方法、方案、组合和拮抗剂与流程
本发明涉及治疗或预防如哺乳动物或人等受试者的贫血。具体地，本发明解决了中度到重度贫血。另外，本发明提供了用于免除对受试者施用红细胞生成刺激剂(esa)的手段。
背景技术：
贫血是一种影响25％的全球人口或超过17亿人，特别是孕妇、新生儿和儿童的严重疾病。超过40％的贫血反映了对铁摄取、储存和再循环的稳态控制失常。这种失调是多种慢性疾病的结果，包含感染(例如，hiv、肝炎)、炎症(例如，类风湿性关节炎)、癌症和肾病。在美国可以看到导致铁稳态失调的疾病的巨大影响，在美国，4千万超过65岁的成年人当中，10％患有贫血并且其中1/3由慢性病引起。
护理标准集中于输血和使用如epo或
正在开发如抗体等用于在治疗或预防贫血的方法中使用的抗骨形态发生蛋白6(bmp6)拮抗剂(见例如，wo2016098079、us20160176956a1)。
技术实现要素：
本发明基于发明人的如下认识：抗bmp6拈抗剂和esa的组合疗法可以用于治疗或预防贫血，特别是中度到重度贫血(即，通过血液血红蛋白低于9.5g/dl表明)。
诸位发明人已经发现这种组合对于治疗如acd(慢性病贫血)等贫血、炎症或感染具有惊人的效果，并且已经证明所述组合疗法可以产生对血液血红蛋白浓度的维持和升高，相比仅使用抗bmp6抗体，所述组合疗法具有统计显著性。此外，这种效果出乎意料地持续数周(甚至在施用单个剂量的抗bmp6抗体之后)。我们认为，之前在所属领域中未显示或暗示这一点。
另外，本发明的组合疗法可用于esa免除贫血疗法，即，使用低于标准剂量的esa实现esa治疗。考虑到esa的潜在有害副作用，这是有用的。本发明还可用于esa难治或对标准esa疗法反应差的受试者的贫血疗法。本发明可以有效地将血液血红蛋白维持在中度到重度贫血范围之外和/或防止血液血红蛋白降低到这种范围。因此，本发明可用于减少对铁输注或输血疗法的需要。
如本文举例说明的，本发明可用于炎性疾病环境和微生物感染环境中的贫血疗法。
为此，本发明提供了以下配置1到13：-
1.一种维持受试者的至少10g/dl的血液血红蛋白水平的方法，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拮抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)。
2.一种防止受试者的血液血红蛋白水平降低到低于10g/dl的方法，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拈抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)。
3.一种将患有贫血的受试者的血液血红蛋白升高到至少10g/dl的水平的方法，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拈抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述贫血得到治疗。
4.一种治疗或预防受试者的中度或重度贫血的方法，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拈抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述贫血得到治疗和预防。
5.一种治疗或预防患有炎性疾病或病症的受试者的贫血的方法，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拮抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述贫血得到治疗或预防。
6.一种消除或减少对患有贫血的受试者施用铁输注或输血的需要的方法，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拮抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述需要得到消除或减少。
在实例中，受试者的不稳定血浆铁(lpi)、增强的lpi(elpi)和非转铁蛋白结合的铁(ntbi)中的一种、多种或全部得到减少。在实例中，受试者的不稳定血浆铁(lpi)、增强的lpi(elpi)和非转铁蛋白结合的铁(ntbi)中的一种、多种或全部得到减少。
7.一种治疗或预防患有微生物感染的受试者的贫血的方法，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拈抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)。
8.一种减少对患有贫血的受试者施用用于治疗贫血的红细胞生成刺激剂(esa)的方法，所述方法包括：施用抗bmp6拮抗剂和所述esa，其中所述受试者的贫血得到治疗。
9.一种治疗患有贫血或有贫血风险的受试者的贫血或降低其贫血风险的方法，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拮抗剂和低剂量的红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述受试者的贫血得到治疗或者所述受试者的所述贫血风险得到降低。
10.一种用于治疗或预防患有贫血或有贫血风险的受试者的贫血的治疗方案，所述方案包括：对所述受试者同时或连续施用抗bmp6拮抗剂和esa，其中
a.在第零天对所述受试者施用所述拈抗剂；并且不迟于第7天(例如，在第1天)对所述受试者施用所述esa；或者
b.在第零天对所述受试者施用所述esa；并且不迟于第7天(例如，在第1天)对所述受试者施用所述拮抗剂；或者
c.在第零天对所述受试者同时施用所述拮抗剂和所述esa；或者
d.在第零天所述受试者已经接受所述esa，并且在第零天对所述受试者施用所述拈抗剂；或者
e.在第零天所述受试者已经接受所述拈抗剂，并且在第零天对所述受试者施用所述esa；
由此在第14天或更晚时间，所述受试者的血液血红蛋白水平为至少10g/dl，其中所述贫血得到治疗或预防。
11.一种用于在根据任何前述权利要求所述的方法或方案中用于治疗或预防受试者的贫血的组合疗法，所述组合包括
a.抗bmp6拈抗剂；
b.esa；以及
c.任选地用于在所述方法或方案中使用的说明书。
12.一种用于在根据任何前述配置所述的方法或方案中用于治疗或预防受试者的贫血的抗bmp6拈抗剂。
13.一种用于在治疗或预防受试者的贫血的方法中使用的抗骨形态发生蛋白6(bmp6)拈抗剂，所述方法包括：对所述受试者施用所述抗bmp6拮抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述贫血得到治疗或预防。
在一方面，所述拮抗剂包括抗bmp6抗体或片段或由其组成，所述方法包括：
(a)在起始日(d0)对所述受试者施用所述抗bmp6抗体或片段；以及
(b)在至少连续3周的时段内，所述时段从d0开始，施用多个剂量的esa，其中所述受试者的血液hb浓度在所述时段的整个持续时间内从d0的基线浓度升高，
使得：-
(i)在所述时段的整个持续时间内，hb浓度不低于基线hb浓度的100％；并且在所述时段期间，hb浓度达到基线的至少120％；和/或
(ii)在所述时段的整个持续时间内，hb浓度相对于基线增加至少1g/dl。
以下通过工作实验和数据的方式提供了进一步例示。
附图说明
图1：小鼠布鲁氏菌模型中的血红蛋白水平-抗体10mg/kg，第0天和第6天，无esa；
图2：小鼠布鲁氏菌模型中的血红蛋白水平-抗体10mg/kg，第0天和第6天，第1天有esa；
图3：小鼠布鲁氏菌模型中的血红蛋白水平-抗体10mg/kg，第0天和第6天，第7天有esa；
图4：治疗示意图；
图5：血红蛋白浓度；以及
图6：平均红细胞血红蛋白(mch)水平。
具体实施方式
由于铁是所有形式的生命的基础并且必须从环境中获取，所以在身体中的可用性和使用受到严格控制。铁稳态的关键调节剂是被称为铁调素的25氨基酸肽激素。铁调素由肝脏产生并且通过控制铁转运体分子铁转运蛋白的表达使主要的铁摄取和储存区室、十二指肠肠细胞和巨噬细胞保留铁。在感染和/或炎症期间以及通过红细胞生成激活免疫系统之后，铁调素本身通过稳态控制机制受铁水平调节。重要的是，在慢性炎性情况、感染以及还有某些癌症中，铁调素水平升高。升高的铁调素水平隔离肠细胞、巨噬细胞和肝细胞中的铁，从而抑制血红蛋白合成和红细胞生成。尽管事实是铁储存水平正常，但这会导致贫血。铁调素基因表达受被称为bmp6(骨形态发生蛋白6)的可溶性因子控制。bmp6被视为主要调节因子，因为在不存在bmp6的情况下，细胞因子(或其它bmp)不能单独地克服bmp6信号的缺陷。因此，诸位发明人集中于用于控制贫血中、例如慢性病贫血(acd)中的铁稳态异常失调的关键药物靶标的bmp6。
bmp6是一种被视为小鼠和人中铁调素产生的“主要”调节因子的高度保守的可溶性蛋白因子。因此，对小鼠施用bmp6会增加铁调素水平并降低血液和血清铁，而bmp6的抑制剂则相反。此外，敲除小鼠bmp6基因或bmp6途径内的人突变支持bmp6在控制铁调素和血液和血清铁水平中的中心作用。此外，针对bmp6的临床前和临床验证来自于在第i期研究中分别通过对啮齿动物或食蟹猴施用抗bmp6抗体或使用hjv-fc(fmx-8，ferrumaxinc)进行bmp6中和来增加可用铁水平。参考了andriopoulosjr.b、corradinie、xiay、faassesa、chens、grgurevicl、knutsonmd、pietrangeloa、vukicevics、linhy和babitt，2009年。bmp-6是铁调素表达和铁代谢的关键内源性调节剂。《自然遗传学(nat.genet.)》，第41卷，第4期，第482到487页；wo2016098079和us8980582。
本发明的各方面如下，并且这些方面(以及任何未编号的段落)可与本文所述的本发明的任何其它配置、实例、特征、方面或条款组合；可以提供用于在以下方面中的方法中使用(或可以在其中使用)的本发明的拮抗剂(例如，抗bmp6抗体或片段)或esa：-
1.一种维持受试者的至少10g/dl、10.5g/dl、11g/dl、11.5g/dl、12g/dl、12.5g/dl或13g/dl的血液血红蛋白水平的方法，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拮抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)。
在实例中，受试者的hb水平不超过11g/dl、11.5g/dl或12g/dl。
2.一种防止受试者的血液血红蛋白水平降低到低于10g/dl、10.5g/dl、11g/dl、11.5g/dl、12g/dl、12.5g/dl或13g/dl的方法，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拮抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)。
3.一种将患有贫血的受试者的血液血红蛋白升高到至少10g/dl、10.5g/dl、11g/dl、11.5g/dl、12g/dl、12.5g/dl或13g/dl的水平的方法，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拮抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述贫血得到治疗。
在任何方面的实例中，受试者在施用bmp6拈抗剂之前患有中度或重度贫血。在一个实施例中，所述方法的结果是受试者未患有贫血或患有轻度(并且不是中度或严重)贫血。
4.一种治疗或预防受试者的中度或重度贫血的方法，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拮抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述贫血得到治疗和预防。
5.一种治疗或预防患有炎性疾病或病症的受试者的贫血的方法，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拈抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述贫血得到治疗或预防。
在实例中，炎性疾病或病症选自由微生物感染(例如，细菌感染)炎症或类风湿性关节炎组成的组。在实例中，贫血是炎症贫血(也称为慢性病贫血，acd)。
6.一种消除或减少对患有贫血的受试者施用铁输注或输血的需要的方法，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拈抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述需要得到消除或减少。
在实施例中，所述方法减少铁的剂量(例如，每周、每两周或每月剂量)或铁的给药频率。
7.一种治疗或预防患有微生物(例如，细菌)感染的受试者的贫血的方法，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拮抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)。
8.一种减少对患有贫血的受试者施用用于治疗贫血的红细胞生成刺激剂(esa)的方法，所述方法包括：施用抗bmp6拮抗剂和所述esa，其中所述受试者的贫血得到治疗。
9.一种治疗患有贫血或有贫血风险的受试者的贫血或降低其贫血风险的方法，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拮抗剂和低剂量的红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述受试者的贫血得到治疗或者所述受试者的所述贫血风险得到降低。
所述剂量低于通常用于治疗或减少受试者、例如如男性或女性等人或成年人的贫血的标准剂量。用于治疗或预防的典型剂量对于所属领域的技术人员来说是显而易见的。例如，见第10方面。
epogen通常以多种配制品配制在小瓶中。使用等渗氯化钠/柠檬酸钠缓冲溶液配制的单剂量小瓶以多种强度供应。每个1ml小瓶在注射用水中含有2000单位、3000单位、4000单位或10,000单位的依泊汀α、白蛋白(人)(2.5mg)、柠檬酸(0.06mg)、氯化钠(5.9mg)以及柠檬酸钠(5.8mg)，usp(ph6.9±0.3)。使用等渗氯化钠/磷酸钠缓冲液配制的单剂量1ml小瓶在注射用水中含有40,000单位的依泊汀α白蛋白(人)(2.5mg)、柠檬酸(0.0068mg)、氯化钠(5.8mg)、柠檬酸钠(0.7mg)、无水磷酸二氢钠(1.8mg)以及一水磷酸一氢钠(1.2mg)，usp(ph6.9±0.3)。多剂量2ml小瓶在每1ml注射用水中含有10,000单位依泊汀α、白蛋白(人)(2.5mg)、苯甲醇(1％)、氯化钠(8.2mg)以及柠檬酸钠(1.3mg)，usp(ph6.1±0.3)。多剂量1ml小瓶在每1ml注射用水中含有20,000单位依泊汀α、白蛋白(人)(2.5mg)、苯甲醇(1％)、氯化钠(8.2mg)、柠檬酸(0.11mg)以及柠檬酸钠(1.3mg)，usp(ph6.1±0.3)。在本发明的实例中，esa作为这些配制品之一施用。
10.根据任何前述方面所述的方法，其中esa是
a.依泊汀α并且以小于1000单位、1500单位、2500单位、5000单位、11000单位、18000单位、34000单位或90000单位的每周剂量施用，任选地其中所述受试者之前已经分别接受过＜1500单位、1500单位到2499单位、2500单位到4999单位、5000单位到10999单位、11000单位到17999单位、18000单位到33999单位、34000单位到89999单位或≥90000单位的每周依泊汀α治疗；
b.达贝泊汀α或
c.达贝泊汀α或
11.根据任何前述方面所述的方法，其中所述抗bmp6拮抗剂是抗体并且以不超过30mg/kg(例如，0.1mg/kg至30mg/kg)的总剂量如每1周、每2周或每3周或每个月、每2个月或每3个月施用。施用可以是例如iv或皮下施用，并且受试者是人，如人类成人。
12.一种用于治疗或预防患有贫血或有贫血风险的受试者的贫血的治疗方案，所述方案包括：对所述受试者同时或连续施用抗bmp6拈抗剂和esa，其中
a.在第零天对所述受试者施用所述拮抗剂；并且不迟于第56天、第28天、第14天或第7天(例如，在第1天、第6天或第7天)对所述受试者施用所述esa；或者
b.在第零天对所述受试者施用所述esa；并且不迟于第56天、第28天、第14天或第7天(例如，在第1天、第6天或第7天)对所述受试者施用所述拈抗剂；或者
c.在第零天对所述受试者同时施用所述拮抗剂和所述esa；或者
d.在第零天所述受试者已经接受所述esa，并且在第零天对所述受试者施用所述拮抗剂；或者
e.在第零天所述受试者已经接受所述拮抗剂，并且在第零天对所述受试者施用所述esa；
由此在第14天或更晚时间(例如，在第28天、第56天或第70天)，所述受试者的血液血红蛋白水平为至少10，10.5g/dl、11g/dl、11.5g/dl、12g/dl、12.5g/dl或13g/dl，其中所述贫血得到治疗或预防。
任选地，在不晚于第7天第二次施用拈抗剂(例如，在第6天施用拮抗剂)。
13.根据任何前述方面所述的方法或方案，其中以不超过7天的间隔对所述受试者施用所述抗bmp6拮抗剂和所述esa。
14.根据任何前述方面中任一项所述的方法或方案，其中所述方法或方案在受试者中将受试者中的血液血红蛋白水平维持处于大于10g/dl。
15.根据任何前述方面中所述的方法或方案，其中所述方法或方案在所述受试者已经接受所述抗bmp6拮抗剂和所述esa之后至少13天或14天将所述受试者的血液血红蛋白水平维持处于或升高到至少10g/dl。
16.根据方面14或15所述的方法或方案，其中以不超过1天的间隔对所述受试者施用所述抗bmp6拈抗剂和所述esa。
17.根据任何前述方面所述的方法或方案，其中对所述受试者同时施用所述抗bmp6拮抗剂和所述esa。
18.根据任何前述方面所述的方法或方案，其中所述受试者的所述血液血红蛋白水平被防止降低到小于10g/dl、10.5g/dl、11g/dl、11.5g/dl、12g/dl、12.5g/dl或13g/dl(例如，在第14天)。
19.根据任何前述方面所述的方法或方案，其中所述受试者的所述血液血红蛋白升高到10g/dl、10.5g/dl、11g/dl、11.5g/dl、12g/dl、12.5g/dl或13g/dl的水平(例如，在第14天)。
20.根据任何前述方面所述的方法或方案，其中所述受试者的中度或重度贫血得到预防(例如，在第14天)。
21.根据任何前述方面所述的方法或方案，其中所述受试者患有
a.炎性疾病或病症；或
b.感染；
c.肾病；
d.hiv或经历hiv治疗；或
e.癌症；并且
所述受试者的贫血得到治疗或预防。
在实例中，受试者患有hiv感染、肝炎、类风湿性关节炎、慢性肾病或终末期肾病。例如，感染是革兰氏阴性细菌感染。例如，感染是革兰氏阳性细菌感染。
使用抗hiv疗法治疗的hiv感染人可能会患上贫血。因此，本发明可用于治疗或预防这种患者的贫血。在实例中，所述方法或方案治疗或预防施使用抗hiv疗法、例如施用＜4200mg/周齐多夫定的hiv感染人的贫血。
使用抗癌化疗(例如，免疫疗法，例如，通过对受试者施用免疫检查点抑制剂，例如抗ctla4、抗pd-l1、抗tigit、抗icos或抗pd1抗体)治疗的癌症患者可能会患上贫血。因此，本发明可用于治疗或预防这种患者的贫血。在实例中，所述方法或方案治疗或预防患有癌症的人的贫血。在所属领域中，初始地，如促红细胞生成素等esa通常以150单位/kg的剂量每周3次地iv或sc施用给这种患者；可替代地，以40,000单位的计量每周一次地sc施用，直到完成化疗疗程。在实例中，本发明治疗或预防人类癌症患者的贫血，其中esa以低于150单位/kg的剂量每周3次地静脉内或皮下施用给人；或以每周低于450单位/kg的总剂量施用；或以低于40,000单位的总剂量每周皮下施用。
所属领域中使用esa治疗来减少患者、例如经历外科手术的患者对红细胞(rbc)输注的需要。因此，esa治疗例如用于围手术期血红蛋白＞10g/dl但≤13g/dl、有由外科手术、例如选择性非心脏非血管外科手术引起的围手术期失血高风险的人类患者。esa以300单位/kg每天一次地sc施用持续15天(外科手术前10天、外科手术当天、外科手术后4天)；可替代地，在外科手术前21天、14天和7天以及外科手术当天以600单位/kg分4个剂量sc施用。在实例中，本发明治疗或预防人类外科手术患者的贫血，其中esa以低于300单位/kg每天一次地施用给人持续15天(外科手术前10天、外科手术当天、外科手术后4天)；或低于4500单位/kg的总共15天剂量；或者低于600单位/kg按3到5个或4个剂量，例如在外科手术前21天、14天和7天以及外科手术当天施用。
22.根据方面21所述的方法，其中受试者的中度或重度贫血得到治疗或预防。
23.根据任何前述方面所述的方法或方案，其中所述受试者是哺乳动物。
24.一种用于在根据任何前述方面所述的方法或方案中用于治疗或预防受试者的贫血的组合疗法，所述组合包括
a.抗bmp6拈抗剂；
b.esa；以及
c.任选地用于在所述方法或方案中使用的说明书。
25.一种用于在根据任何前述方面所述的方法或方案中用于治疗或预防受试者的贫血的抗bmp6拮抗剂。
26.根据方面24所述的组合或根据方面25所述的拮抗剂，其用于治疗或预防中度或重度贫血。
27.根据方面24到26中任一项所述的拮抗剂的组合，其与抗炎剂组合。
28.根据任何前述方面所述的方法、方案、组合或拈抗剂，其中所述拈抗剂包括抗bmp6抗体结合位点，例如其中所述拈抗剂是抗体或抗bmp6捕获剂。
在实例中，捕获剂包括与人抗体fc区融合的人bmp6受体结构域。在实施例中，fc包括人γ-1或-4重链恒定区。
29.根据任何前述方面所述的方法、方案、组合或拮抗剂，其中所述esa是促红细胞生成素。
30.根据方面1到23、28和29中任一项所述的方法或方案，其中对受试者施用抗炎剂。
在实例中，本发明使用抗bmp6单克隆抗体(mab)来调动内源性铁储备并增加血红蛋白合成以及任选地还有红细胞生成。在一方面，本发明可以减少acd患者同时且普遍使用静脉内铁输注或输血的需要。另外地或可替代地，本发明可以减少使用esa(例如，epo)进行的基本护理标准治疗的剂量或使esa(例如，epo)非反应性患者(或具有低反应性的患者)对esa和抗bmp6拮抗剂的共同施用有反应。另外地或可替代地，本发明可以治疗或预防其贫血对esa标准护理来说难治或无反应的患者的贫血。esa可能禁用于患有不受控高血压或患有因接受esa(例如，达贝泊汀α，如
因此，在本发明的一个实施例中，受试者(例如，人)
i.对esa(例如，达贝泊汀α或依泊汀α)来说难治或无反应；
ii.患有或已经患有高血压(例如，不受控高血压)；或者
iii.患有或已经患有纯红细胞再生障碍(例如，由接受如达贝泊汀α或依泊汀α等esa引起)。
与如esa治疗等药物治疗相关的“难治”对于所属领域的技术人员来说是显而易见的，并且例如意味着受试者具有esa抗性或是esa低反应者(即，具有低于平均的反应性)并且未通过使用esa的护理标准得到有效贫血治疗。
esa通常用于将血红蛋白维持在既使输注最小化又最大限度地满足患者需求的最低水平。如上所述，本发明在其各种配置、方面、实例和实施例中可用于esa免除贫血治疗，即能够使用低于标准剂量的esa进行esa治疗。考虑到esa的潜在有害副作用，这是有用的。表1到表4提供了这方面的相关信息。
表1：
在实例中，受试者是未进行透析的慢性肾病(ckd)患者。在实例中，受试者是进行透析的慢性肾病(ckd)患者。在实例中，受试者是化疗患者(例如，接受或已经接受针对癌症的化疗治疗)。
表2：
在实施例中，本发明的治疗或预防在受试者中减少了表2中列出的一种或多种副作用的发生率或风险，例如，“常见”、“较常见”或“非常常见”副作用中的一种或多种。
在一方面，本发明提供了减少患有贫血或有贫血风险的受试者的esa疗法副作用的方法，所述方法包括：对受试者施用抗bmp6拮抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述贫血得到治疗或预防。任选地，减少了表2中列出的一种或多种esa副作用(例如，“常见”、“较常见”或“非常常见”副作用中的一种或多种)的发生率或风险。在实例中，疗法是贫血治疗。在实例中，疗法是贫血预防。在实例中，贫血是中度或重度贫血。
表3：
在实施例中，本发明的治疗或预防在受试者中降低了表3中列出的一种或多种副作用的发生率或风险，例如，缩短了总生存期和/或增加了肿瘤进展或复发或者如中风等心血管或血栓栓塞反应的风险，其中受试者是乳腺癌、非小细胞肺癌、头颈癌、淋巴癌和宫颈癌患者。
在一方面，本发明提供了减少患有贫血或有贫血风险的受试者的esa疗法副作用的方法，所述方法包括：对受试者施用抗bmp6拈抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述贫血得到治疗或预防。任选地，降低了表3中列出的一种或多种esa副作用的发生率或风险(例如，缩短了总生存期和/或增加了肿瘤进展或复发或者如中风等心血管或血栓栓塞反应的风险，其中受试者是乳腺癌、非小细胞肺癌、头颈癌、淋巴癌和宫颈癌患者)。在实例中，疗法是贫血治疗。在实例中，疗法是贫血预防。在实例中，贫血是中度贫血。在实例中，贫血是中度到重度贫血。在实例中，贫血是重度贫血。在实例中，本发明中的贫血是由骨髓抑制化疗引起的贫血。
表4：基于之前的依泊汀α剂量(单位/周)进行透析的患有ckd的患者的估计aranesp起始剂量(mcg/周)
*对于接受＜1,500单位/周的每周依泊汀α剂量的小儿患者，现有数据不足以确定aranesp转换剂量。
本发明的方面提供(i)和(ii)
(i)一种减少对患有贫血的受试者施用用于治疗贫血的红细胞生成刺激剂(esa)的方法，所述方法包括：施用抗bmp6拈抗剂和所述esa，其中所述受试者的贫血得到治疗。
(ii)一种治疗患有贫血或有贫血风险的受试者的贫血或降低其贫血风险的方法，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拈抗剂和低剂量的红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述受试者的贫血得到治疗或者所述受试者的所述贫血风险得到降低。
在这些方面的实例中，esa是
a.依泊汀α并且以小于1000单位、1500单位、2500单位、5000单位、11000单位、18000单位、34000单位或90000单位的每周剂量施用，任选地其中所述受试者之前已经分别接受过＜1500单位、1500单位到2499单位、2500单位到4999单位、5000单位到10999单位、11000单位到17999单位、18000单位到33999单位、34000单位到89999单位或≥90000单位的每周依泊汀α治疗；
b.达贝泊汀α或
c.达贝泊汀α或
在实例中，esa是
(i)依泊汀α并且以3000单位到30000单位的范围内的每周剂量施用；或者
(ii)达贝泊汀α或
其中受试者是人，例如成年人。
在实例中，血液血红蛋白升高到或保持在大于10g/dl的水平。
在实例中，受试者是成年人。在实例中，受试者是小儿人。在实例中，受试者是进行透析治疗的人类ckd患者。在实例中，受试者是患有终末期肾病的人。
在本发明的方法中，对受试者施用治疗有效或预防有效量的拮抗剂和esa。在实例中，抗bmp6拮抗剂和esa以不超过10天、14天、21天或28天的间隔施用给受试者。例如，抗bmp6拮抗剂和esa以不超过1个月或2个月的间隔施用给受试者。
红细胞生成刺激剂(esa)的实例是依泊汀α、
在实例中，esa包括例如选自下表的重组促红细胞生成素或由其组成。促红细胞生成素具有产生α、β、δ和ω形式的各种糖基化模式：
表5：示例促红细胞生成素
在实例中，本发明的esa选自由α、β、δ、ζ和ω形式组成的组。
在实例中，esa是缺氧诱导因子脯氨酰羟化酶(hif-ph)抑制剂，例如，罗沙司他(roxadustat)或fg-4592。hif是体内红细胞(rbc)产生的主要调节因子并且是治疗贫血的潜在新颖机制。这种新颖作用机制被称为缺氧诱导因子-脯氨酰羟化酶(hif-ph)抑制剂。hif-ph抑制剂通过模拟身体对贫血的自然反应而起作用。这允许对红细胞生成系统进行受控的自适应刺激。整个系统的这种活化导致红细胞(rbc)产量增加和骨髓的铁供应稳定性增加，这确保了铁正确地结合到这种rbc产量所需的血红蛋白中。这种自适应模拟非常类似于人在海拔上升时诱导的自然反应。海拔较高时，血流中循环的低水平氧气导致肾脏和肝脏中的相关细胞中的hif-ph活性降低。降低的hif-ph活性稳定并增加蛋白hif1α和hif2α(统称为hifα)的细胞内水平。对于大多数细胞来说，hif2α的稳定性大于hif1α的稳定性，这最终导致促红细胞生成素(epo)分泌增加以及随后的rbc产量增加。
hif-ph抑制剂通过阻断促进hifα蛋白的分解的脯氨酰羟化酶的作用而工作。当分解受到抑制时，细胞中的这些hifα蛋白水平增加。这些hif是主要的蛋白介质，其使身体及其所有个体细胞能够适应氧气水平的变化。两种hifα蛋白始终如一地产生，并且其在细胞中的水平通过hif-ph酶的活性来调节，所述hif-ph酶靶向hifα蛋白以进行降解。hif1α有助于细胞在非常低的氧气条件下生存，而hif2α有助于细胞和身体适应氧气的适度变化，这种情况将随着海拔从海平面变化为高达7500英尺而发生。当hifα稳定时，其行进到细胞的细胞核，其在所述细胞核处结合到蛋白hifβ。当结合在一起时，它们诱导产生epo和若干其它蛋白的遗传信号。hif-ph抑制剂大大增加hifα水平，其方式与氧气减少通过抑制身体的hif-ph酶来增加hifα水平相同。随着hifα持续稳定(通过停留在较高海拔或通过每天给予hif-ph抑制剂)，血红蛋白和rbc的水平将升高以增加血液中循环的氧气量。
在实例中，拮抗剂反而是抗bmp6抗体或抗bmp6抗体结合片段。抗bmp6抗体的实例是mab507，其可从r&dsystems(单克隆小鼠igg2b，克隆#74219)商购获得。在us8980582、wo2016098079和us20160176956a1中公开了其它适当抗体，所述文献的公开内容(以及明确地，抗体、可变区和其中cdr的序列)通过引用并入本文，以便可能地在本发明中用作抗bmp6拈抗剂。
在实施例中，拈抗剂包括结合到人bmp-6(seqidno：1)的抗体或其抗原结合片段或由其组成，所述抗体或其抗原结合片段包括轻链可变区(lcvr)和重链可变区(hcvr)，其中lcvr包括互补决定区(cdr)lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且hcvr包括cdrhcdr1、hcdr2和hcdr3，其中lcdr1是seqidno：2的多肽，lcdr2是seqidno：3的多肽，lcdr3是seqidno：4的多肽，hcdr1是seqidno：5的多肽，hcdr2是seqidno：6或seqidno：7的多肽，并且hcdr3是seqidno：8的多肽。这些seqidno是us8980582中公开的那些，并且这些序列通过引用明确并入本文，以便可能地用于本发明中并且以便可能地包含在本文的一项或多项权利要求中。
在实施例中，拈抗剂包括结合到人bmp-6(seqidno：1)的抗体或其抗原结合片段或由其组成，所述抗体或其抗原结合片段包括轻链可变区(lcvr)和重链可变区(hcvr)，其中lcvr包括互补决定区(cdr)lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且hcvr包括cdrhcdr1、hcdr2和hcdr3，其中lcdr1是seqidno：2的多肽，lcdr2是seqidno：3的多肽，lcdr3是seqidno：4的多肽，hcdr1是seqidno：5的多肽，hcdr2是seqidno：6的多肽，并且hcdr3是seqidno：8的多肽。这些seqidno是us8980582中公开的那些，并且这些序列通过引用明确并入本文，以便可能地用于本发明中并且以便可能地包含在本文的一项或多项权利要求中。
在实施例中，拈抗剂包括结合到人bmp-6(seqidno：1)的抗体或其抗原结合片段或由其组成，所述抗体或其抗原结合片段包括轻链可变区(lcvr)和重链可变区(hcvr)，其中lcvr包括互补决定区(cdr)lcdr1、lcdr2和lcdr3，并且hcvr包括cdrhcdr1、hcdr2和hcdr3，其中lcdr1是seqidno：2的多肽，lcdr2是seqidno：3的多肽，lcdr3是seqidno：4的多肽，hcdr1是seqidno：5的多肽，hcdr2是seqidno：7的多肽，并且hcdr3是seqidno：8的多肽。这些seqidno是us8980582中公开的那些，并且这些序列通过引用明确并入本文，以便可能地用于本发明中并且以便可能地包含在本文的一项或多项权利要求中。
在实施例中，拈抗剂包括结合到人bmp-6(seqidno：1)的抗体或其抗原结合片段或由其组成，所述抗体或其抗原结合片段包括lcvr和hcvr，其中lcvr是seqidno：9的多肽，并且hcvr是seqidno：10或seqidno：11的多肽。在进一步实施例中，拈抗剂包括结合到人bmp-6(seqidno：1)的抗体或其抗原结合片段或由其组成，所述抗体或其抗原结合片段包括lcvr和hcvr，其中lcvr是seqidno：9的多肽，并且hcvr是seqidno：10的多肽。在另一实施例中，拈抗剂包括结合到人bmp-6(seqidno：1)的抗体或其抗原结合片段或由其组成，所述抗体或其抗原结合片段包括lcvr和hcvr，其中lcvr是seqidno：9的多肽，并且hcvr是seqidno：11的多肽。这些seqidno是us8980582中公开的那些，并且这些序列通过引用明确并入本文，以便可能地用于本发明中并且以便可能地包含在本文的一项或多项权利要求中。
在实施例中，拈抗剂包括结合到人bmp-6(seqidno：1)的抗体或由其组成，所述抗体包括lcvr和hcvr，其中lcvr是seqidno：9的多肽，并且hcvr是seqidno：10或seqidno：11的多肽。在进一步实施例中，本发明提供了一种结合到人bmp-6(seqidno：1)的抗体，所述抗体包括lcvr和hcvr，其中lcvr是seqidno：9的多肽，并且hcvr是seqidno：10的多肽。在另一实施例中，拈抗剂包括结合到人bmp-6(seqidno：1)的抗体或由其组成，所述抗体包括lcvr和hcvr，其中lcvr是seqidno：9的多肽，并且hcvr是seqidno：11的多肽。这些seqidno是us8980582中公开的那些，并且这些序列通过引用明确并入本文，以便可能地用于本发明中并且以便可能地包含在本文的一项或多项权利要求中。
在实施例中，拮抗剂包括结合到人bmp-6(seqidno：1)的抗体或由其组成，所述抗体包括轻链(lc)和重链(hc)，其中lc是seqidno：12的多肽，并且hc是seqidno：13或seqidno：14的多肽。在进一步实施例中，拈抗剂包括结合到人bmp-6(seqidno：1)的抗体或由其组成，所述抗体包括lc和hc，其中lc是seqidno：12的多肽，并且hc是seqidno：13的多肽。在另一实施例中，拮抗剂包括结合到人bmp-6(seqidno：1)的抗体或由其组成，所述抗体包括lc和hc，其中lc是seqidno：12的多肽，并且hc是seqidno：14的多肽。这些seqidno是us8980582中公开的那些，并且这些序列通过引用明确并入本文，以便可能地用于本发明中并且以便可能地包含在本文的一项或多项权利要求中。
在实施例中，拈抗剂包括结合到人bmp-6(seqidno：1)的抗体或由其组成，所述抗体包括两个轻链和两个重链，其中每个轻链是seqidno：12的多肽，并且每个重链是seqidno：13的多肽。在实施例中，拮抗剂包括结合到人bmp-6(seqidno：1)的抗体或由其组成，所述抗体包括两个轻链和两个重链，其中每个轻链是seqidno：12的多肽，并且每个重链是seqidno：14的多肽。这些seqidno是us8980582中公开的那些，并且这些序列通过引用明确并入本文，以便可能地用于本发明中并且以便可能地包含在本文的一项或多项权利要求中。
在实施例中，本发明提供了一种药物组合物，其包括本发明的抗bmp6拮抗剂(例如，抗体或其抗原结合片段)和可接受的载剂、稀释剂或赋形剂。更具体地，本发明的组合物进一步包括一种或多种额外的治疗剂，例如esa和/或抗炎剂。适当的抗炎剂可以是抗体或抗体片段，例如抗tnfα抗体(例如，阿达木单抗、
在实例中，抗bmp6拮抗剂、抗体或片段以小于约1x10-8m，优选地小于约1x10-9m的kd结合到bmp6，所述kd如通过所属领域中已知的常见方法、例如通过在37℃下使用表面等离子体共振(spr)生物传感器确定的。
“有效量”是指本发明的拮抗剂(例如，抗体)或esa或本发明的药物组合物的、将对受试者、哺乳动物或人引起研究人员、医生或其他临床医生寻求的生物或医学反应或期望治疗效果的量。有效量可以根据如疾病状态、年龄、性别和个体体重等因素以及抗体和/或esa在个体中引起期望反应的能力而变化。有效量也是治疗有益效果超过任何毒性或有害作用的量。
术语“治疗”(treatment、treat、treating)等意味着包含减缓或逆转如贫血、中度贫血、重度贫血或血液血红蛋白减少等疾病的进展。这些术语还包含减轻、改善、减弱、消除或减少疾病或病症(如贫血、中度贫血、重度贫血或血液血红蛋白减少)的一种或多种症状，即使所述疾病或病症实际上并未完全消除。受试者或患者是指将受益于对bmp-6活性的抑制的哺乳动物，优选地患有疾病、障碍或病症(例如，贫血或有贫血风险)的人。术语“预防”是例如降低如贫血等疾病或病症的风险。
本发明的esa、抗bmp6拮抗剂抗体或其抗原结合片段或包括其的药物组合物可以通过非肠道途径(例如，皮下、静脉内、腹膜内、肌肉内或透皮)施用。可以按照单个计量或多个计量、单独地或组合药学上可接受的载剂和/或稀释剂对受试者进行施用。本发明的药物组合物、组合或拮抗剂可以通过所属领域中熟知的方法制备(例如，《雷明顿：药学科学与实践(remington：thescienceandpracticeofpharmacy)》，第19版，(1995年)，a.gennaro等人，mackpublishingco.)并且可以包括一种或多种药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂或与其组合。
在实例中，受试者在施用bmp6拮抗剂之前患有中度或重度贫血，并且中度或重度贫血得到治疗。在实施例中，受试者在施用之前患有中度贫血，并且在治疗之后，受试者患有轻度贫血或未患有贫血。在实施例中，受试者在施用之前患有重度贫血，并且在治疗之后，受试者患有轻度贫血、中度贫血或未患有贫血。在实施例中，在治疗之后，受试者患有轻度贫血或未患有贫血，并且未患有中度或重度贫血。在另一实施例中，在治疗之后，受试者未患有贫血。在实施例中，受试者在施用之前具有小于9.5g/dl的血液血红蛋白水平，并且在治疗之后，受试者具有至少10g/dl、11g/dl、12g/dl、13g/dl或14g/dl的血液血红蛋白水平。
当孕妇血的红蛋白浓度下降到低于11g/dl，非孕妇的红蛋白浓度下降到低于12g/dl，并且男性的红蛋白浓度下降到低于13g/dl时，通常考虑贫血。
贫血的严重程度按以下血红蛋白浓度范围分类：
·当血红蛋白在9.5g/dl到13.0g/dl之间时，考虑轻度贫血
·当血红蛋白在8.0g/dl到9.5g/dl之间时，考虑中度贫血
·对于血红蛋白浓度低于8.0g/dl，考虑严重贫血
在实例中，血红蛋白的水平等于或相当于海平面处的测量结果。
在实施例中，受试者是人类男性，例如成人或婴儿。在实施例中，受试者是人类女性，例如成人或婴儿，例如未怀孕女性或怀孕女性。在实例中，受试者是透析患者。婴儿可以是＞1个月龄的人。
在实例中，所述方法是消除或减少向患有贫血的受试者施用铁输注或输血的需要例如以便减少对受试者的铁剂量或铁给药频率的方法。
本发明可以包括同时或依次施用抗bmp6拈抗剂和esa。在实例中，拮抗剂和esa以不超过1个月、4周、3周、2周、1周、10天、9天、8天、7天、6天、5天、4天、3天、2天或1天的间隔施用。如本文举例说明的，如果间隔不超过7天(例如，不超过一天)，则施用拮抗剂和esa可能是有效的。在实例中，抗bmp6拮抗剂和esa以不超过10天、14天、21天或28天的间隔施用给受试者。
在实例中，esa每周施用2次、3次或4次。在实例中，esa每月施用1次、2次、3次或4次或者在8周时段内施用。在实例中，esa(例如，依泊汀α)以每周＜3000单位/kg、2900单位/kg、2800单位/kg、2700单位/kg、2600单位/kg、＜2500单位/kg、2500单位/kg、2400单位/kg、2300单位/kg、2200单位/kg、2100单位/kg、＜2000单位/kg、2000单位/kg、1900单位/kg、1800单位/kg、1700单位/kg、1600单位/kg、1500单位/kg、1400单位/kg、1300单位/kg、1200单位/kg、1100单位/kg或1000单位/kg的总剂量施用。在另一实例中，esa每月施用1次、2次、3次或4次或者在8周时段内施用。在实例中，esa(例如，达贝泊汀α)以每周＜15mcg/kg、＜30mcg/kg、12mcg/kg、11mcg/kg、10mcg/kg、9mcg/kg、8mcg/kg、7mcg/kg、6mcg/kg或5mcg/kg的总剂量施用。
在实例中，esa和/或拮抗剂静脉内或皮下施用给受试者。
在实例中，贫血是接受或已经接受齐多夫定治疗的受试者的贫血。
任选地，本发明的任何配置还用于以下各项中的一项或多项：
(a)增加或维持血铁增加，例如，用于治疗或降低贫血风险；
(b)治疗缺铁；
(c)治疗或降低慢性炎症贫血(aci)的风险；
(d)治疗或降低慢性病贫血(acd)的风险；
(e)治疗或降低与癌症、肾脏病症或gvhd相关联的贫血风险；
(f)增加血液或血清铁水平；
(g)增加网织红细胞计数；
(h)增加红细胞计数；
(i)增加血红蛋白；以及
(j)增加受试者(例如，人)的血细胞比容。
在实施例中，本发明用于调节(例如，增加)受试者的红细胞生成。
在实施例中，受试者是包括bmp6基因snprs111588693的人。这可能与贫血倾向增加有关。
在实例中，贫血是慢性病贫血(acd)，如癌症贫血或慢性肾病贫血(ckd)。当过度活跃的炎性细胞因子引起铁稳态失调、红细胞生成减少和红细胞寿命缩短时，如癌症、肾病和自身免疫疾病等某些慢性疾病可能导致acd。铁调素已经被确定为参与铁稳态的关键激素；高水平的铁调素已经与acd中观察到的铁限制性红细胞生成相关联。已经显示，bmp-6增加铁调素表达。在实例中，本发明用于降低受试者的铁调素水平或维持降低的铁调素水平。
ckd贫血是作为患有ckd的患者的早期和常见并发症的贫血。癌症贫血是由血液恶性肿瘤和一些实体瘤引起的贫血；而化疗诱导的(例如，免疫疗法诱导的)贫血是由用化疗剂治疗癌症患者引起的贫血。ckd贫血加剧糖尿病性神经病、心血管疾病和视网膜病，以及其它病症。癌症相关贫血与相对死亡风险增加相关联。癌症相关贫血的当前治疗选择受限于输血，因为红细胞生成刺激剂仅适用于化疗诱导的贫血。
在实例中，受试者患有慢性疾病，如癌症(例如，血液恶性肿瘤或实体瘤)、肾病、自身免疫病或化疗诱导的贫血。在实例中，受试者(例如，人)患有ckd、以及糖尿病性神经病、心血管疾病和视网膜病中的一种或多种。
在实例中，贫血是铁调素相关的铁限制性贫血。在实例中，贫血是铁难治性缺铁性贫血(irida)。在实施例中，irida由受试者的tmprss6基因的缺陷引起，例如，其中irida由tmprss6基因突变(例如，snp，如rs855791；rs2543519；rs2235324或rs1421312)引起。
在实例中，所述方法是除了或代替治疗或预防贫血的治疗或预防sjogren综合征的方法。
在实例中，本发明用于增加受试者(例如，人)的血铁水平、血清铁水平、网织红细胞计数、红细胞计数、血红蛋白和/或血细胞比容。
在实施例中，本发明提供了抗bmp6拈抗剂和esa在制造药剂中的用途。在实施例中，本发明提供了抗bmp6拈抗剂和esa在制造用于治疗或预防贫血、例如中度到重度贫血的药剂中的用途。在另一实施例中，本发明提供了抗bmp6拈抗剂和esa在制造用于治疗慢性病贫血的药剂中的用途。在另一实施例中，本发明提供了抗bmp6拮抗剂和esa在制造用于治疗慢性肾病贫血的药剂中的用途。在另一实施例中，本发明提供了抗bmp6拈抗剂和esa在制造用于治疗癌症贫血的药剂中的用途。在实施例中，本发明提供了抗bmp6拮抗剂和esa在制造用于治疗irida的药剂中的用途。在另一实施例中，本发明提供了抗bmp6拈抗剂和esa在制造用于治疗irida的药剂中的用途，其中irida由tmprss6基因突变(例如，snp，如rs855791；rs2543519；rs2235324或rs1421312)引起。在实施例中，本发明提供了抗bmp6拮抗剂和esa在制造用于治疗sjogren综合征的药剂中的用途。
条款
本发明的条款如下，并且这些条款(以及任何未编号的段落)可与本文所述的本发明的任何其它配置、实例、特征或方面组合；可以提供用于在以下条款中的方法中使用(或可以在其中使用)的本发明的拈抗剂(例如，抗bmp6抗体或片段)或esa：-
1.一种用于在治疗或预防受试者的贫血的方法中使用的抗骨形态发生蛋白6(bmp6)拮抗剂，所述方法包括：对所述受试者施用所述抗bmp6拈抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述贫血得到治疗或预防。
在实施例中，所述方法用于治疗所述受试者的贫血，其中所述贫血得到治疗。
在实例中，所述拮抗剂包括抗bmp6抗体或片段、例如人、人源化或嵌合抗体或由其组成。在抗体或片段的替代方案中，本发明考设想了不同的bmp6拮抗剂，例如抗bmp6捕获剂或hjv-fc。
2.根据条款1所述的拮抗剂，其中所述拈抗剂包括抗bmp6抗体或片段或由其组成，所述方法包括：
(a)在起始日(d0)对所述受试者施用所述抗bmp6抗体或片段；以及
(b)在至少连续3周的时段内，所述时段从d0开始，施用多个剂量的esa，其中所述受试者的血液hb浓度在所述时段的整个持续时间内从d0的基线浓度升高，
使得：-
(i)在所述时段的整个持续时间内，hb浓度不低于基线hb浓度的100％；并且在所述时段期间，hb浓度达到基线的至少120％；和/或
(ii)在所述时段的整个持续时间内，hb浓度相对于基线增加至少1g/dl。
在本文中的任何条款中，在实例中，在所述时段的整个持续时间内，hb浓度相对于基线增加至少1g/dl，例如，至少1.5g/dl、2g/dl或2.5g/dl。在实例中，患者、例如成人男性或女性人的hb浓度不超过11g/dl、11.5g/dl或12g/dl。
可以使用从受试者获得的一种或多种血液样本确定hb浓度和mch(见下文)。例如，如使用在所述时段的每周结束时采集的血液样本(和使用在d0采集的样本确定的基线)确定的。
3.一种用于在治疗贫血的方法中使用的一定量的抗bmp6抗体或片段和一定量的esa(例如，包括多个剂量的所述esa)的组合，其中所述抗体、所述片段和所述方法是根据条款2所述的抗体、片段和方法。
4.根据条款3所述的组合，其中所述方法包括：从所述量的抗体或片段获得单个剂量，其中所述单个剂量在d0施用给所述受试者；以及获得多个剂量的所述esa，其中从d0起每周施用至少一个剂量。
在本文中的任何条款中，在实例中，第一剂量的esa在d0施用。
5.根据条款3或4所述的组合，其中所述抗体或片段由药用组合物构成，其中所述抗体或片段与某一剂量的所述esa混合以在d0施用给所述受试者。
6.一种医疗试剂盒，其包括：根据条款3到5中任一项所述的组合；第一无菌容器，其包括所述量的抗体或片段；以及第二无菌容器，其包括所述量的eas；以及任选地用于实施所述方法的说明书。
7.根据条款1所述的拈抗剂，其中所述拮抗剂包括促红细胞生成素刺激剂(esa)(例如，由多个剂量的所述esa构成)或由其组成，所述方法包括：
(a)在起始日(d0)对所述受试者施用抗bmp6抗体或片段；以及
(b)在至少连续3周的时段内，所述时段从d0开始，施用多个剂量的所述esa，其中所述受试者的血液血红蛋白(hb)浓度在所述时段的整个持续时间内从d0的基线浓度升高，
使得：-
(i)在所述时段的整个持续时间内，hb浓度不低于基线hb浓度的100％；并且在所述时段期间，hb浓度达到基线的至少120％；和/或
(ii)在所述时段的整个持续时间内，hb浓度相对于基线增加至少1g/dl。
8.根据条款2到7中任一项所述的拈抗剂、组合或试剂盒，其中
(iii)所述连续周时段的最后一天的所述hb浓度是紧接在所述最后一天之前的第7天的所述hb浓度的至少120％。
9.根据条款2到8中任一项所述的拈抗剂、组合或试剂盒，其中在施用所述抗bmp6抗体或片段的24小时内对所述受试者施用esa。
10.根据条款2到9中任一项所述的拈抗剂、组合或试剂盒，其中所述连续周时段由连续3周或4周的时段组成。
11.根据条款2到10中任一项(例如，条款10)所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中在所述时段期间，hb浓度相对于基线达到1g/dl到8g/dl的范围内的增加。
在本文中的任何条款中，在实例中，在所述时段期间，hb浓度相对于基线达到1到3g/dl、2.5g/dl、2g/dl、1.5g/dl或1.25g/dl的范围内的增加。例如，hb浓度达到1g/dl到2g/dl的增加。
12.根据条款2到11中任一项所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中所述时段由连续3周或4周组成并且在所述时段结束时hb浓度达到基线的至少150％。
13.根据条款2到12中任一项所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中所述时段由连续3周或4周组成并且
(a)在所述时段的整个持续时间内，hb浓度不低于基线hb浓度的110％；并且在所述时段期间，hb浓度达到基线的至少150％；和/或
(b)在所述时段的整个持续时间内，hb浓度相对于基线增加至少1g/dl并且在所述时段期间，hb浓度相对于基线达到1g/dl到8g/dl的范围内的增加。例如，hb浓度达到1g/dl到2g/dl的增加。
14.根据条款2到13中任一项所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中在所述时段内，在d0施用所述抗体或片段。
15.根据条款14所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中在d0将所述抗体或片段作为单个剂量施用给所述受试者。
在本文中的任何条款中，在实例中，抗体或片段在d0作为单个剂量施用给受试者，其中单个剂量以一个或多个等分试样施用给受试者。
16.根据条款2到15中任一项所述的拈抗剂、组合或试剂盒，其中在d0或其后不超过2天施用初始esa剂量。
17.根据条款2到16中任一项所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中在紧接着d0之后的第4天到第9天(例如，第7天)施用esa剂量。
18.根据条款2到17中任一项所述的拈抗剂、组合或试剂盒，其中在紧接着d0之后的第12天到第16天(例如，第14天)施用esa剂量。
19.根据条款2到18中任一项所述的拈抗剂、组合或试剂盒，其中在紧接着d0之后的第19天到第23天(例如，第21天)施用esa剂量。
在本文中的任何条款中，在实例中，esa剂量在紧接着d0之后的(i)第4天到第9天(例如，第7天)，(ii)第12天到第16天(例如，第14天)以及(iii)第19天到第23天(例如，第21天)中的每一者中施用。
20.根据条款2到19中任一项所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中在所述时段期间施用4个esa剂量的等效物。
此处的“等效物”意指可以施用esa的多个等分试样(例如，在同一天或顺序地)，其中等分试样相当于esa的总剂量。在实例中，esa是达贝泊汀α或
总体来说，本文中，剂量(例如，抗体、片段或esa的剂量)可以以一个等分试样或多个等分试样施用(例如，在同一天、同时、在30小时、1小时或24小时窗口内)。
21.根据条款2到20中任一项所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中在所述初始esa剂量之后的第一周和第二周中的每一者期间对所述受试者施用esa。
22.根据条款2到21中任一项所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中在所述初始esa剂量之后的第一周、第二周和第三周中的每一者期间对所述受试者施用esa。
23.根据条款21或22所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中在每个所述周结束时将esa作为单个剂量施用，任选地其中所述时段由从d0开始的3周或4周组成。
在所述条款中的任何条款的实例中，所述时段由起始于d0的4周组成，并且在第4周对贫血进行治疗。
24.根据条款2到23中任一项所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中在所述时段期间将不超过4个剂量的esa施用给所述受试者，并且优选地施用单个剂量的所述抗体或片段。
25.根据条款2到24中任一项所述的拈抗剂、组合或试剂盒，其中在所述时段内(其中所述时段是连续4周时段)，总剂量的所述抗体和总剂量的esa以x∶y的比例施用给所述受试者，其中x为10到2x106并且y＝4。
在实例中，esa的每周总剂量(例如，其中受试者是人)为10mcg或15mcg到80mcg、100mcg、200mcg或300mcg(微克)。例如，每周总剂量为10mcg到80mcg；15mcg到80mcg；或30mcg到80mcg。例如，esa包括达贝泊汀α、依泊汀α或本文公开的任何其它esa或由其组成。在一个实例中，每个剂量的esa(或每周剂量)以1.5mcg/kg到2mcg/kgesa的范围施用给受试者。
在某些配置中，所述方法涉及减少或免除esa施用。在这种情况下，例如，esa的每周总剂量(例如，其中受试者是人)为1mcg到20mcg，例如1mcg到15mcg。在存在esa免除或减少的实例中，每个剂量的esa(或每周剂量)以0.01mcg/kg或0.1mcg/kg到0.3mcg/kg或1mcg/kgesa的范围、例如0.01mcg/kg到0.3mcg/kg，或0.1mcg/kg到0.3mcg/kg，或0.01mcg/kg到1mcg/kg或0.1mcg/kg到1mcg/kg施用给受试者。
26.根据条款2到25中任一项所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中在所述时段(例如，连续3周或4周时段)结束时的hb浓度是属于相同物种的、已经按照与所述受试者相同的给药方案接受了对所述抗bmp6抗体或片段的施用的对照贫血患者的hb浓度的至少130％，除了所述患者在所述时段期间还未接受对esa的施用之外。
27.根据条款26所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中在所述时段结束时所述hb浓度显著高于在所述时段结束时的所述对照的所述hb浓度，如通过p＜0.0001的p值确定的。
28.根据条款2到27中任一项所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中在所述时段结束时的平均红细胞血红蛋白(mch)是属于相同物种的、已经按照与所述受试者相同的给药方案接受了对所述抗bmp6抗体或片段的施用的对照贫血患者的mch的至少109％，除了所述患者在所述时段期间还未接受对esa的施用之外。
平均红细胞血红蛋白(mch)是血液样本中每个红细胞的血红蛋白的平均质量。
29.根据条款2到28中任一项所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中在所述时段(例如，连续3周或4周时段)结束时的hb浓度是属于相同物种的、已经按照与所述受试者相同的给药方案接受了对所述esa的施用的对照贫血患者的hb浓度的至少120％，除了所述患者在所述时段期间还未接受对抗bmp6抗体或片段的施用之外。任选地，对照患者已经接受并不特异性地结合bmp6的对照igg4抗体(例如，其中bmp6抗体和对照抗体分别以相同剂量施用给受试者和对照患者)。任选地，x为10到2x105、2x104或2x103。
30.根据条款29所述的拈抗剂、组合或试剂盒，其中在所述时段结束时所述hb浓度显著高于在所述时段结束时的所述对照的所述hb浓度，如通过p＜0.0001的p值确定的。
31.根据条款2到30中任一项所述的拈抗剂、组合或试剂盒，其中在所述时段(例如，连续3周或4周时段)结束时的平均红细胞血红蛋白(mch)是属于相同物种的、已经按照与所述受试者相同的给药方案接受了对所述esa的施用的对照贫血患者的mch的至少119％，除了所述患者在所述时段期间还未接受对抗bmp6抗体或片段的施用之外。
32.根据条款31所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中在所述时段结束时所述mch显著高于在所述时段结束时的所述对照的所述mch，如通过p＜0.0001的p值确定的。
33.根据条款2到32中任一项所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中所述受试者在d0患有慢性病贫血(acd)，并且任选地其中所述贫血与慢性炎症(例如，所述受试者患有关节炎)或细菌感染(例如，链球菌感染)相关联，或者其中所述受试者是慢性肾病(ckd)患者。
34.根据条款2到33中任一项所述的拈抗剂、组合或试剂盒，其中在所述时段结束时所述受试者的贫血严重程度低于在d0时。
35.根据条款1所述的拈抗剂，其中所述拮抗剂包括抗bmp6抗体或片段或由其组成。
36.根据条款2到34中任一项所述的拈抗剂、组合或试剂盒，其中所述抗体或片段与参考抗体竞争结合bmp6，其中所述参考抗体是mab507(r&dsystems)或包括以下的抗体：
a.重链，所述重链各自包括seqidno：1或2的氨基酸序列或由其组成；以及轻链，所述轻链各自包括seqidno：3的氨基酸序列或由其组成；或者
b.重链，所述重链各自包括seqidno：4的氨基酸序列或由其组成；以及轻链，所述轻链各自包括seqidno：5的氨基酸序列或由其组成。
本文中的竞争可以例如通过spr(例如，在37摄氏度下、在ph7.6下以及任选地作为fab)；通过elisa；通过荧光激活细胞分选(facs)；或在均相时间分辨荧光(htrf)测定中确定。spr可以使用biacoretm，proteontm或其它标准spr技术进行。在实施例中，竞争通过fortebio
在替代方案中，参考抗体是wo2016098079中公开的任何抗bmp6抗体(与这种抗体有关的序列和公开内容并入本文以可能地用于本发明中)。
37.根据条款2到36中任一项所述的拈抗剂、组合或试剂盒，其中所述抗体或片段与所述参考抗体竞争结合到seqidno：6的多肽。所述seqidno：6可以用作肽本身、较大肽的一部分或bmp6蛋白的一部分(例如，野生型人bmp6或重组产生的bmp6)。
另外地或可替代地，抗体或片段与所述参考抗体竞争结合到选自由seqidno：7到19组成的组的进一步序列。所述进一步序列可以用作肽本身、较大肽的一部分(例如，包括seqidno：6)或bmp6蛋白的一部分(例如，野生型人bmp6或重组产生的bmp6，例如包括seqidno：6)。例如，抗体或片段与所述参考抗体竞争结合到seqidno：7。例如，抗体或片段与所述参考抗体竞争结合到seqidno：8。例如，抗体或片段与所述参考抗体竞争结合到seqidno：9。例如，抗体或片段与所述参考抗体竞争结合到seqidno：10。例如，抗体或片段与所述参考抗体竞争结合到seqidno：11。例如，抗体或片段与所述参考抗体竞争结合到seqidno：12。例如，抗体或片段与所述参考抗体竞争结合到seqidno：13。例如，抗体或片段与所述参考抗体竞争结合到seqidno：14。例如，抗体或片段与所述参考抗体竞争结合到seqidno：15。例如，抗体或片段与所述参考抗体竞争结合到seqidno：16。例如，抗体或片段与所述参考抗体竞争结合到seqidno：17。例如，抗体或片段与所述参考抗体竞争结合到seqidno：18。例如，抗体或片段与所述参考抗体竞争结合到seqidno：19。
38.根据条款2到37中任一项所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中所述抗体或片段竞争性地抑制可溶性血幼素(hjv)结合到bmp6。
39.根据条款1到38中任一项所述的拈抗剂、组合或试剂盒，其中所述抗体或片段并不竞争性地抑制可溶性血幼素(hjv)结合到bmp6(例如，如通过spr、htrf或elisa确定的)。
40.根据条款2到39中任一项所述的拈抗剂、组合或试剂盒，其中所述抗体包括由vdj区序列编码的vh结构域，其中所述vdj源自于vh基因片段、d基因片段和jh基因片段的重组，其中所述vh是人种系(i)vh1-3、(ii)vh2-5或(iii)vh3-15基因片段。
41.根据条款2到40中任一项所述的拈抗、组合或试剂盒，其中所述抗体包括由vdj区序列编码的vl结构域，其中所述vdj源自于vl基因片段和jl基因片段的重组，其中所述vl是人种系(iv)vκ3-20、(v)vλ3-1、(vi)vκ1-17或(vii)vλ1-40。
42.根据条款2到41中任一项所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中所述抗体或片段结合到bmp6的亲和力比结合到bmp7的亲和力更强(通过spr确定的更低kd)；并且任选地结合到bmp6的亲和力比结合到bmp5的亲和力更强。
任选地，抗体或片段结合到bmp6的亲和力比结合到bmp2、bmp4、bmp5和bmp9中的每一个的亲和力更强。
43.根据条款2到42中任一项所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中所述抗体或片段结合到包括seqidno：6的人bmp6序列。
44.根据条款2到43中任一项所述的拈抗剂、组合或试剂盒，其中所述抗体结合到bmp6的亲和力(kd)为1pm到5nm，任选地其中结合是在37℃下、在ph7.6下、使用所述抗体的fab、通过spr确定的。
在实例中，抗体(例如，作为fab)或片段结合到bmp6的亲和力(kd)为
(a)2pm、3pm、4pm、5pm或10pm到3nm、4nm或5nm；
(b)1pm到10pm到5nm；
(c)10pm到3nm、4nm或5nm；
(d)50pm或80pm到200nm；
(e)50pm或80pm到150nm；或
(f)50pm或80pm到100nm。
在实例中，kd为(或约为)5pm到15pm(例如，10pm)。在实例中，kd为(或约为)2nm到5nm(例如，3nm)。在实例中，kd为(或约为)100pm到400pm(例如，140pm或390pm)。
45.根据条款2到44中任一项(例如，条款44)所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中所述抗体结合bmp6的解离速率(koff)为1x10-5s-1到1x10-3s-1，任选地其中结合是在37℃下、在ph7.6下、使用所述抗体的fab、通过spr确定的。
在实例中，抗体(例如，作为fab)或片段结合bmp6的解离速率(koff)为
(a)1x10-5s-1到5x10-4s-1；
(b)1x10-5s-1到6x10-4s-1；
(c)1x10-5s-1到7x10-4s-1；
(d)1x10-5s-1到8x10-4s-1；
(e)2x10-5s-1到1x10-3s-1；
(f)2x10-5s-1到5x10-4s-1；
(g)2x10-5s-1到6x10-4s-1；
(h)2x10-5s-1到7x10-4s-1；或
(i)2x10-5s-1到8x10-4s-1。
在实例中，koff为(或约为)5x10-4s-1(例如，当kd为(或约为)2nm到400pm时；当kd为(或约为)2nm到5nm(例如，3nm)时；或当kd为(或约为)100pm到400pm(例如，140pm或390pm)时)。在实例中，koff为(或约为)3x10-5s-1(例如，当kd为(或约为)5pm到15pm(例如，10pm)时)。
46.根据条款2到45中任一项(例如，条款44和/或45)所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其中所述抗体结合bmp6的结合速率(kon)为1x105m-1s-1到1x107m-1s-1，任选地其中结合是在37℃下、在ph7.6下、使用所述抗体的fab、通过spr确定的。
在实例中，抗体(例如，作为fab)或片段结合bmp6的结合速率(kon)为
(a)1x105m-1s-1到1x106m-1s-1；
(b)1x105m-1s-1到2x106m-1s-1；
(c)1x105m-1s-1到3x106m-1s-1；
(d)1x105m-1s-1到4x106m-1s-1；
(e)1x105m-1s-1到5x106m-1s-1；
(f)2x105m-1s-1到5x106m-1s-1；
(g)3x105m-1s-1到5x106m-1s-1；
(h)4x105m-1s-1到5x106m-1s-1；
(i)5x105m-1s-1到5x106m-1s-1；或
(j)6x105m-1s-1到5x106m-1s-1。
在实例中，kon为(或约为)1x10-5m-1s-1或2x10-5m-1s-1(例如，当kd为2nm到5nm(例如，3nm)时)。在实例中，kon为(或约为)1x10-6m-1s-1到4x10-6m-1s-1、1x10-6m-1s-1、2x10-6m-1s-1、3x10-6m-1s-1或4x10-6m-1s-1(例如，当kd为(或约为)5pm到400pm(例如，140pm或390pm)或5pm到15pm(例如，10pm)时)。
47.根据条款2到46中任一项所述的拈抗剂、组合或试剂盒，其中
(a)所述时段由连续3周或4周组成并且
(i)在所述时段的整个持续时间内，hb浓度不低于基线hb浓度的110％；并且在所述时段期间，hb浓度达到基线的至少120％；和/或
(ii)在所述时段的整个持续时间内，hb浓度相对于基线增加至少1g/dl并且在所述时段期间，hb浓度相对于基线达到1g/dl到8g/dl的范围内的增加；
(b)其中在所述时段的前两周或三周期间至少两次地施用一个剂量的esa；
(c)其中所述抗体或片段结合到bmp6的亲和力比结合到bmp7的亲和力更强(通过spr确定的更低kd)；并且任选地结合到bmp6的亲和力比结合到bmp5的亲和力更强(并且任选地结合到bmp6的亲和力比结合到bmp2、bmp4、bmp5和bmp9中的每一个的亲和力更强)；并且
(d)其中所述抗体或片段与参考抗体竞争结合bmp6，其中所述参考抗体是mab507(r&dsystems)或包括以下的抗体：
i.重链，所述重链各自包括seqidno：1或2的氨基酸序列或由其组成；以及轻链，所述轻链各自包括seqidno：3的氨基酸序列或由其组成；或者
ii.重链，所述重链各自包括seqidno：4的氨基酸序列或由其组成；以及轻链，所述轻链各自包括seqidno：5的氨基酸序列或由其组成。
任选地，在部分i中，重链由seqidno：1的氨基酸序列组成，并且轻链由seqidno：3的氨基酸序列组成。任选地，在部分i中，重链由seqidno：2的氨基酸序列组成，并且轻链由seqidno：3的氨基酸序列组成。任选地，在部分ii中，重链由seqidno：4的氨基酸序列组成，并且轻链由seqidno：5的氨基酸序列组成。
在实例中(根据下文实例2中使用的抗体)，在部分(d)中，本发明的抗bmp6抗体是在htrf测定中与部分i或部分ii的参考抗体竞争的抗体。例如，其中在htrf测定中，本发明的抗体是经标记抗体，其与人bmp6预温育并且随后与未经标记参考抗体(根据部分i或ii)组合，其中抗体之间的竞争通过测定检测。在实例中，所述测定使用本发明的alexafluortm647标记抗体。在替代方案中，对人bmp6进行标记(例如，使用alexafluortm647，使用用于结合到eu3+穴状化合物链霉亲和素的生物素标记测试抗体，并且不对参考抗体进行标记)。
任选地，本发明的抗bmp6抗体(测试抗体)在htrf测定中与参考抗体竞争结合人bmp6(或结合与参考抗体相同的人bmp6表位)，其中所述测定使用直接或间接标记有供体(如例如，eu3+穴状化合物)或受体荧光团(如例如，alexafluortm647)的直接或间接标记的测试抗体和标记有供体或受体荧光团的靶bmp6以实现供体与受体之间的能量转移，由此产生并检测荧光信号。在使用alexafluortm647标记的实例中，当测试抗体在参考抗体存在相对于没有参照抗体的信号时，通过665nm下的荧光信号降低至少20％来检测竞争。任选地，665nm下的信号降低至少为20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。
任选地，抗bmp6抗体(测试抗体)是在htrf测定中与参考抗体竞争结合人bmp6(或结合与参考抗体相同的人bmp6表位)的抗体，其中参考抗体包括重链和轻链，所述重链各自包括seqidno：1或2的氨基酸序列，并且所述轻链各自包括seqidno：3的氨基酸序列，其中所述测定使用用供体标记(如例如，eu3+穴状化合物)或受体荧光团标记(如例如，alexafluortm647)来直接或间接标记的测试抗体和用受体荧光团或供体来标记的人bmp6以实现供体与受体之间的能量转移，其中当测试抗体与参考抗体存在相对于信号没有参考抗体时，通过至少20％的荧光信号减少来检测抗体之间的所述竞争。例如，使用alexafluortm647来直接或间接标记测试抗体，并且当测试抗体在参考抗体存在相对于没有参照抗体的信号时，通过665nm下的荧光信号降低至少20％来检测竞争。任选地，665nm下的信号降低至少为20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。
任选地，抗bmp6抗体(测试抗体)还在htrf测定中与参考抗体竞争结合人bmp6(或结合与参考抗体相同的人bmp6表位)，其中参考抗体包括重链和轻链，所述重链各自包括seqidno：4的氨基酸序列，并且所述轻链各自包括seqidno：5的氨基酸序列，其中所述测定例如使用用供体标记(如例如，eu3+穴状化合物)或受体荧光团标记(如例如，alexafluortm647)来直接或间接标记的测试抗体和用受体荧光团或供体来标记的人bmp6以实现供体与受体之间的能量转移，其中当测试抗体与参考抗体存在相对于信号没有参考抗体时，通过至少20％的荧光信号减少来检测抗体之间的所述竞争。例如，使用alexafluortm647来直接或间接标记测试抗体，并且当测试抗体在参考抗体存在相对于没有参照抗体的信号时，通过665nm下的荧光信号降低至少20％来检测竞争。任选地，665nm下的信号降低至少为20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。
例如，在部分(b)中，在所述时段的前3周期间或在所述时段期间施用某一剂量的esa2次、3次或4次。
在替代方案中，参考抗体是wo2016098079中公开的任何抗bmp6抗体(与这种抗体有关的序列和公开内容并入本文以可能地用于本发明中)。
48.根据条款1到47中任一项所述的拮抗剂、组合或试剂盒，其用于
a.治疗所述受试者的acd；
b.治疗或预防所述受试者的中度或重度贫血；
c.治疗或预防所述受试者的贫血，其中所述受试者患有炎性疾病或病症；
d.消除或减少对所述受试者的施用铁输注或输血的需要；
e.治疗或预防所述受试者的贫血，其中所述受试者患有微生物感染；或者
f.减少对所述受试者施用esa。
49.一种治疗受试者的贫血的方法，所述方法包括：
(a)在起始日(d0)对所述受试者施用抗bmp6抗体或片段；以及
(b)在至少连续3周的时段内，所述时段从d0开始，施用多个剂量的促红细胞生成素刺激剂(esa)，其中所述受试者的血液血红蛋白(hb)浓度在所述时段的整个持续时间内从d0的基线浓度升高，
使得：在所述时段的整个持续时间内：-
(i)hb浓度不低于基线hb浓度的100％；并且在所述时段期间，hb浓度达到基线的至少120％；和/或
(ii)hb浓度相对于基线增加至少1g/dl。
50.根据条款49所述的方法，其中所述方法、所述抗体片段或所述esa是如条款2到48中任一项所述的方法、抗体片段或esa。
51.根据任何前述条款所述的拈抗剂、组合、试剂盒或方法，其中所述贫血是中度或重度贫血。
52.一种用于在维持受试者的至少10g/dl的血液血红蛋白(hb)水平的方法中使用的抗骨形态发生蛋白6(bmp6)拮抗剂，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拮抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)。
53.一种用于在防止受试者的血液血红蛋白水平降低到低于10g/dl的方法中使用的抗骨形态发生蛋白6(bmp6)拮抗剂，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拮抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)。
54.一种用于在将患有贫血的受试者的血液血红蛋白升高到至少10g/dl的水平的方法中使用的抗骨形态发生蛋白6(bmp6)拈抗剂，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拮抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述贫血得到治疗。
55.一种用于在治疗或预防患有炎性疾病或病症的受试者的贫血的方法中使用的抗骨形态发生蛋白6(bmp6)拈抗剂，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拮抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述贫血得到治疗或预防。
56.一种用于在消除或减少对患有贫血的受试者施用铁输注或输血的需要的方法中使用的抗骨形态发生蛋白6(bmp6)拈抗剂，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拮抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述需要得到消除或减少。
57.一种用于在治疗或预防患有微生物感染的受试者的贫血的方法中使用的抗骨形态发生蛋白6(bmp6)拮抗剂，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拈抗剂和红细胞生成刺激剂(esa)。
58.一种用于在减少对患有贫血的受试者施用用于治疗贫血的红细胞生成刺激剂(esa)的方法中使用的抗骨形态发生蛋白6(bmp6)拈抗剂，所述方法包括：施用抗bmp6拮抗剂和所述esa，其中所述受试者的贫血得到治疗。
59.一种用于在治疗患有贫血或有贫血风险的受试者的贫血或降低其贫血风险的方法中使用的抗骨形态发生蛋白6(bmp6)拮抗剂，所述方法包括：对所述受试者施用抗bmp6拮抗剂和低剂量的红细胞生成刺激剂(esa)，其中所述受试者的贫血得到治疗或者所述受试者的所述贫血风险得到降低。
60.根据条款52到59中任一项所述的拈抗剂，其中所述拈抗剂是根据条款1到1、2、7到48和51中任一项所述的拮抗剂。
61.根据条款52到59中任一项所述的拈抗剂，其中所述拈抗剂是根据条款52到59中任何其它项所述的拮抗剂。
62.根据任何前述条款所述的拈抗剂、组合、试剂盒或方法，其中所述esa是
a.依泊汀α并且以小于1000单位、1500单位、2500单位、5000单位、11000单位、18000单位、34000单位或90000单位的每周剂量施用，任选地其中所述受试者之前已经分别接受过＜1500单位、1500单位到2499单位、2500单位到4999单位、5000单位到10999单位、11000单位到17999单位、18000单位到33999单位、34000单位到89999单位或≥90000单位的每周依泊汀α治疗；
b.达贝泊汀α或
c.达贝泊汀α或
63.根据任何前述条款所述的拮抗剂、组合、试剂盒或方法，其中所述抗bmp6拈抗剂是抗体，并且每个剂量以不超过30mg/kg的总量施用。
64.一种用于在用于治疗或预防患有贫血或有贫血风险的受试者的贫血的治疗方案方法中使用的抗bmp6拮抗剂和/或esa，所述方案包括：对所述受试者同时或连续施用抗bmp6拈抗剂和esa，其中
a.在第零天对所述受试者施用所述拮抗剂；并且不迟于第7天(例如，在第1天)对所述受试者施用所述esa；或者
b.在第零天对所述受试者施用所述esa；并且不迟于第7天(例如，在第1天)对所述受试者施用所述拈抗剂；或者
c.在第零天对所述受试者同时施用所述拈抗剂和所述esa；或者
d.在第零天所述受试者已经接受所述esa，并且在第零天对所述受试者施用所述拮抗剂；或者
e.在第零天所述受试者已经接受所述拈抗剂，并且在第零天对所述受试者施用所述esa；
由此在第14天或更晚时间，所述受试者的血液血红蛋白水平为至少10g/dl，其中所述贫血得到治疗或预防。
65.根据条款64所述的拈抗剂和/或esa，其是进一步根据条款1到1、2、7到48和51中任一项所述的拮抗剂和/或esa。
66.根据条款64或65所述的拈抗剂和/或esa，其中以不超过7天的间隔对所述受试者施用所述抗bmp6拈抗剂和所述esa。
67.根据条款64、65或66所述的拮抗剂和/或esa，其中所述方案在所述受试者中将所述受试者的血液hb水平维持处于大于10g/dl。
68.根据条款64到67中任一项所述的拈抗剂和/或esa，其中所述方法在所述受试者已经接受所述抗bmp6拈抗剂和所述esa之后至少13天或14天将所述受试者的血液血红蛋白水平维持处于或升高到至少10g/dl。
69.根据条款67或68所述的拈抗剂和/或esa，其中以不超过1天的间隔对所述受试者施用所述抗bmp6拮抗剂和所述esa。
70.根据条款64到69中任一项所述的拈抗剂和/或esa，其中对所述受试者同时施用所述抗bmp6拮抗剂和所述esa。
71.根据条款64到70中任一项所述的拮抗剂和/或esa，其中所述受试者的所述血液血红蛋白水平被防止降低到小于10g/dl(例如，在第14天)。
72.根据条款64到71中任一项所述的拈抗剂和/或esa，其中所述受试者的所述血液血红蛋白升高到至少10g/dl的水平(例如，在第14天)。
73.根据条款64到72中任一项所述的拮抗剂和/或esa，其中所述受试者的中度或重度贫血得到预防(例如，在第14天)。
74.根据任何前述条款所述的拮抗剂、组合、试剂盒、esa或方法，其中所述受试者患有
a.炎性疾病或病症；或
b.感染；
c.肾病；
d.hiv或经历hiv治疗；或
e.癌症；并且
所述受试者的贫血得到治疗或预防。
75.根据任何前述条款所述的拈抗剂、组合、试剂盒、esa或方法，其中所述受试者是哺乳动物。
76.根据任何前述条款所述的拮抗剂、组合、试剂盒、esa或方法，其与抗炎剂组合，或者其中对所述受试者施用抗炎剂。
77.根据任何前述条款所述的拈抗剂、组合、试剂盒、esa或方法，其中所述esa是促红细胞生成素。
在实例中，所述受试者患有慢性肾病(ckd)。参考了“《kdigo慢性肾病贫血临床实践指南(kdigoclinicalpracticeguidelineforanemiainchronickidneydisease)》”，《国际肾脏病杂志增刊(kidneyinternationalsupplements)》(2012年)，第2卷，第279页；doi：10.1038/kisup.2012.37。这讨论了慢性肾病的阶段(阶段1到阶段5)、诊断、ckd命名、hb水平和各种年龄的人的范围以及esa低反应性。此参考文献公开了：-
对贫血的诊断
·当男性的hb浓度＜13.0g/dl并且女性的hb浓度＜12.0g/dl时，诊断＞15岁的成人和儿童的贫血为ckd。(未评分)
·如果0.5岁到5岁的儿童的hb浓度＜11.0g/dl，5岁到12岁儿童＜11.5g/dl，12岁到15岁儿童＜12.0g/dl，则诊断儿童的贫血为ckd。(未评分)
因此，在本发明中，任选地
(a)受试者是患有ckd的并且在所述时段(例如，从d0开始的第3周开始时)期间hb浓度＜13.0g/dl(当受试者是男性时)或＜12.0g/dl(当受试者是女性时)的成人或＞15岁的儿童；或者
(b)患有ckd并且在所述时段期间(例如，从d0开始的第3周开始时)hb浓度＜11.0g/dl(其中受试者年龄为0.5岁到5岁)，＜11.5g/dl(其中受试者年龄为5岁到12岁)，或＜12.0g/dl(其中受试者年龄为12岁到15岁)的受试者。
任选地，受试者是诊断为恶性肿瘤、遭受一次或多次中风和/或患有恶性肿瘤的cdk患者。esa疗法通常在这些患者中谨慎进行(如果有的话)，并且因此本发明(特别是减少或免除其方面的esa)在这种受试者中是有利的。
任选地，受试者是hb浓度为9.0g/dl到10.0g/dl的ckd5d患者(例如，成年人，例如男性或女性)。
任选地，本发明用于将患有ckd的人类成年患者的hb浓度维持高于11.5g/dl。
任选地，本发明用于将患有ckd的成年人患者的hb浓度维持为9.0g/dl到13g/dl(例如，9.0g/dl到11.5g/dl)。
任选地，本发明用于将患有ckd的儿科人类患者的hb浓度维持为11.0g/dl到12g/dl。在实例中，患者为15岁或更小；或小于15岁；或10岁或更小。
在实例中，ckd患者是成年男性。在另一实例中，ckd患者是成年女性。
任选地，受试者(例如，成年人)是ckd5hd患者、血液滤过患者或血液透析滤过疗法患者，其中所述方法包括静脉内或皮下施用esa。
任选地，受试者(例如，成年人)是ckdnd或ckd5pd患者，其中所述方法包括皮下施用esa。
任选地，在施用片段的抗bmp6抗体之前，患者是esa低反应性的，这通过在esa治疗一个月后(在实施本发明的方法之前)hb浓度增加小于5％或没有增加表明。
实例
实例1：在贫血的小鼠模型中评估esa对血红蛋白代谢的
bmp6拮抗作用
1.目的
贫血是感染和炎性疾病的常见并发症。研究的目的是在患有通过将热和苯酚杀死的流产布鲁杆菌(ba)注射到健康的c57bl/6j雄性小鼠体内来诱导的急性贫血的小鼠模型中评估抗人bmp6抗体(以下称为人抗体“kyab1248”)对基线血红蛋白水平和血红蛋白对红细胞生成刺激剂达贝泊汀α的反应的时间依赖性作用，如kim等人，2014年(下文)所述。将kyab1248的作用与未特异性结合bmp6的人igg4同种型对照(抗体kyab1110)的作用进行比较。
[kima、funge、parikhsg、valoreev、gabayanv、nemethe、和ganzt，2014年，《患有炎症贫血的小鼠模型：复杂的发病机制，其中部分依赖于铁调素(amousemodelofanaemiaofinflammation：complexpathogenesiswithpartialdependenceonhepcidin)》，《血液(blood)》，第123卷，第8期，第1129到11362页。]
2.材料和方法
2.1动物
使用在实验开始时体重为20g到35g(12周龄)的120只雄性c57bl/6j小鼠进行实验。
在标准条件下以5到10个为一组将动物饲养在聚砜笼(占地面积＝1500cm2)中：室温(22±2℃)、湿度(55±10％)、光/暗循环(12h/12h)、空气置换(15到20体积/小时)、水和食物(sds、rm1含有标称159.3mg/kg铁)随意。在斗争主导的情况下，小鼠从社会群体中分离出来。在实验前使小鼠适应环境条件至少5天。通过使用擦不掉的标记来标记小鼠尾巴从而识别小鼠。研究是根据实验用动物欧盟动物福利法规进行的(欧洲指令2010/63/eu)。
2.2物种选择
小鼠已经被选择用于评估抗体的作用，因为根据历史文献小鼠被很好地建立为用于研究铁代谢的急性标记的适当非临床模型，所述标记包含血清铁、铁调素基因表达和非血红素铁的组织水平(andriopoulos等人，2009年，上文)。此外，使用c57bl/6j小鼠开发ba诱导的贫血模型，如kim等人所述(kim等人，2014年，上文)。
2.3流产布鲁氏菌悬浮液的制各
使用通过热和苯酚灭活的流产布鲁氏菌(威布里治99菌株)的浓缩悬浮液来诱导小鼠贫血(pourquierwright的血清凝集布鲁氏菌病抗原，参考p00110，idexx)。在5±3℃下储存此悬浮液直到制备浓缩悬浮液。在室温下、以15,000g对ba悬浮液离心15分钟。将团块重悬于无菌pbs中(参考14190-094，gibco)以获得50x浓缩的ba悬浮液。制备等分试样并将在-80℃下将其储存直到使用。在施用当天，在无菌pbs中将此悬浮液稀释到期望浓度10x。
2.4施用方案
将小鼠随机分配到治疗组之一(每组n＝4)，并根据下表6中描述的治疗时间表进行施用。
将热和苯酚杀死的ba按照每只小鼠固定体积200μl的10x浓缩ba悬浮液进行单次腹膜内(ip)注射而施用(在第0天)。在“给药前”组中，未对小鼠给予ba悬浮液。在“第1天esa”组中，小鼠接受ip施用pbs(200μl)而不是ba悬浮液。
使用静脉内(iv)给药途径来评估kyab1248相比于kyab1110higg4同种型对照的作用，因为其是预期的临床途径。在第0天和第6天，作为以10mg/kg体重的剂量、在5ml/kg体重的体积下尾静脉推注iv注射抗体溶液而执行对kyab1110和kyab1248的每次施用。在给药前对每只小鼠进行称重。根据每种抗体的已知药理学特征选择kyab1248和kyab1110的剂量。
在“给药前”组中，未对小鼠给予任何抗体。在“第1天esa”组中，小鼠接受iv施用pbs(在5ml/kg体重的体积下)而不是kyab1110或kyab1248。
对于第0天给药，首先施用ba悬浮液，然后立即在5分钟窗口内iv注射kyab1248或kyab1110抗体。
在第1天或第7天(在抗体施用之后的24小时)，作为以10μg/kg体重的剂量在100ml/kg体重的体积下进行单次皮下(sc)注射而施用esa(达贝泊汀α，
表6：治疗时间表
2.5参数
评估临床症状。测量所有动物的血红蛋白，除了来自‘kyab1248+第7天esa’剂量组的一个(第8天处死)。
2.6终端程序
2.6.1终端采血
在指定的时间点(即，在给药后的6小时、24小时、第7天、第8天、第14天、第21天和第28天)执行终端程序，其中在上表中标明了组编号。还处死了给药前组(t0，未施用小鼠)。
在实验结束时，即在每个时间点，用戊巴比妥(180mg/kg，ip)麻醉所有动物，并使用心脏穿刺收集静脉血。如下所述，立即将全血置于锂肝素化收集管中。轻轻混合收集管。记录每只动物的确切采血时间。将最小体积0.2ml的非溶血性全血置于第一锂肝素化收集管中用于标准血液学评估。
在给药当天在无菌条件下新鲜制备每种测试项目制剂。对于每种抗体，需要浓度为2mg/ml的溶液以便以10mg/kg的剂量对动物施用。通过以1∶5的稀释比在媒剂(无菌内毒素测试的pbs(生命科学公司(lifetechnologies)，产品10010023))中稀释10mg/ml储备溶液以获得此溶液。
3.结果
在仅接受抗体剂量(即，没有施用esa)的ba接种动物中，在kyab1248与higg4同种型对照组之间未观察到血液血红蛋白贫血曲线的差异(图1)。
对给予同种型对照抗体的ba治疗动物施用esa对血红蛋白水平和贫血严重程度没有影响(对于‘无esa’组(见图1)，‘第1天esa’(见图2)和‘第7天esa’(见图3)，第14天平均血红蛋白结果分别为8.1g/dl、7.8g/dl和8.2g/dl)。
然而，在接受kyab1248抗体和esa的动物中实现了血液血红蛋白改变和贫血改善。这种效果在第1天给予esa的动物中最明显，即，ba注射和第一次注射kyab1248抗体后24小时(图2)。在所测试的每个ba后时间点(第8天、第14天、第21天和第28天)记录到相对于同种型对照给药动物的较高平均血红蛋白水平，并且平均血红蛋白水平在第14天的血红蛋白最低点时间点达到统计显着性(7.8g/dl(同种型抗体+esa)对10.1g/dl(kyab1248+esa)，p＜0.05方差分析)。在第7天即在贫血已经形成的时候接受esa注射的kyab1248抗体给药动物中也观察到第14天平均血红蛋白水平增加，尽管其不具统计显著性(9.3g/dl(kyab1248+esa)对8.2g/dl(同种型抗体+esa))。
实例2：维持和统计显著地增加血红蛋白浓度以及在慢性病贫血(acd)的治疗模型中展示抗bmp6/esa对仅抗bmp6的平均红细胞血红蛋白(mch)
使雌性lewis大鼠保持标准啮齿动物饮食，直到它们达到6周龄到8周龄且体重为140g到160g。所有治疗均通过腹膜内(i.p.)或皮下(s.c.)注射执行。使用以15μg鼠李糖/g体重的总剂量i.p.注射a组链球菌肽聚糖-多糖(pg-aps)(美国加利福尼亚州格雷森leelaboratories)来诱导引起acd的慢性炎症(关节炎)。
通过关节炎的发展和中性粒细胞计数增加确定的对pg-aps注射有反应的大鼠被随机分成4个不同的组。在pg-aps注射后2周开始治疗(第0天＝d0)。图4示出了如下治疗方案：-
第1组：未发炎对照大鼠(未接受pg-aps)：在d0单次s.c.注射了igg4同种型对照抗体[3mg/kg]。对照是并不特异性地结合到bmp6的人源化igg4抗体。
第2组：acd大鼠(即，患有acd的大鼠)：在d0单次s.c.注射了igg4同种型对照抗体[3mg/kg]。
第3组：acd大鼠：在d0单次s.c.注射了抗bmp6igg4抗体[3mg/kg]。
第4组：acd大鼠：在d0单次s.c.注射了igg4同种型对照抗体[3mg/kg]，以及以10μg/kg体重的剂量一周一次单次s.c.注射达贝泊汀α(
第5组：acd大鼠：在d0单次s.c.注射了抗bmp6igg4抗体[3mg/kg]，以及以10μg/kg体重的剂量一周一次单次s.c.注射达贝泊汀α，总共4次这种达贝泊汀α注射。
治疗4周后(pg-aps施用后6周)终止实验并处死大鼠。为了(随时间推移确定血红蛋白水平，每周通过尾静脉穿刺从每只动物采集小血样(300μl)。
治疗4周后，处死动物并终止实验。
抗bmp6抗体(测试抗体)是在htrf测定中与参考抗体竞争结合人bmp6(或结合与参考抗体相同的人bmp6表位)的抗体，其中参考抗体包括重链和轻链，所述重链各自包括seqidno：1或2的氨基酸序列，并且所述轻链各自包括seqidno：3的氨基酸序列，其中所述测定使用用供体标记(eu3+穴状化合物)来标记的测试抗体和用受体荧光团alexafluortm647来标记的人bmp6以实现供体与受体之间的能量转移，其中当测试抗体与参考抗体存在相对于没有参考抗体的信号时，通过至少20％的荧光信号减少来检测抗体之间的所述竞争。
抗bmp6抗体(测试抗体)是在htrf测定中与参考抗体竞争结合人bmp6(或结合与参考抗体相同的人bmp6表位)的抗体，其中参考抗体包括重链和轻链，所述重链各自包括seqidno：4的氨基酸序列，并且所述轻链各自包括seqidno：5的氨基酸序列，其中所述测定使用用供体标记(eu3+穴状化合物)来标记的测试抗体和用受体荧光团alexafluortm647来标记的人bmp6以实现供体与受体之间的能量转移，其中当测试抗体与参考抗体存在相对于没有参考抗体的信号时，通过至少20％的荧光信号减少来检测抗体之间的所述竞争。
结果
参考图5和图6，其示出了实验组中的血液hb浓度和mhc水平。
统计：使用方差分析与dunnett多重比较测试。
*＝将单独接受抗bmp6抗体的大鼠与接受抗bmp6抗体+esa的大鼠进行比较
****p＜0.0001
***p＜0.001
**p＜0.01
*p＜0.05
#＝将单独接受esa的大鼠与接受抗bmp6抗体+esa的大鼠进行比较
####p＜0.0001
###p＜0.001
##p＜0.01
#p＜0.05
·从w3结束到w4结束，hb浓度增加125了％。
·在w3结束时，抗体+esa组中的hb浓度为仅抗体情况下的hb浓度的137％。
·在w4结束时，抗体+esa组中的hb浓度为仅抗体情况下的hb浓度的175％。
·在w4结束时，抗体+esa组中的hb浓度显著高于仅抗体组，如通过p＜0.0001的p值确定的。
·在w3结束时，抗体+esa组中的hb浓度为仅esa情况下的hb浓度的123％。
·在w4结束时，抗体+esa组中的hb浓度为仅esa情况下的hb浓度的168％。
·在w4结束时，抗体+esa组中的hb浓度显著高于仅esa组，如通过p＜0.0001的p值确定的。
·在w3结束时，抗体+esa组中的mch是仅抗体情况下的mch的113％。
·在w4结束时，抗体+esa组中的mch是仅抗体情况下的mch的109％。
·在w3结束时，抗体+esa组中的mch是仅esa情况下的mch的123％。
·在w4结束时，抗体+esa组中的mch是仅esa情况下的mch的119％。
·在w3结束时，抗体+esa组中的mch显著高于仅esa组，如通过p＜0.0001的p值确定的。
·在w4结束时，抗体+esa组中的mch显著高于仅esa组，如通过p＜0.0001的p值确定的。
结果表明，抗bmp6抗体和esa(第5组)的组合可以用于治疗已确定贫血的受试者。组合治疗在3周时段和4周时段(从d0开始计)内使hb浓度维持高于基线值，并且在4周时段结束时hb浓度已经从基线升高超过8g/dl。与仅施用抗bmp6抗体(第3组)相比，这是非常显着的结果(如通过p＜0.0001的p值确定的)，并且我们相信这将支持将eda给药降低到低于常规量或免除esa给药(从而最小化esa的副作用)的能力。与仅esa相比，在组合治疗的情况下，在治疗时段结束时的hb浓度也显著更高(如通过p＜0.0001的p值确定的)。
在组合组中，甚至在所述时段即将结束时(抗体施用之后第4周)也存在25％的增加，这在任何其它治疗组中均未观察到。
无论是在第3周结束时还是在第4周结束时，在将组合治疗与仅esa进行比较时，也观察到mch的显著提高(如通过p＜0.0001的p值确定的)。重要的是，组合组中的mch并未明显减少。因此，我们认为，在组合组中，hb浓度升高有效地用于增加红细胞生成(如通过hb浓度增加和无显著mch减少所表明的)。
- 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞！