7.聚乙二醇甘油酯

蛋黄卵磷脂，聚乙二醇-8甘油辛酸/癸酸酯，大豆磷脂，Tween85、椰子油C8、聚乙二醇甘油酯均购于江苏曼氏生物科技有限公司。

实验方法：

分别称取1mg地榆皂苷元及300mg的口服用油大豆油，与20mg的不同乳化剂蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、聚乙二醇-8甘油辛酸/癸酸酯、液态软磷脂、Tween85、椰子油C8、聚乙二醇甘油酯混合，以乙醇溶解，减压旋转蒸发除去乙醇，高速搅拌下加入5mg稳定剂甘油及适量水溶液，使乳剂中地榆皂苷元的浓度为0.3mg/mL，在10000rpm下高速剪切5min，800bar压力下高压均质4次，高压灭菌。

测定口服乳剂中地榆皂苷元含量及粒径分布，结果见表2。

表2采用不同乳化剂制备的口服乳剂的质量评价

注：与聚乙二醇甘油酯组比较，*P<0.05。

实验结果：采用不同乳化剂制备的口服乳剂中，蛋黄卵磷脂、大豆磷脂制备的口服乳剂中地榆皂苷元含量均高，平均粒径较小，且分散指数(PDI)较小，表明所得口服乳剂的粒径非常均匀，药物含量、平均粒径、分散指数均显著优于使用聚乙二醇甘油酯(P<0.05)；另五种材料——Tween85、聚乙二醇-8甘油辛酸/癸酸酯、液态软磷脂、椰子油C8、聚乙二醇甘油酯会导致药物含量或粒径均匀度的明显降低。

表明制备地榆皂苷元口服乳剂最适宜使用的乳化剂为蛋黄卵磷脂、大豆磷脂。其中，蛋黄卵磷脂制备的口服乳剂药物含量比大豆磷脂更好，制备的地榆皂苷元效果最佳。

实验例3采用不同稳定剂制备的口服乳剂的质量评价

本研究前期根据地榆皂苷元的性质考察了多种稳定剂，以下列出所得口服乳剂质量较好的三种材料。

1.甘油

2.维生素E

3.淀粉

甘油、维生素E、淀粉均购于江苏曼氏生物科技有限公司。

实验方法：

分别称取1mg地榆皂苷元及300mg的口服用油大豆油，与20mg的乳化剂蛋黄卵磷脂以乙醇溶解，减压旋转蒸发除去乙醇，高速搅拌下加入5mg不同稳定剂——甘油、维生素E或淀粉及适量水溶液，使乳剂中地榆皂苷元的浓度为0.3mg/mL，在10000rpm下高速剪切5min，800bar压力下高压均质4次，高压灭菌。

测定口服乳剂中地榆皂苷元含量及粒径分布，结果见表3。

表3采用不同稳定剂制备的口服乳剂的质量评价

注：与淀粉组比较，*P<0.05。

实验结果：采用不同稳定剂制备的口服乳剂中，甘油制备的口服乳剂中地地榆皂苷元最高(达到0.585mg/mL)，平均粒径较小(62nm)，且分散指数(PDI)仅0.109，表明所得乳剂的粒径非常均匀。另两种材料——维生素E、淀粉会导致药物含量或粒径均匀度的明显降低。

表明制备地榆皂苷元口服乳剂最适宜使用的稳定剂为甘油。

实验例4根据不同口服用油用量制备的口服乳剂的质量评价

按照质量比1:1-1:400的比例称取地榆皂苷元及口服用油大豆油(固定地榆皂苷元质量为1mg，口服用油质量随比例变化)，与20mg的乳化剂蛋黄卵磷脂混合，以乙醇溶解，减压旋转蒸发除去乙醇，高速搅拌下加入5mg稳定剂甘油及适量水溶液，使乳剂中地榆皂苷元的浓度为0.3mg/mL，在10000rpm下高速剪切5min，800bar压力下高压均质4次，高压灭菌。

测定口服乳剂中地榆皂苷元含量及粒径分布，结果见表4。

表4根据不同口服用油用量制备的口服乳剂的质量评价

注：与1:1组比较，*P<0.05。

实验结果：口服用油用量为地榆皂苷元1～400倍时所得口服乳剂质量较好：药物含量不低于0.2mg/mL，平均粒径在145nm以下，PDI均低于0.24；其中，口服用油用量在地榆皂苷元质量10～300倍范围内，制剂质量可得到进一步优化，主要表现在药物含量较高，可达到0.5mg/mL以上，平均粒径在120nm以下，PDI均低于0.175，与地榆皂苷元与口服用油为1:1时相比差异显著(P<0.05)；综合比较，地榆皂苷元：口服用油质量比为1：300时，制备的乳剂药物含量较高、平均粒径较小、粒径分布较为均匀，乳剂质量最佳。

实验例5根据不同乳化剂用量制备的口服乳剂的质量评价

按照质量比1:300的比例称取地榆皂苷元及大豆油，与按照质量比1:0.5-1:50称取乳化剂蛋黄卵磷脂(固定地榆皂苷元质量为1mg，乳化剂质量随比例变化)混合，以乙醇溶解，减压旋转蒸发除去乙醇，高速搅拌下加入5mg稳定剂甘油及适量水溶液，使乳剂中地榆皂苷元的浓度为0.3mg/mL，在10000rpm下高速剪切5min，800bar压力下高压均质4次，高压灭菌。

测定口服乳剂中地榆皂苷元含量及粒径分布，结果见表5。

表5根据不同乳化剂用量制备的口服乳剂的质量评价

注：与1:50组比较，*P<0.05。

实验结果：乳化剂用量为地榆皂苷元0.5～50倍时所得口服乳剂质量较好：药物含量不低于0.3mg/mL，平均粒径在112nm以下，PDI均低于0.2；其中，乳化剂用量在地榆皂苷元质量0.5～30倍范围内，制剂质量可得到进一步优化，主要表现在药物含量较高，可达到0.5mg/mL以上，平均粒径在87nm以下，PDI均低于0.2，药物含量、平均粒径、分散指数均显著优于地榆皂苷元与乳化剂比例为1:50(P<0.05)；综合比较，地榆皂苷元：乳化剂质量比为1：20时，制备的乳剂药物含量较高、平均粒径较小、粒径分布较为均匀，乳剂质量最佳。

实验例6根据不同稳定剂用量制备的口服乳剂的质量评价

按照质量比1:300的比例称取地榆皂苷元及大豆油，与按照质量比1:20的比例称取蛋黄卵磷脂混合，以乙醇溶解，减压旋转蒸发除去乙醇，高速搅拌下加入按照质量比1:0.005-1:5的比例的稳定剂甘油及适量水溶液，使乳剂中地榆皂苷元的浓度为0.3mg/mL(固定地榆皂苷元质量为1mg，甘油质量随比例变化)。

在10000rpm下高速剪切5min，800bar压力下高压均质4次，高压灭菌。

测定口服乳剂中地榆皂苷元含量及粒径分布，结果见表6。

表6根据不同稳定剂用量制备的口服乳剂的质量评价

注：与1:6组比较，*P<0.05。

实验结果：稳定剂甘油用量为地榆皂苷元0.001～6倍时所得口服乳剂质量较好：药物含量不低于0.3mg/mL，平均粒径在105nm以下，PDI均低于0.2；其中，乳化剂用量在地榆皂苷元质量0.005～5倍范围内，制剂质量可得到进一步优化，主要表现在药物含量较高，可达到0.5mg/mL以上，平均粒径在78nm以下，PDI均低于0.19，药物含量、平均粒径、分散指数均显著优于地榆皂苷元与甘油比例为1:6(P<0.05)；；综合比较，地榆皂苷元：稳定剂质量比为1：5时，制备的乳剂药物含量较高、平均粒径较小、粒径分布较为均匀，乳剂质量最佳。

实验例7本发明地榆皂苷元口服乳剂药效学研究

1.实验材料

1.1受试药物：地榆皂苷元乳剂A组(按照实施例1制备)、地榆皂苷元乳剂B组(按照实施例2制备)、地榆皂苷元乳剂C组(按照实施例3制备)、地榆皂苷元乳剂D组(按照实施例4制备)、地榆皂苷元乳剂E组(按照实施例5制备)、地榆皂苷元乳剂F组(按照实施例6制备)、地榆皂苷元乳剂G组(按照实施例7制备)、地榆皂苷元乳剂H组(按照实施例8制备)、地榆皂苷元组、环磷酰胺。

1.2实验动物：KM-小鼠：18.5～22.5g。

1.3实验仪器：全自动血球分析仪；BS-600L电子天平：规格：600g/0.1g，上海友声衡器有限公司。

1.4统计方法：用SPSS 17.0软件进行统计分析。数据以均数±标准差()表示，组间采用单因素方差分析，方差齐者组间进行LSD检验，方差不齐者进行Tamhane’s T2检验。

2.实验方法

2.1实验动物分组及模型制备

所有动物适应性喂养1周后按体重随机分为：空白组；模型组；地榆皂苷元乳剂A、B、C、D、E、F、G、H组，配制成2.5mg·kg-1混悬液，临用前配制；地榆皂苷元组；用10％DMSO-生理盐水溶解，配制成2.5mg·kg-1混悬液，临用前配制。实验第1天，除空白组外，其余各组小鼠按50mg·kg-1剂量腹腔注射环磷酰胺生理盐水溶液，连续3天，空白组小鼠尾静脉注射等体积生理盐水。

2.2给药

各实验组自实验第1天开始按剂量、给药方式给予相应药物，空白组和模型组小鼠灌胃给药等体积生理盐水，连续7天。2.3标本采集

2.3标本采集

实验第8天，各实验组小鼠眼眶取血，用装有EDTA抗凝剂的0.5mlEP管收集待测。

2.4检测指标及方法

外周血象检测：采用全自动血球计数仪对各实验组小鼠外周血白细胞(WBC)、中性粒细胞(NEUT)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)、血红蛋白(HGB)进行计数。

骨髓造血干细胞计数(以骨髓细胞CD34+抗原表达量计)用含牛血清白蛋白浓度为0.2％的PBS缓冲液冲出小鼠右侧股骨骨髓细胞，取出106个细胞离心，弃上清，加入30μL正常小鼠血清以封闭非特异结合位点，再加入10μL FITC标记的大鼠抗小鼠CD34+抗体，对照管加入10μL相应对照抗体，4℃避光反应30min。加入2mL红细胞裂解液，作用5min，洗细胞2次，加入终浓度为3μg/mL的PI染液，采用流式细胞仪检测骨髓细胞CD34+抗原表达。

3.实验结果

3.1外周血主要血细胞计数比较，见表7、表8。

表7各实验组小鼠外周血白细胞、红细胞、血小板数量

注：与模型组比较，＊P<0.05，＊＊P<0.01；注：与地榆皂苷元组比较，^△P<0.05，^△△P<0.01。

由表7可知，与模型组比较，地榆皂苷元组无显著性差异，地榆皂苷元乳剂A-H组小鼠外周血WBC、RBC、PLT数量均有显著升高(P<0.05)；与地榆皂苷元组比较，地榆皂苷元乳剂组小鼠外周血WBC、RBC、PLT数量均有显著升高(P<0.05)。

表8各实验组小鼠外周血中性粒细胞、血红蛋白数量

注：与模型组比较，＊P<0.05，＊＊P<0.01；注：与地榆皂苷元组比较，^△P<0.05，^△△P<0.01。

由表8可知，与模型组比较，地榆皂苷元组无显著性差异，地榆皂苷元乳剂A-H组小鼠外周血NEUT和HGB数量均有显著升高(P<0.05)；其中与地榆皂苷元组比较，地榆皂苷元乳剂组小鼠外周血NEUT和HGB数量均有显著升高(P<0.05)。

3.2骨髓造血干细胞计数结果

见图1。

由图1可知，与模型组比较，本发明地榆皂苷元口服乳剂组小鼠造血干细胞数量均有显著升高(P<0.05)，地榆皂苷元组无显著性差异；与地榆皂苷元组比较，本发明地榆皂苷元口服乳剂组小鼠造血干细胞数量均有显著升高(P<0.05)。

以上实验结果表明，本发明地榆皂苷元口服乳剂可以有效升高血细胞，而直接用地榆皂苷元原药无效果。

综上，本发明制备的地榆皂苷元口服乳剂能够有效升高血细胞，有效防治骨髓抑制，对地榆皂苷元的临床应用具有十分重要的意义。