土木香内酯在制备防治肝脏损伤药物中的应用的制作方法

本发明涉及医药领域，具体涉及土木香内酯在制备防治肝脏损伤药物中的应用。

背景技术：

引起肝脏损伤的因素有多种，如：病毒、药物、化学毒物及代谢紊乱等，临床发病率逐年增加。早期多表现为转氨酶增高，之后随病情发展，肝脏损伤进一步加重，最终可出现凝血机制障碍、黄疸、肝性脑病和腹水等症状。目前认为机体免疫应答和氧化应激反应是发病的重要原因，但我们对于肝脏损伤的确切发病机制尚不清楚，目前尚无有效的治疗措施。由于我国的肝病患者众多，因此如何有效的防治肝脏损伤已成为一个重要课题。

土木香内酯（alantolactone）是提取于土木香根茎的活性物质，其分子式为c15h20o2，分子量为232.32，结构如式i所示：

式i

研究证明，土木香内酯具有抗炎、抗真菌、驱虫及抗肿瘤等作用。体外实验表明，土木香内酯能够促进小鼠肝癌细胞株hepa1c1c7抗氧化酶如血红素单加氧酶-1，谷胱甘肽巯基转移酶，γ谷氨酸-半胱氨酸合成酶的表达。土木香内酯还能够抑制巨噬细胞raw264.7产生诱导型一氧化氮合成酶（inos），一氧化氮（no），环氧合酶-2（cox-2），从而发挥抗炎效果。体内实验发现，土木香内酯能缓解东莨菪碱引起的小鼠认知障碍。但目前尚无研究土木香内酯与肝脏损伤的关系，本发明由此而来。

技术实现要素：

本发明的目的旨在提供一种土木香内酯的新的药物用途，特别是治疗痤疮丙酸杆菌(propionibacteriumacnes，p.acnes)/lps引起的小鼠肝脏损伤及d-氨基半乳糖胺（d-galn）引起的小鼠肝脏损伤的药物用途，为防治肝脏损伤提供了一种新途径。

技术方案：本发明提供了一种防治肝脏损伤的药物制剂，由土木香内酯和药学上可接受的辅料组成。

优选的，所述土木香内酯的重量百分比为40~90%。

进一步的，将所述土木香内酯直接或间接加入制备不同剂型时所需的药学上可接受的各种常用辅料，如辅助物质、稳定剂、润湿剂、增溶剂和其它常用的添加剂等。

进一步的，本发明所述药物制剂为片剂或者胶囊剂的一种。

进一步的，本发明所述药物制剂为控释或者缓释制剂的一种。

进一步的，本发明所述药物制剂为适用于胃肠道的药物制剂。

进一步的，将含有土木香内酯的提取物制备防治肝脏损伤药物。

有益效果：在p.acnes/lps引起的小鼠肝脏损伤中，低剂量土木香内酯即可有效缓解炎性细胞浸润和肉芽肿形成，高剂量组效果更加明显。血清检测谷丙转氨酶（alt）和谷草转氨酶（ast）结果发现，和对照组相比，p.acnes/lps组小鼠alt和ast水平明显提高（p＜0.01）；和p.acnes/lps组相比，土木香内酯有效降低了血清alt和ast水平（p＜0.01）。实时定量pcr结果显示，和对照组相比，p.acnes/lps组小鼠肝脏组织inos表达明显增高，土木香内酯有效降低了肝脏inos表达（p＜0.01）。

在d-galn诱导的小鼠肝脏损伤中，和对照组相比，d-galn组小鼠肝脏组织结构紊乱，可见细胞气球样变及坏死。和d-galn组相比，土木香内酯有效降低了肝脏组织损伤，肝脏组织完整，肝细胞变性和坏死明显好转，其中高剂量土木香内酯组未见明显肝细胞变性和坏死。血清检测alt和ast结果发现，和对照组相比，d-galn组小鼠alt和ast水平明显提高（p＜0.01）。和d-galn组相比，土木香内酯有效降低了血清alt和ast水平（p＜0.01）。实时定量pcr结果显示，和对照组相比，d-galn组小鼠肝脏组织inos表达明显增高，土木香内酯有效降低了肝脏inos表达（p＜0.01）。

通过动物实验证实，土木香内酯对p.acnes/lps和d-galn诱导的肝脏急性损伤有一定的防治作用，可使肝脏组织损伤减轻，有效降低血清alt和ast水平，可作为肝脏损伤药物干预的一种新手段。

相对于现有技术中的方案，本发明的优点是：本发明分别通过应用p.acnes/lps诱导的小鼠肝脏损伤模型和d-galn诱导的小鼠肝脏损伤模型，观察土木香内酯对肝脏损伤的治疗作用，分析了血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶的水平，并评估了inos的表达变化，从而阐明了土木香内酯干预肝脏损伤的作用机制—即土木香内酯通过抑制肝脏inos的表达来缓解肝脏损伤。

附图说明

图1p.acnes/lps诱导的小鼠模型实验中各组小鼠肝脏组织进行he染色分析，a为对照组，b为p.acnes/lps组，c为土木香内酯低剂量组，d为土木香内酯高剂量组。

图2p.acnes/lps诱导的小鼠模型实验中各组小鼠血清谷草转氨酶（a）和谷丙转氨酶（b）检测值。**p＜0.01和对照组相比，^##p＜0.01和p.acnes/lps组相比。

图3p.acnes/lps诱导的小鼠模型实验中各组小鼠肝脏组织inos基因表达分析。**p＜0.01和对照组相比，^##p＜0.01和p.acnes/lps组相比。

图4d-galn诱导的小鼠模型实验中各组小鼠肝脏组织进行he染色分析，a为对照组，b为d-galn组，c为土木香内酯低剂量组，d为土木香内酯高剂量组。

图5d-galn诱导的小鼠模型实验中各组小鼠血清谷草转氨酶（a）和谷丙转氨酶（b）检测值。**p＜0.01和对照组相比，^#p＜0.05，^##p＜0.01和d-galn组相比。

图6d-galn诱导的小鼠模型实验中各组小鼠肝脏组织inos基因表达分析。**p＜0.01和对照组相比，^##p＜0.01和d-galn组相比。

具体实施方式

本发明公开了一种土木香内酯在制备防治肝脏损伤药物中的应用。本领域技术人员可以参考本文内容实现其应用，特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明内。本发明的方法和应用已经通过较佳的实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明提供的一种土木香内酯在制备防治肝脏损伤药物中的应用中所用到的试剂及原料均可由市场购得。

为了使本技术领域的技术人员能够更好地理解本发明的技术方案，下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实验例1：土木香内酯对p.acnes/lps诱导的小鼠肝脏损伤的防护作用

雄性c57bl/6小鼠（18-20g）分4组：

（1）对照组：5只，小鼠每天腹腔注射生理盐水0.15ml，连续9天，其中第3天小鼠尾静脉注射生理盐水100μl，第9天小鼠尾静脉注射生理盐水100μl。

（2）p.acnes/lps组：9只，小鼠每天腹腔注射生理盐水0.15ml，连续9天，其中第3天小鼠尾静脉注射p.acnes1mg/100μl，第9天小鼠尾静脉注射lps1μg/100μl。

（3）土木香内酯低剂量组：9只，小鼠每天腹腔注射土木香内酯（0.15ml，0.75mg/kg），连续9天。其中，第3天小鼠尾静脉注射p.acnes1mg/100μl，第9天小鼠尾静脉注射lps1μg/100μl。

（4）土木香内酯高剂量组：9只，小鼠每天腹腔注射土木香内酯（0.15ml，1.5mg/kg），连续9天。其中第3天小鼠尾静脉注射p.acnes1mg/100μl，第9天小鼠尾静脉注射lps1μg/100μl。

lps注射2小时后处死小鼠，采集血清检测ast和alt活力。取肝脏标本，一部分固定后石蜡包埋进行组织学检测，一部分进行实时定量pcr检测，测定inos的表达水平。

实验结果：

（1）从图1中的he染色图得知，光镜下，与对照组小鼠肝脏结构相比，p.acnes/lps组小鼠肝组织结构紊乱，可见大量炎症细胞浸润以及肉芽组织形成。土木香内酯治疗组仅可见少量炎症细胞浸润，肝细胞排列整齐。

（2）ast及alt活力

从图2中得知，和对照组小鼠相比，p.acnes/lps组小鼠血清ast及alt表达明显升高，土木香内酯治疗组明显降低了血清ast及alt表达水平，土木香内酯能有效抑制p.acnes/lps引起的小鼠肝脏损伤及ast及alt活力。

（3）inos表达

从图3得知，和对照组小鼠相比，p.acnes/lps组小鼠肝脏inos表达明显升高，土木香内酯治疗组明显降低了inos表达。

实验例2：土木香内酯对d-galn诱导的小鼠急性肝损伤的防护作用

雄性c57bl/6小鼠（18-20g）分4组：

（1）对照组：5只，小鼠每天腹腔注射生理盐水0.15ml，连续7天，第7天腹腔额外注射生理盐水0.15ml。

（2）d-galn组：9只，小鼠每天腹腔注射生理盐水0.15ml，连续7天，第7天腹腔注射d-galn（0.15ml，800mg/kg）。

（3）土木香内酯低剂量组：9只，小鼠每天腹腔注射土木香内酯（0.15ml，0.75mg/kg），连续7天。第7天腹腔注射d-galn（0.15ml，800mg/kg）。

（4）土木香内酯高剂量组：9只，小鼠每天腹腔注射土木香内酯（0.15ml，1.5mg/kg），连续7天。第7天腹腔注射d-galn（0.15ml，800mg/kg）。

d-galn注射16小时后处死小鼠，采集血清检测ast和alt活力，取肝脏标本，一部分固定后石蜡包埋进行组织学检测，一部分进行实时定量pcr检测，测定inos的表达水平。

实验结果：

（1）从图4得知，和对照组相比，d-galn组小鼠肝脏组织结构紊乱，可见细胞气球样变及坏死。和d-galn组相比，土木香内酯有效降低了肝脏组织损伤，肝脏组织完整，肝细胞变性和坏死明显好转，其中高剂量土木香内酯组未见明显肝细胞变性和坏死。

（2）ast及alt活力

从图5得知，和对照组小鼠相比，d-galn组小鼠血清ast及alt表达明显升高，土木香内酯治疗组明显降低了血清ast及alt表达。

（3）inos表达

从图6得知，和对照组相比，d-galn组小鼠肝脏组织inos表达明显增高，土木香内酯有效降低了肝脏inos表达（p＜0.01）。

结论:土木香内酯能有效抑制p.acnes/lps和d-galn引起的小鼠肝脏损伤，可以用来制备抗肝脏损伤药物。