迈华替尼组合物、相关化合物及其制备方法和用途与流程

本发明涉及迈华替尼组合物、相关化合物及其制备方法和用途。
背景技术：
迈华替尼(mefatinib)，其化学名称为：2-丁烯醛氨基，n-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-二氟甲基氧基]-6-喹唑啉基]-4-(二甲基氨基)-(2e)-二马来酸盐；分子式：c21h19clf3n5o2.2c4h4o4；分子量：698.0，结构式如下：专利文献cn102838550a公开了下式所示的喹唑啉巴豆基化合物(迈华替尼游离碱)，所述化合物被证明是理想的高效双重非可逆性酪氨酸激酶抑制剂，可通过作用于egfr细胞内部分与atp竞争性结合，抑制激酶的活性和磷酸化，并封闭egfr酪氨酸激酶atp结合位点从而达到特异性抑制egfr的目的。该化合物可用于治疗或预防各种与egfr和her2激酶功能有关的适应症，包括但不限于乳腺癌、卵巢癌、胃肠癌、食管癌、肺癌、头颈部鳞癌、胰腺癌、表皮鳞癌、前列腺癌、神经胶质瘤和鼻咽癌等多种恶性肿瘤疾病。上述专利文献cn102838550a实施例1公开了合成迈华替尼游离碱的方法，具体通过以下合成路线获得：cn105859641采用cn102838550a中所制得的迈华替尼游离碱，制得了迈华替尼晶体。上述路线中，从化合物2到迈华替尼游离碱的总摩尔收率仅有37％左右。式1b的制备中，原料和产物都不溶于有机溶剂，始终为混悬液状态，不利于反应监控。从化合物1到迈华替尼游离碱的反应为无水反应，转化率仅38％左右。而且化合物1不能完全转化，粗产物纯度低于70％，杂质多，产物相关物质复杂，所得迈华替尼游离碱粗产物为油状物难以固化，必须要用柱层析来纯化，批产量低，仅适合10g级别的规模。整体而言，该方法收率低、提纯难、成本高，批产量低。因此，该合成工艺以及所得产物不适于工业化应用。专利文献cn104151359a公开了迈华替尼游离碱(即下述合成路线中的式a10化合物)的另外一种合成路线，具体如下：该合成路线具有以下优点：在由a9制备a10e的步骤中，反应结束后加入适当溶剂，能够使所得产物沉淀析出，易于处理，纯度高；在a10e制备a10的步骤中，反应在有机相/水相中进行，反应结束后，加水可使产品沉淀析出，易于处理，纯度高，粗品含量即达到96％以上，收率接近100％。从a9到a10反应总收率大于60％。该工艺路线所得产物不需要进行柱层析纯化步骤，适合大规模工业化生产。技术实现要素：如上所述，cn102838550a中公开的迈华替尼游离体产物及其合成工艺不适合规模化工业生产。本发明人采用专利文献cn104151359a中的、适合规模化工业生产的合成工艺所得的产物a10，制备其二马来酸盐，经工艺优化，获得了高纯度的二马来酸盐。大批量生产时，产物收率、质量稳定。然而，研究发现，由专利文献cn104151359a的合成路线制得的a10中所含的相关物质，不同于cn102838550a中所得产物中所含的相关物质。特别是cn104151359a中的a10中，含有少量顺式异构体，使得所制得的二马来酸盐中含有顺式异构体的二马来酸盐，即式(ii)所示化合物。进一步研究发现，相对于迈华替尼而言，式(ii)化合物对正常细胞具有显著的抑制作用，产生较强的毒副作用，而对肿瘤细胞的抑制作用则很弱。因此，控制该工艺所得产物中式(ii)化合物的含量，有着非常重要的意义。本发明人通过将该合成工艺所得产物中的式(ii)化合物含量控制在特定范围，减少了毒副作用，使所得迈华替尼组合物的毒副作用处于可接受的程度范围，从而完成了本发明。为此，第一方面，提供一种迈华替尼组合物，其特征在于，所述组合物包含式(i)所示的迈华替尼和归一化百分含量为1％以下且不为零的式(ii)所示的化合物，可选地，所述迈华替尼组合物中式(ii)所示的化合物的归一化百分含量为0.9％以下，可选地为0.8％以下，可选地为0.5％以下，可选地为0.3％以下，可选地为0.2％以下。可选地，从生产成本和实际需要的角度考虑，上述迈华替尼组合物中式(ii)所示的化合物的归一化百分含量可以为0.01％以上，可选地为0.02％以上，可选地为0.05％以上。可选地，所述的迈华替尼组合物中，式(i)所示的迈华替尼的归一化百分含量为98.0％以上，优选为98.5％以上，更优选为99.0％以上，更优选为99.3％以上，更优选为99.5％以上。第二方面，提供上述迈华替尼组合物的制备方法，其包括：(1)参照专利cn104151359a中公开的制备方法制备a10；所述a10的制备方法采用以下合成路线，上述结构式中的各个r相互独立地为c1-6烷基，优选为甲基或乙基，更优选为乙基。在a9化合物的制备步骤中，由a8化合物与氢气在催化剂的存在下进行反应。所述催化剂可以是本领域常用的氢化催化剂，例如雷尼镍、铂、钯和铑等，优选雷尼镍催化剂。优选在氯化铵的存在下进行反应，优选a8化合物与氯化铵的质量比为1-20:1，更优选为8-12:1，更优选为10:1。优选地，反应溶剂选自n',n’-二甲基甲酰胺(dmf)、四氢呋喃、四氢呋喃与甲醇的混合溶剂；优选为四氢呋喃与甲醇的混合溶剂，更优选为四氢呋喃与甲醇体积比为3-8:1的混合溶剂，更优选四氢呋喃与甲醇体积比为5:1的混合溶剂。优选所得a9化合物真空干燥至水分小于1％。优选地，将a8化合物加入到反应釜中，向反应釜中加入四氢呋喃和甲醇混合溶剂，搅拌溶解，在加入雷尼镍和氯化铵，升温，氮气置换后通入氢气，保温搅拌反应。反应结束后，过滤，滤液用饱和食盐水洗涤两次，水层合并用适量四氢呋喃反萃，有机层合并旋干，真空干燥至水分小于1.0％。在a10e化合物的制备步骤中，由a9化合物与二烷基磷乙酸在n,n’-羰基二咪唑(cdi)的存在下进行反应。优选n,n’-羰基二咪唑(cdi)和二烷基磷乙酸的用量各自均为a9化合物的1.5倍当量以上3当量以下，更优选各自均为2.05-2.22当量，更优选各自均为2倍当量。优选地，反应溶剂选自为四氢呋喃、甲苯、二氧六环、dmf、二氯甲烷等，优选四氢呋喃。反应产物优选采用四氢呋喃、甲基叔丁基醚、甲基叔丁基醚+四氢呋喃、dmf+水、二氧六环、乙酸乙酯、二氯甲烷或乙醇进行浆洗。优选采用四氢呋喃、甲基叔丁基醚、甲基叔丁基醚+四氢呋喃、dmf+水进行浆洗。反应温度优选为常温至50℃。优选地，将cdi加入到反应釜中，再加入thf，搅拌并升温。将二乙基磷乙酸溶于适量thf中，滴加至反应釜中，混合物搅拌，备用。将a9溶于thf，升温，将上述混合物滴加至a9的thf溶液中，滴加完毕后保温搅拌反应。反应结束后，将甲基叔丁基醚加入到反应体系中，搅拌。过滤，滤饼用适量mtbe：thf＝1：1.2(w/w)的混合液浆洗，再用水洗，然后用适量mtbe：thf＝1：1.2(w/w)的混合液浆洗。真空干燥。在a10化合物的制备步骤中，先将二甲氨基乙醛缩二烷醇转化为n,n-二甲基氨基乙醛，然后在碱的存在下进行反应。优选所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、醇钠、醇钾，优选叔丁醇钠。优选叔丁醇钠的用量为a10e的10倍当量以上15当量以下，优选为10倍当量。二甲氨基乙醛缩二烷醇用量优选为a10e化合物的2倍当量以上6当量以下，优选为4倍当量。反应温度优选为-30至-20℃。优选地，将浓盐酸加水稀释后，转移至反应釜中，升温。在氮气保护下，将二甲氨基乙醛缩二乙醇慢慢滴加至稀释后的盐酸中，滴加完毕后搅拌反应。使用前用固体碳酸钠中和至中性，滤去无机盐备用。将a10e、thf加入到反应釜中，搅拌，降温至-30℃～-20℃。将叔丁醇钠分批加入到反应釜中，保持温度在-30℃～-20℃，加料完毕搅拌。在-30℃～-20℃，滴加醛的水溶液进行反应。反应完毕后，转移至事先加入适量水的后处理釜中，搅拌，过滤，滤饼用纯化水洗至中性，再用适量正庚烷浆洗，真空干燥。(2)二马来酸盐的制备；将a10化合物与马来酸盐在溶剂中进行反应，制得二马来酸盐产物。所述溶剂为乙酸乙酯与水的混合溶剂，其中水与乙酸乙酯的质量比为1-4:20，优选为1:10。每质量份a10化合物使用1-4质量份水，优选2质量份水。当水的比率和用量过少时，迈华替尼含量较低，式(ii)化合物含量较高。优选地，将乙酸乙酯和水加入到反应釜中，升温。再将a10加入到反应釜中，搅拌至全溶。将马来酸溶于到适量乙酸乙酯中，将马来酸的乙酸乙酯溶液滴加至反应釜中进行反应，反应完毕后降温，搅拌析晶。过滤，滤饼用少量乙酸乙酯浆洗，真空干燥，得二马来酸盐(迈华替尼组合物)。任选地，还包括以下(3)重结晶步骤。(3)重结晶；将二马来酸盐产物采用溶剂进行重结晶，所述溶剂为乙酸乙酯与水的混合溶剂，其中水与乙酸乙酯的质量比为1-4:20，优选为1:10。每质量份二马来酸盐使用1-4质量份水，优选2质量份水。重结晶温度优选为45-65℃，更优选50℃。优选在析晶时加入迈华替尼晶种。优选地，将乙酸乙酯和水加入到反应釜中，升温。通入氮气，将二马来酸盐加入到反应釜中，搅拌至全溶，降至室温，析晶，过滤，滤饼用少量乙酸乙酯浆洗，真空干燥。成盐和重结晶过程中，结晶优选在氮气保护下进行，可以提高纯度。第三方面，提供上述迈华替尼组合物在制备用于预防或治疗与egfr和her2激酶功能有关的适应症的药物中的用途，以及提供上述迈华替尼组合物用于预防或治疗与egfr和her2激酶功能有关的适应症的用途。可选地，所述与egfr和her2激酶功能有关的适应症包括乳腺癌、卵巢癌、胃肠癌、食管癌、肺癌、头颈部鳞癌、胰腺癌、表皮鳞癌、前列腺癌、神经胶质瘤和鼻咽癌；所述药物的药物制剂包括上述迈华替尼组合物和药学上可接受的辅料，其可以单剂量或多剂量，通过具有相似用途的药剂的任意可接受的给药方式进行给药，例如直肠、口腔(包括颊内或舌下)、鼻内和经皮途径给药，或者通过动脉内注射、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、口服、局部、作为吸入剂给药。所述用于预防或治疗与egfr和her2激酶功能有关的适应症的药物的剂型包括液体制剂、气体制剂、固体制剂和半固体制剂，合适的制剂包括片剂(包括肠溶包衣片剂)、丸剂、粉剂、锭剂、囊剂、扁囊剂、酏剂、混悬液、乳液、溶液、糖浆剂、气雾剂、软膏剂、软和硬明胶胶囊、无菌可注射溶液和无菌包装粉剂的形式。可以是活性成分快速、持续或延迟释放的制剂。第四方面，提供式(ii)所示的化合物，上述式(ii)化合物，可以作为标准品(对照品)，用于检测和控制迈华替尼组合物中式(ii)化合物的含量，以确保产品的质量及安全性。本发明第五方面，提供了式(ii)化合物的制备方法，其合成路线如下。使1-二甲基胺-2-丙炔与二氧化碳(优选干冰)在碱的存在下反应制备4-(二甲基氨基)-2-炔丁酸，再使4-(二甲基氨基)-2-炔丁酸在氯甲酸异丁酯和n-甲基吗啉的存在下与a9反应制备z-a10-01化合物。将z-a10-01化合物在lindlar催化剂存在下氢化制备z-a10化合物，然后与马来酸成盐制得式(ii)化合物。第六方面，提供式(ii)化合物作为标准品(对照品)，用于检测迈华替尼组合物中式(ii)化合物或其含量的用途。第七方面，提供一种检测迈华替尼组合物中式(ii)化合物的含量的方法，其特征在于，以式(ii)化合物标准品为对照品，采用高效液相色谱法进行检测。优选地，高效液相色谱的流动相为磷酸氢二钠-磷酸缓冲液、甲醇、或者为乙腈与水的混合溶剂，优选采用磷酸氢二钠-磷酸缓冲液和甲醇进行梯度洗脱。有益效果：所提供的迈华替尼组合物及其制备方法，适合工业化生产，特定的有关物质即式(ii)化合物含量低。本发明人通过对可工业化生产的迈华替尼组合物中有关物质进行深入研究，提供的迈华替尼组合物的毒副作用显著降低，急性毒性试验表明，毒副作用处于可接受的程度范围。所提供的式(ii)化合物，可以作为检测和控制迈华替尼组合物中有关物质含量的标准品(对照品)，为确保迈华替尼原料药及制剂的质量提供了保障。附图说明图1是式(ii)化合物的1hnmr谱图。图2是实施例4中供试品溶液hplc色谱图。图3是实施例4中顺式异构体对照溶液hplc色谱图。图4是实施例4中顺式异构体对照溶液和供试品溶液的hplc叠加色谱图。具体实施方式以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于示例性地对本发明进行说明，并不用于限制本发明。所用迈华替尼游离碱(a10)按照专利文献cn104151359a中公开的方法制备。实施例1迈华替尼组合物的制备1、成盐步骤将479.7g乙酸乙酯和812.6g纯化水加入到反应釜中，升温至约50℃，再将406.3ga10加入到反应釜中，搅拌使其全部溶解；将203.1g马来酸加入到1145.5g乙酸乙酯中，搅拌使其全部溶解；将马来酸的乙酸乙酯溶液在50℃下滴加至反应釜中，滴加完毕后继续搅拌1h，自然降温，搅拌过液析晶，过滤，滤饼用3.44kg乙酸乙酯洗涤，35℃真空干燥，得到迈华替尼粗品。2、重结晶步骤取10.51kg乙酸乙酯和1.05kg水加入到10l反应釜中，升温至50℃，加入525.7g上述制备的迈华替尼粗品，搅拌至全溶后降至室温。加入3.0g迈华替尼晶种，析出固体后继续搅拌析晶4h。过滤，滤饼用1.60kg乙酸乙酯洗涤，35℃真空干燥过夜，得到503.4g迈华替尼组合物，收率95.8％，归一化纯度99.2％(批号met306-111041)。参照以上方法，另行制备两批迈华替尼组合物，归一化纯度均为99.2％(批号met306-111043、met306-111061)。参照以上成盐步骤，另行制备毒理批次迈华替尼组合物，归一化纯度为98.5％(毒理批次)。实施例2成盐、结晶条件参照实施例1的成盐方法，固定乙酸乙酯与水的质量比约为10:1，物料投入量和结果见下表。结果表明，水的加入量对产物的纯度及产物中残留式(ii)化合物的含量有较大影响。加入水多，有利于产品纯度的提升和式(ii)化合物含量的减少，但水的加入量过大，生成式(ii)化合物反而增多。另外，水的加入量对产品的收率也有影响，但试验发现，搅拌过夜可以确保收率在90％以上。参照实施例1的重结晶方法，迈华替尼粗品、乙酸乙酯和水的用量比以及所得产品的纯度如下表所示。结果表明，乙酸乙酯添加量过大，会导致纯度下降。然而，如果乙酸乙酯量过少，则不利于晶体析出。对比例1参照专利cn105859641中结晶工艺制备迈华替尼组合物三口烧瓶中加入10.22g迈华替尼游离碱，加入17ml乙酸乙酯，机械搅拌并加热至50℃，可观察到溶液浑浊，逐滴加入0.15mol/l的马来酸乙酸乙酯溶液，至出现沉淀(约加入125ml)，然后加入4.1ml去离子水，接着用注射器以1ml/min的速度加入0.15mol/l马来酸的乙酸乙酯溶液约175ml，在温度约50℃下保温搅拌15小时，自然降温至室温，抽滤并于35℃下真空干燥5小时，得到迈华替尼二马来酸盐晶型k，hplc纯度98.23％。实施例3式(ii)化合物(顺式异构体)的合成第一步：4-(二甲基氨基)-2-炔丁酸的合成(在-78℃下，将正丁基锂己烷溶液(2.5m，33.4mmol，13.4ml)缓慢滴加到1-二甲基胺-2-丙炔(33.4mmol,3.6ml,2.78g)的干燥四氢呋喃(15ml)溶液中。所得混合物在-78℃搅拌1小时，一次性加入压碎的干冰(335mmol,11.72g)，搅拌15分钟。将反应液倒入300ml水中，用100ml乙酸乙酯洗涤三次，水相减压浓缩，所得残留物溶于甲醇中，过滤除去不溶盐，滤液减压浓缩得到6.05g含大量无机盐的4-(二甲基氨基)-2-炔丁酸粗品。ms(esi)m/z＝128.2[m+1]。第二步：中间体z-a10-01的合成反应瓶中加入3g上述所得4-(二甲基氨基)-2-炔丁酸粗品、四氢呋喃300ml和n-甲基吗啉(31.8mmol,3.22g)，-10℃下，加入氯甲酸异丁酯(12.7mmol,1.74g)，保温反应30分钟。滴加a9(8.3mmol,2.94g)溶于80ml吡啶的溶液，继续搅拌1小时。加入200ml冰水和200ml饱和碳酸氢钠溶液。用乙酸乙酯(300ml×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱色谱分离提纯(甲醇/乙酸乙酯(v/v)＝1:10)，得到z-a10-01(2.4mmol，1.12g)，收率:28.9％。ms(esi)m/z＝464.2[m+1]。第三步：中间体z-a10的合成反应瓶中加入z-a10-01(0.2mmol，92.8mg)和20ml甲醇，继续加入lindlar催化剂(12mg)，体系抽真空，用氢气置换3次，室温下氢化反应16小时。垫硅藻土过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱色谱分离提纯(甲醇/乙酸乙酯(v/v)＝1:10)，得到z-a10(0.13mmol，60mg)，收率：65％。ms(esi)m/z＝466.9[m+1]。第四步：式(ii)化合物的合成三口烧瓶中加入z-a10(0.16mmol，75mg)和0.2ml乙酸乙酯，加热至50℃，滴加入0.1mol/l的马来酸乙酸乙酯溶液0.5ml，然后加入0.15ml去离子水，接着用注射器以1ml/min的速度加入0.1mol/l马来酸的乙酸乙酯溶液约0.8ml，在温度约50℃下保温搅拌2小时，自然降温至室温，抽滤并于35℃下真空干燥5小时，得到101mg式(ii)化合物。其1hnmr谱图及h原子归属见图1。实施例4迈华替尼组合物中式(ii)化合物的确认取迈华替尼组合物(参照实施例1的方法制备)适量，加乙腈:水(1:1)溶解配成供试品溶液。另取顺式异构体对照品适量，加乙腈:水(1:1)溶液配成对照溶液。取供试品溶液，注入液相色谱仪。色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长为245nm；柱温30℃；以5mm磷酸氢二钠-磷酸缓冲液(取磷酸氢二钠1.78g，加1000ml纯化水溶解，搅拌均匀后用磷酸溶液调节ph至7.4)为流动相a；以甲醇为流动相b，按下表进行梯度洗脱。记录色谱图，见图2。时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)04060525751822782459528595取对照溶液注入液相色谱仪，按照以上方法进行梯度洗脱，记录色谱图，见图3。分别取对照溶液和供试品溶液，混合后注入液相色谱仪，按照以上方法进行梯度洗脱，记录迈华替尼组合物和对照品的叠加色谱图，见图4。结果表明，在该色谱条件下，迈华替尼及其顺式异构体可以很好地分离，保留时间分别约为14.7min和16.7min。叠加色谱图中，在保留时间约16.7min的位置出现了单一的叠加峰，表明迈华替尼组合物中存在与顺式异构体出峰位置一致的组分。为进一步确认，收集该出峰位置对应的组分，减压浓缩后进行lcms检测。测得其分子离子峰m/z＝466.2，与顺式异构体一致。实施例5式(ii)化合物作为对照品的应用分别取不同批次的迈华替尼组合物适量，精密称定，加入乙腈:水(1:1)溶液配成浓度为0.5mg/ml的供试品溶液。另取迈华替尼对照品和顺式异构体对照品适量，精密称定，加入乙腈:水(1:1)溶液配成对照品混合溶液，其中迈华替尼和顺式异构体的浓度均为5μg/ml。取对照品混合溶液10μl，注入液相色谱仪，检测条件同实施例4。迈华替尼与顺式异构体依次出峰。取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，检测条件同实施例4。记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有与顺式异构体对照品保留时间一致的峰，分别按照归一化及自身对照法以峰面积计算顺式异构体的含量。即，以式(ii)化合物作为对照品进行定位，可测定迈华替尼组合物中顺式异构体的归一化含量及自身对照含量。另外，式(ii)化合物也可作为对照品，采用外标法计算迈华替尼中顺式异构体的重量含量。试验例1、细胞抑制试验细胞：nci-h292购自中科院上海生命科学院细胞库(sibcb)，nci-h1650购自atcc，a549由密歇根大学惠赠。人小肠粘膜上皮细胞系从流产胎儿小肠分离而得。细胞均于37℃，5％co2培养箱中培养。所测细胞系在含10％胎牛血清的rpmi-1640培养基中。受试样品：迈华替尼组合物(参照实施例1的方法制得，式ii化合物归一化含量为0.015％)、式ii化合物(参照实施例3的方法制备得到)。实验方法：先将式ii化合物与迈华替尼组合物溶于100％dmso中，再用培养基稀释至所需浓度，配制0.001、0.01、0.1、1、10μm共5个浓度梯度，dmso的终浓度均为0.1％。以0.1％的dmso培养基溶液作为阴性对照，以0.1％dmso培养基溶液中接种细胞作为细胞对照。wst方法单药测试实验加药(避光操作)：在96孔培养板中，每个实验剂量做3复孔，100μl/孔，式ii化合物与迈华替尼组合物各5个剂量浓度；细胞对照孔及阴性对照孔均以0.1％的dmso培养基溶液替代。接种细胞(避光操作)：除阴性对照孔之外，每个待测孔加入100μl完全培养基细胞悬液，其中含有相应细胞数以确保达到培养所需时间时细胞对照组的细胞刚好铺满孔底面。阴性对照孔用0.1％dmso培养基溶液100μl代替。37℃，co2培养箱中培养72小时。吸弃待测孔内液体。每个测试孔加入100μlcck-8检测液，37℃，co2培养箱中孵育3-4小时。酶标仪a450nm检测od值。使用下列公式计算细胞存活率百分比：(o.d.sample–o.d.blank)/(o.d.control-o.d.blank)×100。使用graphpadprism软件的非线性回归数据分析方法计算ic50。结果见下表。试验例2、大鼠急性毒性研究采用迈华替尼组合物(毒理批次，式ii化合物归一化含量为0.76％)评价迈华替尼单次灌胃和静脉注射给予sd大鼠后可能出现的毒性反应。试验用sd大鼠50只，随机分为5组(5只/性别/组)，第1组动物灌胃给予0.5％cmc-na溶液，第2、3、4组分别灌胃给予迈华替尼200、500、1000mg/kg，第5组静脉注射给予迈华替尼100mg/kg，给药容量均为10ml/kg。给药后观察4小时，以后每天上午和下午各观察一次，观察期为14天。试验期间，定期测量动物体重和摄食量。观察期结束后，将动物实施安乐死，进行大体解剖观察，并对大体解剖所见异常的组织器官进行显微镜检查。试验期间，灌胃1000mg/kg剂量组共有9只动物发现死亡，其中4只雄性动物于d6(第6天，以下d含义相同)和d8发现死亡，5只雌性动物于d3～d8发现死亡；灌胃500mg/kg剂量组共有3只雌性动物于d7和d9发现死亡；静脉注射100mg/kg剂量组1只雄性动物药后1min内死亡。试验期间，第1组溶媒对照组未见异常反应。灌胃给药临床观察：200mg/kg剂量组，有4只雄性动物于试验期间可见鼻分泌物、软便、稀便和肛周污秽现象，2只雌性动物可见眼或鼻分泌物。500mg/kg剂量组，雄性动物d2～d15出现鼻分泌物、软便、肛周污秽、肛周皮肤发红、稀便、精神不振、异常运动、弓背、眼分泌物、唾液分泌过多、被毛蓬松、包皮肿胀、阴茎肿胀、脱毛、皮肤破溃和红色尿液；雌性动物d3～d15出现鼻分泌物、眼分泌物、稀便、肛周污秽、精神不振、异常运动、被毛蓬松、俯卧、弓背和软便，有3只雌性动物于d7和d9发现死亡。1000mg/kg剂量组，雄性动物于d3～d15出现鼻分泌物、软便、稀便、肛周污秽、被毛蓬松、弓背、眼分泌物和被毛稀疏，有4只雄性动物分别于d6和d8发现死亡；雌性动物于d2～d7开始出现鼻分泌物、稀便、肛周污秽、精神不振、弓背、被毛蓬松和异常运动，5只雌性动物于d3～d8发现死亡。静脉给药：100mg/kg剂量组1只雄性动物药后1min内死亡，其余动物全身异常反应主要表现为药后即刻出现精神不振、呼吸急促和俯卧，药后60min内恢复；2只雌性动物于d3出现鼻分泌物，于d4恢复。注射局部反应主要表现为d3开始陆续出现尾部肿胀、尾部变色和结痂。给药期间，与同期同性别溶媒对照组比较，灌胃200mg/kg剂量组雄性动物d15的体重降低，雌性动物d4的体重降低，降低范围为8％～9％；灌胃500mg/kg剂量组雄性动物d8、d11和d15的体重降低，雌性动物d4和d8的体重降低，降低范围为20％～34％；灌胃1000mg/kg剂量组动物d4的体重降低，降低范围为11％～16％；静脉注射100mg/kg剂量组动物的体重未见明显差异。试验期间，灌胃200、500和1000mg/kg剂量组动物药后第1周(w1)的摄食量低于同期同性别溶媒对照组，静脉注射100mg/kg剂量组动物的食量与同期同性别溶媒对照组相近。病理学检查结果显示，迈华替尼单次灌胃给予sd大鼠，计划时间安乐死的动物未见明确与供试品相关的大体变化和组织学改变。500mg/kg剂量组和1000mg/kg剂量组死亡动物的病理学检查，胃肠道病变可能与供试品相关；胸腺、脾脏、肾上腺等异常尚不能确定与供试品的相关性。迈华替尼单次静脉注射给予sd大鼠，除注射部位及其周围组织外，未见其它明确与供试品相关的大体变化和组织学改变。部分动物注射后尾部出现肿胀、变色、结痂，认为与供试品的局部刺激性相关。迈华替尼单次灌胃给予sd大鼠，主要毒性反应为胃肠道反应，致死剂量(ld)为500mg/kg，最大耐受剂量(mtd)≥200mg/kg。迈华替尼单次静脉注射给予sd大鼠，主要毒性反应为注射局部刺激反应，致死剂量(ld)为100mg/kg。当前第1页12