汉防己甲素、乙素的抗耐药菌活性的应用
【专利摘要】本发明公开了汉防己甲素、乙素的抗耐药菌活性的应用，属于药品汉防己甲素、乙素的新应用领域，具体为汉防己甲素或/和汉防己乙素在制备抗耐药菌活性药物中的应用。所述耐药菌为金黄色葡萄球菌或产ESBL的大肠杆菌。本发明提供了汉防己甲素、乙素的抗耐药菌活性的应用，为抗耐药菌活性药物的研究提供了新的方向。
【专利说明】
汉防己甲素、乙素的抗耐药菌活性的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及药品汉防己甲素、乙素的应用，具体为汉防己甲素、乙素的抗耐药菌活 性的应用。
【背景技术】
[0002] 汉防己别名粉防己、山乌龟、石蟾蜍、倒地拱，是防己科千金藤属植物汉防己的干 燥块根，含有多糖、生物碱等多种成分，其主要有效成分为汉防己甲素和汉防己乙素。汉防 己甲素具有消炎、镇痛、降血压、抗肿瘤、抗缺氧性肺动脉高压、抑制肺纤维化等作用。汉防 己乙素是一种天然的钙拮抗剂，对高血压、糖尿病、肝纤维化等疾病具有治疗作用，还具有 脑细胞保护作用和广谱消炎抗菌作用。
[0003] -直以来人类与能引起感染性疾病的病原因子之间的斗争从未停止过，自从抗菌 药物问世，人类获得了治疗细菌性感染疾病的强力武器，可是随着第三代头孢菌素等广谱 内酰胺类抗生素的广泛使用，产内酰胺酶的耐药菌株也迅速出现。本论文的抗耐药菌 试验部分选用革兰阳性菌中的耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)，革兰阴性菌中的产超 广谱β-内酰胺酶(ESBL)大肠杆菌，目前利奈唑胺、万古霉素、替加环素等是治疗MRSA的特效 药，MIC约在2yg/m。治疗产ESBL大肠杆菌的特效药是亚胺培南MIC约在2 yg/mL。近年来中药 对临床致病菌的抗菌活性研究越来越受关注，由于其资源丰富，作用靶位多、细菌难以产生 耐药性等特点，从中药中筛选抗耐药活性成分来开发新的抗菌剂具有广阔前景。
[0004] 目前暂未见有关汉防己总碱、汉防己甲素、乙素的抗耐药菌活性研究的相关文献。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供汉防己甲素、乙素的抗耐药菌活性的应用。
[0006] 采用的技术方案为:汉防己甲素或/和汉防己乙素在制备抗耐药菌活性药物中的 应用。
[0007] 进一步，所述耐药菌为金黄色葡萄球菌或产ESBL的大肠杆菌。
[0008] 本发明提供了汉防己甲素、乙素的抗耐药菌活性的应用，为抗耐药菌活性药物的 研究提供了新的方向。
【附图说明】
[0009] 图1为本发明实施例中MRSA的活菌数-吸光度标准曲线图。
[0010] 图2为本发明实施例中产ESBL大肠杆菌的活菌数-吸光度标准曲线图。
[0011] 图3为本发明实施例中MRSA在含不同浓度汉防己甲素的平板上的生长情况。
[0012] 图4为本发明实施例中ESBL在含不同浓度汉防己甲素的平板上的生长情况。
[0013] 图5为本发明实施例中MRSA在含不同浓度汉防己乙素的平板上的生长情况。
[0014]图6为本发明实施例中ESBL在含不同浓度汉防己乙素的平板上的生长情况。
【具体实施方式】
[0015] 下面结合实施例及附图进一步介绍本发明，但本发明不仅限于下述实施例，可以 预见本领域技术人员在结合现有技术的情况下，实施情况可能产生种种变化。
[0016] 试验菌株：由遵义医学院附属医院检验科提供的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA 13366和产ESBL的大肠杆菌13025,菌种在测试前复苏。
[0017]表1为主要试剂和药品的来源：
含药琼脂平板的制作制作：用二倍稀释法将汉防己甲素和汉防己乙素分别制成400、 800、1600、3200、6400 yg/mL的药液，溶剂为二甲基亚砜(气温较低时二甲基亚砜易结晶，可 50°C恒温水浴备用），然后取1 mL各浓度药液和9 mL无菌MH琼脂培养基(60 °C恒温水浴)加 入平板中混合均匀，制得40、80、160、320、64(^8/11^的含药腿琼脂平板，冷却之后使用。再 以相同的方法分别制做含亚胺培南西司他丁钠、盐酸万古霉素、青霉素钠且浓度为2 yg/mL 的对照组平板，溶剂为50%乙醇。
[0018] 分光光度法配制0.5麦氏浓度菌液:菌种复苏后，取4-5个菌落，接种于无菌的生理 盐水中，使用涡旋振荡器混合均匀，二倍稀释获得5个梯度的菌液。600 nm波长下分别测定 0D值，然后将菌液稀释1000倍，取10 yL均匀涂布于MH琼脂平板上，37°C下培养24 h，在体式 显微镜下计数，在计数菌落高密度分布的平板时，可选有代表性的1/8或1/4区域粗略统计 菌落数。
[0019] MRSA和产ESBL大肠杆菌的五个不同浓度的菌液，活菌数与吸光度的关系结果见表 2：
将活菌数和对应吸光度用Excel软件绘制标准曲线，见图1、图2 JRSA 13366的回归方 程为：Y = 9.5715x - 0.3439(R2 = 0.9907);产ESBL大肠杆菌 13025的回归方程为：Y = 8.6245Χ - 0.1802(R2 = 0.9972)，将所需菌液浓度代入回归方程中求出吸光度，再配制该 吸光度的菌液，用于体外抗菌活性试验。本实验中所需菌液浓度为1.5X10 8cfu/mL，分别代 入回归方程计算得到MRSA13366的吸光度为0.193，ESBL13025的吸光度为0.195。其中活菌 数的结果由计数的菌落数X稀释倍数得来，计数的菌落数与真实值之间存在一定的误差， 平板内的菌落数越多误差越大，当平板内菌落数达10000时误差约在± 10%。
[0020] 汉防己甲素、乙素体外抗耐药菌活性试验:取0.1 mL浓度为0.5麦氏浓度的耐药菌 菌液，用无菌玻璃棒均匀涂布于含药琼脂平板上，在平皿底部做上对应标记，37°C下培养24 h，观察细菌生长状况。进行三次平行试验。
[0021] 采用琼脂平板稀释法，测定汉防己甲素、乙素的MIC，结果见表3:
表3中，西司他丁钠为产ESBL大肠杆菌的阳性对照药品、盐酸万古霉素为MRSA的阳性对 照药品、青霉素钠为两种菌的阴性对照药品，以加溶剂不加药物的平板作为溶剂对照，以加 无菌水为空白对照。
[0022] 由表3可知，所有的阴性对照中细菌都大量生长，说明青霉素对这些菌没有抑制作 用，该菌具有耐药性。另外，所有的空白对照中细菌都是大量生长，说明是汉防己甲素、乙素 本身的活性成分对MRSA和产ESBL大肠杆菌产生明显的抑制作用，结果表明汉防己甲素的抗 菌活性最强，对MRSA的MIC为80 yg/mL，对产ESBL大肠杆菌的MIC为160 yg/mL。乙素对MRSA 的MIC为160 yg/mL，对产ESBL大肠杆菌的MIC为320 yg/mL。
[0023] 实验图片见图3-图6,图3为MRSA在含不同浓度汉防己甲素的平板上的生长情况。 图4为ESBL在含不同浓度汉防己甲素的平板上的生长情况。图5为MRSA在含不同浓度汉防己 乙素的平板上的生长情况。图6为ESBL在含不同浓度汉防己乙素的平板上的生长情况。
【主权项】
1. 汉防己甲素或/和汉防己乙素在制备抗耐药菌活性药物中的应用。2. 如权利要求1所述的应用，其特征是:所述耐药菌为金黄色葡萄球菌或产ESBL的大肠 杆菌。
【文档编号】A61P31/04GK106038565SQ201610367066
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月30日
【发明人】付少彬, 杨鸿强, 孟庆峰, 张茂生
【申请人】遵义医学院