1.一种猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗,其特征在于,包括猪肺炎支原体灭活疫苗和猪瘟活疫苗,用一头份的猪肺炎支原体灭活疫苗稀释一头份的猪瘟活疫苗;其中,猪肺炎支原体灭活疫苗CCU不低于108/头份,猪瘟活疫苗病毒每头份含量不低于150兔体感染量。
2.根据权利要求1所述的猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗,其特征在于,所述猪肺炎支原体灭活疫苗的制备方法如下:
(1)制备一级生产种子:将冻干菌种启封,按10%的接种量将菌种接种于液体培养基中,于37~37.5℃培养3~7天,且培养基pH值为6.8时,得一级生产种子,并于-20℃以下保存备用;
(2)制备二级生产种子:按10%的接种量将一级生产种子接种于液体培养基中,于37~37.5℃培养3~7天,且培养基pH值为6.8时,得二级生产种子,并于-20℃以下保存备用;
(3)菌液培养:按8%~10%的接种量将二级生产种子接种于液体培养基中,于37℃培养3~7天,且培养基pH值为6.8~7.0时,得菌液;
(4)浓缩灭活:过滤步骤(3)所得菌液,并将菌液浓缩为原体积的1/10~1/2,再在2~8℃的条件下,在搅拌的同时加入菌液体积0.2%的β-丙内酯,灭活处理24h后,回温至37℃,保持2h,得猪肺炎支原体灭活疫苗。
3.根据权利要求1所述的猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗,其特征在于,所述猪瘟活疫苗的制备方法如下:
(1)制备单层次代细胞;
(2)制备新鲜脾毒;
(3)取去脂肪、清洗后的新鲜脾毒,剪碎并研磨,再加入100mL乳汉液,过滤,收集滤液,得脾毒液,再将脾毒液于2~8℃的条件下放置60min,每15~20min振荡一次,于2~8℃、3000r/min的条件下离心15min,取上清液,并向其中加入100mL维持液,摇匀,36~37℃培养,得脾毒种;
(4)除去步骤(1)所得次代细胞中的营养液,接种步骤(3)所得脾毒种,再向其中加入瓶体容积1/10的维持液,包扎后,于37℃、9~11r/h的条件下培养,得猪瘟活疫苗。
4.根据权利要求2所述的猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗,其特征在于,步骤(1)中所述培养基为改良Goodwin氏A26液体培养基。
5.根据权利要求4所述的猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗,其特征在于,所述改良Goodwin氏A26液体培养基包括0.2%水解乳蛋白Hanks液、牛心消化液、25%酵母液以及1/80乙酸铊;其中,0.2%水解乳蛋白Hanks液、牛心消化液、25%酵母液以及1/80乙酸铊体积比为50:30:2:1。
6.根据权利要求3所述的猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗,其特征在于,步骤(3)中所述维持液包括犊牛血清、双抗溶液和碳酸氢钠;其中,犊牛血清、双抗溶液和碳酸氢钠的体积比为4:1:6。
7.根据权利要求1~6任一项所述的猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗,其特征在于,所述猪肺炎支原体毒株为HP-G株,保藏编号为CCTCC NO.V2001661。
8.权利要求1~7所述的猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
用一头份的猪肺炎支原体灭活疫苗稀释一头份的猪瘟活疫苗,混合,即得猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗;其中,猪肺炎支原体灭活疫苗CCU不低于108/头份,猪瘟活疫苗病毒每头份含量不低于150兔体感染量。