本发明属于中药材加工、炮制领域，尤其涉及秦皮一体化产地加工及炮制方法。
背景技术：
近年，随着中药产业的不断发展和对中药饮片生产的创新研究，逐渐形成了针对某些来源和性质的药材在产地直接加工成饮片。这种将产地初加工与炮制相结合的中药生产技术称为产地加工与炮制一体化技术。在早些年，陈江河就已初步提出中药材应在产地加工成饮片，采用趁鲜切制可以避免炮制时的软化对中药中有效成分的损失，且可减少包装及运输的花费。
秦皮加工炮制工艺需切丝，但产地加工时为显示产品的等级和规格，多加工成整块树皮。同时，秦皮中的有效成分多易随水流失，故在炮制过程中，操作稍有不当，即会导致内在质量的大幅度下降。传统秦皮饮片的制备，先由药农在产地进行产地初加工，初加工阶段对秦皮原药材进行了淘洗、晾晒及初切制，产地初加工后再由饮片厂进行炮制，炮制阶段又再一次的淘洗、晾晒、软化、干燥，反复多次的淘洗及软化，易使得秦皮中的有效成分流失。产地加工炮制一体化技术，可以避免传统炮制对饮片中有效成分的损失，节省生产程序，缩短生产周期，节省人力、物力。
技术实现要素：
本发明的目的是克服现有保鲜技术的不足之处和缺陷，提供一种工艺简单，质量可控的秦皮一体化产地加工及炮制方法。
本发明采取的技术方案为：秦皮一体化产地加工及炮制方法，其特征在于采收的秦皮鲜药材用刀背刮去粗皮，在大水下快速枪洗，然后经过软化，切丝，干燥制成成品药材。
优选的，所述软化过程采用淋法或蒸法。
优选的，所述切丝宽度为2-6mm的细丝。
优选的，所述干燥温度为60-80℃干燥。
进一步优选的所述秦皮一体化产地加工及炮制方法，包括以下步骤：采收的秦皮鲜药材用刀背刮去粗皮，在大水下快速枪洗，然后经过蒸法软化8-10h，再切制为3-5mm细丝，在68-72℃干燥4h制成成品药材。
本发明的优势及有益效果：
相比较传统的秦皮产地加工及炮制方法，本发明的技术方案是将产地加工和炮制进行整合，流程为鲜药材-洗净-软化-切丝-干燥，缩短了加工时间、能耗，减少了内在成分的流失，并能加快饮片上市时间，具有良好的产业化前景。
经检测，按照本发明的方法所得的秦皮饮片的各项检查符合2015版《中国药典》规定，且比传统秦皮饮片的水分、总灰分含量更低，醇溶性浸出物含量更高。
按照本发明的方法通过蒸制软化所得秦皮饮片中四种有效成分(秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮素、秦皮苷)的含量明显高于传统淋法软化所得秦皮饮片中四种有效成分的含量。
发现传统淋法对秦皮进行的软化周期需2-3天，且秦皮药材的粗皮难以很好的去除，由此可见，传统秦皮的软化耗时长，操作繁琐，在一体化工艺中，通过不断摸索与研究发现，最终确定一体化秦皮的软化可采用蒸制方法对秦皮进行软化，本发明的秦皮饮片工艺中，蒸制软化的周期缩短至8-10小时，且发现在蒸制软化秦皮的过程中秦皮的粗皮即可很轻易的剥除，简化了去粗皮的过程。通过实验对比，一体化秦皮饮片与传统秦皮饮片具有生物等效性。
一秦皮一体化产地加工及炮制方法研究
1材料
1.1仪器
ar1140型电子天平(万分之一，梅特勒-托利多仪器，<上海>有限公司)；kh-400-kde型高功率数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)；qe-300g粉碎机(浙江屹立工贸有限公司)；dhg-9140型电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)；u3000型反相高效液相色谱仪(德国戴安)。1.2试药
秦皮甲素、秦皮乙素照品，(购于中国食品药品检定研究院，批号:秦皮甲素110740-200104、秦皮乙素110741-200607，秦皮素111731-200501、秦皮苷对照品由西玛实验室提供)；甲醇、磷酸均为分析纯，(成都市科龙化工有限公司)；乙腈为色谱纯(赛默飞世尔中国有限公司)；水为娃哈哈纯净水。
样品秦皮饮片分别来源于兴盛德饮片厂及西安市万寿路药材市场，产地为宝鸡市太白县。
2单因素考察
2.1软化方式的考察
2.1.1传统秦皮的软化
取秦皮鲜药材适量，用刀背刮去粗皮，在大水下快速枪洗，避免淘洗时长时间接触大量水分而造成秦皮有效成分的随水流失，采用淋法对秦皮药材进行软化，具体操作为用湿纱布包裹秦皮药材，多次不断的淋水，每次喷淋少量水。直至秦皮药材软化，切丝，60℃干燥。
2.1.2一体化秦皮的软化
取秦皮鲜药材适量，在大水下快速枪洗，采用蒸制的方式对秦皮药材进行软化，待秦皮药材完全软化后，切丝，60℃干燥。
2.1.3水分
参照《中国药典》2015版(四部)通则0832第二法进行分别测定不同软化方式秦皮饮片的水分。结果见表1-1。
表1-1不同软化方式秦皮饮片的水分
2.1.4总灰分
参照《中国药典》2015版(四部)通则2302法总灰分测定方法分别测定不同软化方式秦皮饮片的总灰分。结果见表1-2。
表1-2不同软化方式秦皮饮片的总灰分
2.1.5浸出物
参照《中国药典》2015版(四部)醇溶性浸出物测定法通则2201项下的热浸法，分别测定不同软化方式秦皮饮片的浸出物。结果见表1-3。
表1-3不同软化方式秦皮饮片的醇溶性浸出物
2.1.6不同软化方式对秦皮饮片中有效成分含量的影响
色谱条件
色谱柱：betasilc18柱(250mm×4.6mm,5μm)；流动相：乙腈-0.1％磷酸水溶液(12:88)；检测波长：334nm；柱温：30℃；流速：1ml/min；进样量为10μl。
对照品溶液的制备
精密称取秦皮甲素对照品、秦皮乙素对照品、秦皮素对照品、秦皮苷对照品适量，加甲醇溶解并配制成每1ml含秦皮甲素对照品、秦皮乙素对照品、秦皮素对照品、秦皮苷对照品分别为0.1545mg，0.0255mg，0.0138mg，0.0270mg的对照品混合溶液。
供试品溶液的制备
取约0.5g的样品粉末(使通过三号筛)，精密称定，置具塞圆底烧瓶中，再精密加入50ml甲醇，密塞，称定总重量，加热回流1h，放冷，拆下，再称定总重量，用甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液过0.45μm微孔滤膜，即得。
计算两种饮片中有效成分含量。结果见表1-4。
表1-4不同软化方式秦皮饮片中有效成分的含量
由表中结果可见，一体化工艺通过蒸制软化所得秦皮饮片中四种有效成分的含量明显高于传统淋法软化所得秦皮饮片中四种有效成分的含量。
2.2.蒸制温度的考察
2.2.1秦皮饮片样品的制备
取秦皮鲜药材适量，大水下快速枪洗，分别在140℃、160℃、180℃、220℃条件下蒸制秦皮药材进行软化，待秦皮药材完全软化后，切丝，60℃干燥。
2.2.2水分
参照《中国药典》2015版(四部)通则0832第二法进行分别测定不同软化方式秦皮饮片的水分。结果见表1-5。
表1-5不同蒸制温度秦皮饮片的水分
2.2.3总灰分
参照《中国药典》2015版(四部)通则2302法总灰分测定方法分别测定不同软化方式秦皮饮片的总灰分。结果见表1-6。
表1-6不同蒸制温度秦皮饮片的总灰分
2.2.4浸出物
参照《中国药典》2015版(四部)醇溶性浸出物测定法通则2201项下的热浸法，分别测定不同软化方式秦皮饮片的浸出物。结果见表1-7。
表1-7不同蒸制温度秦皮饮片的醇溶性浸出物
2.2.5不同蒸制温度对秦皮饮片中有效成分的影响
按“2.1.6”项下方法配制各样品的供试品溶液，在“2.1.6”项下色谱条件下进样测定，计算不同蒸制温度秦品饮片中有效成分的含量。结果见表1-8。
表1-8不同蒸制温度秦皮饮片中有效成分的含量
由表1-8可看出，不同蒸制温度对秦皮饮片中有效成分含量的影响不大，没有明显的趋势性，故不将蒸制温度作为影响秦皮饮片质量的工艺。
2.3切丝规格的考察
2.3.1秦皮饮片样品的制备
《中国药典》2015版规定秦皮的切丝规格为切细丝，但市售秦皮饮片均为8-10mm的宽丝。本实验设计几种不同切丝规格进行考察。
取秦皮鲜药材适量，大水下快速枪洗，蒸制秦皮，待秦皮药材完全软化后，分别切为约2mm的细丝、约4mm的细丝、约6mm的宽丝、约8mm的宽丝、约10mm的宽丝，60℃干燥。
2.3.2水分
参照《中国药典》2015版(四部)通则0832第二法进行分别测定不同软化方式秦皮饮片的水分。结果见表1-9。
表1-9不同切制规格秦皮饮片的水分
2.3.3总灰分
参照《中国药典》2015版(四部)通则2302法总灰分测定方法分别测定不同软化方式秦皮饮片的总灰分。结果见表1-10。
表1-10不同切制规格秦皮饮片的总灰分
2.3.4浸出物
参照《中国药典》2015版(四部)醇溶性浸出物测定法通则2201项下的热浸法，分别测定不同软化方式秦皮饮片的浸出物。结果见表1-11。
表1-11不同切制规格秦皮饮片的浸出物
2.3.5不同切丝规格对秦皮饮片中有效成分含量
供试品溶液的制备：取约5g的样品(未粉碎)，精密称定，置具塞圆底烧瓶中，再精密加入50ml甲醇，密塞，称定总重量，加热回流2h，放冷，拆下，再称定总重量，用甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液过0.45μm微孔滤膜，即得。
在“2.1.6”项下色谱条件下分别进样测定各供试品溶液，计算不同切制规格秦品饮片中有效成分的含量。结果见表1-12。
表1-12不同切丝规格秦皮饮片中有效成分的含量
由表1-12可看出，不同切丝规格对秦皮饮片中有效成分的含量较明显，其中切为约4mm的细丝时有效成分含量最高，故确定切丝约4mm为最佳切丝规格。2.4干燥温度的考察
2.4.1秦皮饮片样品的制备
取秦皮鲜药材适量，大水下快速枪洗，蒸制秦皮，待秦皮药材完全软化后，切为约4mm的细丝，分别在25℃(阴干)、50℃恒温烘箱、60℃恒温烘箱、70℃恒温烘箱、80℃恒温烘箱中干燥。
2.4.2水分
参照《中国药典》2015版(四部)通则0832第二法进行分别测定不同软化方式秦皮饮片的水分。结果见表1-13。
表1-13不同干燥温度秦皮饮片的水分
2.4.3总灰分
参照《中国药典》2015版(四部)通则2302法总灰分测定方法分别测定不同软化方式秦皮饮片的总灰分。结果见表1-14。
表1-14不同干燥温度秦皮饮片的总灰分
2.4.4浸出物
参照《中国药典》2015版(四部)醇溶性浸出物测定法通则2201项下的热浸法，分别测定不同软化方式秦皮饮片的浸出物。结果见表1-15。
表1-15不同干燥温度秦皮饮片的醇溶性浸出物
2.4.5不同干燥温度对秦皮饮片中有效成分的影响
按“2.1.6”项下方法配制各样品的供试品溶液，在“2.1.6”项下色谱条件下进样测定，计算不同干燥温度秦品饮片中有效成分的含量。结果见表1-16。
表1-16不同干燥温度秦皮饮片中的有效成分的含量
由表1-16可看出，不同干燥温度对秦皮饮片中有效成分的含量影响较明显，其中干燥温度为70℃时秦皮饮片中有效成分含量最高，故确定70℃为最佳干燥温度。
2.5干燥时间的考察
2.5.1秦皮饮片样品的制备
取秦皮鲜药材适量，大水下快速枪洗，蒸制秦皮，待秦皮药材完全软化后，切为约4mm的细丝，在70℃恒温烘箱中干燥，分别在1h、2h、3h、4h时取出部分饮片得不同干燥时间饮片样品。
2.5.2不同干燥时间秦皮饮片的水分
参照《中国药典》2015版(四部)通则0832第二法进行分别测定不同软化方式秦皮饮片的水分。结果见表1-17。
表1-17不同干燥时间秦皮饮片的水分
由表1-17中结果可看出，干燥时间在4h时秦皮饮片的水分含量趋于稳定。可认为干燥4h后秦皮饮片干燥完全。
2.5.3不同干燥时间秦皮饮片中有效成分的含量
按第一章“2.1.6”项下方法配制各样品的供试品溶液，在“2.1.6”项下色谱条件下进样测定，计算不同干燥时间秦品饮片中有效成分的含量。结果见表1-18。
表1-18不同干燥时间秦皮饮片中的有效成分的含量
对于干燥时间的考察结果，结合秦皮饮片的水分含量及有效成含量，确定干燥时间4h为最佳干燥时间。
二传统秦皮饮片与产地加工炮制一体化秦皮饮片的生物等效性
由第一部分内容可知，产地加工炮制一体化秦皮饮片的各项检查及有效成分含量优于传统秦皮饮片，但还应对产地加工炮制一体化秦皮饮片进行药效学考察，以说明新工艺与传统工艺炮制的饮片具有生物等效性，可用于临床应用。本章实验采用角叉菜胶致大鼠足肿胀来考察传统秦皮饮片和产地加工炮制一体化秦皮饮片的生物等效性。
1材料
1.1仪器
ar1140型电子天平(万分之一，梅特勒-托利多仪器，<上海>有限公司)；kh-400-kde型高功率数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)；qe-300g粉碎机(浙江屹立工贸有限公司)；imark酶标仪18485(美国bio－rad公司)。
1.2动物
sd大鼠，40只，雄性，spf级，体重(165±15)g，购自西安交通大学医学部实验动物中心，动物合格证号scxk(陕)2012－003。
1.3试药
传统秦皮饮片(陕西兴盛德药业有限责任公司，批号为20150901)，产地加工炮制一体化秦皮饮片实验室自制。白细胞介素1β(il－1β)、肿瘤坏死因子－α(tnf－α)、丙二醛(mda)、超氧化物歧化酶(sod)酶联免疫吸附试验(elisa)试剂盒均购自由南京森贝伽生物科技有限公司。
2方法
2.1造模及给药
sd大鼠40只适应性喂养7d后，随机分为5组，即空白组、模型组、传统秦皮饮片提取物组、一体化秦皮饮片提取物组、阿司匹林组，各8只。称重并给药，各组实验动物给药剂量如下，两组秦皮饮片提取物组7.2g/kg(生药量)，阿司匹林组0.225g/kg(去薄膜包衣)，模型组和空白组灌胃10ml/kg生理盐水，每天灌胃1次，连续8d。最后一次灌胃结束1h后，除空白组外，其余大鼠右足趾部皮下注射1％角叉菜胶溶液0.1ml致炎，空白组注射0.1ml生理盐水，标记右足测量部位，分别在致炎前与致炎后1，2，3，4，5h测量右足厚度，计算足肿胀度。足肿胀度＝致炎后足厚度－致炎前足厚度。
2.2血样采集及指标测定
足肿胀结束后麻醉大鼠，取血，离心血样，取上清液，冷冻备用。采用elisa法严格按照试剂盒说明书测定血清中il-1β(白细胞介素)，tnf-α(肿瘤坏死因子)，mda(丙二醛)含量及sod(超氧化物歧化酶)活性。
2.3测定结果
测定各组大鼠的右足厚度，计算各组大鼠的足肿胀度，结果见表2-1.测定各组大鼠血清中il-1β、tnf-α、sod、mda的活性，结果见表2-2。
表2-1各组大鼠足肿胀度
注：与模型组比较，#p﹤0.05；一体化秦皮饮片组与传统秦皮饮片组相比，▲p﹤0.05
表2-2各组大鼠血清中il-1β、tnf-α、sod、mda含量
注：与空白组比较，*p﹤0.05；与模型组比较，#p﹤0.05；一体化秦皮饮片组与传统秦皮饮片组相比，▲p﹤0.05
表2-1中结果显示，一体化秦皮饮片组和传统秦皮饮片组从4h开始表现对大鼠足肿胀的抑制，阿司匹林组2h开始就表现出抑制作用。表2-2中结果显示，模型组与空白组比较，il-1β、tnf-α、mda的活性均显著升高，sod的活性显著降低；与模型组相比，一体化秦皮饮片组、传统秦皮饮片组、阿司匹林组的il-1β、tnf-α、mda的活性均显著升高，sod的活性显著降低；一体化秦皮饮片组与传统秦皮饮片组相比，il-1β、tnf-α、mda的活性有所降低，sod的活性有所升高，但均无显著性差异。
3讨论与小结
3.1讨论
tnf-α和il-1β是重要的促炎因子,tnf-α是由巨噬细胞产生的一种能刺激破骨细胞和抑制成骨细胞的细胞因子,能够参与炎症的发生、免疫调节和发热。il-1β又称淋巴细胞刺激因子,主要通过刺激炎症和自身免疫病相关基因的表达,在免疫调节及炎症进程中扮演着重要的角色。sod和mda为可作为自由基基础代谢情况的评价指标，sod是氧自由基清除体系的关键因子，可降低细胞受到自由基的损害。自由基受损时,可引发脂质过氧化反应，脂质过氧化物反应在炎症及免疫调节过程中起着重要的作用，mda是脂质过氧化物反应产生的因子，用mda活性来评价脂质过氧化反应及细胞受损的程度；然而自由基引起脂质过氧化及一些基因的表达，在炎症和免疫过程中起着重要的作用。sod能催化具有抗炎作用的氧及过氧化氢的生成，得以减轻炎性症状。
3.2小结
本实验采用角叉菜胶致大鼠足肿胀模型，以il-1β、tnf-α、sod、mda为指标评价各实验组抗炎效果。各指标的测定结果得出传统秦皮饮片提取物及一体化秦皮饮片提取物均对炎症反应表现一定的抑制。一体化秦皮饮片提取物组相比于传统秦皮饮片提取物组，il-1β、tnf-α、mda更为减小，sod活性也稍有增加，但并无统计学差异。说明，一体化秦皮饮片与传统秦皮饮片具有生物等效性。
具体实施方式
下面通过实例对本发明做进一步详细说明，这些实例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。
实施例1秦皮一体化产地加工及炮制
采收的秦皮鲜药材用刀背刮去粗皮，在大水下快速水洗，然后经过淋法软化3d，再切丝，在60℃干燥8h制成成品药材。
实施例2秦皮一体化产地加工及炮制
采收的秦皮鲜药材用刀背刮去粗皮，在大水下快速枪洗，然后经过蒸法软化8h，再切制为3mm细丝，在68℃干燥4h制成成品药材。
实施例3秦皮一体化产地加工及炮制
采收的秦皮鲜药材用刀背刮去粗皮，在大水下快速枪洗，然后经过蒸法软化10h，再切制为5mm细丝，在72℃干燥4h制成成品药材。
实施例4秦皮一体化产地加工及炮制
采收的秦皮鲜药材用刀背刮去粗皮，在大水下快速枪洗，然后经过蒸法软化9h，再切制为4mm细丝，在70℃干燥4h制成成品药材。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。