专利名称：灰黄青霉、由其产生的抗菌活性化合物及应用的制作方法
技术领域：
本发明属于微生物和制药领域，具体地说，涉及一株灰黄青霉、由其产生的抗菌活性化合物及应用。
背景技术：
天然抗菌药物和合成抗菌药物等的出现使有效治疗各种细菌感染成为可能，为保障人类健康做出了卓越贡献。但随着抗生素的广泛应用，也出现了细菌耐药性逐年增加，致使一些抗生素疗效降低、甚至无效的情况。过去已获控制的一些传染性疾病(如结核病等)出现了再次流行的趋势；一些非致病菌成为条件致病菌，如变形杆菌、绿脓杆菌等；尤其是超级细菌的出现，更是让医学界担心“后抗菌药物时代”的到来。因此，迫切要求不断地研发新型抗菌药物。在蛋白质的生物合成过程中，氨酰-tRNA合成酶起了至关重要的作用，它催化氨基酸与相应的tRNA合成氨酰-tRNA，是遗传信息通过蛋白质形式得以表达所必需的一个组分，是各类生物体生存所必不可少的一类酶。对于病原菌而言，一旦它的某种氨酰-tRNA合成酶受到抑制失去功能，就会导致其蛋白质的生物合成中断以及许多重要的生理过程受影响，病原菌的生长繁殖也就随之终止。因此，氨酰-tRNA合成酶适于作为新型抗菌药物的作用靶点。苯丙氨酰-t RNA合成酶(PheRS)作为药物筛选的靶点具有其独特的优点。PheRS与其它氨酰-tRNA合成酶在结构以及催化特性方面的差异将有利于避免交叉耐药的问题。另外，PheRS在不同细菌中的序列比较保守，而且与真核生物的同种功能的蛋白之间不具有相关性，有利于筛选到对多种病原菌都有效的广谱抗生素，而且所筛选到的化合物对人体的毒性也会很小。微生物及其代谢产物的多样性，为新抗菌药物的筛选提供了丰富来源。目前，已从青霉菌中发现了大量具有新颖化学结构和特异生理功能的化合物，其中许多具有良好的抗菌、抗病毒、抗肿瘤等活性，青霉菌通过人工条件发酵培养，可以提供稳定的天然产物来源。
发明内容
本发明的目的是提供一株灰黄青霉CPCC 400528。本发明的另一目的是提供由灰黄青霉CPCC 400528产生的具有广谱抗菌作用的化合物及其应用。为了实现本发明目的，本发明的灰黄青霉(Penicillium griseofulvum) CPCC400528，其分离自新疆喀纳斯湖畔的土壤样品中，现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期2012年2月13日，保藏号CGMCC N0.5752。灰黄青霉CPCC 400528的菌落在察氏培养基(CA)上25°C培养7天，产生大量的放射状皱纹，中心有脐状突起；质地通常绒状，带轻微絮状；菌丝体，边缘通常呈现白色，而中部面上往往呈现淡灰黄色；分生孢子结构大量产生，分生孢子梗发生在孢梗束和束丝之中，帚状分枝比较复杂，多是四轮生，少三轮生，叉开，分枝点通常2-3或更多，分生孢子呈现宽椭圆形，分生孢子链呈现较紧密而叉开的近圆柱状。本发明还提供由灰黄青霉CPCC 400528发酵产生的抗菌活性化合物一异棒曲霉素，其分子式为C7H6O4,结构如式(I’ )所示:
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权利要求
1.灰黄青霉(Penicilliumgriseofulvum)CPCC 400528，其保藏号为 CGMCC N0.5752。
2.由权利要求1所述的灰黄青霉CPCC400528发酵产生的抗菌活性化合物，其分子式为C7H6O4，结构如式⑴所示:
3.权利要求2所述抗菌活性化合物的制备方法，其特征在于，包括步骤: 1)将活化后的灰黄青霉CPCC400528接种到发酵培养基中进行发酵培养； 2)用乙酸乙酯-甲醇体积比为17: 3作为萃取剂萃取步骤I)所得的发酵液，过滤，滤液经真空浓缩，得到褐色浸膏； 3)以水溶解步骤2)中得到的褐色浸膏，然后用乙酸乙酯浸提，并用RP-18反相硅胶柱分离浸提液，以甲醇的水溶液进行洗脱，收集洗脱液，浓缩后用正相硅胶柱分离，以氯仿和甲醇的混合液进行梯度洗脱，当氯仿:甲醇体积比为20: I时，即得目标化合物。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤I)中发酵培养的温度为25 28°C，培养时间为3 7d ;步骤2)中萃取时间为12 24h，真空浓缩的温度为40 45°C。
5.权利要求2所述的抗菌活性化合物在制备广谱抗菌药物中的应用。
6.含有权利要求2所述抗菌活性化合物的广谱抗菌药物。
7.根据权利要求6所述的广谱抗菌药物，其为抗金黄色葡菌球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌、结核分枝杆菌的药物。
8.根据权利要求6所述的广谱抗菌药物，其为抗耐药的金黄色葡菌球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌的药物。
9.根据权利要求6所述的广谱抗菌药物，其为抗大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、粘质沙雷氏菌、摩根摩根氏菌、雷极普鲁菲登杆菌、普通变形杆菌、奇异变形杆菌、伤寒沙门菌、弗劳地枸橼酸菌的药物。
10.根据权利要求6所述的广谱抗菌药物，其为抗耐药的大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌的药物。
全文摘要
本发明提供了一种灰黄青霉(Penicillium griseofulvum)CPCC400528，其保藏号为CGMCC NO.5752，由其发酵制备产生的抗菌活性化合物，其分子式为C7H6O4，结构如式(I)所示式(I)，该化合物对多种革兰氏阳性病原菌，革兰氏阴性病原菌具有较好的生长抑制作用，随着浓度增加，其抑制作用逐渐增强；同时对多种耐药菌株也具有良好的抑制作用。本发明的菌株易于发酵培养，产量高，活性化合物的制备工艺简单易控，制备的化合物抗菌活性明显，为抗菌新药的研发奠定了基础，具有十分广阔的市场前景。
文档编号C07D493/04GK103255061SQ20121003428
公开日2013年8月21日 申请日期2012年2月15日 优先权日2012年2月15日
发明者余利岩, 王莉宁, 张志明, 张涛, 游雪甫, 胡辛欣, 刘红宇, 魏玉珍 申请人:中国医学科学院医药生物技术研究所