一种地榆苷元注射剂及其制备方法和用途与流程

本发明涉及一种地榆苷元注射剂及其制备方法和用途，属药物领域。

背景技术：

骨髓抑制是临床上常见的造血系统疾病，它可发生于各系统肿瘤性疾病的放射治疗及(或)化学治疗、电离辐射引起的放射损伤、病毒性肝炎、微小病毒感染或药物(氯霉素、苯、磺胺、抗癫痈药、镇静剂、抗甲状腺药、抗糖尿病药、抗疟疾、安眠药)等因素。骨髓抑制可引起骨髓微环境、造血干细胞、造血细胞生长因子等的损伤，粒、红、巨核细胞系统一系、二系或三系细胞受抑制。粒细胞缺乏会引起严重感染；红细胞明显减少会引起严重贫血；血小板明显下降引起严重出血，甚至导致死亡。

目前，临床上对于骨髓抑制，尤其是放化疗引起的骨髓抑制，尚缺乏有效的治疗手段。因此，寻找到有效的药物来缓解骨髓抑制，成为了一个亟待解决的问题。

地榆苷元是从蔷薇科地榆属植物地榆(Sanguisorba officinalis L.)或长叶地榆[S.officinalis L.var.longifolia(Bertol.)Yu et Li]的根中提取得到的一种活性成分，是地榆皂苷I和地榆皂苷II的苷元，化学名：3β，19α-羟基乌索-12烯-28-羧酸，其结构式如下所示：

然而，迄今尚未见以地榆苷元为活性成分制备注射剂，用于治疗和/或预防骨髓抑制的公开报道。

技术实现要素：

为解决上述问题，本发明提供了一种地榆苷元注射剂，其特征在于：它是包含下述原料制备而成的制剂：

地榆苷元、增溶剂。

进一步地，它是包含下述重量配比的原料制备而成的制剂：

地榆苷元0.5-10份、增溶剂0.001-60份。

进一步地，所述地榆苷元与增溶剂的重量配比为1:0.005～300。

进一步地，所述的增溶剂为吐温80、聚氧乙烯蓖麻油EL或泊洛沙姆188；所述的pH调节剂为氢氧化钠。

进一步地，所述注射剂中地榆苷元的浓度为0.2mg/mL。

进一步地，所述的注射剂是注射液、粉针剂、水针剂或大输液。

进一步地，包括下述步骤：

按配比称取地榆苷元分散于注射用水中，加入相应配比的增溶剂、pH调节剂，调节pH至10，搅拌溶解，再加入注射用水，过滤、灭菌，即得本发明注射剂。

本发明还提供了所述注射剂用于制备治疗和/或预防骨髓抑制的药物的用途。

进一步地，所述的药物是治疗和/或预防化学物质导致的骨髓抑制的药物。

进一步地，所述的药物是升高血细胞和/或骨髓造血干细胞的药物。

进一步地，所述的药物是升高外周血白细胞、中性粒细胞、红细胞、血小板和/或血红蛋白的药物。

发明人前期研究发现，地榆苷元存在溶解度低、口服胃肠吸收率小等问题，造成该成分口服生物利用度低，限制了该成分升高血细胞效果的发挥。

发明人经过对剂型及其配方的研究，通过本发明制备的地榆苷元注射剂解决了地榆苷元溶解度低的问题，提高了地榆苷元生物利用度，进而提高其升高血细胞的疗效，对地榆苷元的新剂型开发及更好的临床应用具有十分重要的意义。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为各实验组小鼠骨髓造血干细胞计数比较。

具体实施方式

实施例1本发明注射剂的制备

按下述配比称取原料：

地榆苷元1.5g、吐温80 10g、pH调节剂适量。

制备方法如下：

取地榆苷元分散于10mL注射用水中，加入吐温80、氢氧化钠，调节pH至10，搅拌溶解，再加入注射用水至7500mL使溶液中地榆苷元的浓度为0.2mg/mL，用0.22um微孔滤膜过滤、灭菌，即得本发明注射剂。

实施例2本发明注射剂的制备

按下述配比称取原料：

地榆苷元2.5g、聚氧乙烯蓖麻油EL 60g、pH调节剂适量。

制备方法如下：

取地榆苷元分散于10mL注射用水中，加入聚氧乙烯蓖麻油EL、氢氧化钠，调节pH至10，搅拌溶解，再加入注射用水至12500mL使溶液中地榆苷元的浓度为0.2mg/mL，用0.22um微孔滤膜过滤、灭菌，即得本发明注射剂。

实施例3本发明注射剂的制备

按下述配比称取原料：

地榆苷元10g、泊洛沙姆188 60g、pH调节剂适量。

制备方法如下：

取地榆苷元分散于10mL注射用水中，加入泊洛沙姆188、氢氧化钠，调节pH至10，搅拌溶解，再加入注射用水至50000mL使溶液中地榆苷元的浓度为0.2mg/mL，用0.22um微孔滤膜过滤、灭菌，即得本发明注射剂。

以下通过具体实验证明本发明的有益效果。

实验例1采用不同辅料制备的地榆苷元注射剂的质量评价

本研究根据地榆苷元的性质，选用吐温80、聚氧乙烯蓖麻油EL、泊洛沙姆188、丙二醇、维生素C为辅料，制成地榆苷元注射剂。

制备方法如下：取地榆苷元0.2g分散于100mL注射用水中，分别加入不同的辅料(吐温80、聚氧乙烯蓖麻油EL、泊洛沙姆188、丙二醇、维生素C)、氢氧化钠，调节pH至10，搅拌溶解，再加入注射用水至1000mL使溶液中地榆苷元的浓度为0.2mg/mL，用0.22um微孔滤膜过滤、灭菌，即得本发明注射剂，结果见表1。

热原按《中国药典》(2010年版)热原检查法测定。

澄明度按《中国药典》(2010年版)可见异物检查法项下的灯检法检查。

地榆苷元含量，采用HPLC法测定，色谱条件：Agilent extend-C18色谱柱(250×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.5％磷酸(70:30)。流速：0.8mL·min-1，柱温：40℃，检测波长：205nm，进样量：10μL。

表1 采用不同辅料制备的地榆苷元注射剂的质量评价

注：与吐温80组比较，*P<0.05。

实验结果：采用本发明辅料吐温80、聚氧乙烯蓖麻油EL、泊洛沙姆188制备的地榆苷元注射剂，热源检查合格，澄明度检查合格，地榆苷元含量测定显示含量较高，表明采用本发明辅料吐温80、聚氧乙烯蓖麻油EL、泊洛沙姆188制备的地榆苷元注射剂符合制剂要求，且最大程度保留地榆苷元成分。其它二种辅料丙二醇、维生素C制备的地榆苷元注射剂，热源检查合格，澄明度检查不合格，地榆苷元含量测定显示含量较低。

实验例2采用不同量辅料制备的地榆苷元注射剂的质量评价

制备方法如下：取地榆苷元0.2g分散于100mL注射用水中，分别加入不同量的增溶剂(吐温80)、氢氧化钠，调节pH至10，搅拌溶解，再加入注射用水至1000mL使溶液中地榆苷元的浓度为0.2mg/mL，用0.22um微孔滤膜过滤、灭菌，即得本发明注射剂，结果见表2。

表2 采用不同量增溶剂制备的地榆苷元注射剂的质量评价

注：与1.0mg组比较，*P<0.05。

实验结果：仅在本发明地榆苷元0.2g和增溶剂用量为1.0mg-60g比例下制备的地榆苷元注射剂热源合格，澄明度符合要求，含量高，制剂最佳，可制备符合要求的地榆苷元注射剂。

实验例3本发明地榆苷元注射剂药效学研究

1实验材料

1.1受试药物本发明地榆苷元注射剂A组(按照实施例1制备)、B组(按照实施例2制备)、C组(按照实施例3制备)、地榆苷元10％DMSO-生理盐水组、环磷酰胺。

1.2实验动物KM-小鼠：18.5～22.5g。

1.3实验仪器：全自动血球分析仪；BS-600L电子天平：规格：600g/0.1g，

上海友声衡器有限公司。

1.4统计方法

用SPSS 17.0软件进行统计分析。数据以均数±标准差表示，组间采用单因素方差分析，方差齐者组间进行LSD检验，方差不齐者进行Tamhane’s T2检验。

2实验方法

2.1实验动物分组及模型制备

所有动物适应性喂养1周后按体重随机分为：空白组；模型组；地榆苷元注射剂A、B、C组，制成2.5mg·kg^-1混悬液，临用前配制；地榆苷元组：地榆苷元粉末，用10％DMSO-生理盐水溶解，配制成2.5mg·kg^-1混悬液，临用前配制。实验第1天，除空白组外，其余各组小鼠按50mg·kg^-1剂量腹腔注射环磷酰胺生理盐水溶液，连续3天，空白组小鼠尾静脉注射等体积生理盐水。

2.2给药

各实验组自实验第1天开始按剂量、给药方式给予相应药物，空白组和模型组小鼠尾静脉注射等体积生理盐水，连续7天。

2.3标本采集

实验第8天，各实验组小鼠眼眶取血，用装有EDTA抗凝剂的0.5mlEP管收集待测。

2.4检测指标及方法

外周血象检测：采用全自动血球计数仪对各实验组小鼠外周血白细胞(WBC)、中性粒细胞(NEUT)红细胞(RBC)、血小板(PLT)、血红蛋白(HGB)进行计数。

骨髓造血干细胞计数(以骨髓细胞CD34+抗原表达量计)用含牛血清白蛋白浓度为0.2％的PBS缓冲液冲出小鼠右侧股骨骨髓细胞，取出106个细胞离心，弃上清，加入30μL正常小鼠血清以封闭非特异结合位点，再加入10μL FITC标记的大鼠抗小鼠CD34+抗体，对照管加入10μL相应对照抗体，4℃避光反应30min。加入2mL红细胞裂解液，作用5min，洗细胞2次，加入终浓度为3μg/mL的PI染液，采用流式细胞仪检测骨髓细胞CD34+抗原表达。

3实验结果

3.1外周血主要血细胞计数比较，见表3、表4。

表3 各实验组小鼠外周血血细胞数量

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；注：与地榆苷元组比较，^△P<0.05，^△△P<0.01。

结果显示，与模型组比较，地榆苷元注射剂A组、地榆苷元注射剂B组、地榆苷元注射剂C组小鼠造血干细胞数量均有显著升高(P<0.05)，地榆苷元组无显著性差异；与地榆苷元组比较，地榆苷元注射剂A组、地榆苷元注射剂B组、地榆苷元注射剂C组小鼠外周血WBC、RBC、PLT数量均有显著升高(P<0.05)。

表4 各实验组小鼠外周血血细胞数量

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；注：与地榆苷元组比较，^△P<0.05，^△△P<0.01。

结果显示，与模型组比较，地榆苷元注射剂A组、地榆苷元注射剂B组、地榆苷元注射剂C组小鼠外周血NEUT和HGB数量均有显著升高(P<0.05)，地榆苷元组无显著性差异；与地榆苷元组比较，地榆苷元注射剂A组、地榆苷元注射剂B组、地榆苷元注射剂C组组小鼠外周血NEUT和HGB数量均有显著升高(P<0.05)

3.2、骨髓造血干细胞计数比较

从图1可知，与模型组比较，本发明地榆苷元注射剂组小鼠造血干细胞数量均有显著升高(P<0.05)，地榆苷元组无显著性差异；与地榆苷元组比较，本发明地榆苷元注射剂组小鼠造血干细胞数量均有显著升高(P<0.05)。

以上实验结果表明，本发明地榆苷元注射剂可以有效升高血细胞，药效明显优于直接用地榆苷元原药给药。

综上所述，本发明制备的地榆苷元注射剂解决了地榆苷元溶解度低的问题，提高了地榆苷元生物利用度，进而提高其升高血细胞的疗效，对地榆苷元更好的临床应用具有十分重要的意义。