本发明涉及日化护肤
技术领域：
，特别是涉及含干细胞多肽因子的组合物及在护肤抗衰上的应用。
背景技术：
：皮肤皱纹，是皮肤自然老化和光老化共同作用的结果，与多种因素有关，如年龄、重力、肌肉/关节运动、吸烟等。随着年龄的增长，表皮角质层中的自然保湿因子不断减少，导致皮肤组织细胞的水分减少，细胞皱缩、老化，出现细小皱纹，日光中uva和uvb照射皮肤后可产生高度反应的自由基，造成表皮细胞膜受损及一些细胞酶类破坏，从而释放细胞因子及花生四烯酸代谢产物等，促进真皮层中胶原蛋白的降解及弹性纤维的变性，从而导致皮肤松弛，产生皱纹。在各种因素的作用下真皮成纤维细胞数量减少，胶原类型比例倒置，真皮乳头层和网状层弹性纤维减少及退化，胶原纤维和弹性纤维的排列紊乱，导致皱纹产生。随着年龄的增长，脂肪组织逐渐萎缩，导致真皮网状层下部及筋膜的纤维性小梁失去支撑，造成皮肤松弛，再加上地心引力的作用，使松弛的皮肤下垂，形成皱襞。此外，面部皱纹也与面部表情肌有关，表情肌附着于皮肤，当它收缩时皮肤可在与它收缩成直角处出现皱纹，并随岁月的增加而增多和加深。皮肤皱纹在祖国医学属于“驻颜除皱”，“益容”，“抗老防衰”的范畴，是由于脏腑虚衰、气血失调、阴阳失衡、外感内伤所致。肾为先天之本，生命之根，当肾精亏虚，化生乏源，会导致脏腑失荣，功能失司，出现发堕齿槁，腰膝酸软等衰老症状，同时精气血不能上达于面，皮肤失于濡养，而致皮肤菲薄多皱。脾为后天之本，脾胃虚弱，气血生化乏源，气血亏虚，不能上达于面，皮肤失养，枯槁无泽，久之则皮肤干燥粗糙，皱纹横生，阴阳平衡，则机体健康无病。如果生理状态的阴阳相对平衡受破坏，就会发生阴阳偏盛偏衰的病理状态，长期不能纠正，可导致阴或阳的虚损，加速衰老过程，促进皮肤皱纹的出现。若禀赋不耐，皮毛腠理不密或脾虚失运，水湿不化，蕴久化热，湿热内生，如又值春夏季节，天气渐暖，复外感阳光毒热之邪，与体内久蕴湿热搏结，郁阻于肌肤而化热生风，风胜则燥，肌肤失养，久之则皮肤无泽，皱纹横生。目前西医除皱手段较多，如手术祛皱、填充物注射、肉毒毒素注射、皮肤微晶磨削等。这些祛皱方法见效快，疗效可靠，但大多是有创性的，存在一定的风险及副作用。现代人对形象越来越重视，因此祛皱抗衰功效的护肤品的研发也越来越多。技术实现要素：肌肤中干细胞虽然有自我复制和再生的能力，但是它同样面临着岁月困扰，随着年龄的增长，干细胞将逐渐失去再生的能力与潜力，不断的增殖造成干细胞的老化和丢失，无法及时分化出新的细胞来替换衰老的细胞，造成肌肤渐渐出现皱纹、失去弹性、肤色暗沉、粗糙等肌肤老化问题。含干细胞生长因子的护肤组合物为皮肤再生和修复提供细胞来源，可以补充皮肤的细胞数量，使得细胞的新生和死亡保持平衡。本发明所要解决的第一个问题是提供一种含干细胞生长因子的护肤组合物。含干细胞生长因子的护肤组合物，含有如下成分，按质量百分比计为：人干细胞生长因子(1×10-5～2×10-5)％，桃仁提取物物13～15％，淡竹叶提取物5～10％，枇杷叶提取物1～3％，黄芪提取物1～3％，富番茄红素的孢子提取物1～5％，橘皮提取物1～3％，植物源糖蛋白0.1～4％，余量为薏苡仁提取物。所述含干细胞生长因子的护肤组合物中的所有成分既可以通过市售的方法得到，也可以通过现有的专利或者文献自行制备。番茄红素是一种由11个共轭及2个非共轭双键组成的非环状平面脂溶性不饱和碳氢化合物，它是许多类胡萝卜素生物合成的中间体，经过环化可形成其他类胡萝卜素。番茄红素是类胡萝卜素中最强有力的氧猝灭剂，其极强的抗氧化性对抗衰老、增强免疫力及预防癌症等有重要的作用。在本发明的一些技术方案中，所述富番茄红素的孢子提取物通过以下过程得到：将粗糙脉胞菌置于种子培养基于28～30℃活化培养24～48小时，随后加入到无菌水中，于28～30℃、120～170转/分钟搅拌1～3小时，使孢子分散均匀，获得浓度107～109cfu/ml的孢子分散液；将孢子分散液按照0.6～1％的体积比接种入含有固体发酵培养基的平板中，于28～30℃光照下静置培养48～96小时；发酵培养结束后，收集孢子，置于50～60℃鼓风干燥箱中烘干2～3天；将烘干后的干孢子以固液比1：(50～70)(g/l)加入乙酸乙酯中，在25～30℃超声破碎15～40分钟后，置于暗室室温浸提1.5～4小时；将提取液真空冷冻干燥，即得富番茄红素的孢子提取物。在本发明的一些技术方案中，所述富番茄红素的孢子提取物通过以下过程得到：将粗糙脉胞菌置于种子培养基于28～30℃活化培养24～48小时，随后加入到无菌水中，于28～30℃、120～170转/分钟搅拌1～3小时，使孢子分散均匀，获得浓度107～109cfu/ml的孢子分散液；向孢子分散液中加入酶激活物0.2～0.4g/l、前体物质23～25mg/l、麦角固醇合成抑制剂0.95～1.0mg/l、番茄红素环化酶抑制剂550～570mg/l，充分混匀，得到混合液；将混合液按照0.6～1％的体积比接种入含有固体发酵培养基的平板中，于28～30℃光照下静置培养48～96小时；发酵培养结束后，收集孢子，置于50～60℃鼓风干燥箱中烘干2～3天；将烘干后的干孢子以固液比1：(50～70)(g/l)加入乙酸乙酯中，在25～30℃超声破碎15～40分钟后，置于暗室室温浸提1.5～4小时；将提取液真空冷冻干燥，即得富番茄红素的孢子提取物。在上述技术方案中，所述前体物质为柠檬酸、琥珀酸、香叶醇中的一种或几种，所述酶激活物为h2o2、bht中的一种或几种，所述麦角固醇合成抑制剂为酮康唑、盐酸特比萘芬、十二环吗啉中的一种或几种，所述番茄红素环化酶抑制剂为2,6-二甲基吡啶、烟碱、2-异丙基咪唑中的一种或几种。优选地，所述前体物质为香叶醇，所述酶激活物为bht，所述麦角固醇合成抑制剂为盐酸特比萘芬，所述番茄红素环化酶抑制剂为2-异丙基咪唑。粗糙脉胞菌发酵产番茄红素，其代谢过程中可以通过添加前体物、麦角固醇合成抑制剂、番茄红素环化酶抑制剂及抗应激反应效应物等提高最终番茄红素的产量。前体物可整体性提高所有产物的产量；酶激活物的加入会刺激相应酶的活性，起到调节代谢的作用，进而大大促进番茄红素的生物合成；麦角固醇合成抑制剂可切断麦角固醇合成支路，从而提高番茄红素产量；番茄红素环化酶抑制剂可抑制番茄红素进一步环化为β-胡萝卜素，使代谢停止在番茄红素阶段，达到积累番茄红素的目的。bht、香叶醇和盐酸特比萘芬均易溶于乙醇，2-异丙基咪唑易溶于水，由于乙醇与水互溶，而固体培养基是用无菌水配制的，所以配制培养基时这些物质均可溶于其中。粗糙脉孢菌的菌丝深入、蔓延到培养基中可吸收营养物质，供孢子生长，同时溶解在培养基中的各种助剂通过菌丝的吸收和输送，在代谢途径的不同阶段可分别起到相应的作用，从而进一步促进孢子中番茄红素的积累。进一步地，所述植物源糖蛋白为覆盆子糖蛋白和/或远志糖蛋白。更优选地，所述植物源糖蛋白为覆盆子糖蛋白和远志糖蛋白以质量比1:1组成的混合物。本发明所要解决的第二个问题是公开含干细胞生长因子的护肤组合物在制备具有祛皱抗衰作用的护肤品中的应用。进一步地，所述含干细胞生长因子的护肤组合物在护肤品中的含量为0.5～8wt％。进一步地，所述护肤品的原料中还包括辅酶q10和硫辛酸的复合乳液。进一步地，所述辅酶q10和硫辛酸的复合乳液按质量百分比的组成为：辛酸癸酸甘油酯5～9％，单硬脂酸甘油酯1～5％，硬脂醇聚醚-214～8％，s2硬脂醇聚醚-20.5～1.5％，辅酶q102～5％，硫辛酸1～3％，余量为去离子水；所述辅酶q10和硫辛酸的复合乳液的制备方法为：将单硬脂酸甘油酯、辛酸癸酸甘油酯、硬脂醇聚醚-21、s2硬脂醇聚醚-2置于65℃水浴搅拌混合均匀，然后加入辅酶q10和硫辛酸，待搅拌至辅酶q10和硫辛酸溶解完全后，加入剩余含量的去离子水，充分搅拌后混合均匀，得到辅酶q10和硫辛酸的复合乳液。进一步地，所述护肤品包括抗衰老霜、抗衰老面膜液、抗衰老精华液。本发明所要解决的第三个问题是公开一种含干细胞生长因子的护肤组合物的护肤品。本发明公开一种含有权利要求1所述的含干细胞生长因子的护肤组合物的抗衰老霜，含有如下按质量百分比计的成分：其制备过程为：将a相组分于60～80℃溶解，加入b相组分以2000～4000转/分钟均质15～30分钟，随后自然降温至37～40℃，加入c相组分、d相组分，搅拌均匀，脱气，得到抗衰老霜。本发明所述含干细胞生长因子的护肤组合物应用在护肤品中可以改善肤质，提升皮肤含水量，降低经皮水分丢失，保持皮肤柔软和弹性，延缓皮肤中蛋白质的流失，增强皮肤中细胞合成蛋白的能力，具有很好的抗氧化功能和抗衰老功能。具体实施方式实施例中原料介绍如下：人干细胞生长因子通过专利申请号201010614697.3的实施例1制备得到。桃仁提取物，参考申请号201610943438.2的实施例1制备得到，包括以下步骤：(1)将桃仁进行去杂处理后，再将其放入沸水中水焯2分钟，取出后自然晾干备用；(2)将步骤(1)处理后的桃仁粉碎后过80目筛，然后再放入取总质量3倍的质量分数为85％的乙醇溶液中，不断回流浸提12小时，过滤得浸提液和滤渣，再将浸提液进行去醇处理后得到溶液a备用；(3)将步骤(2)所得的滤渣放入其总质量4倍的石油醚中，浸泡提取8小时后将石油醚提取液取出，然后对其进行石油醚去除操作，得溶液b备用；(4)将步骤(2)所得的溶液a和步骤(3)所得的溶液b共同混合均匀后，再加入等体积的乙酸乙酯，同时进行超声处理，连续提取30分钟，取上层清液备用；将上清液真空冷冻干燥，即得桃仁提取物。淡竹叶提取物，参考专利申请号201310203779.2制备得到，包括以下步骤：取淡竹叶茎叶100g，粉碎，加1500ml体积浓度80％的乙醇溶液，于提取罐中85℃回流提取两次，每次3小时，过滤，滤液和滤渣均保留待用；滤液浓缩回收乙醇至含固量12wt％的浓缩液，然后在170℃喷雾干燥，得淡竹叶醇溶性提取物；取过滤后的滤渣，继续添加1200ml的蒸馏水，90℃浸泡提取4小时，离心后，离心液浓缩至含固量12wt％，然后在170℃喷雾干燥，得淡竹叶水溶性提取物；将所得淡竹叶醇溶性提取物和淡竹叶水溶性提取物以质量比1:2的比例进行混合，即得。枇杷叶提取物，参考专利申请号200610069043.0制备得到，包括以下步骤：将新鲜枇杷叶水洗、干燥、粉碎，过20目筛得枇杷叶粉末；将3.6kg枇杷叶粉末放入提取罐中，用枇杷叶粉末10倍重量的水，于78℃提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液在绝对压强0.06mpa的条件下，经过减压回收溶剂、真空浓缩得到枇杷叶提取物。黄芪提取物与淡竹叶提取物的制备方法相同，将淡竹叶茎叶替换为黄芪即可。橘皮提取物与淡竹叶提取物的制备方法相同，将淡竹叶茎叶替换为橘皮即可。薏苡仁提取物，参考专利申请号201811292744.x制备得到，包括以下步骤：步骤1：称取薏苡仁40目100份，加入5倍重量的蒸馏水，搅拌煮沸10分钟，冷却至室温，加入以蒸馏水重量为基准的2％(质量百分数)的ɑ淀粉酶，置于65℃恒温水浴1小时，加热煮沸10分钟，趁热过滤，滤渣于50℃烘干，得到干粉；步骤2：向上述干粉中，加入8倍重量的体积分数70％的乙醇溶液，回流提取2小时，得到第一次滤液；步骤3：第二次再加入干粉重量8倍量的体积分数70％的乙醇溶液，回流提取2小时，得到第二次滤液；步骤4：合并两次滤液，加热浓缩至原体积的1/3，使用旋转蒸发仪除去乙醇溶液，再将得到的滤液和残渣烘干，粉碎过80目筛，即得薏苡仁提取物。粗糙脉胞菌，菌种编号n.crassa3.1607，购于广东省微生物菌种保藏中心。种子培养基的组成：去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂16g，蒸馏水定容至1l。种子培养基的制备方法为常规工艺，不再赘述。固体发酵培养基的组成：葡萄糖30g，蛋白胨20g，琼脂粉16g，nano33.0g/l，mgso40.5g/l，kcl0.5g/l，feso40.01g/l，k2hpo41.0g，用蒸馏水定容至1l。bht，即2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚，厂家河北源创生物科技有限公司。香叶醇，厂家成都顺成化工集团有限公司。盐酸特比萘芬，厂家湘潭嘉叶源生物科技有限公司。2-异丙基咪唑，厂家江苏康乐新材料科技有限公司。单硬脂酸甘油酯，厂家山东滨州金盛新材料科技有限责任公司。辛酸癸酸甘油酯，厂家广州诗茗化工有限公司。硬脂醇聚醚-21，厂家广州洁宇化工有限公司。s2硬脂醇聚醚-2，厂家优索化工科技有限公司。辅酶q10，厂家西安皓天生物科技有限公司。硫辛酸，厂家常熟富士莱医药化工有限公司。【实施例1】含干细胞生长因子的护肤组合物，含有如下成分，按质量百分比计为：人干细胞生长因子2×10-5％，桃仁提取物物13％，淡竹叶提取物10％，枇杷叶提取物1％，黄芪提取物2％，富番茄红素的孢子提取物5％，橘皮提取物1％，覆盆子糖蛋白3％，余量为薏苡仁提取物。富番茄红素的孢子提取物通过以下过程得到：将粗糙脉胞菌置于种子培养基于30℃活化培养48小时，随后加入到无菌水中，于30℃、120转/分钟搅拌1小时，使孢子分散均匀，获得浓度107cfu/ml的孢子分散液；将孢子分散液按照0.6％的体积比接种入含有固体发酵培养基的平板中，于30℃光照下静置培养96小时；发酵培养结束后，收集孢子，置于55℃鼓风干燥箱中烘干2天；将烘干后的干孢子以固液比1：60(g/l)加入乙酸乙酯中，在超声功率300w、25℃破碎15分钟后，置于暗室室温浸提1.5小时；将提取液真空冷冻干燥，即得富番茄红素的孢子提取物。覆盆子糖蛋白，参考文献《安徽农业科学》(2009年08期，王芳)制备得到，具体条件为：料液比1:15，提取温度50℃，提取时间4小时，提取次数2次。【实施例2～6】含干细胞生长因子的护肤组合物，含有如下成分，按质量百分比计为：人干细胞生长因子2×10-5％，桃仁提取物13％，淡竹叶提取物10％，枇杷叶提取物1％，黄芪提取物2％，富番茄红素的孢子提取物5％，橘皮提取物1％，覆盆子糖蛋白3％，余量为薏苡仁提取物。富番茄红素的孢子提取物通过以下过程得到：将粗糙脉胞菌置于种子培养基于30℃活化培养48小时，随后加入到无菌水中，于30℃、120转/分钟搅拌1小时，使孢子分散均匀，获得浓度107cfu/ml的孢子分散液；向孢子分散液中加入bht、香叶醇、盐酸特比萘芬、2-异丙基咪唑，充分混匀，得到混合液；将混合液按照0.6％的体积比接种入含有固体发酵培养基的平板中，于30℃光照下静置培养96小时；发酵培养结束后，收集孢子，置于55℃鼓风干燥箱中烘干2天；将烘干后的干孢子以固液比1：60(g/l)加入乙酸乙酯中，在超声功率300w、25℃破碎15分钟后，置于暗室室温浸提1.5小时；将提取液真空冷冻干燥，即得富番茄红素的孢子提取物。覆盆子糖蛋白，参考文献《安徽农业科学》(2009年08期，王芳)制备得到，具体条件为：料液比1：15，提取温度50℃，提取时间4小时，提取次数2次。富番茄红素的孢子提取物自由基清除性能参考《维生素c清除自由基能力3种检测方法的比较》(阿吉姑·阿布都热西提，新疆医科大学学报)进行。具体测试结果见表1。表1富番茄红素的孢子提取物自由基清除性能测试表【实施例7】抗衰老霜的原料如下表2：表2抗衰老霜原料表以上原料除自制的外，均可通过购买得到。抗衰老霜的制备：将a相组分于70℃溶解，加入b相组分以2000转/分钟均质15分钟，随后自然降温至37℃，加入c相组分、d相组分，搅拌均匀，脱气，得到抗衰老霜。其中，含干细胞生长因子的护肤组合物，含有如下成分，按质量百分比计为：人干细胞生长因子2×10-5％，桃仁提取物13％，淡竹叶提取物10％，枇杷叶提取物1％，黄芪提取物2％，富番茄红素的孢子提取物5％，橘皮提取物1％，覆盆子糖蛋白3％，余量为薏苡仁提取物。覆盆子糖蛋白，参考文献《安徽农业科学》(2009年08期，王芳)制备得到，具体条件为：料液比1：15，提取温度50℃，提取时间4小时，提取次数2次。所述富番茄红素的孢子提取物的制备同实施例5。【实施例8～16】抗衰老霜的原料如下表3：表3抗衰老霜原料表以上原料除自制的外，均可通过购买得到。抗衰老霜的制备：将a相组分于70℃溶解，加入b相组分以2000转/分钟均质15分钟，随后自然降温至37℃，加入c相组分、d相组分，搅拌均匀，脱气，得到抗衰老霜。其中，含干细胞生长因子的护肤组合物，含有如下成分，按质量百分比计为：人干细胞生长因子2×10-5％，桃仁提取物13％，淡竹叶提取物10％，枇杷叶提取物1％，黄芪提取物2％，富番茄红素的孢子提取物5％，橘皮提取物1％，覆盆子糖蛋白3％，余量为薏苡仁提取物。覆盆子糖蛋白，参考文献《安徽农业科学》(2009年08期，王芳)制备得到，具体条件为：料液比1：15，提取温度50℃，提取时间4小时，提取次数2次。所述富番茄红素的孢子提取物的制备同实施例5。所述辅酶q10和硫辛酸的复合乳液的制备方法为：将单硬脂酸甘油酯、辛酸癸酸甘油酯、硬脂醇聚醚-21、s2硬脂醇聚醚-2置于65℃水浴搅拌混合均匀，然后加入辅酶q10和硫辛酸，待搅拌至辅酶q10和硫辛酸溶解完全后，加入剩余含量的去离子水，充分搅拌后混合均匀，得到辅酶q10和硫辛酸的复合乳液。对复合乳液进行性能测定：复合乳液用去离子水稀释200倍，稀释液成透明状，加入1ml聚苯乙烯槽中进行实验测定。使用仪器malvenzetasizernacozs90利用动态激光光散射法测试多分散指数和zeta电位，测试温度25℃，测试角度为90度，平衡时间为2分钟。多分散指数越小，说明粒径分布越集中。zeta电位的绝对值越高，说明该体系的稳定性越好。具体测试结果见表4。表4复合乳液原料组成和分散性能性能测试表从表4看出，结合多分散指数和zeta电位，实施例为9的效果最优。【实施例17】与实施例9相同，区别在于：将植物源糖蛋白由覆盆子糖蛋白替换为远志糖蛋白。远志糖蛋白，参考文献《响应曲面试验优选远志糖蛋白的提取工艺》制备得到，具体制备条件为：采用ph＝7.85的tris-hcl(nacl浓度0.1mol/l)缓冲液，以料液比8ml/g，温度33℃，水浴提取1.5小时。【实施例18】与实施例9相同，区别在于：将植物源糖蛋白由覆盆子糖蛋白替换为覆盆子糖蛋白和远志糖蛋白以质量比1：1组成的混合物。远志糖蛋白，参考文献《响应曲面试验优选远志糖蛋白的提取工艺》制备得到，具体制备条件为：采用ph＝7.85的tris-hcl(nacl浓度0.1mol/l)缓冲液，以料液比8ml/g，温度33℃，水浴提取1.5小时。覆盆子糖蛋白，参考文献《安徽农业科学》(2009年08期，王芳)制备得到，具体条件为：料液比1:15，提取温度50℃，提取时间4小时，提取次数2次。对实施例7、实施例9、实施例17和实施例18的抗衰老霜进行抗皱性能评价：1.1受试对象选择将符合纳入标准的受试对象分组，各组性别、年龄、皱纹程度经统计学检验差异无统计学意义(p＞0.05)，具有可比性。纳入标准：①符合皮肤皱纹分级标准；②年龄40～70岁。具体分组方法：采用分层随机法分组，先根据年龄和皱纹分级，将条件相同的受试对象划成一个区组，然后再在每个区组内部按随机数字表法，将受试对象分别分配到试验组和对照组，每组45个样本。1.2皮肤皱纹分级标准：根据glogau分型法对皮肤皱纹进行分级，见表5。表5皮肤皱纹分级标准表1.3试验方法：试验组使用抗衰老霜，对照组使用已知有一定除皱作用的普通祛皱霜-全效新生霜(肇庆澳美日用化工有限公司产品，50g/盒)，分别于皮肤皱纹测试部位外涂，每日早晚各涂1次，使用周期为40天，试验前后均拍照进行皮肤皱纹等级及积分评价。皱纹等级及积分评价：试验前后均在统一的标准条件下拍摄目外眦至发际之间的区域(crow'sfeet区)和前额照片，按预先制订的标准对照片上的皱纹进行评价。然后观察试验前后两张照片的crow'sfeet区和前额，并记录两个区域中的皱纹数量、深度和长度。crow'sfeet区的皱纹程度根据修正的daniell皮肤皱纹量表和glogau分型法对皮肤皱纹进行分级。皱纹积分是将crow'sfeet区和前额部位每条皱纹深度分值(d)与长度分值(l)和每个区域的皱纹数分值(n)的乘积累加而来，每个区域最多选用5条皱纹，超5条时选用分值最大的5条皱纹，取两个区域积分的平均值。皱纹积分评分标准见表6。表6皱纹积分标标准项目分级评分皱纹数11223344≥55深度浅1中3深6长度(cm)≤1.011.0～1.521.5～2.032.0～2.54≥2.55皱纹积分和皱纹平均深度结果见表7。表7抗衰老霜皱纹积分测试结果两组受试对象试验前的皱纹积分和皱纹平均深度无统计学显著差异，具有可比性。经使用抗衰老霜后，两组的皱纹积分和皱纹平均深度均降低(p＜0.05)，但以试验组的降低程度明显，优于对照组(p＜0.05)。【实施例19】抗衰老面膜液的原料如下表8：表8抗衰老面膜液原料表以上原料除自制的外，均可通过购买得到。抗衰老面膜液的制备：将上述原料充分混匀，即得抗衰老面膜液。应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为了清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。当前第1页12