专利名称：一种黄花蒿等中药材及含青蒿素成分样品中青蒿素含量的测定方法
技术领域：
本发明涉及一种青蒿素含量的简易测定方法，尤其是涉及一种黄花蒿等中药材及含青蒿素成分样品中青蒿素含量的测定方法。
背景技术：
青蒿素是上个世纪70年代由我国科学家从黄花蒿中分离出的一种活性单体成分，在治疗脑型疟、恶性疟、间日疟等疾病方面具有高效、低毒、速效、使用安全等优点，是目前防治疟疾的首选药物及WHO推荐的抗疟药物。由于青蒿素类药物是抗疟的特效药物，与氯喹类抗疟药物相比具有成本低廉的优势，具有很可观的市场前景。因此，针对青蒿素的含量测定方法研究也得到了广泛的关注，并开发出了一系列的青蒿素含量测定方法。其中，药品中青蒿素的含量的常用测定方法是紫外可见光谱法和高效液相色谱法，这也是《中国药典》收录的含量测定方法。·
紫外可见光谱法检测青蒿素的原理和方法大致相同。以青蒿素的含量测定为例通过使用NaOH处理青蒿素乙醇溶液30分钟，使青蒿素反应生成在292nm波长处有明显吸收的衍生物，对衍生物在292nm波长处的吸光度进行测量并通过标准曲线法计算出相应的青蒿素含量。该方法操作简单，使用的仪器-紫外可见光谱仪也较为普遍。但是，由于在含量测定前必须先进行衍生化，并且在实际测量中，特别是测定复方制剂中青蒿素类药品或者植物提取液中的青蒿素的含量时，往往会因为其它杂质在292nm波长处有吸收而导致测定结果不准确。高效液相色谱法(HPLC)是目前广泛使用的青蒿素类药物含量测定方法之一，《中国药典》中通常将样品溶解后直接进样，以外标法测定青蒿素类药物的含量。需要注意的是，在测定药物中或植物提取物中的青蒿素含量时，虽都可以采用HPLC法，但使用的检测器不同，实验方法也有差别。在使用紫外(UV)检测器时，需将青蒿素类药品进行柱前衍生化，然后再进行测定。青蒿素与碱反应后生成292nm处有吸收的物质,之后将其在PH5. 6-6. O定量转化为最大吸收波长在260nm处有吸收的物质，再进行HPLC测定。或者使用其它检测器，如蒸发光散射检测器(ELSD)，质谱(MS)进行检测。HPLC法准确可靠、重现性好、专属性强，可广泛用于药物原料、制剂及生物样品中青蒿素含量的分析。由于使用HPLC-UV法进行含量测定时需对样品进行柱前衍生化处理，若使用其它检测器则较为昂贵。并且HPLC法进行含量测定时还需要用到标准对照品。从而使得HPLC法检测青蒿素类药物成本较高。由于紫外可见光谱法和HPLC法都需要用到专业仪器设备，并且在样品测试前需要进行复杂的前处理过程，进行样品含量测定时需花费较多时间，特别是HPLC法，测定单个样品耗时更多。因此，这两种常用的方法都不适宜大批量样品的含量测定，特别是对样品含量的测试精度要求不高的时候。目前还没有一种测量快速、同时低成本的青蒿素的检测方法。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种方法独特、测量快速、同时低成本的一种黄花蒿等中药材和青蒿素原料药等含青蒿素成分样品中青蒿素含量的测定方法。本发明通过如下方式实现
一种黄花蒿等中药材及含青蒿素成分样品中青蒿素含量的测定方法，其特征在于该方法为先将所测样品溶于有机溶剂或以有机溶剂提取出其中的青蒿素制成待测样品溶液，然后在一个50 mL锥形瓶中加入O. 1-4 g的NaHCO3、1_5倍NaHCO3量的冰醋酸、5_20 mL乙醇、O — IOmL蒸馏水、1-100倍待测样品中青蒿素成分含量的KI、0. 5_5mL浓盐酸，之后加入确定体积的待测样品溶液，将混合溶液在5-100°C水浴加热反应0-24小时后，将其冷却，最后以淀粉为指示剂，用Na2S2O3标准溶液进行滴定至终点，通过公式计算得出样品中青蒿素的含量；
所述公式为m(样品中青蒿素质量)=(N*V*282)/2,其中，N为Na2S2O3标准溶液的物·质的量浓度，V为消耗Na2S2O3标准溶液的体积,282为青蒿素的摩尔质量；
所述有机溶剂为石油醚或乙醇；
所述 NaHCO3 为 O. 3-2 g ；
所述冰醋酸为NaHCO3物质的量的2-4倍；
所述KI为待测样品中青蒿素物质的量的6-10倍；
所述反应水浴为45-70 °C，加热时间为10-60 min。本发明有如下效果
I)方法独特本发明提供的方法为先将所测样品溶于有机溶剂或以有机溶剂提取出其中的青蒿素制成待测样品溶液，然后在一个50 mL锥形瓶中加入O. 1-4 g的NaHCO3、1_5倍NaHCO3量的冰醋酸、5-20 mL乙醇、O — IOmL蒸馏水、1_100倍待测样品中青蒿素成分含量的KI以及O. 5-5mL浓盐酸，之后加入确定体积的待测样品溶液，将混合溶液在5_100°C水浴加热反应0-24小时后，将其冷却，最后以淀粉为指示剂，用Na2S2O3标准溶液进行滴定至终点，通过公式计算得出样品中青蒿素的含量；青蒿素结构中的过氧桥是其抗疟活性的必要基团。过氧桥可以与碘离子定量反应生成单质碘，通过使用硫代硫酸钠标准溶液滴定生成的单质碘就可以定量测定过氧基团的含量，这是本发明基于碘量法对青蒿素类药物进行含量测定的原理。由于黄花蒿等药材和青蒿素原料药等样品及制剂中其它化学成分通常不含过氧桥或类似的可以与碘离子发生反应的基团。因此，我们可以通过碘量法测定过氧基团的量而直接测定出制剂中青蒿素类药品的含量。2)成本低、测量快速本发明提供的方法只需使用Na2S2O3等常用分析纯化学试齐U，价格便宜同时所需的化学试剂均为分析常用试剂，容易购买获得；操作简单快捷，能够在较短时间内测定样品中青蒿素含量，单个样品的总检测时间可以控制在O. 5小时以内，并且可以平行处理样品，使大批样品测试时所需时间大大缩短；不需使用大型昂贵的分析仪器设备，实验只需恒温水浴锅、酸碱滴定管即可进行，设备成本仅需几百元，并且可反复使用，没有运行成本。因此，该方法能够快速、简易测定中药材等含有青蒿素成分的样品中青蒿素含量，满足黄花蒿等药材收购、黄花蒿等品种选育及青蒿素原料药含量测定等情况下大批量、快速测定青蒿素含量的需要。
具体实施例方式实施例I :一种黄花蒿等中药材及含青蒿素成分样品中青蒿素含量的测定方法，该方法为取青蒿素标准品70. 3 mg溶于5. O mL乙醇。在50 mL锥形瓶中加入O. 5g NaHCO3,
1.0mL冰醋酸，再加入2. O mL水，O. 5 g KI以及2. O mL浓盐酸，加入上述青蒿素样品的乙醇溶液，于70°C水浴敞口反应15 min，之后冷却至室温，以O. I mo I/L Na2S2O3标准溶液滴定，至浅黄色时，加入淀粉溶液为指示剂，以Na2S2O3滴定至无色为滴定终点，共消耗Na2S2O3标准溶液5. O mL。通过公式计算得出样品中青蒿素的含量，青蒿素含量计算值为70. 5 mg。实施例2 :—种黄花蒿等中药材及含青蒿素成分样品中青蒿素含量的测定方法，该方法为取青蒿素标准品70. 9 mg溶于5. O mL乙醇。在50 mL锥形瓶中加入O. 5g NaHCO3,
1.0mL冰醋酸，再加入2. O mL水，O. 5 g KI以及2. O mL浓盐酸，加入上述青蒿素样品的乙醇溶液，于70°C水浴敞口反应30 min，之后冷却至室温，以O. I mo I/L Na2S2O3标准溶液滴定，至浅黄色时，加入淀粉溶液为指示剂，以Na2S2O3滴定至无色为滴定终点，共消耗Na2S2O3·标准溶液4.9 mL，通过公式计算得出样品中青蒿素的含量，青蒿素含量计算值为69. I mg。实施例3 :—种黄花蒿等中药材及含青蒿素成分样品中青蒿素含量的测定方法，该方法为取青蒿素标准品69.8 mg溶于5. O mL乙醇。在50 mL锥形瓶中加入O. 5g NaHCO3,
1.0mL冰醋酸，再加入2. O mL水，O. 5 g KI以及2. O mL浓盐酸，加入上述青蒿素样品的乙醇溶液，于70°C水浴敞口反应10 min，之后冷却至室温，以O. I mo I/L Na2S2O3标准溶液滴定，至浅黄色时，加入淀粉溶液为指示剂，以Na2S2O3滴定至无色为滴定终点，共消耗Na2S2O3标准溶液4.8 mL，通过公式计算得出样品中青蒿素的含量，青蒿素含量计算值为67.7 mg。实施例4:一种黄花蒿等中药材及含青蒿素成分样品中青蒿素含量的测定方法，该方法为取青蒿素粗品即以石油醚提取黄花蒿中青蒿素后重结晶所得142. O mg溶于5. OmL乙醇。在50 mL锥形瓶中加入I. O g NaHCO3, 2. O mL冰醋酸，I. 08 g KI以及3. O mL浓盐酸，加入上述青蒿素样品的乙醇溶液，于45°C水浴敞口反应I小时，之后冷却至室温，以
O.I mol/L Na2S2O3标准溶液滴定，至浅黄色时，加入淀粉溶液为指示剂，以Na2S2Ojf定至无色为滴定终点，共消耗Na2S2O3S准溶液8. 7 mL，通过公式计算得出样品中青蒿素的含量，青蒿素含量计算值为122. 7 mg,纯度为86. 4%。实施例5 :—种黄花蒿等中药材及含青蒿素成分样品中青蒿素含量的测定方法，该方法为取黄花蒿药材5. O g，加入20. O mL石油醚在50 °C提取2小时，提取后静置。在50 mL锥形瓶中加入O. 5g NaHCO3，再加入10. O mL乙醇，I. O mL冰醋酸，之后加入I. O mL蒸懼水,及O. 5g KI,摇勻后加入石油醚提取液9. O mL,最后加入2. O mL浓盐酸及20. O mL蒸馏水。加入后摇匀，在70°C水浴敞口反应15 min，挥去大部分石油醚，反应完后溶液为红棕色。将该溶液以O. I mol/L Na2S2O3标准溶液滴定，至浅黄色时，加入淀粉溶液为指示剂，以Na2S2CUf定至无色为滴定终点，共消耗Na2S2O3S准溶性0. 92 mL,以消耗的Na2S2O3计算黄花蒿中青蒿素含量为0. 58%，通过公式计算得出样品中青蒿素的含量，按提取液中的提取出的青蒿素的质量计算。实施例6:—种黄花蒿等中药材及含青蒿素成分样品中青蒿素含量的测定方法，该方法为取黄花蒿药材5. O g，加入60. O mL石油醚在50°C提取I小时后将石油醚吸出。之后对提取所剩药渣再加入60. O mL石油醚在50°C提取I小时后将石油醚吸出。合并两次所得提取液，蒸干得固体待用。将上述固体溶于10 mL乙醇中。在50 mL锥形瓶中加入l.Og NaHCO3, 2. O mL冰醋酸，1.0 g KI以及3.5 mL浓盐酸，加入上述青蒿素样品的乙醇溶液，于45°C水浴敞口反应I小时，之后冷却至室温，以O. I mol/L Na2S2O3标准溶液滴定，至浅黄色时，加入淀粉溶液为指示剂，以Na2S2O3滴定至无色为滴定终点，共消耗Na2S2O3标准溶液3. 4 mL,以消耗的Na2S2O3计算黄花蒿中青蒿素含量为O. 96 %，按提取出的青蒿素的质量计算，通过公式计算得出样品中青蒿素的含量。上述公式为m(样品中青蒿素质量)=(N*V*282)/2,其中，N为Na2S2O3标准溶液的物质的量浓度，V为消耗Na2S2O3标准溶液的体积，282为青蒿素的摩尔质量。·
权利要求
1.一种黄花蒿等中药材及含青蒿素成分样品中青蒿素含量的测定方法，其特征在于该方法为先将所测样品溶于有机溶剂或以有机溶剂提取出其中的青蒿素制成待测样品溶液，然后在一个50 mL锥形瓶中加入O. 1-4 g的NaHCO3、1-5倍NaHCO3量的冰醋酸、5_20mL乙醇、O - IOmL蒸馏水、1-100倍待测样品中青蒿素成分含量的KI、0. 5_5mL浓盐酸，之后加入确定体积的待测样品溶液，将混合溶液在5-100°C水浴加热反应0-24小时后，将其冷却，最后以淀粉为指示剂，用Na2S2O3标准溶液进行滴定至终点，通过公式计算得出样品中青蒿素的含量。
2.如权利要求I所述的一种黄花蒿等中药材及含青蒿素成分样品中青蒿素含量的测定方法，其特征在于所述公式为m(样品中青蒿素质量)=(N*V*282)/2，其中，N为Na2S2O3标准溶液的物质的量浓度，V为消耗Na2S2O3标准溶液的体积，282为青蒿素的摩尔质量。
3.如权利要求I所述的一种黄花蒿等中药材及含青蒿素成分样品中青蒿素含量的测定方法，其特征在于所述有机溶剂为石油醚或乙醇。
4.如权利要求I所述的一种黄花蒿等中药材及含青蒿素成分样品中青蒿素含量的简易测定方法，其特征在于所述NaHCO3为O. 3-2 g。
5.如权利要求I所述的一种黄花蒿等中药材及含青蒿素成分样品中青蒿素含量的测定方法，其特征在于所述冰醋酸为NaHCO3物质的量的2-4倍。
6.如权利要求I所述的一种黄花蒿等中药材及含青蒿素成分样品中青蒿素含量的测定方法，其特征在于所述KI为待测样品中青蒿素物质的量的6-10倍。
7.如权利要求I所述的一种黄花蒿等中药材及含青蒿素成分样品中青蒿素含量的测定方法，其特征在于所述反应水浴为45-70 °C，加热时间为10-60 min。
全文摘要
本发明涉及一种青蒿素含量的简易测定方法，尤其是涉及一种黄花蒿等中药材及含青蒿素成分样品中青蒿素含量的测定方法，该方法为先将所测样品溶于有机溶剂或以有机溶剂提取出其中的青蒿素制成待测样品溶液，然后在一个50mL锥形瓶中加入NaHCO3冰醋酸、乙醇、蒸馏水、待测样品中青蒿素成分含量的KI、浓盐酸，之后加入确定体积的待测样品溶液，将混合溶液在5-100℃水浴加热反应0-24小时后，将其冷却，最后以淀粉为指示剂，用Na2S2O3标准溶液进行滴定至终点，通过公式计算得出样品中青蒿素的含量；本发明方法独特、测量快速、同时低成本。
文档编号G01N21/79GK102890087SQ20121045137
公开日2013年1月23日 申请日期2012年11月13日 优先权日2012年11月13日
发明者黄宇, 樊艳茹 申请人:宁夏医科大学