本发明属于医用材料领域，具体涉及一种液体抗菌护创膜的制备方法。
背景技术：
：随着社会经济的增长，工业化推进、交通的迅猛发展，各种外伤引起的慢性伤口不断增多，此外随着社会老龄化加剧，糖尿病、血管源性疾病等造成的慢性伤口迅猛增长。慢性难愈性伤口的成因众多，机制复杂，一般的外伤治疗的首要措施是清洗、消毒创面，用护创敷料将创面保护起来，防止后发感染。近年来，随着护创敷料的不断发展，各种各样的护创膜推出。但大多护创膜是合成材料膜，如硅橡胶膜、聚氨酯膜、尼龙膜、涤纶膜、聚乙烯膜、聚丙稀膜等，但组织相容性差，需频繁更换，导致反复的疼痛刺激、损伤和破坏创面，伤口愈合速度缓慢。所以，随着生物材料学及组织工程学的迅猛发展，生物护创膜作为一种新型生物敷料在难愈性伤口治疗中得以应用。生物护创膜的主要成分是胶原蛋白，其无色、透明，采取自猪内脏膜，经脱抗原及微生物灭活等相关处理，它不仅具有一般生物膜的各种基本结构，而且拥有透水透气性、柔韧性及组织相容性，能与伤口很好的贴合，从而有效减少伤口渗出，减少毒性代谢产物对伤口的损害，防止伤口感染，为伤口的肉芽组织生长、修复创造局部适宜的环境，刺激伤口内肉芽组织内新生毛细血管不断增生。但使用后广谱抗菌性变差，持效时间短，导致使用及治疗效果较差。因此，亟待开发一种使用后广谱抗菌性好、持效时间长、治疗效果佳的护创膜具有必要的意义。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题：针对传统生物护创膜使用后广谱抗菌性变差，持效时间短的弊端，提供了一种液体抗菌护创膜。为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：（1）取蚕茧壳与质量分数为5％碳酸氢钠溶液在90～95℃下，保温45～55min，冷却至室温，进行过滤，收集过滤物，并进行风干，收集风干物，得预处理蚕茧壳；（2）将填充液从预处理蚕茧壳口添加至预处理蚕茧壳内，并在45～50℃下静置过夜，随后放入压机中进行挤压，收集挤压物，干燥，收集干燥物，粉碎，过筛，收集过筛颗粒；（3）按重量份数计，取60～65份蒸馏水、30～35份过筛颗粒、10～15份卵磷脂及3～6份胰蛋白酶，放入酶解罐中，使用氢氧化钠溶液调节ph至8.0～8.5，进行酶解；（4）在酶解结束后，收集酶解罐中的酶解混合物，使用盐酸调节酶解混合物ph至中性，离心分离，收集上清液，备用；（5）取卡拉胶、黄连、黄柏和蒸馏水放入蒸煮罐中蒸煮4～6h，冷却至室温，过滤，收集过滤液，将过滤液与活性炭混合脱色后进行过滤，收集脱色液；（6）将脱色液与备用的上清液混合均匀，得液体抗菌护创膜基液，将液体抗菌护创膜基液放入真空浓缩罐中，浓缩至液体抗菌护创膜基液体积55～60％，收集浓缩液，即可。所述步骤（1）中蚕茧壳与质量分数为5％碳酸氢钠溶液的质量比为1:7～10。所述步骤（2）中填充液为按质量比6:2:2:1，将蒸馏水、甘草次酸、葡萄糖醛酸及京尼平苷混合均匀制得。所述步骤（2）中每个预处理蚕茧壳中的填充液添加量为每个预处理蚕茧壳质量的0.8～1.2倍。所述步骤（3）中酶解温度为36～38℃，酶解时间为6～8h。所述步骤（5）中卡拉胶、黄连、黄柏和蒸馏水质量比为1:1:2:4。所述步骤（6）脱色液与备用的上清液的体积比3:5～3:8。本发明与其他方法相比，有益技术效果是：（1）本发明通过高蛋白质含量的蚕茧壳作为原料，通过碳酸氢钠溶液进行脱脂及脱除胶类物质后，利用胰蛋白酶进行酶解，获得丰富氨基酸，促进吸收及伤口愈合，同时增加通过填充液的处理，降低抗原量，增加了与人体的相容性，利用卵磷脂进行活化，提高活性；（2）本发明以黄连、黄柏作为抗菌物质，使用卡拉胶作为成膜基料，进行提取，提高了抗菌的光谱性，通过卡拉胶对抗菌物质的包裹吸附，在治疗过程中，通过吸收对抗菌物质进行释放，延长了持效时间；（3）本发明制备步骤简单，所得护创膜生物相容性好，能与创面很好的结合，可有效促进创面愈合。具体实施方式填充液的制备：为按质量比6:2:2:1，将蒸馏水、甘草次酸、葡萄糖醛酸及京尼平苷混合均匀，即可。上清液的制备：（1）按质量比1:7～10，取蚕茧壳与质量分数为5％碳酸氢钠溶液放入容器中，设定温度为90～95℃，保温45～55min后，自然冷却至室温，并对容器中混合物进行过滤，收集过滤物，将过滤物放入风干机中风干，收集风干物，得预处理蚕茧壳；（2）将填充液从预处理蚕茧壳口添加至上述预处理蚕茧壳内，每个预处理蚕茧壳中的填充液添加量为每个预处理蚕茧壳质量的0.8～1.2倍，待添加完成后，将填充后的预处理蚕茧壳置于45～50℃下静置过夜，再放入压机中，以20mpa进行挤压3～6min，收集挤压物并放入70℃干燥箱中干燥6～8h，收集干燥物放入粉碎机中进行粉碎，将粉碎物过200目筛，收集过筛颗粒；（3）按重量份数计，取60～65份蒸馏水、30～35份上述过筛颗粒、10～15份卵磷脂及3～6份胰蛋白酶，放入酶解罐中，使用氢氧化钠溶液调节ph至8.0～8.5，设定温度为36～38℃，酶解6～8h；（4）在酶解结束后，收集酶解罐中的酶解混合物，使用盐酸调节酶解混合物ph至中性，随后放入离心机中，以800r/min离心分离10～15min，收集上清液。脱色液的制备：按质量比1:1:2:4，取卡拉胶、黄连、黄柏和蒸馏水放入蒸煮罐中，设定温度为102～105℃，压力为0.8～1.2mpa，蒸煮4～6h后，自然冷却至室温，对蒸煮混合物进行过滤，收集过滤液，将过滤液与过滤液质量10～15％的活性炭混合脱色20～25min后进行过滤，收集脱色液。液体抗菌护创膜的制备：按体积比3:5～3:8，将脱色液与上清液混合均匀，得液体抗菌护创膜基液，将液体抗菌护创膜基液放入真空浓缩罐中，浓缩至液体抗菌护创膜基液体积55～60％，收集浓缩液，即可。实例1上清液的制备：（1）按质量比1:7，取蚕茧壳与质量分数为5％碳酸氢钠溶液放入容器中，设定温度为90℃，保温45min后，自然冷却至室温，并对容器中混合物进行过滤，收集过滤物，将过滤物放入风干机中风干，收集风干物，得预处理蚕茧壳；（2）将填充液从预处理蚕茧壳口添加至上述预处理蚕茧壳内，每个预处理蚕茧壳中的填充液添加量为每个预处理蚕茧壳质量的0.8倍，待添加完成后，将填充后的预处理蚕茧壳置于45℃下静置过夜，再放入压机中，以20mpa进行挤压3min，收集挤压物并放入70℃干燥箱中干燥6h，收集干燥物放入粉碎机中进行粉碎，将粉碎物过200目筛，收集过筛颗粒；（3）按重量份数计，取60份蒸馏水、30份上述过筛颗粒、10份卵磷脂及3份胰蛋白酶，放入酶解罐中，使用氢氧化钠溶液调节ph至8.0，设定温度为36℃，酶解6h；（4）在酶解结束后，收集酶解罐中的酶解混合物，使用盐酸调节酶解混合物ph至中性，随后放入离心机中，以800r/min离心分离10min，收集上清液。本发明液体抗菌护创膜中的上清液使用后于创面15～30s可吸收成膜，创面无红肿、发痒现象，也无排斥现象发生。实例2脱色液的制备：按质量比1:1:2:4，取卡拉胶、黄连、黄柏和蒸馏水放入蒸煮罐中，设定温度为102℃，压力为0.8mpa，蒸煮4h后，自然冷却至室温，对蒸煮混合物进行过滤，收集过滤液，将过滤液与过滤液质量10％的活性炭混合脱色20min后进行过滤，收集脱色液。将本实施例所得液体抗菌护创膜中的脱色液抗菌性进行检测，结果如表一所示。表一：菌种金黄色葡萄球菌大肠杆菌白色念珠菌铜绿假单胞菌抑菌率（％）85.3684.2885.1283.96备用：上表抑菌率为本发明液体抗菌护创膜中的脱色液使用12h后对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌和铜绿假单胞菌的抑菌率。实例3液体抗菌护创膜的制备：按体积比3:5，将脱色液与上清液混合均匀，得液体抗菌护创膜基液，将液体抗菌护创膜基液放入真空浓缩罐中，浓缩至液体抗菌护创膜基液体积55％，收集浓缩液，即可。将本实施例所得液体抗菌护创膜抗菌性进行检测，结果如表二所示。表二：菌种金黄色葡萄球菌大肠杆菌白色念珠菌铜绿假单胞菌抑菌率（％）99.4599.5299.5999.60备用：上表抑菌率为本发明液体抗菌护创膜使用12h后对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌和铜绿假单胞菌的抑菌率。将本实施例所得液体抗菌护创膜对创面的愈合率进行检测，结果如表三所示。表三：天数第10天第14天第19天创面愈合率（％）>48.1>80.3>98.5实例4使用时：先将创面污垢清洗干净，并祛除水疱表皮后，再用质量分数为0.05%醋酸氯己定溶液反复清洗3次，清洗结束后，将本发明制得的液体抗菌护创膜均匀涂敷于清洗后的创面，控制涂敷范围超过创缘3cm，涂敷完毕，用无菌纱布包裹即可。本发明液体抗菌护创膜使用后于创面15～30s可吸收成膜，创面无红肿、发痒现象，也无排斥现象发生，广谱抗菌性好，使用12h后对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌和铜绿假单胞菌的抑菌率分别为99.45％、99.52％、99.59％、99.60％，可有效延长抗菌持效时间24h，能快速促进创面愈合，防止创面感染，使用19天创面愈合率达98.5～99.3％。当前第1页12