一种种植用复合微生物抗菌制剂及制备方法
【专利摘要】本发明属于微生物抗菌剂领域，具体涉及一种种植用复合微生物抗菌制剂及制备方法。可解决现有技术中存在的农作物品质降低，污染环境的问题，包括以下重量份数的菌粉：枯草芽孢杆菌ACCC10632，20%?40%、地衣芽孢杆菌ACCC10613，20%?40%、荚膜放线杆菌ACCC11051，20%?40%、侧孢芽孢杆菌ACCC11079，20%?40%。本发明能够有效地抑制农作物常见由细菌、真菌及线虫引起的多种土传病害，且具有使用方法简便、安全无残留、广谱抗菌和抑菌的优点。
【专利说明】
一种种植用复合微生物抗菌制剂及制备方法
技术领域
[0001]本发明属于微生物抗菌剂领域，具体涉及一种种植用复合微生物抗菌制剂及制备方法。
【背景技术】
[0002]我国农业生产施肥特点为偏施化肥，化学肥料的大量长期施用使得农作物品质降低，引起土壤板结、有机质下降、土壤及作物根系微生态结构被破坏，更是导致了土传植物病害泛滥的。常见的土传植物病害有小麦和水稻的纹枯病、玉米的丝黑穗病和大豆疫病以及瓜豆的枯萎病和灰霉病等。当前的病害防控主要依靠化学防控，但是长期施用化学药剂亦会造成药剂残留和环境污染等问题，土传病害是以土壤为媒介进行传播的植物病害统称。对土传病害生物防治的研究一直是一个热点和难点的课题。
[0003]土壤中，特别是植物根际栖息着许多具有生防潜力的微生物资源，虽然它们的作用发挥受内在和外在因素影响很大，但利用微生物繁殖速度快的特点，大量人工繁殖后施入土壤中，可以调节根部微生态环境、限制土传病原真菌的繁殖和抑制土传病害的发生发展，显示出巨大的应用潜力。
【发明内容】
[0004]本发明为了解决现有技术中存在的农作物品质降低，污染环境的问题，提供一种种植用复合微生物抗菌制剂及制备方法。
[0005]本发明采用如下技术方案实现:
一种种植用复合微生物抗菌制剂，包括以下重量份数的菌粉:枯草芽孢杆菌ACCC10632，20%-40%、地衣芽孢杆菌 ACCC10613，20%-40%、荚膜放线杆菌 ACCCl 1051，20%-40%、侧孢芽孢杆菌 ACCCl 1079，20%_40%。
[0006]—种种植用复合微生物抗菌制剂的制备方法，包括步骤如下:
第一步，菌种活化
枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis) ACCC10632、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis) ACCC10613、荚膜放线杆菌(Actinobacillus capsulatus)ACCC11051、侧抱芽抱杆菌(Brevibaci I Ius laterosporus)ACCCl 1079菌株从保存好的油管中转接于固体培养基平板中，于28°C，培养48h后。取培养好的固体培养基平板，用接种针挑单菌落接种于固体培养基试管中，于25-28 °C，培养24-48h;
第二步，种子发酵
用接种针挑适量枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis) ACCCl0613、荚膜放线杆菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079菌笞接种于装有150mL液体培养基的500mL三角瓶中放于25-28°C，130-180r/min恒温摇床培养，培养时间24-28h; 第三步，液体发酵
使用密封罐发酵，装料系数0.7，将所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.SubtiIis)ACCC10632、地衣芽抱杆菌(BaciIIus licheniformis)ACCC10613、荚膜放线杆菌(Actinobacillus capsulatus)ACCCl 1051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl 1079种子培养得到的种子培养液按照接种量为0.5%?3%加入到液体发酵培养基中，发酵温度为25°C-30°C，通气量为0.5-0.8m3/h，转速为130?180r/min，pH值为6.5-7.5,培养时间24?48h，得到发酵菌液；
第四步，制作菌粉
将第三步得到的枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis) ACCCl0613、荚膜放线杆菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079的发酵菌液，离心后去掉上清液得湿菌体，湿菌体与等量的滑石粉混合均匀，50 °C真空烘干到干粉状，得到干粉菌剂；
第五步，混合菌粉
将上述得到的枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis) ACCC10613、荚膜放线杆菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079的菌粉，按照一定比例混合均匀，得到复合微生物抗菌制剂。
[0007]第一步所述的固体培养基为:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、琼脂15.0g、蒸馏水 1.0L、pH 7.0ο
[0008]第二步所述的种子培养基为:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、蒸馏水 1.0L、pH 7.0ο
[0009]第三步所述的发酵培养基为:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、蒸馏水 1.0L、pH 7.0ο
[0010]所述的各个菌种的菌粉的菌数为:多5 X 109cfu/mL。
[0011]所述的菌粉比例是:枯草芽孢杆菌六00:10632，20%-40%、地衣芽孢杆菌400:10613，20%-40%、荚膜放线杆菌 ACCCl 1051，20%_40%、侧孢芽孢杆菌 ACCCl 1079，20%_40%。
[0012]本发明典型应用案例:
I.复合微生物抗菌制剂对小麦病害防治及增产的应用效果
试验地点:山西省运城市垣曲县;参与单位是垣曲县科技局;方法是将复合微生物抗菌制剂与叶面肥复配液按照1:100的比混合后，喷晒到小麦苗上(与30%毒死蜱可湿性粉剂施药方式一致)。结果表明，经复合微生物抗菌制剂处理后，小麦纹枯病发病率为7%，而化学农药的发病率为16%。复合微生物抗菌制剂对小麦纹枯病及赤霉病病害防治效果优于化学农药毒死蜱，而且增产了 10%。经复合微生物菌剂处理后，不但能增加产量，而且显著提高了小麦品质。
[0013]2.复合微生物抗菌制剂对甜菜病害防治及增产的应用效果
试验地点:黑龙江省齐齐哈尔市依安县;参与单位是依安县工信局；方法是甜菜育苗时，将复合微生物抗菌剂产品拌土后均匀撒在苗圃田间，施加量为每平方米苗圃添加复合微生物抗菌制剂产品2克，然后翻地、整地、播种。复合微生物抗菌制剂具有提高出苗率、促进生长、缩短育苗时间的作用，与没有添加该产品的对照相比，能提前一周出苗。移栽到田间后，除了促进生长的作用外，还能比不添加菌剂产品的对照早10天结实，并且延长生长周期10-15天，可增产15-20%。本品兑水1:100液喷三次(生长前、中、后期)具有防治立枯病和线虫病的显著功效，可减少化学农药用量的4/5，平均减少用药1.5次，可节省药1.5元/亩。复合微生物抗菌制剂不但对甜菜整个生育期的病害防治效果显著，而且还能增产和提高品质。
[0014]3.复合微生物抗菌制剂对橘子树病害防治及增产的应用效果
试验地点:广西省贺州市钟山县;参与单位是金汉威生物科技有限公司;方法在试验组将复合微生物抗菌制剂与叶面肥复配液按照1:100的比例混合后，喷晒到橘子树叶面上(对照组不作处理);将复合微生物抗菌制剂与叶面肥复配液按照1:50的比例灌根(对照组不作处理)。结果表明，经复合微生物抗菌制剂处理后，试验组橘子树裂皮病、碎叶病病害比对照组橘子树较少。复合微生物抗菌制剂对橘子树黄龙病病害防治效果显著，而且橘子的产量提尚了 21%。
[0015]本发明的有益效果是:
1.本发明能够有效地抑制农作物常见由细菌、真菌及线虫引起的多种土传病害；
2.本发明且具有使用方法简便、安全无残留、广谱抗菌和抑菌的优点。
【具体实施方式】
[0016]实施例1，一种种植用复合微生物抗菌制剂的制备方法，包括步骤如下:
第一步，菌种活化
枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis) ACCC10632、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis) ACCC10613、荚膜放线杆菌(Actinobacillus capsulatus)ACCC11051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079菌株从保存好的油管中转接于固体培养基平板中，于28°C，培养48h后。取培养好的固体培养基平板，用接种针挑单菌落接种于固体培养基试管中，于25-28 °C，培养24-48h;
第二步，种子发酵
用接种针挑适量枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis) ACCCl0613、荚膜放线杆菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079菌笞接种于装有150mL液体培养基的500mL三角瓶中放于25-28°C，130-180r/min恒温摇床培养，培养时间24-28h;
第三步，液体发酵
使用密封罐发酵，装料系数0.7，将所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.SubtiIis)ACCC10632、地衣芽抱杆菌(BaciIIus licheniformis)ACCC10613、荚膜放线杆菌(Actinobacillus capsulatus)ACCCl 1051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl 1079种子培养得到的种子培养液按照接种量为0.5%?3%加入到液体发酵培养基中，发酵温度为25°C-30°C，通气量为0.5-0.8m3/h，转速为130?180r/min，PH值为6.5-7.5,培养时间24?48h，得到发酵菌液；
第四步，制作菌粉将第三步得到的枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis) ACCCl0613、荚膜放线杆菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079的发酵菌液，离心后去掉上清液得湿菌体，湿菌体与等量的滑石粉混合均匀，50 °C真空烘干到干粉状，得到干粉菌剂；
第五步，混合菌粉
将上述得到的枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis) ACCC10613、荚膜放线杆菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079的菌粉，按照一定比例混合均匀，得到复合微生物抗菌制剂。
[0017]第一步所述的固体培养基为:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、琼脂15.0g、蒸馏水 1.0L、pH 7.0ο
[0018]第二步所述的种子培养基为:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、蒸馏水 1.0L、pH 7.0ο
[0019]第三步所述的发酵培养基为:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、蒸馏水 1.0L、pH 7.0ο
[0020]所述的各个菌种的菌粉的菌数为:多5Χ 109cfu/mL。
[0021 ] 所述的菌粉比例是:枯草芽孢杆菌ACCC10632，25%、地衣芽孢杆菌ACCC10613，25%、荚膜放线杆菌ACCCl 1051，25%、侧孢芽孢杆菌ACCCl 1079，25%。
[0022]实施例2，一种种植用复合微生物抗菌制剂的制备方法，包括步骤如下:
第一步，菌种活化
枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis) ACCC10632、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis) ACCC10613、荚膜放线杆菌(Actinobacillus capsulatus)ACCC11051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079菌株从保存好的油管中转接于固体培养基平板中，于28°C，培养48h后。取培养好的固体培养基平板，用接种针挑单菌落接种于固体培养基试管中，于25-28 °C，培养24-48h;
第二步，种子发酵
用接种针挑适量枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis) ACCCl0613、荚膜放线杆菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079菌笞接种于装有150ml液体培养基的500ml三角瓶中放于25-28°C，130-180r/min恒温摇床培养，培养时间24-28h;
第三步，液体发酵
使用密封罐发酵，装料系数0.7，将所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.SubtiIis)ACCC10632、地衣芽抱杆菌(BaciIIus licheniformis)ACCC10613、荚膜放线杆菌(Actinobacillus capsulatus)ACCCl 1051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl 1079种子培养得到的种子培养液按照接种量为0.5%?3%加入到液体发酵培养基中，发酵温度为25°C-30°C，通气量为0.5-0.8m3/h，转速为130?180r/min，pH值为6.5-7.5,培养时间24?48h，得到发酵菌液； 第四步，制作菌粉
将第三步得到的枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis) ACCCl0613、荚膜放线杆菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079的发酵菌液，离心后去掉上清液得湿菌体，湿菌体与等量的滑石粉混合均匀，50 °C真空烘干到干粉状，得到干粉菌剂；
第五步，混合菌粉
将上述得到的枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis) ACCC10613、荚膜放线杆菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079的菌粉，按照一定比例混合均匀，得到复合微生物抗菌制剂。
[0023]第一步所述的固体培养基为:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、琼脂15.0g、蒸馏水 1.0L、pH 7.0ο
[0024]第二步所述的种子培养基为:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、蒸馏水 1.0L、pH 7.0ο
[0025]第三步所述的发酵培养基为:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、蒸馏水 1.0L、pH 7.0ο
[0026]所述的各个菌种的菌粉的菌数为:多5Χ 109cfu/mL。
[0027]所述的菌粉比例是:枯草芽孢杆菌ACCC10632，20%、地衣芽孢杆菌ACCC10613，30%、荚膜放线杆菌ACCCl 1051，30%、侧孢芽孢杆菌ACCCl 1079，20%。
[0028]实施例3，一种种植用复合微生物抗菌制剂的制备方法，包括步骤如下:
第一步，菌种活化
枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis) ACCC10632、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis) ACCC10613、荚膜放线杆菌(Actinobacillus capsulatus)ACCC11051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079菌株从保存好的油管中转接于固体培养基平板中，于28°C，培养48h后。取培养好的固体培养基平板，用接种针挑单菌落接种于固体培养基试管中，于25-28 °C，培养24-48h;
第二步，种子发酵
用接种针挑适量枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis) ACCCl0613、荚膜放线杆菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079菌笞接种于装有150mL液体培养基的500mL三角瓶中放于25-28°C，130-180r/min恒温摇床培养，培养时间24-28h;
第三步，液体发酵
使用密封罐发酵，装料系数0.7，将所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.SubtiIis)ACCC10632、地衣芽抱杆菌(BaciIIus licheniformis)ACCC10613、荚膜放线杆菌(Actinobacillus capsulatus)ACCCl 1051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl 1079种子培养得到的种子培养液按照接种量为0.5%?3%加入到液体发酵培养基中，发酵温度为25°C-30°C，通气量为0.5-0.8m3/h，转速为130?180r/min，pH值为6.5-7.5,培养时间24?48h，得到发酵菌液；
第四步，制作菌粉
将第三步得到的枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis) ACCCl0613、荚膜放线杆菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079的发酵菌液，离心后去掉上清液得湿菌体，湿菌体与等量的滑石粉混合均匀，50 °C真空烘干到干粉状，得到干粉菌剂；
第五步，混合菌粉
将上述得到的枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis subsp.Subtilis)ACCC10632、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis) ACCC10613、荚膜放线杆菌(ActinobaciIIuscapsulatus)ACCC11051、侧抱芽抱杆菌(BrevibaciIIus laterosporus)ACCCl1079的菌粉，按照一定比例混合均匀，得到复合微生物抗菌制剂。
[0029]第一步所述的固体培养基为:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、琼脂15.0g、蒸馏水 1.0L、pH 7.0ο
[0030]第二步所述的种子培养基为:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、蒸馏水 1.0L、pH 7.0ο
[0031]第三步所述的发酵培养基为:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl5.0g、蒸馏水 1.0L、pH 7.0ο
[0032]所述的各个菌种的菌粉的菌数为:多5Χ109cfu/mL。
[0033]所述的菌粉比例是:枯草芽孢杆菌ACCC10632，20%、地衣芽孢杆菌ACCC10613，20%、荚膜放线杆菌ACCCl 1051，20%、侧孢芽孢杆菌ACCCl 1079，40%。
【主权项】
1.一种种植用复合微生物抗菌制剂，其特征在于:包括以下重量份数的菌粉:枯草芽孢杆菌 ACCC10632，20%-40%、地衣芽孢杆菌 ACCC10613，20%-40%、荚膜放线杆菌 ACCCl 1051，20%-40%、侧孢芽孢杆菌 ACCCl 1079，20%_40%。2.一种种植用复合微生物抗菌制剂的制备方法，其特征在于:包括步骤如下: 第一步，菌种活化 枯草芽孢杆菌ACCC10632、地衣芽孢杆菌ACCC10613、荚膜放线杆菌ACCCl 1051、侧孢芽孢杆菌ACCC11079菌株从保存好的油管中转接于固体培养基平板中，于28°C，培养48h后，3.取培养好的固体培养基平板，用接种针挑单菌落接种于固体培养基试管中，于25-28Γ，培养24-48h; 第二步，种子发酵 用接种针挑适量枯草芽孢杆菌ACCC10632、地衣芽孢杆菌ACCC10613、荚膜放线杆菌ACCC11051、侧孢芽孢杆菌ACCC11079菌苔接种于装有150ml液体培养基的500ml三角瓶中放于25-28°(:，130-18(^/111丨11恒温摇床培养，培养时间24-2811; 第三步，液体发酵 使用密封罐发酵，装料系数0.7，将所述枯草芽孢杆菌ACCC10632、地衣芽孢杆菌ACCC10613、荚膜放线杆菌ACCC11051、侧孢芽孢杆菌ACCC11079种子培养得到的种子培养液按照接种量为0.5%?3%加入到液体发酵培养基中，发酵温度为25 °030°C，通气量为0.5?0.8m3/h，转速为130~180r/min，PH值为6.5-7.5,培养时间24?48h，得到发酵菌液； 第四步，制作菌粉 将第三步得到的枯草芽孢杆菌ACCC10632、地衣芽孢杆菌ACCC10613、荚膜放线杆菌ACCCl 1051、侧孢芽孢杆菌ACCCl 1079的发酵菌液，离心后去掉上清液得湿菌体，湿菌体与等量的滑石粉混合均匀，50°C真空烘干到干粉状，得到干粉菌剂； 第五步，混合菌粉 将上述得到的枯草芽孢杆菌ACCC10632、地衣芽孢杆菌ACCC10613、荚膜放线杆菌ACCCl 1051、侧孢芽孢杆菌ACCCl 1079的菌粉，按照一定比例混合均匀，得到复合微生物抗菌制剂。3.根据权利要求2所述的一种种植用复合微生物抗菌制剂的制备方法，其特征在于:第一步所述的固体培养基为:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl 5.0g、琼脂15.0g、蒸馏水 1.0L、pH 7.0ο4.根据权利要求2所述的一种种植用复合微生物抗菌制剂的制备方法，其特征在于:第二步所述的种子培养基为:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl 5.0g、蒸馏水1.0L、pH7.0。5.根据权利要求2所述的一种种植用复合微生物抗菌制剂的制备方法，其特征在于:第三步所述的发酵培养基为:蛋白胨10.0g、牛肉浸取物3.0g、NaCl 5.0g、蒸馏水1.0L、pH7.0。6.根据权利要求2所述的一种种植用复合微生物抗菌制剂的制备方法，其特征在于:所述的各个菌种的菌粉的菌数为??彡5 X 109cfu/mL。7.根据权利要求2所述的一种种植用复合微生物抗菌制剂的制备方法，其特征在于:所述的菌粉比例是:枯草芽孢杆菌ACCC10632，20%-40%、地衣芽孢杆菌ACCC10613，20%_40%、荚 膜放线杆菌 ACCCl 1051，20%-40%、侧孢芽孢杆菌 ACCCl 1079，20%_40%。
【文档编号】C12R1/10GK106047766SQ201610602137
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年7月28日 公开号201610602137.3, CN 106047766 A, CN 106047766A, CN 201610602137, CN-A-106047766, CN106047766 A, CN106047766A, CN201610602137, CN201610602137.3
【发明人】唐清池, 程雅珍, 郭银保, 王学宾, 武彪, 郑晓东
【申请人】唐清池