治疗EBV+DLBCL和DLBCL的药物及组合物的制作方法

本发明涉及一种治疗ebv+dlbcl和dlbcl的药物及组合物，属于生物医药技术领域。

背景技术：

弥漫性大b细胞淋巴瘤（dlbcl）是最常见的成人非霍奇金淋巴瘤(nhl)类型。在所有非霍奇金淋巴瘤中它的比例约占30%，年均发病率在7-8例/每10万人次。包括环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和泼尼松的标准化疗方案(chop)已帮助超过40%的dlbcl患者获得长期生存。此外，增加了利妥昔单抗的chop方案(r-chop)使得dlbcl患者的5年生存率提高到了接近60%。虽然随着治疗方案的进展，患者的预后已经取得了巨大的进步，但仍有大约三分之一的患者最终死于耐药或疾病复发。

eb病毒（ebv）阳性弥漫性大b细胞淋巴瘤（ebv-positivediffuselargeb-celllymphoma，ebv+dlbcl）因其具有独特的临床病理特征及发病机制，在2008年修订版造血和淋巴组织肿瘤世界卫生组织（who）分类中，将ebv+dlbcl分为一种独立的疾病类型。将50岁以上的dlbcl伴eb病毒（ebv）感染的单克隆b细胞增殖性疾病同时满足免疫功能健全和既往无淋巴瘤病史两个条件定义为老年ebv阳性dlbcl，这部分患者预后较ebv阴性dlbcl差。但近年来认为ebv+dlbcl在年轻患者中发现的越来越多，其生物学行为与年龄＞50岁患者无显著差别。因此，2016版分类则将其明确为一个疾病实体，并将“老年”改为“非特指（nos）”。

dlbcl细胞是否感染ebv和dlbcl的预后相关。有报道称ebv感染的b细胞淋巴瘤通常发生于老年人，免疫功能下降是主要原因。有学者评估了ebv阳性dlbcl的治疗效果，发现ebv阳性的dlbcl具有更短的总生存期和无疾病进展生存期。ebv介导nf-κb通路持续激活，对dlbcl的存活非常重要。高ipi和non-gcb表型的ebv阳性淋巴瘤患者预后更差。

目前，没有统一的方案治疗ebv+dlbcl。单一化疗效果并不理想，传统的化疗方案chop（环磷酰胺+多柔比星+长春新碱+泼尼松）对ebv+dlbcl患者的治疗效果也并不理想，现阶段采用方案是利妥西单抗结合chop(r-chop)。有文献表明，此方案可延长dlbcl患者寿命。然而，用此方案治疗ebv+dlbcl的报道还比较欠缺。ebv特异性细胞毒性t淋巴细胞免疫疗法，能成功阻止器官移植后淋巴瘤，并能治疗与ebv相关的淋巴瘤，但这种方法没有用于治疗免疫功能正常的dlbcl患者。此外，丙戊酸(使组蛋白脱乙酰基，一种ι类hdac抑制剂)结合更昔洛韦的方法，比单一化疗更能有效阻止ebv转化的细胞增殖。蛋白酶抑制剂硼替佐米可治疗浆细胞骨髓瘤，它阻断nf-κb信号通路，促进ebv相关b细胞转化。硼替佐米结合其他分子靶向药物的应用，也许能治疗ebv+dlbcl。总之，临床上急需有效治疗ebv+dlbcl和dlbcl的新药或药物组合物。咖啡酸苯乙酯(cape)是蜂胶的主要组成成分之一，其药理作用有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等方面。cape是nf-κb和hdac特异性抑制剂，因此cape有可能用于治疗包括ebv+dlbcl在内的dlbcl。

技术实现要素：

cape，化学名：咖啡酸苯乙酯，是蜂胶的主要组成成分之一，药理作用有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等方面。

一种治疗ebv+dlbcl的药物，所述药物为咖啡酸苯乙酯及其衍生物。

上述咖啡酸苯乙酯及其衍生物的用量为：1-90mg/kg/d。

上述咖啡酸苯乙酯衍生物包括咖啡酸苯乙酯邻二酚羟基被取代的衍生物、咖啡酸苯乙酯苯环氢被取代的衍生物以及咖啡酸苯乙酯烷基链延长的衍生物。

一种治疗ebv+dlbcl的药物组合物，上述药物组合物包含咖啡酸苯乙酯及其衍生物和chop，chop可以为codox-m/ivac或者pep-c或者c-mopp或者cmop或者meda。

codox-m/ivac(cyclophosphamide,vincristine,doxorubicin-methatrexate/ifusamide,etoposide,cytarabine):

环磷酰胺、长春新碱、甲氨蝶呤、阿霉素、甲氨蝶呤/异环磷酰胺，依托泊苷、阿糖胞苷。

pep-c（prednisone、etoposide、procarbazine、cyclophosphamide）:

泼尼松、依托泊苷、甲基苄肼、环磷酰胺。

c-mopp（cyclophosphamide,vincristine,prednisoloneandprocarbazine）:

环磷酰胺，长春新碱，强的松，甲基苄肼。

cmop（cyclophosphamide,mitoxantrone,vincristine,andprednisolone）:

环磷酰胺，米托蒽醌，长春新碱，泼尼松龙。

meda(methotrexate,etoposide,dexamethasoneandpegaspargase):

氨甲喋呤、依托泊苷、地塞米松。

上述咖啡酸苯乙酯衍生物包括咖啡酸苯乙酯邻二酚羟基被取代的衍生物、咖啡酸苯乙酯苯环氢被取代的衍生物以及咖啡酸苯乙酯烷基链延长的衍生物。

上述chop与咖啡酸苯乙酯的配比1:1-300，所述配比为质量比。

上述chop与咖啡酸苯乙酯的配比1:2-50，所述配比为质量比。

一种治疗dlbcl的药物，所述药物为咖啡酸苯乙酯及其衍生物。

上述咖啡酸苯乙酯及其衍生物的用量为：1-90mg/kg/d。

上述咖啡酸苯乙酯衍生物包括咖啡酸苯乙酯邻二酚羟基被取代的衍生物、咖啡酸苯乙酯苯环氢被取代的衍生物以及咖啡酸苯乙酯烷基链延长的衍生物。

一种治疗dlbcl的药物组合物，所述药物为咖啡酸苯乙酯及其衍生物和chop，chop可以为codox-m/ivac或者pep-c或者c-mopp或者cmop或者meda。

上述chop与咖啡酸苯乙酯的配比1:1-300，所述配比为质量比。

上述chop与咖啡酸苯乙酯的配比1:2-50，所述配比为质量比。

上述咖啡酸苯乙酯及其衍生物的用量为：1-90mg/kg/d。

上述咖啡酸苯乙酯衍生物包括咖啡酸苯乙酯邻二酚羟基被取代的衍生物、咖啡酸苯乙酯苯环氢被取代的衍生物以及咖啡酸苯乙酯烷基链延长的衍生物。

需要特别说明的是，本发明的重点技术特征在于发现cape即咖啡酸苯乙酯有治疗包括ebv+dlbcl在内的dlbcl和化疗增敏的效果，本发明不局限于上述的用量范围值，包括能够在哺乳动物上安全使用的所有剂量范围。

通过药理试验研究表明：

cape可以有效抑制ebv+dlbcl细胞的生长。

具体试验如下：

实验条件：5000个farage细胞每孔点入96孔板中，同时加入cape处理farage细胞，farage细胞为ebv+dlbcl细胞，于48小时后加入alamarblue，测量药物对细胞的抑制率，发现cape对farage细胞增殖有抑制作用，ic50为2.42μm。

cape可以有效抑制ebv-dlbcl细胞的生长。

具体试验如下：

实验条件：5000个mc116细胞每孔点入96孔板中，同时加入cape处理mc116细胞，mc116细胞为ebv-dlbcl细胞，于48小时后加入alamarblue，测量药物对细胞的抑制率，发现cape对mc116细胞增殖有抑制作用，ic50为1.26μm。

实验条件：5000个sudhl-2细胞每孔点入96孔板中，同时加入cape处理sudhl-2细胞，sudhl-2细胞为ebv-dlbcl细胞，于48小时后加入alamarblue，测量药物对细胞的抑制率，发现cape对sudhl-2细胞增殖有抑制作用，ic50为0.304μm。

cape可以有效抑制ebv+dlbcl细胞移植瘤的生长。

具体试验如下：

实验条件：在6-8周的nod-scid鼠腋下植入10⁷个farage细胞。待瘤体长到100-200mm³时，，将nod-scid鼠分为两组，给药组和溶剂组，每组6只，灌胃给药或溶剂，药物剂量为cape30mg/kg/d，溶剂为0.5%cmcna。给药或溶剂11天，每日测量瘤体积，发现cape对瘤体生长有抑制作用。

cape和chop联用可以增强chop对ebv+dlbcl细胞生长的抑制作用。

具体实验如下：

实验条件：5000个farage细胞每孔点入96孔板中，同时用cape、chop、cape+chop处理farage细胞，farage细胞为ebv+dlbcl细胞，于48小时后加入alamarblue，测量药物对细胞的抑制率，发现cape增强farage细胞对chop的敏感度，联用组表现出更强的抑制作用。

实验条件：5000个opl2细胞每孔点入96孔板中，同时用cape、chop、cape+chop处理opl2细胞，opl2细胞为ebv+dlbcl细胞，于72小时后加入alamarblue，测量药物对细胞的抑制率，发现cape增强opl2细胞对chop的敏感度，联用组表现出更强的抑制作用。

cape和chop联用可以增强chop对ebv-dlbcl细胞生长的抑制作用。

具体实验如下：

实验条件：5000个sudhl-2细胞每孔点入96孔板中，同时用cape、chop、cape+chop处理sudhl-2细胞，sudhl-2细胞为ebv-dlbcl细胞，于48小时后加入alamarblue，测量药物对细胞的抑制率，发现cape增强sudhl-2细胞对chop的敏感度，联用组表现出更强的抑制作用。

实验条件：5000个mc116细胞每孔点入96孔板中，同时用cape、chop、cape+chop处理mc116细胞，mc116细胞为ebv-dlbcl细胞，于48小时后加入alamarblue，测量药物对细胞的抑制率，发现cape增强mc116细胞对chop的敏感度，联用组表现出更强的抑制作用。

附图说明

图1是cape处理farage细胞的抑制率；

图2是cape处理mc116细胞的抑制率；

图3是cape处理sudhl-2细胞的抑制率；

图4是cape处理farage细胞移植瘤的瘤体积折线图；

图5是cape和chop联合处理farage细胞的抑制率；

图6是cape和chop联合处理farage细胞的联合指数作用图；

图7是cape和chop联合处理opl2细胞的抑制率；

图8是cape和chop联合处理opl2细胞的联合指数作用图。

图9是cape和chop联合处理mc116细胞的抑制率；

图10是cape和chop联合处理mc116细胞的联合指数作用图。

图11是cape和chop联合处理sudhl-2细胞的抑制率；

图12是cape和chop联合处理sudhl-2细胞的联合指数作用图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。

实施例1：

实验条件：5000个farage细胞每孔点入96孔板中，同时加入cape处理farage细胞，farage细胞为ebv+dlbcl细胞，于48小时后加入alamarblue，测量药物对细胞的抑制率，发现cape对farage细胞增殖有抑制作用，抑制率如图1所示，ic50为2.42μm。

实施例2：

实验条件：5000个mc116细胞每孔点入96孔板中，同时加入cape处理mc116细胞，mc116细胞为ebv-dlbcl细胞，于48小时后加入alamarblue，测量药物对细胞的抑制率，发现cape对mc116细胞增殖有抑制作用，抑制率如图2所示，ic50为1.26μm。

实施例3：

实验条件：5000个sudhl-2细胞每孔点入96孔板中，同时加入cape处理sudhl-2细胞，sudhl-2细胞为ebv-dlbcl细胞，于48小时后加入alamarblue，测量药物对细胞的抑制率，发现cape对sudhl-2细胞增殖有抑制作用，抑制率如图3所示，ic50为0.304μm。

实施例4：

实验条件：在6-8周的nod-scid鼠腋下植入10⁷个farage细胞。待瘤体长到100-200mm³时，将nod-scid鼠分为两组，给药组和溶剂组，每组6只，灌胃给药或溶剂，药物剂量为cape30mg/kg/d，溶剂为0.5%cmcna。给药或溶剂11天，每日测量瘤体积，发现cape对瘤体生长有抑制作用，瘤体积折线图如图4所示。

实施例5：

实验条件：5000个farage细胞每孔点入96孔板中，同时用cape、chop、cape+chop处理farage细胞，farage细胞为ebv+dlbcl细胞，于48小时后加入alamarblue，测量药物对细胞的抑制率，发现chop0.01μg/ml单用抑制率为39.68%，cape0.4μm单用抑制率为7.59%，chop0.01μg/ml和cape0.4μm联用抑制率为62.90%，联用组表现出更强抑制作用，联用抑制率如图5所示。通过计算联合指数（combinedindex，ci）可以得出cape与chop联用时具有显著的协同增效作用（ci>1），而不仅仅是各自结果的叠加，联合指数作用图如图6所示。

实施例6：

实验条件：5000个opl2细胞每孔点入96孔板中，同时用cape、chop、cape+chop处理opl2细胞，opl2细胞为ebv+dlbcl细胞，于72小时后加入alamarblue，测量药物对细胞的抑制率，发现chop3.7μg/ml单用抑制率为-6.7%，cape75μm单用抑制率为12.69%，chop3.7μg/ml和cape75μm联用抑制率为24..27%，联用组表现出更强抑制作用，联用抑制率如图7所示。通过计算联合指数（combinedindex，ci）可以得出cape与chop联用时具有显著的协同增效作用（ci>1），而不仅仅是各自结果的叠加,联合指数作用图如图8所示。

实施例7：

实验条件：5000个mc116细胞每孔点入96孔板中，同时用cape、chop、cape+chop处理mc116细胞，mc116细胞为ebv-dlbcl细胞，于48小时后加入alamarblue，测量药物对细胞的抑制率，发现chop0.01μg/ml单用抑制率为13.16%，cape0.1775μm单用抑制率为18.92%，chop0.01μg/ml和cape0.1775μm联用抑制率为34.38%，联用组表现出更强抑制作用，联用抑制率如图9所示。通过计算联合指数（combinedindex，ci）可以得出cape与chop联用时具有显著的协同增效作用（ci>1），而不仅仅是各自结果的叠加,联合指数作用图如图10所示。

实施例8：

实验条件：5000个sudhl-2细胞每孔点入96孔板中，同时用cape、chop、cape+chop处理sudhl-2细胞，sudhl-2细胞为ebv-dlbcl细胞，于48小时后加入alamarblue，测量药物对细胞的抑制率，发现chop0.001μg/ml单用抑制率为15.35%，cape0.0785μm单用抑制率为10.71%，chop0.001μg/ml和cape0.0785μm联用抑制率为38.55%，联用组表现出更强抑制作用，联用抑制率如图11所示。通过计算联合指数（combinedindex，ci）可以得出cape与chop联用时具有显著的协同增效作用（ci>1），而不仅仅是各自结果的叠加,联合指数作用图如图12所示。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变形，这些改进和变形也应视为本发明的保护范围。