本发明属于药物技术领域，涉及次甲基青蒿素的一种新应用，尤其涉及次甲基青蒿素在制备治疗肝病药物中的应用。
背景技术：
肝脏疾病作为人类最常见的疾病之一，对人类健康造成巨大威胁，其防治是现代医学的重大课题。随着人们生活水平的提高，饮食结构发生了很大的变化，酒精和脂肪的摄入量增加，酒精性肝损伤的发病率呈上升趋势。酒精主要是在肝脏代谢，过度饮酒会引起肝细胞损伤，严重时，可导致肝细胞坏死。酒精性肝损伤也是常见的致肝硬化的原因之一。目前我国有超过700万的肝硬化患者，而且患病人数不断增多。2015至2030年间，中国将有约1000万人因与慢性肝炎相关的肝硬化和肝癌死亡。面对如此严峻的形势，及时对疾病进行干预，遏制肝炎向肝硬变发展的病理过程，研制新的药物，使之在预防和治疗的环节发挥关键作用，具有重要意义。因此，开发安全有效的治疗肝病的药物有着积极的意义。
次甲基青蒿素是从菊科艾属植物黄花蒿叶中提取分离得到的一种具有过氧桥的倍半萜内酯类化合物，其分子式为c15h20o5，结构式为
次甲基青蒿素是青蒿素结构中临近羰基的甲基(9位)脱氢后转化的成分，在黄花蒿中与青蒿素同时存在。其中，山东省中医药研究所在青蒿素生产工艺研究中，除了获得青蒿素和大量的青蒿酸等成分外，还得到了次甲基青蒿素成分，开辟了青蒿素和次甲基青蒿素制备工艺新途径,申报了国家发明专利《青蒿素及次甲基青蒿素的提取方法》，并于1995年8月获得国家发明专利授权(专利号：zl89103384.x)，为国内首次申请次甲基青蒿素的提取制备方法。目前，青蒿素及其衍生物作为高效低毒的抗疟疾药己经得到了全世界的公认。现有文献及技术资料中，并未有实验数据证明次甲基青蒿素具有预防和治疗肝病的药理活性。
技术实现要素：
本发明提供了次甲基青蒿素的一种新应用，具体地，为次甲基青蒿素在制备治疗肝病药物中的应用，次甲基青蒿素的化学结构式为
进一步地，次甲基青蒿素与药用载体组合为药物制剂。
进一步地，药物制剂包括滴丸剂、片剂、散剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、微囊剂、糖浆剂或口服溶液剂。
本发明所提供的应用的有益效果体现在：
本发明根据一系列实验发现次甲基青蒿素可降低肝病患者的血清alt、ast和肝指数，提高肝脏功能，有效缓解酒精肝和肝炎造成的肝损伤；还可以明显降低患者的ha、pcⅲ、ⅳ-c含量，具有明显的抗肝硬化效果。因此，次甲基青蒿素具有预防和治疗酒精性肝损伤、急性肝损伤和肝硬化的作用，故提供了次甲基青蒿素在制备预防和治疗肝病药物中的应用。本发明拓展了次甲基青蒿素的临床应用范围，为酒精性肝损伤、急性肝损伤和肝硬化等肝病治疗发现了新的药物来源，也有利于次甲基青蒿素的充分利用。
应当理解的是，以上的一般描述和后文的细节描述仅是示例性和解释性的，并不能限制本发明。
具体实施方式
下面结合实验数据及实施例，对本发明所提供的次甲基青蒿素在制备治疗肝病药物中的应用进行清除、完整地描述。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下实施例中的次甲基青蒿素均使用专利号为zl89103384.x的专利中所述的制备方法制备得到。
实施例一
次甲基青蒿素滴丸剂的制备
取次甲基青蒿素25g与聚乙二醇400055g混合,于80℃水浴中加热熔融，80℃恒温搅拌60min使得分散均匀，将药液迅速转移至75℃恒温储料管中。滴头口径为3.8/5.0mm，滴速控制在每分钟60滴，二甲基硅油为冷却剂，冷却液温度控制在10℃，调节滴丸丸重为80mg，滴制成丸，将滴丸表面上的冷却液除去，并包薄膜衣，制作1000粒滴丸，分装即得。口服适用于酒精性和肝炎引起的肝硬化患者。每次1-3粒，一日2-3次，30天为一疗程，可连续使用2-3疗程。
实施例二
次甲基青蒿素片剂的制备
取次甲基青蒿素50g、微晶纤维素450g、starch1500100g、硬脂酸镁10g，过60目筛混匀后，用75％乙醇为粘合剂制软材，24目筛制粒于60℃干燥，24目筛整粒，加入处方量硬脂酸镁混匀，压1000片，分装即得，每片含次甲基青蒿素50mg。口服，适用于酒精性和肝炎引起的肝硬化患者。每次1-2片，一日2-3次，30天为一疗程，可连续使用2-3疗程。
实施例三
次甲基青蒿素糖浆剂的制备
取次甲基青蒿素10g溶于80ml乙醇、40ml丙二醇溶液中，再加入桔子香精0.5ml、苯甲酸钠3.0g、纯化水220ml、阿斯巴甜1g，加热搅拌10min(温度45℃左右)，放冷，加单糖浆适量调整至1000ml，混匀，分装，每瓶100ml。口服，适用于酒精性和肝炎所引起的肝硬化患者。每次5-10ml，一日1-2次，30天为一疗程，可连续使用2-3疗程。
其他药物制剂，如散剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、微囊剂或口服溶液剂等，均可按常规方法进行。
以下通过药效实验进一步说明本发明实施例所提供的次甲基青蒿素在制备治疗肝病药物中的应用，但不用来限制本发明。
实验一次甲基青蒿素对酒精所致大鼠肝损伤的实验
1实验方法
1.1建模、分组及给药
取猪油50g、胆固醇10g、胆酸钠3.3g、丙硫氧嘧啶0.2g、丙二醇15ml、吐温-80适量和蒸馏水20ml，配制成均匀乳剂；取上述乳剂与白酒44度(v/v)按体积比3：2混匀，形成白色乳液即为酒脂乳剂。
将40只大鼠(spf级，雄性，体重200-250g，山东大学实验动物中心提供，许可证号scxk(鲁)20090001)随机分成4组，每组10只，分为正常对照组、模型对照组、次甲基青蒿素低剂量组和次甲基青蒿素高剂量组。正常对照组灌胃给予0.7％羚甲基纤维素钠溶液10ml/kg，其余3组给予酒脂乳剂10ml/kg，连续灌胃8周。次甲基青蒿素低剂量组和次甲基青蒿素高剂量组造模的同时给予次甲基青蒿素(山东省中医药研究院山东省中药新型制剂中心提供)干预，给药剂量为次甲基青蒿素高剂量组、次甲基青蒿素低剂量组分别给予100mg/kg、50mg/kg。
1.2标本采集及指标测定
末次灌胃后禁食15h。大鼠称重，10％水合氯醛溶液以3ml/kg腹腔注射麻醉,颈动脉取血，室温充分凝固后，3000r/min离心15min，得血清，使用试剂盒检测血清的甘油三酯(triglyceride,tg)、谷草转氨酶(aspartatetransaminase，ast)和谷丙转氨酶(alanineaminotransferase，alt)指标。取血后摘取肝脏，在冷生理盐水中漂洗，滤纸吸干，称重，计算肝指数，肝指数(％)＝肝重量(g)/体重量(g)x100％。取肝左叶，在冷生理盐水中漂洗干净，与生理盐水制成100g/l的肝组织匀浆，使用试剂盒检测肝组织匀浆的超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，sod)和丙二醛(malondialdehyde，mda)指标。取肝右叶用100g/l甲醛溶液固定，石蜡包埋切片，苏木精-伊红(he)染色，光镜下观察病理改变。
1.3数据处理
所有实验数据均采用spss11.5软件进行处理,数据用x±s表示，各组均数间比较采用单因素方差分析。
2实验结果
2.1一般情况观察
正常对照组大鼠皮毛光泽，行动灵活。模型对照组大鼠皮毛发黄、黯淡、不整，体重较正常组增加缓慢，酒脂乳剂灌胃后有醉酒现象，对外界刺激反应迟钝。次甲基青蒿素高剂量组和次甲基青蒿素低剂量组大鼠一般情况较好。
2.2次甲基青蒿素对大鼠酒精性肝损伤模型肝指数的影响
参见下表1.1，与正常对照组比较，模型对照组肝指数明显升高(p<0.01)，初步判断是由于肝脏病变，病变可能为增生、充血、水肿等，导致肝指数明显升高。与模型对照组比较，次甲基青蒿素低剂量组和次甲基青蒿素高剂量组的肝指数明显降低(p<0.05)，其中以次甲基青蒿素高剂量组尤为明显，初步判断次甲基青蒿素对肝脏病变具有缓解治疗功能。
表1.1次甲基青蒿素对大鼠酒精性肝损伤模型肝指数的影响
注：与正常对照组比较，*p<0.01；与模型对照组比较，**p<0.05。
2.3次甲基青蒿素对大鼠酒精性肝损伤模型血清tg、alt和ast的影响
alt和ast都是反映肝实际损伤最常用的指标，1％的肝细胞发生坏死时，血清alt水平即可升高1倍。ast数值超过alt往往提示肝实质损害严重，是慢性化程度加重的标志。参见表1.2，为与正常对照组比较,模型对照组tg、alt、ast明显升高(p<0.01)，说明肝损伤严重。与模型对照组比较，次甲基青蒿素低剂量组和次甲基青蒿素高剂量组tg、alt、ast有显著性降低(p<0.01)，说明次甲基青蒿素对肝损伤有所缓解，可治疗肝损伤。
表1.2次甲基青蒿素对大鼠酒精性肝损伤模型血清tg、alt和ast的影响
注：与正常对照组比较，*p<0.01；与模型对照组比较，**p<0.01。
2.4次甲基青蒿素对大鼠酒精性肝损伤模型肝组织匀浆sod、mda的影响
sod和mda都是反映肝组织抗氧化指标的参数。参见表1.3，与正常对照组比较，模型对照组sod明显降低(p<0.01)，mda明显升高(p<0.01)，说明肝组织抗氧化能力降低。与模型对照组比较，次甲基青蒿素低剂量组和次甲基青蒿素高剂量组的sod明显升高(p<0.01)，mda明显降低(p<0.01)，说明次甲基青蒿素对肝组织抗氧化能力有缓解和治疗作用。
表1.3次甲基青蒿素对大鼠酒精性肝损伤模型肝组织匀浆sod、mda的影响
注：与正常对照组比较，*p<0.01；与模型对照组比较，**p<0.01。
4.5次甲基青蒿素对大鼠酒精性肝损伤模型肝脏外观及组织学变化的影响
正常肝脏呈红褐色，边缘锐利，质地柔软，模型对照组肝脏明显增大，边缘钝而厚，表面色泽灰黄，切面呈淡黄色。次甲基青蒿素低、高剂量组肝脏颜色黯红，明显比模型对照组深，其中以次甲基青蒿素高剂量组肝脏形态更为接近正常对照组。
病理切片观察，正常大鼠肝小叶结构清晰,肝细胞索以中央静脉为中心向周围呈放射状排列,肝窦正常,胞核结构清晰。大鼠肝损伤模型组，肝小叶界限不清,肝细胞索紊乱,肝窦变窄,肝细胞出现散在和片状气球样变,可见点状坏死和炎细胞浸润，胞核粉染,胞浆呈颗粒状，病变以中央静脉周围为明显。次甲基青蒿素低剂量组和次甲基青蒿素高剂量组对肝损伤有不同程度改善，炎细胞数目减少，胞浆内脂滴减少或消失，胞浆较丰富，肝索排列较整齐，尤以次甲基青蒿素高剂量组改善最为明显。
3实验结论
本实验以大鼠酒精性肝损伤模型为研究对象，对次甲基青蒿素抗酒精肝的作用进行研究。综上，次甲基青蒿素对酒精性肝损伤具有较好的预防和治疗作用。
实验二次甲基青蒿素对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的实验
1实验方法
1.1建模、分组及给药
将48只小鼠(spf级，雌雄各半，体重18-20g，山东大学实验动物中心提供，许可证号scxk(鲁)2013001)随机分成6组，每组8只，分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、次甲基青蒿素低剂量组、次甲基青蒿素中剂量组和次甲基青蒿素高剂量组。阳性对照组灌胃给予200mg/kg的联苯双酯，次甲基青蒿素低剂量组、次甲基青蒿素中剂量组和次甲基青蒿素高剂量组灌胃分别给予10mg/kg、20mg/kg和30mg/kg的次甲基青蒿素(山东省中医药研究院山东省中药新型制剂中心提供)，正常对照组和模型对照组灌胃均给予等体积的10ml/kg的生理盐水。以上六组给药1次/d，连续10d。末次给药后，除正常对照组外，其他五组的每只小鼠的鼠腹腔注射6ml/kg花生油配制的5％ccl4溶液。摘眼球取血后处死小鼠，迅速取出肝脏备检。
1.2标本采集及指标测定
小鼠称重，10％水合氯醛溶液以3ml/kg腹腔注射麻醉,颈动脉取血，室温充分凝固后，4℃下3500r/min离心10min，得血清，使用试剂盒检测血清的ast和alt指标。取血后摘取肝脏，在4℃的生理盐水中漂洗，滤纸吸干，称重，计算肝指数。取小鼠右叶相同位置肝组织，用4℃生理盐水冲洗后，滤纸拭干，以10％中性福尔马林溶液固定，石蜡包埋，he染色，光镜下观察肝组织切片的病理变化。
1.3数据处理
所有实验数据均采用spss11.5软件进行处理,数据用x±s表示，各组均数间比较采用单因素方差分析。
2实验结果
2.1次甲基青蒿素对小鼠ccl4急性肝损伤模型肝指数的影响
参见下表2.1，实验结果表明，模型对照组的肝指数较正常对照组显著增加(p＜0.05)，表明ccl4引起小鼠肝脏明显肿大。与模型对照组比较，阳性对照组、次甲基青蒿素低剂量组、次甲基青蒿素中剂量组和次甲基青蒿素高剂量组的小鼠肝指数均显著降低(p＜0.05)。次甲基青蒿素各剂量组与阳性对照组比较，肝脏指数均无显著性差异。
表2.1次甲基青蒿素对小鼠ccl4急性肝损伤模型肝指数的影响
注：与模型对照组比较，*p＜0.05。
2.2次甲基青蒿素对小鼠ccl4急性肝损伤模型肝功能的影响
参见下表2.2，实验结果表明，模型对照组较正常对照组血清alt和ast显著升高(p＜0.05)，说明ccl4致小鼠急性肝损伤造模成功。与模型组比较，阳性对照组、次甲基青蒿素中剂量组和次甲基青蒿素高剂量组均能显著降低ccl4所引起的alt和ast的升高(p＜0.05或p＜0.01)，次甲基青蒿素低剂量组对ccl4所引起的alt和ast的升高无显著影响。
表2.2次甲基青蒿素对小鼠ccl4急性肝损伤模型血清alt和ast的影响
注：与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01
2.3次甲基青蒿素对小鼠ccl4急性肝损伤模型肝脏外观及组织学变化的影响
显微镜下观察正常对照组小鼠肝小叶结构完整，肝索呈放射状排列，清晰可辨，肝细胞结构和形态正常，排列整齐，未见肝细胞坏死、变性等病理改变。模型对照组小鼠肝小叶结构破坏，索状排列紊乱，肝细胞呈不同程度肿胀坏死、变性，胞浆疏松透亮，部分细胞核固缩溶解，大量炎细胞浸润。阳性对照组肝细胞坏死减轻，细胞排列较为整齐。次甲基青蒿素高、中剂量组肝小叶破坏程度和肝细胞水肿程度明显减轻，肝细胞排列较整齐，损伤程度较轻；次甲基青蒿素低剂量组与模型组比较，肝细胞的损伤程度有轻度改善。
3实验结论
本实验首次以小鼠ccl4急性肝损伤模型为研究对象，对次甲基青蒿素抗急性肝损伤的作用进行研究。实验结果表明，模型对照组肝组织破坏严重，血清alt、ast显著升高；次甲基青蒿素高、中剂量组小鼠肝细胞受损程度明显减少，血清alt、ast显著降低；次甲基青蒿素低剂量组小鼠肝细胞损伤程度有轻度改善，血清alt、ast也有一定程度降低。表明次甲基青蒿素具有保护肝细胞、对抗肝损伤的作用，且呈浓度依赖性。
综上，次甲基青蒿素对小鼠ccl4急性肝损伤模型具有降低血清alt、ast，保护肝损伤的作用。为次甲基青蒿素急性肝损伤的研究提供了药效学依据，并为对其进一步研究和开发奠定基础。
实验三次甲基青蒿素对四氯化碳所致大鼠肝硬化的实验
1实验方法
1.1建模、分组及给药
将60只大鼠(spf级，雄性，体重200-250g，山东大学实验动物中心提供，许可证号scxk(鲁)20090001)随机分成6组，每组10只，分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、次甲基青蒿素低剂量组、次甲基青蒿素中剂量组和次甲基青蒿素高剂量组。阳性对照组灌胃给予0.1mg/kg的秋水仙碱，次甲基青蒿素低剂量组、次甲基青蒿素中剂量组和次甲基青蒿素高剂量组灌胃分别给予50mg/kg、75mg/kg和100mg/kg的次甲基青蒿素(山东省中医药研究院山东省中药新型制剂中心提供)，正常对照组和模型对照组灌胃均给予等体积的10ml/kg的生理盐水。正常对照组饲喂实验鼠颗粒饲料，自由饮水，其余各组饲喂自制饲料，饮10％乙醇溶液。造模当日开始给药。1次/d，连续6周。
末次灌胃后禁食18h(不禁水)，次日摘眼球取血，2500r/min离心10min，分离血清测透明质酸、ⅳ型胶原和ⅲ型前胶原。取肝脏称重，计算肝指数。
2实验结果
2.1次甲基青蒿素对大鼠ccl4肝硬化模型肝硬化三项的影响
参见下表3.1，实验结果表明，模型对照组肝硬化大鼠透明质酸、ⅳ型胶原和ⅲ型前胶原含量显著增高，与正常对照组比较具有显著性差异，说明肝硬化大鼠形成过程中血中透明质酸(ha)、ⅳ型胶原(ⅳ-c)和ⅲ型前胶原(pcⅲ)有增高趋势。次甲基青蒿素各剂量组均可明显降低透明质酸的含量，说明次甲基青蒿素具有抗肝硬化形成的作用。
表3.1次甲基青蒿素对大鼠ccl4肝硬化模型肝硬化三项的影响
注：与正常对照组比较，**p<0.01；与模型对照组比较，δδp<0.01.
2.1次甲基青蒿素对大鼠ccl4肝硬化模型肝指数和存活时间的影响
参见下表3.2，实验结果表明，在形成肝硬化模型的过程中，肝细胞损伤使肝系数增加，模型组大鼠死亡较多，存活天数较短，与正常对照组比较具有显著性差异，次次甲基青蒿素具有减轻肝细胞损伤的作用，同时可不同程度降低大鼠死亡率，延长存活天数，与模型对照组比较具有显著性差异。
表3.2次甲基青蒿素对大鼠ccl4肝硬化模型肝指数和存活时间的影响
注：与正常对照组比较，**p<0.01；与模型对照组比较，δδp<0.01。
3实验结论
本实验以大鼠ccl4肝硬化模型为研究对象，对次甲基青蒿素抗肝硬化的作用进行研究。实验结果表明，模型对照组ha、pcⅲ、ⅳ-c明显增高，与正常对照组比较有显著性差异，采用次甲基青蒿素治疗后可明显降低ha、pcⅲ、ⅳ-c含量，具有抗肝硬化的作用。
本领域技术人员在考虑说明书及实践这里发明的公开后，将容易想到本发明的其它实施方案。本发明旨在涵盖本发明的任何变型、用途或者适应性变化，这些变型、用途或者适应性变化遵循本发明的一般性原理并包括本发明未公开的本技术领域中的公知常识或惯用技术手段。说明书和实施例仅被视为示例性的，本发明的真正范围和精神由权利要求指出。应当理解的是，本发明的范围仅由所附的权利要求来限制。