本发明提供了一种外用抗真菌组合物，尤其是一种含有提取自蜂斗菜的倍半萜类化合物的外用组合物。
背景技术：
蜂斗菜内酯类化合物为分离自菊科蜂斗菜属植物中的以蜂斗菜内酯(cas：19906-72-0，结构如下式
中国专利文献cn102086182a公开了一种提取自掌叶蜂斗菜的蜂斗菜内酯viia(结构如下式
技术实现要素：
为解决前述问题，本发明采用的技术方案为：
提供含有一种蜂斗菜内酯的抗真菌皮肤用组合物，其特征在于所述皮肤用组合物由作为活性成分的酮康唑和蜂斗菜内酯viia，和至少一种用于皮肤外用的辅料组成；所述皮肤用组合物中酮康唑的质量百分比含量为0.9％～1.1％，蜂斗菜内酯viia与酮康唑的质量比为0.6～0.8：1。
所述的含有一种蜂斗菜内酯的抗真菌皮肤用组合物，其特征在于所述蜂斗菜内酯与酮康唑的质量比优选为0.65～0.75:1。最优选酮康唑的质量百分含量为1％，蜂斗菜内酯与酮康唑的质量比为0.7:1。
所述的含有一种蜂斗菜内酯的抗真菌皮肤用组合物，其特征在于所述皮肤用组合物的剂型为凝胶剂，所述辅料选自卡波姆、保湿剂、溶剂、防腐剂、表面活性剂、ph调节剂中的一种或几种，以及余量的水。
所述卡波姆用量为组合物总质量0.8％～1.2％，优选为卡波姆934；所述溶剂为选自乙醇、丙二醇、dmf(n，n-二甲基甲酰胺)，优选乙醇和/或丙二醇；所述的保湿剂选自丙三醇、山梨醇或甘露醇，用量为4％～10％，优选为4％～6％的丙三醇；所述表面活性剂优选吐温-80，用量为0.5％～1％；所述的ph调节剂选自氢氧化钠、磷酸/磷酸盐缓冲剂、醋酸/醋酸盐缓冲剂、柠檬酸/柠檬酸盐缓冲剂、硼酸/硼酸盐缓冲剂中的一种，所述防腐剂为尼泊金乙酯，用量为0.1％。
本发明中所述百分比均为占组合物的重量百分比。
酮康唑由于被发现在口服时肝毒性较大，使用受到了很大的限制。在体外抑菌实验中我们发现虽然蜂斗菜内酯viia的在抑菌实验时，同样浓度下抑菌圈直径仅为酮康唑的约25～30％，但在与酮康唑特定比例进行配伍时，产生了更好的对常见的人体皮肤真菌病病原的抑菌效果。蜂斗菜内酯viia在外用时无明显的皮肤刺激性。基于上述发现本发明提供了含有一种蜂斗菜内酯的抗真菌皮肤用组合物，动物实验表明，该外用组合物皮肤真菌病的治疗效果，高于单独施用酮康唑，说明特定比例的蜂斗菜内酯viia与酮康唑对常见皮肤致病真菌造成的真菌性皮肤病，能够协同抗真菌并促进皮损修复，在进一步实验中我们发现，蜂斗菜内酯viia与酮康唑的配比在约0.7：1时，上述协同效果更为明显。而在本发明提供的配比范围之外，两种活性成分的协同抗真菌效果开始出现明显下降。
具体实施方式：
蜂斗菜内酯viia的分子式如下
一、体外抑菌效果实验
1、培养基的制备
马铃薯葡萄糖琼脂培养基(pda)，质量分数为马铃薯20％、葡萄糖2％、琼脂1.8％。每个试管中加入5ml培养基制备成斜面培养基；直径90mm的平皿中加入20ml培养基制备成平板培养基
2、实验方法
2.1菌株的处理
①将阳性菌落使用灭菌接种环转种于平皿pda培养基活化菌株，丝状型真菌采取一区划线法，置于28℃恒温培养箱，培养7天；念珠菌使用三区划线法，置于35℃恒温培养箱，培养2天。
②挑取无污染的菌落采取三区划线法转种于平皿pda培养基进行分纯，培养条件同前。
③挑取单独的纯化菌落以“z”字形转种于斜面sda试管培养基中，丝状型真菌置于28℃恒温培养箱，培养10天后经玻片小培养鉴定到种；念珠菌置于35℃恒温箱，培养2天后接种于科玛嘉培养基显色鉴定到种。
本实验采用的的菌株分别为属于皮肤癣菌的红色毛癣菌、须癣毛癣菌、石膏小孢子菌和属于念珠菌的白色念珠菌和光滑念珠菌
2.2制作菌悬液
挑取适当菌落团块，溶于1ml加入吐温80的0.9％灭菌生理盐水。用微量振荡器震荡2min，充分震荡洗脱出孢子，使用血细胞计数器调节菌悬液浊度至5×106～10×106cfu/ml。
2.3制作含菌平板
抽取0.5ml菌悬液置于pda平皿培养基，用灭菌涂布棒使之均匀分布于培养基表面。
2.4打孔加药
以直径6mm的打孔器在涂菌后的培养基上打孔，挑去孔内琼脂，将待测试药物分别挤入1ml无菌注射器中，每孔内加药0.1ml。
将活性成分溶于dmso后再按下表所示浓度配制成混合溶液后，作为各组的待测试药物
2.5培养与结果测量
药敏实验平板置于28℃恒温培养箱，培养10天。使用游标卡尺测量每种药的抑菌环半径，记录各药孔周围抑菌圈半径mm值。每株菌同时做3个平板。
结果如下(单位mm，n＝3，means±s)
实验结果表明，同样浓度的蜂斗菜内酯viia与酮康唑，前者的形成的抑菌圈直径仅为后者的15％～25％，但两者以0.6～0.8：1:的比例混合后可以显著提高对各种致病真菌的抑制效果，其抑制效果不但高于单用活性成分的实验组6/7，也高于采用了不同比例的其他实验组。因此选定蜂斗菜内酯viia与酮康唑的最优配比为以0.7：1，并基于该比例制备外用组合物。
二制剂实施例
制剂实施例中将复方酮康唑外用组合物制备成为凝胶剂，配方如下
实施例1
酮康唑10g、蜂斗菜内酯viia6g，
卡波姆93410g，丙三醇50g吐温806g
尼泊金乙酯1g蒸馏水加至1000g
将卡波姆与吐温80及300ml蒸馏水混合，氢氧化钠溶于100ml水后加入上液搅匀，再将酮康唑及蜂斗菜内酯viia溶于适量乙醇后逐渐加入搅匀，补足余量的水搅匀即得透明凝胶。
实施例2
酮康唑10g、蜂斗菜内酯viia7g
卡波姆93412g丙三醇50g吐温805g
蒸馏水加至1000g
将卡波姆与吐温80及300ml蒸馏水混合，后加入上液搅匀，再将酮康唑及蜂斗菜内酯viia溶于适量乙醇后逐渐加入搅匀，补足余量的水搅匀即得透明凝胶。
实施例3
酮康唑10g蜂斗菜内酯viia8g
卡波姆93412g乙醇50g丙三醇50g吐温8010g
尼泊金乙酯1g蒸馏水加至1000g
将卡波姆与吐温80及300ml蒸馏水混合，加入0.1m氢氧化钠溶液调节ph至7.0，再将酮康唑及蜂斗菜内酯viia溶于乙醇后逐渐加入搅匀，补足余量的水搅匀即得透明凝胶。
实施例4
酮康唑9g蜂斗菜内酯viia6.3g
卡波姆93412g乙醇60g丙三醇80g吐温808g
尼泊金乙酯1g氢氧化钠4.5g蒸馏水加至1000g
将卡波姆与吐温80及300ml蒸馏水混合，加入0.1m氢氧化钠溶液调节ph至7.0，再将酮康唑及蜂斗菜内酯viia溶于乙醇后逐渐加入搅匀，补足余量的水搅匀即得透明凝胶。.
实施例5
酮康唑11g蜂斗菜内酯viia6.6g
卡波姆93410g乙醇60g丙三醇60g吐温808g
尼泊金乙酯1g氢氧化钠4g蒸馏水加至1000g
将卡波姆与吐温80及300ml蒸馏水混合，加入0.1m氢氧化钠溶液调节ph至7.0，再将酮康唑及蜂斗菜内酯viia溶于乙醇后逐渐加入搅匀，补足余量的水搅匀即得透明凝胶。.
对比例1
按照实施例1的配方，将活性成分改为酮康唑20g。
对比例2
按照实施例1的配方，将活性成分改为蜂斗菜内酯viia20g。
药理实施例1真菌抑菌效果对比实验
1、材料
实验动物为hartley豚鼠，体重300±20g,雌雄各半，
2、菌悬液的制备
将须癣毛癣菌菌株在pda固体培养基上连续传代培养2次(28℃),以保证其活力。于第二次培养5d后，挑其菌落与0.9％生理盐水中，制成终浓度为1×108cfu/ml的菌悬液。
3、造模
豚鼠背部剃刀剃毛，用日本脱毛蜡脱毛，形成沿脊柱对称的两个4.0cm×4.0cm的无毛区。对无毛区进行真菌直接镜检及培养,结果均为阴性确认为阴性后用砂纸在豚鼠背上轻轻均匀地摩擦,并将菌悬液200μl均匀涂布于背部无毛区。涂菌1次后,连续观察10天。
4、分组及给药
取造模成功的实验动物随机分组，每组5只，每只动物的两个无毛区，给予同一种药物，连续给药14d，并记录给药前和给药14d后的评分，
评分标准
4分：红、肿、皮肤增厚，皮屑致密布满整个皮损部位。
3分：红、肿，皮损部位皮屑间有点状正常皮肤,累计小于25％。
2分：微红、不肿，皮损部位皮屑间有线状正常皮肤,累计小于50％。
1分：不红、不肿，皮损部位有少许皮屑间，75％以上皮肤正常。
0分：不红、不肿，基本正常。
分组给药与实验结果见下表
实验结果表明，实验1～5组采用本发明实施例提供的组合物，其对真菌感染模型动物的治疗效果既明显优于对照组，也优于采用单一活性成分的实验6/7组，说明本发明提供的组合物通过优选两种活性成分的比例，提高了对于皮肤真菌感染的治疗效果，特别是实验2/4组，其效果也明显优于其他实验组，说明特别优选的蜂斗菜内酯与酮康唑比例(0.7:1)能够表现出更好的抗皮肤真菌感染效果，可以提高抗真菌效果的同时减少酮康唑的用量。