毛果鱼藤石油醚提取物的降血糖应用的制作方法

本发明属于壮药毛果鱼藤
技术领域：
，尤其涉及一种毛果鱼藤石油醚提取物的降血糖应用。
背景技术：
：糖尿病是以高血糖为特征的代谢性疾病，是与遗传、环境、胰岛素分泌缺陷等因素有关引起的慢性高血糖综合症。糖尿病时，机体持续性的高血糖与长时间的代谢紊乱使机体组织器官受到损伤并发生功能障碍，严重危害着糖尿病病人的健康。药物通过对胰腺的保护，而保护β细胞，增强胰岛素分泌治疗糖尿病。然而，抗糖尿病的传统药物可能会引起低血糖、胃肠道反应、心血管疾病及体重增加等副作用。中草药和传统医学对于糖尿病的治疗或改善作用早有文献报道，至今已有400多种传统植物被报道具有降血糖作用。毛果鱼藤(derriseriocarpahow)为豆科鱼藤属植物，其又名土甘草，主要分布在广东、广西等地区。攀援状灌木，木质大藤本。茎棕黄色，有多数黄色瘤状突起物，断面淡黄色，纤维状。羽状复叶互生，小叶对生。花小，粉红色，呈腋生总状花序。小枝被锈色微柔毛，花期为6-7月，果期为9月至翌年1月。毛果鱼藤常被用于治疗膀胱炎、肾炎、尿道炎、咳嗽等，具有利尿除湿、镇咳化痰的功效。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是提供一种毛果鱼藤石油醚提取物的降血糖应用，为临床提供一种新的具有良好疗效的降血糖中药。为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：毛果鱼藤石油醚提取物在制备降血糖药物中的应用。降血糖药物为降糖尿病血糖药物。毛果鱼藤石油醚提取物来自毛果鱼藤乙醇提取物的石油醚提取部位。毛果鱼藤石油醚提取物按以下操作制备：将干燥毛果鱼藤藤茎切片为0.5-1cm，经中药粉碎机粉碎成粗粉，过30目筛得毛果鱼藤药粉；称取毛果鱼藤药粉，用体积浓度95％的乙醇浸泡药粉24h后，加热回流提取2次，每次1h，合并乙醇提取液，浓缩，挥尽乙醇；将毛果鱼藤乙醇提取物用水混悬，加入石油醚萃取3次，合并萃取液，浓缩，最终得到毛果鱼藤石油醚提取物浸膏。为充分利用广西、云南特有的壮药毛果鱼藤，发明人建立了一种毛果鱼藤石油醚提取物(petroleumetherextractofderriseriocarpahow.，peedeh)的制备方法。据此，发明人进一步研究，发现了毛果鱼藤石油醚提取物具有降血糖作用，特别针对糖尿病的高血糖有良好效果。通过使用高糖高脂饲料及链脲佐菌素建立糖尿病动物模型，采用免疫组化法统计毛果鱼藤石油醚提取物对糖尿病模型小鼠胰腺中caspase-3、nf-κb表达的影响，以及检查体外hepg2细胞对葡萄糖的利用率。检测结果显示，毛果鱼藤提取物对糖尿病模型小鼠具有升高小鼠体重及降低小鼠血糖的作用，提高了高糖模型体外hepg2细胞对葡萄糖的利用率。实验研究表明，本发明毛果鱼藤石油醚提取物对链脲佐菌素引起的糖尿病模型小鼠具有较好的保护胰腺，改善小鼠胰腺病理程度，和降血糖的作用。因此，本发明为深入研究与开发壮药毛果鱼藤提供了理论依据，以期为临床提供一种新的通过降血糖作用而治疗糖尿病的现代中药制剂。附图说明图1是各组小鼠胰腺组织病理学改变的倒置荧光显微镜图(he染色，400×)。具体实施方式一、毛果鱼藤石油醚提取物的制备将干燥毛果鱼藤藤茎切成0.5-1cm切片，经中药粉碎机粉碎成粗粉，过30目筛得毛果鱼藤药粉；称取毛果鱼藤药粉1kg，用体积浓度95％的乙醇浸泡药粉24h后，加热回流提取2次，每次1h，合并乙醇提取液，浓缩，挥尽乙醇，得到毛果鱼藤乙醇提取物(92.5g)；将毛果鱼藤乙醇提取物用适量水混悬，加入500ml石油醚萃取，萃取3次，合并萃取液，浓缩，最终得到深绿色的毛果鱼藤石油醚提取物浸膏20g。二、毛果鱼藤石油醚提取物体外降糖作用的药理实验实验步骤将处于对数生长期生长状态良好的hep62细胞接种于96孔板，200μl/孔，每组12个复孔，用10％的胎牛血清dmem培养基培养hepg2细胞12h，按照实验分组进行实验。24h后，吸出培养基，采用葡萄糖氧化酶法，利用葡萄糖试剂盒在波长为505nm处测定培养基中葡萄糖的剩余量。以没有接种细胞的空白组培养基中葡萄糖浓度平均值为基础值，计算其他各组细胞中葡萄糖的消耗量(gc)。gc实验结束后，使用mtt法检测细胞的活性。将每孔加入20μl的5mg/ml的mtt溶液，放于培养箱中培养4h后，弃去培养基，加入150μl/孔的dmso，震荡3min，最终在490nm波长处检测每孔吸光度，以测量得到的吸光度平均值反映细胞活性。实验结果如表1所示，本实验使用hepg2细胞作为研究的对象，得出peedeh对hepg2细胞葡萄糖消耗作用随着浸膏的剂量呈现一定的量效关系，且呈现显著的降糖效果(p＜0.01)。同时，peedeh对hepg2细胞无细胞毒性。表1peedeh对hepg2细胞葡萄糖消耗的影响(x±s，n＝6)三、毛果鱼藤石油醚提取物对链脲佐菌素辅以高糖高脂建立的糖尿病模型小鼠降血糖作用实验动物spf级雄性km小鼠，体重为18-22g。实验步骤糖尿病小鼠模型的建立：适应性喂养三天，饲养温度为25±1℃、相对湿度为60±5％、12h的光照昼夜循环。小鼠禁食不禁水12h后尾静脉注射stz(120mg/kg)，辅以高糖高脂饲料(基础饲料60％、蔗糖20％、猪油10％、胆固醇1％、蛋黄9％)喂养。72h后尾静脉取血，测小鼠fb6，fb6≥11.1mmol/l的认为糖尿病小鼠造模成功，造模成功后使用基础饲料饲养小鼠。将糖尿病模型小鼠随机分为peedeh高剂量组(800mg/kg)、中剂量组(400mg/kg)、低剂量组(200mg/kg)、二甲双胍阳性药对照组(320mg/kg)及模型组，每组10只。另取10只健康小鼠作为正常对照组。每天灌胃给药一次，空白组和模型组小鼠ig双蒸水，所有组别均按20ml/kg的体积进行灌胃。给药21天后，小鼠禁食不禁水12h，使用罗氏血糖仪测定小鼠fb6，以剂量为2.0g/kg葡萄糖灌胃小鼠，随即测量小鼠灌胃葡萄糖后0、30、60、120min时血糖水平，并计算auc。小鼠经眼球取血，4℃，4000r/min离心10min，收集血清，备用。取小鼠胰腺组织进行称重，计算胰腺指数，然后将胰腺组织于10％甲醛溶液中固定，常规石蜡包埋制片法进行he染色。切片选取清晰、典型的视野，观察胰腺组织病理情况。使用免疫组化法检测胰腺组织中caspase-3、nf-κb表达含量。实验结果如图1所示，给药21天后的糖尿病模型小鼠，高剂量组的糖尿病模型小鼠的fbg、糖耐量均显著性降低。表2peedeh对糖尿病小鼠空腹血糖的影响结果(x±s，n＝10)表3peedeh对糖尿病小鼠糖耐量的影响结果(x±s，n＝10)表4peedeh对糖尿病小鼠体重及胰腺指数的影响结果(x±s，n＝10)组别体重(g)胰腺指数(mg/g)正常对照组31.43±1.423.94±0.08模型组20.41±2.225.28±0.29二甲双胍组26.65±5.34.62±0.28peedeh高剂量组23.24±2.3*4.78±0.15*peedeh中剂量组22.26±2.30*4.90±0.40peedeh低剂量组22.55±1.10*5.16±0.60表5peedeh对糖尿病小鼠胰腺组织caspase-3与和nf-κb表达的影响结果(x±s，n＝10)如图1所示，空白组小鼠胰岛细胞结构完整，呈椭圆形，胰岛细胞数量较多，结构整齐，边界轮廓清晰。模型组胰岛β细胞数量减少，细胞排列紊乱，并伴有变性或者坏死现象，胰岛变形，结构不完整，排列松散，边界不够清晰。peedeh高剂量组明显提高了胰岛细胞数目，胰岛的结构完整，边界清晰，细胞排列整齐，具有明显的改善作用。低剂量和中剂量效果也较为明显，胰岛细胞相比模型组具有更完整的形态。当前第1页12